COMPLEJO ENTERICO NEONATAL EN ALPACAS

ANDINAS

CONOPA

Raúl Rosadio, Ph.D

Biología y Genética molecular
FMV, UNMSM
Instituto CONOPA
 CAUSAS DE MORTALIDAD NEONATAL EN ALPACAS EN
DOS EMPRESAS DE PUNO
3% 6%
3% 3%
3% ENTEROTOXEMIA
4% EPS 1 (1982-1988)
44%
5% n = 41,569

5%
7%
17% INANICION

Enterotoxemia Inanicion Nacidas muertas Muertas al nacer

Colibacilosis Accidentes Neumonias Colicos
Distocia Hipotermia Otros

NEUMONIAS
2% 7%
3% 2% 21%
3%
7%
colibacilosis
INANICIÓN
EPS 2 8%
17%
(1971-1988) 12%
18% ENTEROTOXEMIA
n = 72,152

Neumonias Inanicion Enterotoxemia Hipotermia

Colibacilosis Accidentes Nacidas muertas Retención Orina
Malf congenitas Pioseptisemia Otros
 MORTALIDAD NEONATAL EN ALPACAS
DOS EMPRESAS TIPO SAIS (SIERRA CENTRAL)
ZORROS

(1982-1988)
INANICION
N = 8101

HIPOTERMIA

(1983-1989)
n = 4063 MUERTOS AL NACER
ZORROS
Complejo enterotoxemico
¿Quién la causa?

• Una bacteria llamada

Clostridium perfringens

• Habita en el suelo, agua e

intestino de los animales.

• Secreta toxinas que dañan

el intestino y diferentes
órganos vitales.
 La enfermedad

Observada a partir del primer mes de vida

Mortalidad mayor en los meses de Febrero y Marzo
Suri son mas Susceptibles
 ALTA MORTALIDAD

Enfermedad cíclica: Un año Si el otro No

cada 4-5 años brotes
Mayor incidencia años lluviosos
 Signos de la enfermedad
Cria deprimida y somnolienta

Crías en buen estado nutricional mas susceptibles

Mayores mortalidades en predios mal manejados
 Signos de la enfermedad
Muy rapidamente estado comatoso

Sospecha de problemas de transferencia de Igs calostrales

Crías con deficiencias de Ac calostrales mas susceptibles
Niveles de Igs en crías normales (2-21 días de edad)
Igs calostrales de crías muertas por enterotoxemia
Comparadas con curva de degradación de Igs
 Signos de la enfermedad: al final torticolis

Establecida la infección no actúa los antibioticos

Enfermedad toxémica: toxina en circulación sanguínea
Signos de la enfermedad

Torticolis al final de la enfermedad

 Complejo Enterotoxemico
• Reportada en el Perú
– Moro, 1967
• Estudios microbiológicos
– C. perfringens, tipos A y C
• Toxinas implicadas
– Enterotoxina (cpe) (Tipo A)
• Ramírez et al (1980s)
– Toxinas α (Tipo A) y β (Tipo B)
• Prehn et al., 1988
 ¿Qué pasa con los órganos de
crías enfermas?
• El abdomen aparece
distendido y al abrir los
intestinos están llenos gas.

• Los órganos se encuentran

congestionados (enrojecidos).

• El olor es desagradable y
característico.
Alteraciones en el abdomen
Intestinos: presencia de gases
Los nódulos linfáticos aparecen congestionados
(enrojecidos) y grandes.
El cerebro se encuentra congestionado (enrojecido)
Prioridad en nuestras investigaciones:
elucidar etiopatogénesis
de la enterotoxemia
Muestreo animales afectados con enterotoxemia
 Diagnostico Laboratorio
Morfología de la Morfología
colonia en agar sangre microscópica y
afinidad a la Tinción
Gram

Crecimiento en Negatividad a
anaerobiosis IDENTIFICACIÓN DEL Clostridium la prueba de
perfringens catalasa

Actividad Lecitinasa Capacidad de

reducción de
(Reacción de Nagler)
sulfito
 Clostridium perfringens produce diversas
enfermedades en diferentes especies de animales
TIPOS ENFERMEDAD ESPECIE
Gangrena gaseosa Humano
Intoxicación alimentaría Humano
A Enteritis necrótica Pollos
Enterotoxemia Corderos, bovinos, cabras,
caballos, perros, alpacas y otros
Disentería corderos
B Enterotoxemia Ovinos, cabras, cobayos
Darmbrand Humanos
Pig-bel Humanos
C struck ovejas
Enterotoxemia Corderos, lechones
Enteritis necrótica potros
Enterotoxemia ovejas
D Riñón pulposo Corderos
Enterotoxemia Terneros,
Disentería Corderos
E Enterotoxemia cobayos
 DIAGNOSTICO RAPIDO MOLECULAR

Extracción de TIPIFICACION Y SUBTIPIFICACION:

ADN PCR MÚLTIPLE

PCR Múltiple to xina Ge n Inic iado re s

S e c ue nc ia
5´  3´
Lo ng itud de l pro duc to
amplific ado (pb)

CP A5L AGTCTACGCTTGGGATGGAA
α cpa
CP A5R TTTCCTGGGTTGTCCATTTC
900
Electroforesis
CP BL TCCTTTCTTGAGGGAGGATAAA
β cpb
CP BR TGAACCTCCTATTTTGTATCCCA
611

CP EL GGGGAACCCTCAGTAGTTTCA
CPE cpe
CP ER ACCAGCTGGATTTGAGTTTAATG
506
Visualización
CP ETXL TGGGAACTTCGATACAAGCA
ε etx
CP ETXR TTAACTCATCTCCCATAACTGCAC
396

CP IL AAACGCATTAAAGCTCACACC
ι iap
CP IR CTGCATAACCTGGAATGGCT
293

CP B2L CAAGCAATTGGGGGAGTTTA
β2 cpb2
CP B2R GCAGAATCAGGATTTTGACCA
200
 Distribución de genotipos y subtipos de 307 cepas de C.
perfringens aislados de alpacas muertas por enterotoxemia
(años 2005-2008)

CUSCO
(n = 50)

GENOTIPO A
HUANCAVELICA 48 cepas (96%)
(n = 5)
GENOTIPO A β2

TOXINA ALFA
1 cepa (2%)
GENOTIPO A:
5 cepas (100 %) GENOTIPO C

TOXINA BETA2
1 cepa (2%)

AREQUIPA
(n = 52) NO ENTEROTOXINA PUNO
(n = 200)
GENOTIPO A
49 cepas (94.2%)
GENOTIPO A
GENOTIPO A β2 185 cepas (92.5%)
3 cepas (5.8 %)
GENOTIPO A β2
15 cepas (7.5 %)
 Las C. perfringens aislados de enterotoxemia poseen diferentes
capacidades de producción de TOXINAS (Cp-PLC) alfa in vitro sin
aparente relación a características toxigénicas
 Coccidial Infections in Neonatal Peruvian
Alpacas
Rosadio, R y Ameghino, E Veterinary Record: 1994, 135:459

• Diagnostico campo: enterotoxemia

• 12/25 animales hasta 35 días edad
• Diarreas: 8/25
• Muerte súbita: 4/25

Todos los 12 casos mostraron enteritis necrotizante asociada

con masiva presencia de E. macusaniensis.
LESIONES HISTOPATOLOGICAS
2005-2008
LESIONES HISTOPATOLOGICAS
2005-2008
 Asociación: lesiones histopatológicas
y presencia de E. macusaniensis
(2005-08)
LESIONES E. macusaniensis
n (%)

Moderada-severa enteritis catarral 5/21 (23.8)

Severa enteritis necrotizante 18/49 (36.7)
Extensiva Enteritis hemorrágica 10/35 (28.6)

Eimeria macusaniensis associated lesions in neonate alpacas dying from enterotoxemia

Rosadio et al., Vet Parasitology 2010
 Identificación E. macusaniensis: 108
muestras intestinales de crías afectadas
por Enterotoxemia

2005 2006 2007 2008 Total

Muestras (n) 28 19 40 21 108

E. mac (n) 09 05 15 04 33

E. mac (%) 32.1 26.3 33.3 19.0 30.6

Eimeria macusaniensis associated lesions in neonate alpacas dying from enterotoxemia
Rosadio et al., Vet Parasitology 2010
 ASOCIACION DE E. MACUSANIENSIS Y
SIGNOS CLINICOS (2005, 2007, 2008)

E. macusaniensis Diarreas Sin Total

diarreas
Presencia 12 18 30

Ausencia 20 35 55

Total 32 53 85

Eimeria macusaniensis associated lesions in neonate alpacas dying from enterotoxemia

Rosadio et al., Vet Parasitology 2010
 ENTEROTOXEMIA EN ALPACAS
POBRE TOMA DE MADRE NO VACUNADA
CALOSTRO (CRIA)

C. perfringens BAJOS NIVELES DE ANTICUERPOS

AMBIENTE PROTECTIVOS EN CRIAS

TEMPRANO CONSUMO INGRESO DEL C. perfringens

DE FORRAJES AL INTESTINO

CAMBIOS EN LA FLORA Y PROLIFERACION Y COINFECCIÓN E. MAC

pH INTESTINAL PRODUCCION DE TOXINAS O CEPAS PATÓGENAS
(C. perfringens) DE E. COLI?

COLICOS DAÑO INTESTINAL

ABSORCION DE TOXINAS
MUERTE (TOXEMIA)
Eimeriosis en Alpacas

E. punoensis
E. Lamae
E. alpacae

E. macusaniensis
E. ivitaensis
 DETECCION DE EIMERIAS EN HEMBRAS
GESTANTES * HATOS COMUNALES, HUANCAVELICA
COMUNIDAD Muestras Positivas Eimeriosis
examinadas (%)

Selene 21 8 38,10

Arcata 71 28 39,44

Ares 69 19 27,54

Total 161 55 34,16

* 2-3 Meses antes del posible parto (2007)
Prevalencia de Eimeria sp en crías y
madres (EE 2008)
 Eimeria sp. en 478 crías de
alpaca CIP La Raya (Marzo, 2008)

Crías examinadas Positivo OPG OPG

N (%) Promedio Rangos
478 418 (87.4%) 24,017 50-1 202,400

A. Rodríguez, 2010
Prevalencia de especies de Eimerias (ooquistes) en 478
muestras fecales de crías, del CIP - La Raya, UNA, Puno.
Marzo 2008
 Mayores prevalencia de
Eimeriosis en 478 crías de
alpacas (Marzo,2008)
Animales E. lamae E.macusaniensis
muestreados n (%) n (%)
478 289 (60.4%) 240 (50.2%)

A. Rodríguez, 2009
 Detección de Eimeria spp, ooquistes por gramo de heces (OPGH)
promedio y rangos en muestras fecales de crías de alpacas por
edades (CIP-La Raya, UNA, Puno. 2008)

Edad (días) Positivos (%) HPG promedio OPG Rangos

0-30 12/24 (50) 17,216.7 50 – 103650

31-45 76/82 (92.7) 28,501.97 50 - 334,800

46-60 122/144 (84.7) 34,371.7 50 - 1 202,400

61-75 172/183 (94) 16,564.2 50 - 387,600

76-90 36/45 (80) 17,336.2 100 - 250,750

Total 418/478 (87.4)

Prevalencia Eimeria spp por edades en muestras fecales
de crías de alpaca del CIP - La Raya, UNA, Puno. 2008

ESPECIE DE EIMERIA
Muestras
Edad
analizadas punoensis alpacae lamae macusaniensis ivitaensis
(días)
n (%) (%) (%) (%) (%)

0-30 24 2 (8.3) 4(16.6) 10 (41.7) 1 (4.2) 1 (4.2)

31-45 82 22(26.8) 32 (39.0) 53 (64.6) 13 (15.9) 1 (1.2)
46-60 144 46 (31.9) 65 (45.1) 96 (66.7) 62 (43.1) 13 (9.0)
61-75
183 62 (33.9) 100 (54.6) 110 (60.1) 120 (65.6) 9 (4.9)
76-90 45 10 (22.2) 17 (37.8) 20 (44.4) 14 (31.1) 2 (4.4)
DIARREAS NEONATALES

Bacterianas Virales Parasitarias

Escherichia coli Rotavirus Cryptosporidium sp.

Salmonella sp. Coronavirus Giardia sp..

Eimeria sp

Nematodos
Detección de cepas E. coli enterohemorragicas
(ECEH) en 15/25 casos lesiones enteritis
hemorrágicas (crías 2-4 semanas).

Genes Incidencia n (%)

Stx 1 6 (40)
Stx 2 3 (20)
Stx 1 y Stx 2 6 (40)
Mecanismo patogenicidad de E. coli
productoras de diarreas
Celulas de Paneth: Regeneracion celular
Capacidad antibacterial y antiparasitaria

Celulas Paneth: BASE DE LAS GLANDULAS CRIPTICAS

Identificación de Células de
Paneth Alpacas

Lira B. et al. Rivep 2013, 2012

 CEPAS E. coli ASOCIADAS A ENFERMEDADES
EN HUMANOS Y ANIMALES

• Se reportan hasta 8 serovares patogénicos

1) Diarreagénicas: 6 serovares
• Enteropatogénicas (EPEC)
• Enterohemorrágicas (EHEC)
• Enterotoxigénicas (ETEC)
• Enteroinvasivas (EIEC)
• Enteroagregativas (EAEC)
• E. coli de adherencia difusa (DEAC)
2) Extra intestinales: 2 serovares
• Uropatogénicos
• E. coli productora de meningitis neonatales
 Escherichia coli patogenicas usan
adhesinas y toxinas
• E. coli causantes de diarreas:
– E. coli enterotoxigenicas (ETEC)
• Toxinas termo estables (STa y STb)
– Expresan antígenos fimbriales F5 y/o F41 (rumiantes)
• Toxinas termo lábiles (LT-I, LT-II)
– E. coli enteropatogénicas (EPEC):
• Intimina (eae)
– Destruyen microvellocidades y muerte celular
• adhesina fimbrial:
– bundle forming pili (gen bfp)

– E .coli enterohemorrágicas (EHEC):

• Toxinas tipos shiga (Stx-1 y/o Stx-2)
– Lisis en células Vero (Verocitoxinas)
– Algunas cepas EHEC producen intimina (eae)
 Cepas diarreagénicas de E. coli
aisladas de 51 crías (2007)
EHEC EPEC EPEC
TIPICAS ATIPICAS
Diarreas clínicas
n=27 1 (4%) 11 (41%) 7 (26%)
Casos fatales
n= 24 5 (21%) 0 6 (25%)
Total 6 (12%) 11(24%) 13 (25%)

EHEC: Enterohemorrágicas (Stx1+ o Stx2+). EPEC: enteropatogénicas típicas (eae+ y bfp+)

EPEC atípicas (solo eae+)
Luna, L (2008)
Análisis de las 6 cepas ECEH aisladas de
diarreas y contenido intestinal en crías
de alpacas

Tipos ECEH Incidencia

Stx1+vo y eae-vo 3/6 (50%)

Stx2+vo y eae-vo 1/6 (17%)

Stx1+vo, Stx2+vo y eae-vo 2/6 (33%)

Luis Luna, 2007
 Cepas de E. coli aisladas de heces
diarreicas en 94 crías de alpacas (2009)

Tipos de cepas Prevalencia

EPEC típicas (eae+vo y bfp+vo) 2/94 (2.1%)

EPEC atípicas (eae+vo y bfp-vo) 10/94 (10.7%)

EHEC (Stx1+vo o Stx2+vo) 11/94 (11.7%)

Dolores Cid y colaboradores, UCM, España
Mecanismo de patogenicidad
de E. coli
 Complejo enterotoxemico
• C. perfringens, tipo A
– La toxina  la más prevalente
– Cepas de alta, mediana y baja
producción de toxina 
– Toxina secundaria: 2 (10%)
– Toxina cpe, al parecer, no
implicada en la patogénesis
– Evidencias de presencia de
otras toxinas
 Complejo enterotoxemico: posibles
factores desencadenantes
• Coinfección coccidial
– E. macusaniensis
– E. ivitaensis?
• Cepas E. coli virulentas:
– EHEC (Shiga toxinas)?
• Infecciones virales
– Edades tempranas
– CoV?
– Rotavirus?
 provetsac@gmail.com

rrosadio@gmail.com rrosadio@gmail.com
Programa de vacunación recomendada
• Vacunar a preñadas con 2
dosis (incialmente)
– 1ra, 2-3 meses antes del parto
– 2da, 15 días antes del parto
• Revacunar anualmente
– 30-15 días antes del parto
• Vacunar a crías
– > 10 días de edad.
– Revacunar si es necesario
(brotes)
ENTEROTOX ALPACA EN EL CONTROL DE ENTEROTOXEMIA

REDUCCION DE MORTALIDAD NEONATAL EN UN FUNDO ALPAQUERO MEDIANTE EL

USO DE ANACULTIVOS (C. perfringens inactivados y sus toxoides)
(año 2000-2006)
PORCENTAJES DE MORTALIDAD NEONATA

60

50

40 37.41

30 25.17
23.72

20 19.45
15.1 14.3
9.38 12.1
9.1
10 7.18
3.9
2.1
0.98 0.12
0
2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006
SIN VACUNACIÓN CON VACUNACIÓN

AÑOS

Índice de Mortalidad Neonatal Total

Índice de Mortalidad Neonatal por Enterotoxemia

 Tratamientos
Decoquinatos

Ooquistes esporulados X
Esporozoito

Amprolium
Sulfas
Ionoforos XX
Schizonte

Ooquistes
Merozoitos
Triazinas

X
Microgametocitos
Cigote

X
Microgametos
Macrogametocitos
 Tratamiento
“Una vez que se detecten ooquistes en las
heces: muchas veces ya es demasiado
tarde para usar una quimioterapia
especifica para controlar el ciclo de la
infección y beneficiar al animal”

Georgi’s Parasitology for Veterinarians

8th Ed, p. 97.
 Ciclo de vida – 1 Infección ra

Ingestión Esporozoito
Ooquistes Esporulados
13 dias a 30C
21 dias a 18-25C
Defecación Inactivo a 7C Esquizonte

Ooquiste
Merozoito

Microgametocito
Zigote
Microgameto
Rohbeck 2004 Macrogametocito
Tratamiento estratégico
anticoccidial:
madres antes del parto

Tortrazuril (20 mg x Kg PV) oral

en crías (partir de 11-12 días)
 Ciclo de vida – 1 Infección ra

Ingestión Esporozoito
Ooquiste Esporulados
13 dias a 30C
21 dias a 18-25C
Defecación Inactivo a 7C Esquizonte

Ooquiste 32 a 36 dias
Eliminan : 39-43 dias Merozoito

Microgametocito
Cigote
Microgameto
Rohbeck 2004 Macrogametocito
 Buen Manejo: ayuda
fundamental en la prevención
Rotar las canchas para mantenerlas
LIMPIAS!!!
Cancha de parición limpia!!!
Evitar el hacinamiento de crías
Consumo adecuado de calostro
Construcción de cobertizos para la época de
parición
…cuidando los rebaños de los Apus
 Patógenos diarreagénicos
• Cepas E.Coli patogénicas
circulan en poblaciones de
alpacas andinas
– Cepas EPEC y EHEC
posibles causantes de
diarreas
– Giardia spp
– CoV
• Alerta en salud pública
– Giardia grupo A
– Cepas EHEC
– C. ubiquitum