PURIFICACIÓN

DEL
ADN
Fuente: http://www.vix.com/es/btg/curiosidades/4971/10-curiosidades-sobre-el-adn-que-no-conocias
 INTEGRANTES

 Andrea Catherine Barrera

 Libardo Escamilla Niño
 Wendy Daniela Tovar

Fuente: http://www.bloglenovo.es/como-analiza-la-policia-tu-adn/
 PURIFICACIÓN.

1. extracción eficiente.
Los criterios básicos que
debería cumplir un método para
purificar ADN de cualquier
fuente incluyen: 3. remoción de
contaminantes.

2. cantidad de ADN purificado

suficiente para las subsiguientes
aplicaciones.
4. calidad y pureza del
ADN.
MÉTODOS DE PURIFICACIÓN DE ADN.

Diferentes métodos de
extracción resultan en
diferente pureza de
ADN y poseen
diferente rendimiento.
Algunos de los
métodos han sido
evaluados
sistemáticamente para
aplicaciones específicas
tales como muestras de
suelo, de agua y de
Kits de reactivos para purificación de ADN
GeneRead DNA FFPE Kit. Fuente: http://www.medicalexpo.es/prod/qiagen-lake- microorganismos.
constance/product-69785-767041.html
Tecnología basada en sílica:
Este es un método ampliamente
utilizado en los kits actuales. El
ADN se adsorbe
específicamente a
membranas/esferas/partículas de
sílica en presencia de ciertas
sales y a un pH particular. Los
contaminantes celulares son
removidos por pasos de lavado.
El ADN es eluido en un búfer de
baja salinidad o búfer de
elución. Donde sales caotrópicas
son incluidas para promover la
desnaturalización de proteínas y Fuente: http://slideplayer.es/slide/10348372/

la extracción del ADN.

Separación magnética:
Este método está basado en la
unión reversible del ADN a una
superficie/esferas/partículas
sólidas magnéticas, las cuales
han sido recubiertas con un
anticuerpo que une ADN o un
grupo funcional que interactúa
específicamente con el ADN.
Luego de la unión del ADN, las
esferas son separadas de otros
componentes celulares
contaminantes, lavadas y
finalmente el ADN purificado es
eluido utilizando extracción con
etanol. Este método es rápido y Fuente: http://www.cultek.com/aplicaciones.asp?p=Aplicacion_AN_Purificacion&opc=tecnicas&idap=38

puede ser automatizado.

 KIT DE PURIFICACIÓN EL
POWERSOIL ADN
consta de un novedoso y patentado método para aislar
el ADN genómico de muestras ambientales. El kit
está pensado para uso con muestras ambientales que
contienen un alto contenido de ácido húmico
incluyendo los tipos de suciedad difícil como
estiércol, compost y sedimento. Otros tipos de suelo
más comunes también se han utilizado con éxito con
este kit.
 Pasos para realización de este proceso:

1. A los tubos de PowerBead, agregar 0,25 g de muestra de suelo

Vortex para mezclar
 3. Compruebe la solución C1. Si se precipita la Solución C1, calentar
la solución a 60 ° C hasta que Disuelto antes del uso.
 4. Añadir 60 μl de Solución C1 e invertir varias veces o
vórtice brevemente
 5. Asegure los tubos PowerBead horizontalmente con el MO BIO Vortex Adapter
Tubo para el vórtice (MO BIO Catalog # 13000-V1-24) o tubos seguros
Horizontalmente en una almohadilla del vortex de la cama plana con la cinta.
Vortex a velocidad máxima de 10 minutos.
 6. Asegúrese de que los Tubos PowerBead giran libremente en su centrífuga sin
frotamiento. Centrifugar los tubos a 10.000 x g durante 30 segundos a temperatura
ambiente. PRECAUCIÓN: Asegúrese de no exceder los 10.000 x g o los tubos
pueden romperse.
 
7.Transferir el sobrenadante a un tubo de recogida limpio de 2 ml
(proporcionado)
 8.Añadir 250 μl de Solución C2 y agitar durante 5 segundos. Incubar
a 4 ° C durante 5 minutos.
 9. Centrifugar los tubos a temperatura ambiente durante 1 minuto a
10.000 x g
 10. Evitando el pellet, transfiera hasta, pero no más de 600 μl de sobrenadante A
un tubo de recogida limpio de 2 ml (suministrado).
 11. Añadir 200 μl de Solución C3 y agitar vórtex brevemente.
Incubar a 4 ° C durante 5 minutos.
 12. Centrifugar los tubos a temperatura ambiente durante 1 minuto a
10.000 x g.
 13.Evitando el pellet, transfiera hasta, pero no más de 750 μl de
sobrenadante En un tubo de recogida limpio de 2 ml (suministrado).
 14. Añadir 1200 μl de Solución C4 al sobrenadante y
agitar durante 5 segundos.
 15. Cargue aproximadamente 675 μl en un Filtro de centrifugado y
centrifugue a 10.000 x g durante 1 minuto a temperatura ambiente
temperatura. Deseche el flujo y agregue 675μl adicionales de
sobrenadante al filtro de centrifugado Y centrifugar a 10.000 x g
durante 1 minuto a temperatura ambiente. Cargar el sobrenadante
restante en El filtro de centrifugado y centrifugar a 10.000 x g
durante 1 minuto a temperatura ambiente.
 16. Añadir 500 μl de Solución C5 y centrifugar a temperatura ambiente
durante 30 segundos a 10.000 x g
 17. Deseche el flujo
 18. Centrifugar de nuevo a temperatura ambiente durante 1 minuto a
10.000 x g.
 19. Coloque cuidadosamente el filtro de centrifugado en un tubo de
recogida limpio de 2 ml (suministrado). Evite salpicar cualquier
solución C5 en el filtro de giro
 20. Añadir 100 μl de solución C6 al centro de la membrana filtrante blanca.
Alternativamente, el ADN estéril libre de Grado de PCR Puede usarse agua para la
elución de la membrana de Filtro de Spin de sílice en este paso (MO BIO Número
de catálogo 17000-10).
 21. 21. Centrifugar a temperatura ambiente durante 30 segundos a
10.000 x g.
 22. Deseche el filtro de centrifugado. El ADN en el tubo está ahora
listo para cualquier aplicación aguas abajo.
 Recomendamos almacenar el ADN congelado (-20 ° a -80 ° C).
 Kit de purificación BACMAX TM
El kit de purificación de ADN BACMAX ™ fue desarrollado para un aislamiento
fácil y confiable de alta calidad BAC ( Cultivo de cromosomas artificiales de
bacterias) DNA.

El protocolo se basa en un procedimiento modificado de lisis alcalina Que se puede

utilizar con 1,5 a 100 ml de cultivo. Rendimientos consistentes de hasta 0,6, 4, 11 o
Se obtienen 25 μg de ADN de BAC a partir de cultivos de 1,5, 10, 40 o 100 ml de una
sola copia BAC, respectivamente. Etapas de precipitación selectiva y la incorporación
de Epicenter RiboShredder ™ RNase Blend eliminan eficazmente los contaminantes
que degradan el ADN y Interferir con las aplicaciones aguas abajo.
Procedimiento
 100 ml

(~ 250 rpm) 37 °C 14-16 Hr

3 ml solución BACMAX, 6 ml de solución BACMAX 2

a cada tubo. Para evitar el corte del ADN de BAC no
vórtice, agite ni pipetee el lisado. Añadir 4,5 ml de
solución BACMAX 3 tubo 2-3 Veces.

5.000 x g durante 8 minutos 6 ml

15’

Añadir 8,1 ml o 0,6

Centrifugar a ≥ 15.000 volúmenes de Precipitar los ácidos nucleicos por
x g durante 15 minutos isopropanol. centrifugación a ≥ 15.000 x g durante 15
a4°C Invirtiendo 4 a 6 minutos a 4ºC. Decantar cuidadosamente
veces el isopropanol.
3-5’

20 μl 37 °C 30 minutos.
500 μl

1 mL de BACMAX 4
200 μl en agua estéril.
Sobrante mas 4mL de
3-5’ 15000 xg a 15´ 4° etanol absoluto

15000 xg a 15´ 4° 15’

Profundización.
 Bibliografía.

 Epicentre, an illumina company. (2012) BACMAX™ DNA Purification Kit. Recuperado de:

http://www.epibio.com/docs/default-source/protocols/bacmax-dna-purification-kit.pdf?sfvrsn=8

 Mo Bio. (2016) PowerSoil® DNA Isolation Kit (Catalog No. 12888-50) Recuperado de:

https://mobio.com/media/wysiwyg/pdfs/protocols/12888.pdf.

 Labome, The world of laboratories. (2013) Extracción y purificación de ADN. Recuperado de:

http://www.labome.es/method/DNA-Extraction-and-Purification.html