Seminario 10

Determinación de linealidad y límite

de detección del método analítico

Integrantes:

● Gutiérrez Riega, Luis

● Peralta Bendezu, Cesar
● Solis Cruz, Erika
Método Analítico

Método de investigación que

consiste en la desmembración de un
todo descomponiéndolo en sus
partes o elementos para observar las
causas, naturaleza y los efectos.

● Observación
● Exámenes
Clases de Métodos Analíticos

● Clase A: Para establecer identidad

● Clase B: Para detectar y cuantificar impurezas
● Clase C: Para determinar cuantitativamente la
concentración
● Clase D: Para evaluar las características, disolución,
uniformidad de contenido

Clasificación OMS (Inf. 32, Anexo 5 Validación de métodos analíticos)

Validación de Métodos Analíticos

Proceso por el cual se establece, mediante

estudios de laboratorio, que las características
de desempeño del método cumplen con los
requisitos para las aplicaciones analíticas
previstas.

FDA draft guidance – Analytical Procedures and Methods Validation

Requerimientos del Método Analítico

La validación de procedimientos analíticos requiere:

● Instrumentos calificados y calibrados

● Métodos documentados
● Patrones de referencia confiables
● Analistas calificados
● Integridad de la muestra
Parámetros de Validación

● Precisión
● Exactitud
● Especificidad
● Linealidad
● Límite de detección
Precisión Exactitud

Cercanía de coincidencia entre una serie Cercanía entre el valor que es

de mediciones obtenidas de múltiples aceptado, sea como un valor
muestreos de una misma muestra convencional verdadero, valor de
homogénea bajo condiciones referencia o un valor estándar y el valor
establecidas. Puede considerarse a tres obtenido al aplicar el procedimiento de
niveles: análisis un cierto número de veces.
● Repetibilidad
Se relaciona con la veracidad de la
● Precisión intermedia
información.
● Reproducibilidad.
Relación entre Precisión y Exactitud
Especificidad

Capacidad de un método analítico para

medir exacta y específicamente el analito
sin interferencias de impurezas, productos
de degradación o excipientes que pueden
estar presentes en la muestra.
Linealidad

Capacidad de un método analítico para

obtener resultados proporcionales a la
concentración del analito en la muestra
dentro de un intervalo determinado.
Determinación de la Linealidad

Diluciones:

Se debe tener en cuenta…

● Diluyente de muestras.
● Seguir las recomendaciones del
fabricante
● Determinar el volumen total necesario
para el análisis.
Determinación de la Linealidad

Niveles de concentración a considerar (5

niveles)

● El NCCLS recomienda un mínimo de 4 y

preferible 5 niveles de concentración.

● Se determina la concentración máxima

y mínima por medio de rango.
Determinación de la Linealidad

Triplicado por nivel

● La linealidad se realiza por triplicado en cada

nivel de concentración.

● El Comité Nacional de Estándares de

Laboratorio Clínico (NCCLS) recomienda hacer
4 mediciones de cada muestra, pero se ha
demostrado que 3 repeticiones son
suficientes.
Determinación de la Linealidad

Selección del rango:

Se hace deacuerdo al
tipo de metodo analitico
que se emplea
 Ecuación de la línea de Regresión lineal

Determinación de la Linealidad

Regresión lineal:

Permite cuantificar la relación que

puede ser observada cuando se grafica
un diagrama de puntos dispersos
correspondientes a dos variables, cuya
tendencia general es rectilínea.
Determinación de la Linealidad
Método de mínimos cuadrados: se estima la mejor línea de ajuste, es decir que la suma de las
diferencias individuales de cada punto de la gráfica cuando se eleva al cuadrado respecto a la línea
de ajuste es la mínima.
Límite de detección

● Es la mínima cantidad o
concentración de analito que puede
detectar para un nivel de confianza
dado.

● Depende de la relación entre la ● Por tanto a no ser que la señal analítica sea
magnitud de la señal analitica y el mayor que la del blanco en un múltiplo K de la
valor de las fluctuaciones variación del blanco debida a errores aleatorios
estadísticas de la señal del blanco. no será posible detectar con certeza esta señal.
 ➔ donde K vale 3

Determinación del Límite de detección

● El LD se puede determinar experimentalmente realizando 20 o 30 medidas del blanco,

durante un amplio periodo de tiempo.
Límite de detección
Determinación para métodos instrumentales

● La señal-ruido: se evalúa ● Linealidad: es necesario generar una

obteniendo la respuesta analitica a
una concentración cero del analito
(blanco o matriz analitica sin analito)
a la que comúnmente se la llama
señal ruido.
relación concentración por triplicado, lo
que permitirá determinar la linealidad,
estimar la pendiente (b) y una medida del
error de la respuesta (se), como lo es la
desviación estándar de la regresión (sy/x)
o la desviación estándar de la ordenada al
origen (sa).
Referencias Bibliográficas

● Hernandez G. Método Analítico. UAEH [Internet]. 2017 [cited 2021 Sep 25]; Available from:
https://www.uaeh.edu.mx/docencia/P_Presentaciones/b_huejutla/2017/Metodo_Analitico.pdf

● Guia de validación de Métodos Analíticos. [cited 2021 Sep 25]; Available from:
https://www.ministeriodesalud.go.cr/index.php/biblioteca-de-archivos/tramites/registro-de-productos-de-interes-sanitario/medicamentos
-1/documentos-de-interes-3/guias-de-registro-medicamentos/2472-guia-de-validacion-de-metodos-analiticos/file

● WHO. Guia de validación de Métodos Analíticos [Internet]. 2012 [cited 2021 Sep 25]. Available from:
https://www.ministeriodesalud.go.cr/index.php/biblioteca-de-archivos/tramites/registro-de-productos-de-interes-sanitario/medicamentos
-1/documentos-de-interes-3/guias-de-registro-medicamentos/2472-guia-de-validacion-de-metodos-analiticos/file

● Castillo B, González R. Protocolo de validación de métodos analíticos para la cuantificación de fármacos [Internet]. Rev Cubana Farm. 2016
[cited 2021 Sep 25]. Available from: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-75151996000100009

● McCartney S. Límite de detección del método [Internet]. 2020 [cited 2021 Sep 25]. Available from: https://www.academia.edu/36106228/
Límite_de_detección_del_método

● Judge M. LQ y LD en los métodos analíticos [Internet]. Geniolandia. 2018 [cited 2021 Sep 25]. Available from:
https://www.geniolandia.com/13137658/lq-y-ld-en-los-metodos-analiticos