TALLER ESTERILIZACIÓN Y

ASEPSIA
Maestría Biología Molecular y Biotecnología
Mayo 2020
1.BIOSEGURID
AD
 NIVELES DE BIOSEGURIDAD
• La bioseguridad trabaja organismos y agentes que
son o pueden ser patógenos.
• Estos se agrupan en diferentes grupos de riesgo, los
cuales se tratan diferente.
• Cada grupo de riesgo tiene un nivel de bioseguridad
el cual es :
A. Grupo 1: Riesgo individual y poblacional escaso o
nulo.
B. Grupo 2: Riesgo individual moderado, riesgo
poblacional bajo.
C. Grupo 3: Riesgo individual elevado, riesgo
poblacional bajo.
D. Grupo 4: Riesgo individual elevado, riesgo
poblacional elevado (agentes de bioterrorismo).
La clasificación del nivel de
seguridad depende de:
• Patogenicidad del organismo.
• Modo de transmisión y gama de
hospederos. Agente Evaluación Clasificació
n del grupo
• Disponibilidad de medidas patógeno del riesgo
de riesgo.
preventivas y eficaces.
• Disponibilidad de tratamientos
eficaces.
Nivel de seguridad 1 (BSL-1).
• Este nivel tiene un grupo de riesgo
1.
• Se emplean para enseñanza
básica, investigación (laboratorios
de docencia).
• Se pueden realizar actividades al
descubierto.
• Y el empleo de protección es
básica.
Nivel de seguridad 2 (BSL-2).
• Su grupo de riesgo es 2.
• Los entornos de nivel de seguridad
2 se emplean para atención
primaria de salud e investigación
(laboratorios clínicos).
• Poseen cabinas de seguridad
especiales.
• El personal tiene que portar ropa
de seguridad como lo son guantes
y bata.
Nivel de seguridad 3 (BSL-3).
• Tiene un grupo de riesgo 3.
• Se caracteriza por su nivel de
contención primario.
• En este nivel de seguridad se pueden
realizar, investigación y diagnostico
especial (laboratorios clínicos de
hospitales especializados nivel 3)
• Su entorno debe contar con un flujo
de aire direccional y acceso
controlado.
Nivel de seguridad 4 (BSL-4).
• Se clasifica en un grupo de riesgo 4.
• Su contención es máxima, como los
laboratorios de referencia
regionales o nacionales donde se
encuentran patógenos peligrosos
y/o agentes de bioterrorismo.
• Estos entornos se caracterizan por
tener un cierre hermético y su
salida posee una ducha
descontaminante.
 Existen tres clases básicas, conocidas
Cámaras como:

de • Clase I
• Clase II (Tipos: A, B1, B2 y B3)
biosegurid • Clase III.
ad.
 Cabina de seguridad biológica
• Las clase I
cabinas de clase I se caracterizan por
suministrar protección al personal y al ambiente,
pero no al producto.
• El aire de la cabina es extraído a través de un
filtro HEPA mediante un sistema de extracción
entregado al exterior.
• El aire de la habitación (sin filtrar) fluye
directamente sobre la superficie de trabajo.
• Se usan para aislar equipos, para airear cultivos,
homogenizar tejidos y para pesar agentes
químicos en forma de polvo.
• Son adecuadas para trabajar con agentes
biológicos clasificados con niveles de seguridad 1,
2 o 3.
 Cabina de seguridad biológica
clase II
• Es una cabina que se caracteriza por suministrar
protección al personal, al ambiente y al producto.
• Existen diversos tipos de cabinas de seguridad biológica,
clase II, los mas comunes son los denominados A,B1, B2 y
B3.
• Estas cabinas disponen de dos rejillas, una frontal y una
trasera, a través de las cuales es succionado el aire que
circula sobre la superficie de trabajo.
• Dispone un filtro HEPA que suministra un flujo vertical
laminar que protege el producto y evita la contaminación.
• Dispone de un segundo filtro HEPA a través del cual el aire
sale de la cabina (Filtro de extracción).
• Se identifica la cabina de tipo A, si se recicla el aire dentro
del laboratorio.
• Si se extrae el aire hacia el exterior a través de un ducto, se
identifica como la cabina de tipo B.
 Cabinas de seguridad biológica
clase III
• Es una cabina que se caracteriza por estar
totalmente cerrada. Su construcción es sellada a
los gases.
• Esta diseñada para trabajar con agentes
microbiológicos clasificados en el nivel de
seguridad 4.
• Suministra máxima protección al trabajador y al
ambiente.
• La inyección y la extracción del aire a la cabina se
realiza a través de filtros HEPA.
• El aire extraído de la cabina pasa a través de dos
filtros HEPA, o de un filtro y un incinerador de
aire.
• El flujo de aire es mantenido a través de un
sistema externo independiente.
2.DEFINICIONE
S
ESTERILIZACIÓN: Destrucción o eliminación de todas formas de
vida microbiana incluyendo las formas de resistencia (esporas)
y los virus. Es el nivel más alto posible de destrucción
microbiana y, por tanto, el método que proporciona el mayor
nivel de protección. Puede llevarse a cabo por procesos físicos
o químicos.

Métodos físicos de esterilización

a) Esterilización con vapor de agua

Ejemplo: Esterilización de medio de cultivo que va a ser preparado y usado en algún procedimiento en autoclave
durante 15 minutos a 15 libras de presión a 121°C.
b) Esterilización con calor seco
Ejemplo: Los esterilizadores por calor seco pueden ser de dos tipos: de aire estático o de circulación forzada del aire.
También en este método puede encontrarse el Bactoincinerador.
 •Métodos químicos de esterilización
Exposición de los elementos a esterilizar a diferentes tipos de químicos
(óxido de etileno, glutaraldehído, etc.) dependiendo de su resistencia a
ellos. Son poco usados porque pueden llegar a ser tóxicos y costos.

•Efectividad de los métodos de esterilización

A modo de resumen, podemos señalar que la esterilización por vapor de agua es el único método
que consigue una efectividad del 100% en cualquiera de los casos. El segundo método más efectivo
es la esterilización por óxido de etileno (próxima al 100%), seguida de la esterilización por calor seco
y mediante inmersión es glutaraldehído, siendo estos métodos menos seguros.
ASEPSIA: Ausencia de microorganismos que pueden causar enfermedad o infección.
Ejemplo: Preparación del equipo, la instrumentación y el cambio de operaciones en un quirófano mediante
los mecanismos de esterilización y desinfección.
 
ANTISÉPTICO: Sustancia que inhibe el crecimiento o destruye microorganismos sobre tejido vivo.
Un buen antiséptico debe presentar cuatro cualidades importantes:

-Tener amplio espectro de acción (bactericida o bacteriostático, virucida, esporocida, etc.).

- Actuar con rapidez frente al germen.
- Tener una duración de acción suficiente.
- Garantizar la inocuidad local y, sobre todo, sistémica.

Ejemplo: Alcohol etílico, clorhexidina, povidona, tintura de yodo, agua oxigenada y merbromina (Es un
medicamento que actúa impidiendo el desarrollo de microorganismos en la piel. Este fármaco es un
derivado del mercurio que detiene el crecimiento de las bacterias y hongos.).
•DESINFECCIÓN: Proceso destinado a conseguir la eliminación de
microorganismos de una superficie por medio de agentes
químicos o físicos.
Ejemplo: Emplear una solución de hipoclorito de sodio al 0,5%
para desinfectar mesones donde se trabajaron muestras
contaminadas con algún microorganismo.
DESINFECTANTE: Germicida que inactiva prácticamente todos los microorganismos patógenos reconocidos, pero no
necesariamente todas las formas de vida microbiana, ejemplo esporas. Ejerce la misma acción (inhibir el crecimiento o
destruir microorganismos) sobre superficies u objetos inanimados como un antiséptico. Este término se aplica solo a
objetos inanimados.
Ejemplo:
 Formaldehído: Se utilizan concentraciones del 2-8% para desinfectar material quirúrgico y guantes.
 Glutaraldehído: Aldehído más activo que el anterior frente a bacterias, hongos, micobacterias, esporas y virus. Es
menos irritante para la piel y desprende menos vapores, por lo que resulta menos nocivo por inhalación.
 Hipoclorito de sodio: Actividad bactericida y virucida es potente, pero se inactiva rápidamente en presencia de
materia orgánica.
 Amonios cuaternarios: Son activos para eliminar bacterias grampositivas y gramnegativas, aunque éstas últimas en
menor grado. Son bactericidas, fungicidas y virucidas. Su actividad la desarrollan tanto sobre el medio ácido como
alcalino, aunque en éste último muestra mejores acciones. Son compatibles con tensoactivos catiónicos, no iónicos
y anfotéricos.
BACTERICIDA: Efecto o sustancia que tiene la capacidad de matar bacterias, microorganismos unicelulares
u otros organismos. Los bactericidas pueden venir en forma de desinfectantes, antisépticos o
antibióticos. Algunos organismos secretan sustancias bactericidas como medios defensivos contra las
bacterias.
Ejemplo: Lisozima presente en la saliva, lágrimas y moco que protege las mucosas relacionadas con
la nasofaringe. Provoca la muerte de las bacterias cuando estas se están multiplicando, rompe los enlaces
entre las moléculas de peptidoglicano que forman la pared celular de las bacterias gram-positivas.
BACTERIOSTÁTICO: Sustancia o efecto que genera una reducción o deteneción el
metabolismo bacteriano, inhibiendo el crecimiento de bacterias que permanecen vivas, de
tal modo que al suprimir el elemento bacteriostático por disolución o neutralización, las
bacterias seguirán desarrollandose; a menos que el tiempo de exposición a este sea muy
prolongado y la dosis lo suficientemente alta para envejecer la célula hasta su muerte.
Ejemplo: Algunos antibióticos o el ácido láctico o las bacteriocicnas.
Las bacteriocinas se emplean en la biopreservación (método de conservación) que ofrece
diversas condiciones para extender la vida útil y aumentar la seguridad de los alimentos,
por medio del uso de una microbiota natural o controlada y de sus productos
antimicrobianos.
3.ESTERILIZACIÓN
POR MEDIOS
FÍSICOS
3.1 CALOR
Calor.
• El calor es el agente físico más utilizado para la descontaminación de patógenos. El calor «seco»,
que no es en absoluto corrosivo, se utiliza para tratar muchos objetos de laboratorio que pueden
soportar temperaturas de 160 °C o más durante dos a cuatro horas. La combustión o incineración
es también una forma de calor seco. El calor «húmedo» es especialmente eficaz cuando se utiliza
en autoclave.

• La cocción no necesariamente mata todos los microorganismos o patógenos, pero puede utilizarse
como tratamiento mínimo de desinfección cuando no puedan aplicarse o no estén disponibles
otros métodos, como la desinfección o descontaminación química, o el tratamiento en autoclave.

• Los artículos esterilizados deben manipularse y guardarse de forma que se mantengan

descontaminados hasta que se vuelvan a utilizar.
Cinética de la esterilización.
Cuando una población
bacteriana es expuesta a un
agente letal físico o químico,
se produce una progresiva
reducción del número de
sobrevivientes, de modo que
la curva que representa el
número de sobrevivientes en
función del tiempo tiene
forma exponencial decreciente
(Fig. 1A).
 Si graficamos la curva en una escala
semilogarítmica, obtenemos una recta como la de la
Fig. 1B. En la misma, la pendiente (negativa)
representa la velocidad de muerte de la población.
Resulta claro que cuanto mayor sea el valor
absoluto de la pendiente, los microorganismos
morirán más rápido.
Este comportamiento debe tenerse presente
siempre, más aún en las técnicas de esterilización,
donde el tiempo de exposición al agente es
fundamental para alcanzar el objetivo buscado. El
efecto letal de un agente (por Ej.: el fenol) cambia
en relación a las distintas cepas, incluso dentro de
una misma especie bacteriana.
Autoclave.
•La aplicación de vapor de agua saturado a
presión (tratamiento en autoclave) es el medio
más eficaz y fiable de esterilizar material del
laboratorio. Para la mayoría de los propósitos,
los ciclos siguientes garantizarán la esterilización
del contenido de la autoclave siempre que se
haya cargado correctamente:
•1. 3 minutos a 134 °C
•2. 10 minutos a 126 °C
•3. 15 minutos a 121 °C
•4. 25 minutos a 115 °C
Autoclaves de desplazamiento por gravedad. El vapor entra en la cámara a presión y desplaza el aire más
pesado hacia abajo, a través de la válvula del orificio de salida, equipada con un filtro HEPA.
Autoclaves de prevacío. Permiten eliminar el aire de la cámara antes de dar paso al vapor. El aire extraído se
evacua a través de una válvula equipada con un filtro HEPA. Al final del ciclo, el vapor se evacua
automáticamente. Estas autoclaves pueden funcionar a 134 °C, por lo que el ciclo de esterilización puede
reducirse a tres minutos. Son ideales para cargas de material poroso, pero no pueden utilizarse para tratar
líquidos debido al vacío.
Autoclaves de olla a presión calentadas por combustible. Este tipo de autoclaves sólo deben utilizarse si no
se dispone de una autoclave de desplazamiento por gravedad. Se cargan desde arriba y se calientan con gas,
electricidad u otro combustible. El vapor se produce por el calentamiento del agua en la base del recipiente;
el aire se desplaza en sentido ascendente por una abertura de descarga. Cuando se ha sacado todo el aire, la
válvula de la abertura de descarga se cierra y se reduce el calor. La presión y la temperatura aumentan hasta
que la válvula de seguridad funciona en el nivel preestablecido. Este es el comienzo del tiempo de retención.
Al final del ciclo se cierra la fuente de calor y se deja que la temperatura descienda a 80 °C o menos antes de
abrir la tapa.
Pasteurización.
Proceso al que son sometidos ciertos líquidos para eliminar agentes patógenos que podrían enfermar
a las personas al consumirlos.

Se basa en someter a los líquidos a altas temperaturas durante un periodo de tiempo determinado.

Existen tres métodos de pasteurización que se aplican actualmente y se diferencian tanto por la
temperatura utilizada, como también por el tiempo y forma de proceso industrial en que se usa.

VAT: Lenta

HTST: Relampago (High Temperature/Short Time, "alta temperatura/corto lapso“)

UHT: Ultrapasteurización.
VAT: Consiste en calentar los líquidos hasta una temperatura de aproximadamente 63 °C y luego
dejarla enfriar durante 30 minutos dentro del mismo recipiente. Al terminar, se les envasa de
inmediato para prevenir contaminación.
HTST: Los líquidos se calientan rápidamente a entre 71 °C y 89 °C, dependiendo de su tipo, por
sólo 15 segundos. Es el más utilizado por la industria, ya que es rápido y se puede trabajar con
grandes volúmenes.
UHT: Consiste en someter a los líquidos a una temperatura de 137 °C por sólo 2 segundos, para
luego enfriarla rápidamente.
La UHT tiene una variante conocida como aséptica, donde las temperaturas pueden llegar a los
150 °C por 4 segundos, para luego esperar que se enfríe a temperatura ambiente.
El método que se utiliza depende del tipo de líquido con que se trabaja.
Aplicaciones.
Esterilización de material de consultorios médicos, odontológicos, de laboratorios microbiológicos,
bioquímicos. Industria alimentaria.
3.2 RADIACIÓN
 3.2 RADIACIÓN

 Emisión de radiaciones luminosas, térmicas, magnéticas o de otro tipo.

 Emisión de energía o de partículas que producen algunos cuerpos y que
se propaga a través del espacio.
 Propagación de energía en forma de ondas electromagnéticas o
partículas subatómicas a través del vacío o de un medio material.
LUZ ULTRAVIOLETA

3.2 RADIACIÓN
El término luz ultravioleta (UV) es aplicado a la radiación electromagnética emitida por la región del
espectro que ocupa la posición intermedia entre la luz visible y los rayos X. El espectro ultravioleta está
dividido en tres áreas designadas: UV-A, UV-B y UV-C.
UV-A entre 320 y 400 nm Long. de Onda MAS LARGA
UV-B entre 280 y 320 nm
UV-C entre 100 y 280 nm Long. de Onda MAS CORTA – MAS PELIGROSA
3.2 RADIACIÓN
Radiación UV-A
3.2 RADIACIÓN
La radiación UV-A es la forma menos dañina de la radiación ultravioleta, presenta
un menor peligro por ser menos energética.
Radiación UV-B
La radiación UV-B que es bastante energética puede causar daños celulares de
carácter degenerativo, debido a que puede romper los enlaces de las moléculas
del ADN.
Radiación UV-C
Los rayos UV-C son la forma más dañina de toda la gama de rayos ultravioleta
porque es muy energética.
 RADIACIONES IONIZANTES:
-Las radiaciones ionizantes son aquellas radiaciones con energía suficiente para ionizar la
materia, extrayendo los electrones de sus estados ligados al átomo. Las radiaciones ionizantes
interaccionan con la materia viva, produciendo diversos efectos. Del estudio de esta interacción y
de sus efectos se encarga la radiobiología.
Las radiaciones ionizantes pueden provenir de sustancias radiactivas, que emiten dichas
radiaciones de forma espontánea, o de generadores artificiales, tales como los generadores de
rayos X y los aceleradores de partículas.
3.2 RADIACIÓN
 MECANISMOS DE ACCIÓN DE LA RADIACIÓN

3.2 RADIACIÓN
Dimerización del ADN: La UV absorbida
promueve la formación de enlaces entre
nucleótidos adyacentes, con lo que se crean
moléculas dobles o dímeros.
Timina-timina, citosina-citosina, citosinatiamina,
y dimerización del uracilo.
La formación de un número suficiente de
dímeros dentro de un microbio impide que éste
replique su ADN y ARN, lo que impide su
reproducción.
 3.2 RADIACIÓN
Generación de ROS: Los radicales libres generan “especies reactivas de oxígeno” (ROS en las siglas
en inglés, Reactive Oxygen Species), los cuales oxidan diferentes constituyentes celulares, como
pueden ser lípidos, proteínas o también el DNA.

Si las dosis de radiaciones recibidas son lo bastante altas,

el daño ocasionado puede impedir a la célula realizar sus
funciones vitales y por lo tanto que produzca directamente
su muerte.
Si las dosis recibidas son bajas y la célula puede sobrevivir,
pero las alteraciones que se pueden haber producido en el
DNA (mutaciones).
 CINÉTICA DE LA RADIACIÓN

  cinética de inactivación microbiana por UV

La La dosis UV se define como el producto de la
sigue la ley de Chick: intensidad UV por el tiempo. En la figura se brinda
una representación gráfica de la ley de Chick que
muestra la inactivación como una función de la
Donde: dosis UV aplicada.
= Concentración inicial de microbios previa a la
aplicación de UV.
= Número de microbios que restan después de
la exposición a la luz UV
= intensidad UV
= Tiempo de exposición
k = Constante del ritmo de inactivación
microbiana
APLICACIONES
Se usa en la esterilización de agua y alimentos, en la soldadura de arco industrial, para el curado fotoquímico de
tintas, pinturas y plásticos y para tratamientos médicos de diagnóstico y terapéuticos, como las lámparas UV
utilizadas en dermatología y bronceado cosmético.
Como forma de esterilización la radiación ultravioleta de ciertas longitudes de onda daña el ADN de numerosos
microorganismos e impide que se reproduzcan. De esta manera pueden eliminar bacterias, virus y hongos sin
dejar residuos, a diferencia de los productos químicos.
Es posible que algunos microorganismos reparen el daño fotoquímico causado por la luz UV, si su dosis es
demasiado baja, mediante la fotorreactivación o reparación oscura.
3.3 FILTRACIÓN
¿Qué es?
 
La filtración es un procedimiento físico de esterilización de fluidos en el cual los
microorganismos no son destruidos, sino simplemente retenidos por un
material filtrante.

¿En que tipos de sustancias puede ser utilizado?

 
La filtración sólo puede ser utilizada con fluidos, sean líquidos o gaseosos. Se
suele utilizar con soluciones cuyos componentes sean termolábiles y por lo
tanto no pueden ser esterilizadas en el autoclave, por ejemplo, soluciones
concentradas de azúcares, de urea, vitaminas, factores de crecimiento, etc.
¿La esterilización por filtración tiene alguna desventaja?
 
La filtración tiene la desventaja de que es ineficaz con determinados
microorganismos, como los virus o los micoplasmas. Los primeros son mucho más
pequeños que el tamaño del poro, por lo que no son retenidos. Los segundos son
pleomórficos ya que carecen de una pared de peptidoglicano y pueden adaptarse al
tamaño de poro, por lo que tampoco son retenidos (*).
El material filtrante debe de ser inerte para no reaccionar con los componentes de la
solución, presentar resistencia mecánica y tener un tamaño de poro menor que los
microorganismos que deben ser retenidos. Tradicionalmente se usan filtros de
nitrocelulosa desechables con tamaño de poro de 0,45 o de 0,22 micras. El fluido es
impulsado mediante la presión ejercida por el embolo de una jeringuilla, o bien
mediante el uso de un quitasato y un sistema de vacío.
 
(*)  En el caso de los micoplasmas hay filtros especiales con un tamaño de poro
inferior a 0,1 micras capaces de retenerlos, pero no serán usados en el laboratorio.
 
Tipos de filtro

Filtros profundos o Filtros de profundidad:

Consisten de un material fibroso o granular prensado, plegado, activado, o pegado
dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros la retención de las partículas se
produce por una combinación de absorción y de retención mecánica en la matriz.
Membranas filtrantes:
Tienen una estructura continua, y la retención se debe principalmente al tamaño de
la partícula. Partículas más pequeñas al tamaño del poro quedan retenidas en la
matriza del filtro debido a efectos electrostáticos.
Filtros de huella de nucleación (Nucleoporo):
Son películas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un tratamiento
conjunto con radiación y sustancias químicas. Son filtros con orificios muy regulares
que atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el
paso de toda partícula con un tamaño mayor al del poro.
Procedimiento
 
1. Separar el medio de cultivo en dos porciones.
2. Pasar la porción A a través del equipo de filtración preparado con un filtro.
3. Recoger el líquido filtrado en un recipiente estéril yrotular.
4. Colocar la porción B directamente en un recipiente estéril y rotular.
5. Incubar ambas porciones a 32,5oC+/-2,5 oC durante 24 horas.

Aplicaciones
 
Se utiliza para esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftálmicas,
soluciones intravenosas, drogas diagnósticas, radiofármacos, medios para cultivos
celulares, y soluciones de antibióticos y vitaminas.
4.CONTROL QUÍMICO
ANTIMICROBIANO
Un control químico antimicrobiano es el uso de compuestos químicos que mata o inhibe el
crecimiento de los microorganismos. Hay diferentes métodos y sustancias que pueden matar y
controlar el crecimiento microbiano entre ellos: antisépticos, desinfectantes y esterilizantes.

Entre los agentes esterilizantes químicos se encuentran:

Oxido de etileno
Glutaraldehido

Desinfectantes y antisépticos
Agentes inorgánicos:
Metales
Ácidos y álcalis
Compuestos inorgánicos oxidantes
Halógenos (cloro, iodo)

Agentes orgánicos:
Alcoholes
Fenoles y compuestos fenólicos
EFECTO DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS
Son elementos químicos naturales o sintéticos que pueden reducir o eliminar el desarrollo de los microorganismos
-Los agentes antimicrobianos se denominan agente-cida, el prefijo indica el tipo de microorganismo que mata:
Bactericida, fungicida, virucida.
-Los agentes que inhiben el crecimiento pero que no matan al microorganismo se denomina agente-estático:
Bacteriostáticos, fungistaticos, virustaticos.

El efecto que causa sobre los microorganismos un agente antimicrobiano es el siguiente:

-Se inhibe el crecimiento microbiano pero la célula no muere

-En general son inhibidores de la síntesis proteica
-Se une de manera reversible a los ribosomas
-Se mata a la célula bacteriana
-No hay ruptura de la pared por tanto no hay lisis celular
-Se une de manera covalente a sus dianas moleculares(enzimas
de replicación de ADN o ARN)

-Se destruye a la célula bacteriana

-Hay ruptura de la pared por tanto no hay lisis celular
-Se afecta la estructura de la pared celular de células que están
creciendo.
CUANTIFICACION DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA
Para evaluar la actividad antimicrobiana de los desinfectantes y antisépticos se utilizan algunos métodos tales como:
Técnica de dilución en tubo: Primero se realizan diferentes diluciones del agente químico. El mismo volumen de cada
dilución se dispensa en tubos estériles. A cada tubo se le añade la misma cantidad de una suspensión del microorganismo
utilizado como prueba. A determinados intervalos de tiempo se transfiere una alícuota de cada tubo a otro tubo que
contenga medio de cultivo. Estos tubos inoculados se incuban a la temperatura óptima de crecimiento del microorganismo
utilizado como prueba durante 24 a 48 horas. Al cabo de este tiempo se examina el crecimiento del microorganismo
mediante la aparición de turbidez en el tubo (crecimiento +) o ausencia de turbidez (crecimiento -). Aquellos tubos que
presenten crecimiento negativo indican la dilución a la cual ese agente químico mata al microorganismo utilizado como
prueba cuando este microorganismo es expuesto al agente químico durante ese período de tiempo.
Técnica de la placa de agar: Se inocula una
placa que contenga medio de cultivo sólido
con el microorganismo utilizado como prueba.
El agente químico se coloca en el centro de la
placa, bien dentro de un cilindro o
impregnado en un disco de papel. Al cabo de
24 a 48 horas se observan zonas de inhibición
(crecimiento -) alrededor del agente químico.
Una modificación de esta técnica es la
incorporación del agente químico en el medio
de cultivo antes de verterlo sobre la placa.
Una vez solidificado se inocula con el
microorganismo utilizado como prueba, se
incuba y se examina el crecimiento
microbiano.
Técnica del coeficiente fenólico: Es una técnica estandarizada que se utiliza para comparar el
poder desinfectante de un agente químico frente al del fenol. Es una modificación de la técnica
de dilución en tubo tal como se describe a continuación: (i) Se prepara una serie de tubos
conteniendo cada uno 5 ml de diferentes diluciones del desinfectante. (ii) A la vez se prepara
una segunda serie de tubos que contengan diferentes diluciones de fenol. (iii) Cada tubo de las
dos series se inocula con 0,5 ml de un cultivo de 24 horas del microorganismo utilizado como
prueba (cepas específicas de Salmonella typhi o Staphylococcus aureus). (iv) A los 5, 10 y 15
minutos se recoge una alícuota de cada tubo que se inocula en otro tubo que contenga medio
de cultivo estéril. (v) Estos tubos inoculados se incuban durante 24 a 48 horas y se observa el
crecimiento del microorganismo (aparición de turbidez). (vi) La mayor dilución del
desinfectante que mate a los microorganismos en 10 minutos pero no los mate en 5 minutos
se divide por la dilución mayor de fenol que dé los mismos resultados. El número obtenido es
el coeficiente fenólico de ese desinfectante.
Esterilización: es el proceso de
destrucción de todas las formas de vida
microbiana.
Desinfección: es el proceso de
destrucción de los agentes infecciosos.
Fenol y compuestos fenólicos
Desinfectantes: son aquellas sustancias
químicas que matan las formas
vegetativas y no necesariamente las
formas de resistencia de los
microorganismos patógenos. Se refiere a
sustancias empleadas sobre objetos
inanimados.
Antisépticos: son aquellas sustancias
químicas que previenen el crecimiento o
acción de los microorganismos ya sea
destruyéndolos o inhibiendo su
crecimiento y actividad. Se refiere a
sustancias que se aplican sobre el
cuerpo.
Mecanismos de acción de algunos agentes antimicrobianos
Desinfectante Antisepticos Esterilizantes Mecanismo de accion
Los alcoholes actúan desnaturalizando las proteínas,
disolviendo las capas lipídicas y como agentes
Alcohol etilico Alcohol etilico deshidratantes. El etanol al 96% se usa como antiséptico de la
piel y como desinfectante en los termómetros clínicos orales
y algunos instrumentos quirúrgicos.
El fenol y compuestos fenólicos actúan alterando la
permeabilidad de la membrana citoplásmica así como
desnaturalizando proteínas.
El óxido de etileno actúa inactivando enzimas y otras
proteínas que contienen grupos sulfidrilos (R-SH) mediante
óxido de etileno una reacción llamada alquilación (R-S-CH2CH2O-H).
Su acción se debería a su unión a grupos negativamente
CLOROHEXIDINA cargados de las moléculas celulares. Esto produciría
precipitación de proteínas y ácidos nucleicos, inactivación
enzimática y pérdida irreversible del contenido citoplásmico.
Metales:
mercurio, plata
Actúan inactivando las proteínas celulares al combinarse con
(AgNO3),
ellas.
cobre(CuSO4) y
zinc
Ácidos y álcalis Actúan alterando la permeabilidad y coagulando las proteínas
La muerte de los microorganismos por acción del cloro se
debe en parte a la combinación directa del cloro con las
proteínas de las membranas celulares y los enzimas. El
mecanismo mediante el cual el iodo ejerce su acción
Halógenos (cloro y yodo)
antimicrobiana es debido a su acción oxidante. Además la
habilidad que tiene el iodo para combinarse con el
aminoácido tirosina resulta en la inactivación de enzimas y
otras proteínas