A highly efficient recombinant canarypox

virus-based vaccine against canine distemper

virus constructed using the CRISPR/Cas9 gene
editing method
Yuchen Gong, Tingwei Chen, Na Feng, Xianyong Meng, Weiyang Sun, Tiecheng Wang, Yongkun Zhao,
Songtao Yang, Xiaofei Song, Wen Li, Haiman Dong, Hongmei Wang, Hongbin He, Jianzhong Wang,
Ling Zhang, Yuwei Gao, Xianzhu Xia.

Karime Montenegro - Esteban Caycho - Maricielo Vaella - Jhon Zumaeta

Objetivos

Evaluar el desarrollo de un virus de la viruela del canario

recombinante altamente eficiente denominado "ALVACCDV-
M-F-H / C5−" que contenía partículas similares al virus CDV
(VLP) mediante el método de edición de genes CRISPR /
Cas9

2
Curva de cinética de crecimiento de la nueva cepa recombinante

Las curvas de crecimiento de ALVAC-

CDV-M-F-H / C5− y ALVAC-CDV-F-H.
Las células CEF se infectaron con
ALVAC-CDV-M-F-H / C5- y ALVAC-CDV-
FH a una MOI de 0,01.

3
Confirmación de expresión de la proteínas M, F y H del CDV
1: CEF infectadas con ALVAC-CDV-M-F-H/C5-
2: CEF infectadas con ALVAC-CDV-F-H
3: CEF no infectadas
4: Vero infectadas con CDV-O
5: Vero no infectadas

Se expresan las tres proteínas

recombinantes cuando se infecta a las
CEFs con ALVAC-CDV-M-F-H/C5-

4
Coexpresión de M, H y F, e incorporación en las CDV-VLPs

1: CEF infectadas con ALVAC-CDV-M-F-H/C5-
2: CEF infectadas con ALVAC-CDV-F-M
3: CEF no infectadas
Solo cuando las CEFs son infectadas con ALVAC-CDV-M-
F-H/C5- se coexpresan las tres proteínas.
Se pudieron pruficar CDV-VLPs de CEFs infectadas con
ALVAC-CDV-M-F-H/C5-.

5
Ensayo de inmunogenicidad en zorros

Se muestra la eficacia de la
vacunación.
Tasas positivas de CDV NA de cada
grupo en diferentes momentos.
- Zorros CVD NA-+ → tasas
positivas. Todos seropositivos.

6
 Ensayo de inmunogenicidad en zorros

Se muestran los resultados de la

neutralización
Ningún título detectado luego de 21
días de la primera dosis.
-Luego de la “dosis recuerdo” (35 d)
> Títulos altos en grupos de dosis alta
> 42 días después volvieron a bajar
-Tercera dosis
> Aumento de la respuesta inmune en
todos los grupos

7
Tasas positivas de CDV NA de cada grupo en diferentes momentos.
8
Las barras de error representan la media y el SEM en cada grupo, que fueron analizados por
ANOVA de 2 vías. Los asteriscos representan los niveles de significación estadística

9
Conclusiones
● Se demostró que el sistema CRISPR / Cas9 es una tecnología poderosa para
apuntar y editar el genoma de ALVAC.
● Una nueva cepa recombinante que expresa simultáneamente el CDV M, F y H
proteínas denominadas ALVAC-CDV-M-F-H / C5− se construyó utilizando el Sistema
CRISPR / Cas9.
● ALVAC-CDV-M-F-H / C5- con CDVVLP generaron tasas y títulos positivos de NA más
altos entre ambos zorros y visones.
● La mejor respuesta inmune podría lograrse aumentando la dosis de vacuna para
ambas cepas.

10