METODOS DE CALIBRACION Y

VALIDACION DE METODOS ANALITICOS

TEMA 2
QMC 1400
Ing. Gonzalo Aliendre Garcia
Es difícil la selección
 La dificultad reside en la gran variedad de métodos y
herramientas que se disponen para realizar los análisis.
 En esta parte de la unidad 1, ponemos a consideración
algunos criterios para hacer la elección adecuada.
Definición del problema
1. ¿Qué exactitud se requiere?
2. ¿De cuanta muestra se dispone?
3. ¿En qué intervalo de concentración está el analito?
4. ¿Qué componentes de la muestra interfieren?
5. ¿Cuáles son la propiedades físicas y químicas de la
matriz de la muestra?
6. ¿Cuántas muestra hay que realizar?
Parámetros
de calidad
Criterios
Cuantitativos
Características a tener en cuenta en la
elección del método
 Velocidad
 Facilidady comodidad
 Habilidad del operador
 Costo y disponibilidad del equipo
 Costo por muestra
Precisión
 La precisión de los datos analíticos se define como el
grado de concordancia mutua entre los datos que se han
obtenido de una misma forma.
 Indica la medida del error aleatorio, o indeterminado de
un análisis.
 Los parámetros de calidad de la precisión son:
 La desviación estándar absoluta
 La desviación estándar relativa
 El coeficiente de variación y
 La varianza
Precisión
Sesgo
 El sesgo mide el error sistemático, o determinado de un
método analítico
 Se puede considerar que la media de 20 a 30 análisis
replicados es una buena estimación de la media de la
población de la concentración de un analito en una
muestra cuya concentración verdadera es xt
 En general, al desarrollar un método analítico, todos los
esfuerzos se dirigen hacia la identificación de la causa del
sesgo y a su eliminación o corrección, una forma puede
ser el calibrado del instrumento.
Sensibilidad
 Es una medida de la capacidad de un instrumento o
método, de diferenciar pequeñas variaciones en la
concentración del analito.
 Dos factores limitan la sensibilidad:
 La pendiente de la curva de calibrado y
 La reproducibilidad o precisión del sistema de medida.
 Entre dos métodos que tengan igual precisión, será más
sensible aquel cuya curva de calibrado tenga mayor
pendiente.
¿Qué gráfica tiene mayor sensibilidad?

a b c
Límite de detección
 Es la mínima concentración o la mínima masa de analito
que se puede detectar para un nivel de confianza dado

Intervalo lineal
Selectividad
 La selectividad de un método analítico indica el grado de
ausencia de interferencia con otras especies que
contienen la matriz de la muestra.
 Por lo general, ningún método analítico está totalmente
libre de estas interferencias y, con frecuencia, hay que
realizar diversas etapas para minimizar sus efectos.
Gráficas de calibración en análisis instrumental

Curva o gráfica analítica

Método de adición de estándar
Método del estándar interno

Curva o gráfica analítica

Se preparan una serie de disoluciones patrón de forma que cubran
un intervalo de concentraciones adecuado y que tengan una composición en
matriz parecida a la de la muestra. También se prepara un blanco, este tiene
igual composición que los demás estándares pero sin el analito. Su señal
debería ser cero pero a veces por efecto del ruido de fondo no es así.
Se representan las respuestas en una gráfica frente a las concentraciones de
los estándares que las han proporcionado. Generalmente hay una relación
lineal entre la señal analítica (y) y la concentración (x) y por ello los datos se
ajustan a una recta por el método de mínimos cuadrados según y=ax+b,
siendo y la señal instrumental, a la pendiente, b la ordenada en el origen y x
las concentraciones de los estándares.
Una vez obtenida la gráfica, se interpola la señal de la muestra y se obtiene
la concentración de analito en la muestra.
Método de adición de estándar
Se usa cuando es imposible suprimir interferencias físicas o químicas en la
matriz de la muestra.
Se toman alícuotas iguales de muestra, se le añade a cada una por
separado cantidades diferentes de patrón, excepto a una de ellas y se
realiza la medida.
La escala de concentración (x) se define con las concentraciones de analito
agregadas a las alícuotas de muestra, por tanto, la concentración
desconocida está dada por el punto en el cual la línea extrapolada corta al
efe de concentración. La recta de regresión se establece mediante mínimos
cuadrados.
Método del estándar interno
En este método una cantidad fija de una sustancia pura (estándar interno) se
añade tanto a las disoluciones muestra como a las disoluciones de patrones. El
estándar interno debe ser una sustancia de naturaleza similar a la del analito, con
una señal fácilmente medible y que no interfiera con la respuesta del analito.
Se determinan luego las respuestas del analito y del estándar interno, y se calcula
el cociente de las dos respuestas. De esta manera si se varía algún parámetro que
afecte a las respuestas medidas, dichas respuestas (del analito y estándar interno)
se deben afectar por igual. Por tanto, el cociente de respuestas (del analito y del
estándar interno) depende solamente de la concentración de analito.
Una representación de la relación o cociente de respuestas analito/estándar
interno, como función de la concentración del analito, da una gráfica de calibración
(por mínimos cuadrados).
Este método se usa mucho en cromatografía de gases y absorción atómica.
LIMITES DE DETECCION Y CUANTIFICACION

El límite de detección es la menor concentración de analito en

una muestra determinada que puede ser positivamente
identificada con un método analítico determinado.

Límite de cuantificación es la menor concentración de analito

en una muestra determinada que puede proporcionar una
medida cuantitativa positiva, utilizando un método analítico
determinado.

Sensibilidad: Se refiere a la pendiente de la recta de calibrado

resultante al representar concentración de analito frente a señal.
Un método será más sensible cuanto mas pronunciada es la
recta de calibrado, ya que esto significa que una pequeña
variación en la concentración de analito proporciona una
elevada variación en la respuesta instrumental.
Cálculo de los límites de detección y determinación.

Límite de detección:

La concentración de analito que proporciona una señal instrumental

significativamente diferente de la señal de una muestra en blanco.
Es aquella concentración de analito cuya señal es igual a la del blanco más tres
veces su desviación estándar.

LOD = yB + 3SB

Donde yB es la señal del blanco y SB su desviación estándar

Límite de determinación o cuantificación:

Es la concentración de analito que da una señal igual a la del blanco más diez
veces su desviación estándar.

LOQ = yB + 10SB
Señal-Ruido

La señal analítica puede dividirse en dos partes, una causada por el

analito y la otra por los demás componentes de la matriz de la muestra y
por la instrumentación utilizada en la medición. Esta última parte de la
señal se conoce como ruido.
Por esta razón para describir la calidad de un método analítico o el
funcionamiento de un instrumento, la relación señal/ruido es un parámetro
de calidad mucho mejor que el ruido solo.
La capacidad de un sistema para discriminar entre señales y ruido se
expresa, usualmente como la relación señal ruido Así conforme las
concentraciones disminuyen hacia el nivel traza, el problema de distinguir
las señales respecto al ruido se hace cada vez más difícil, lo que
ocasiona una disminución en la exactitud y en la precisión de las
mediciones a la vez que se aumenta el límite inferior de la cantidad de
analito que se puede detectar.
Como norma general la detección cierta de una señal mediante un
sistema visual resulta imposible cuando S/N < 2 ó 3.
Un aumento en la relación S/N generalmente indica una reducción del
ruido y, por tanto, una medición más deseable.