PRÁCTICA 2

TÉCNICAS MICROSCÓPICAS
DE BACTERIAS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA BIO-231-P
 PRÁCTICA 2
TECNICAS MICROSCÓPICAS DE BACTERIAS

PRINCIPIOS GENERALES
• El estudio microscópico de las bacterias
se facilita notablemente al tratarlas con
colorantes; pudiendo así apreciar mas su
forma y estructura.
• La preparación en fresco (in vivo) permite
observar a los microorganismos vivos, el
inconveniente con este es que no permite
aumentar el contraste de la preparación
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TÉCNICAS DE TINCIÓN

Tinción Simple Tinción Compuesta

Al menos tres reactivos : colorante primario,

Tinción homogénea
agente descolorante, colorante de contraste

Se emplea un sólo colorante Tinción de Gram

Ácidos o básicos
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 ¿Qué debemos RECORDAR para clasificar ?

1) Capa de peptidoglicano

2) Presencia/ Ausencia de membrana externa

3) Acido Teicoico en Gram positivas

4) LPS en Gram negativas

Gram Positiva 2 capas • 3 capas

Gram Negativa
Membrana plasmática • Membrana plasmática
Capa gruesa de • Capa fina de
peptidoglicano peptidoglicano
• Bi capa de fosfolípidos
Bajo contenido lipídico externa

No endotoxinas • Alto contenido lipídico

Vulnerable a penicilina • Endotoxina (LPS)

• Resistente a penicilina
•
Tinción • Se utiliza una tinción básica
Primaria como el Cristal Violeta

• Yodo: aumenta la afinidad del

Mordiente colorante primario

• Alcohol etílico al 95% como

Agente solvente que facilitando la porosidad
Descolorante en Gram negativas, y así la salida del
colorante

• Safranina que tiñe las

Tinción de Gram negativas
Contraste descoloradas
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PROCEDIMIENTO
• 1) PREPARAR EL FROTIS
• 5 PORTA OBJETOS LIMPIOS
• SI PARTIMOS DE CULTIVOS SOLIDOS, UTILIZAR UNA GOTA DE AGUA EN EL
PORTA OBJETOS
• SI PARTIMOS DE CULTIVOS LIQUIDOS SOLO EXTENDER Y DEJAR SECAR

• 2) TINCION DE GRAM
• 3) OBSERVAR HASTA LLEGAR AL OBJETIVO 100X CON ACEITE DE
INMERSION