TINCIÓN WRIGHT

¿Qué es?

Técnica que se emplea generalmente para la diferenciación de elementos celulares de la

sangre y es clasifi cada como una tinción policromática, dado que puede teñir compuestos
ácidos o básicos presentes en una célula.
Historia

Fue desarrollada por el patólogo James Homer Wright en 1902 a partir de la modifi cación de
la ya existente tinción de Romanowsky, utilizada para diferenciar elementos formes de la
sangre.
Usos

Tiene diversos usos en microbiología; la búsqueda de Plasmodium spp. (en México,

principalmente, Plasmodium vivax), Leihsmania spp., (principalmente Leishmania mexicana),
Trypanosoma cruzii, y en la búsqueda intencionada de fi larias (Figura 3). En micología esta
tinción es de gran ayuda en la búsqueda de Histoplasma capsulatum (hongo dimórfi co) en
extendidos de médula ósea. Tinción usada en histología para facilitar la diferenciación de
los tipos de células de la sangre. Se usa principalmente para teñir frotis de sangre y punciones
medulares, para ser examinadas al microscopio. En citogenética se usa para
teñir cromosomas, para facilitar el diagnóstico de síndromes y enfermedades.
Composición y Fundamento

Compuesto por eosina y azul de metileno, cuando éste se oxida se conoce como azur B a
una concentración de 0.8 g/L empleando como solvente alcohol metílico. La eosina es un
colorante ácido que tiene afinidad por componentes alcalinos. Existen dos compuestos
conocidos como eosina y que están intrínsecamente relacionados: eosina Y, conocida
también como tetrabromofluoresceína –o, comúnmente, eosina amarilla–, y la eosina B,
conocida como dibromodinitrofluoresceína o eritrosina B azulada. Ambos compuestos son
intercambiables, sin que sean notables las diferencias entre ellos en el resultado de la tinción,
por lo que la preferencia de una sobre otra no sigue un criterio objetivo.

La eosina es un compuesto ácido cuya propiedad está basada en su polaridad negativa, lo

que le permite enlazarse con constituyentes celulares de carga positiva; por esta razón,
colorea componentes citoplasmáticos y se les conoce como acidófilos. La tonalidad
resultante de la tinción con eosina es rosada-anaranjada para citoplasmas, y rojo intenso en
el caso de los eritrocitos.

La tinción de Wright cuyo colorante está compuesto de azul de metileno (que tiñe de color
azul las partes ácidas de las células) y eosina (que tiñe las partes alcalinas) disueltos en
metanol (que permite la fijación de las células), adicionando a la preparación buffer de
fosfatos (que rehidrata a las células después de la exposición con metanol)
La eosina Y, colorante ácido, se fija a los agrupamientos básicos de
las moléculas de hemoglobina y a las proteínas básicas.
El típico color de los núcleos celulares, mayoritariamente morado, se basa en la interacción
molecular entre eosina y un complejo azul de metileno-DNA. La intensidad de la coloración
depende del contenido de azur B y de la relación con la eosina amarilla. El resultado de la
tinción puede ser influido por diferentes factores, como el valor del pH de los colorantes y de
la solución amortiguadora, esto debido a que la tinción se fundamenta en la relación de las
características ácido-base, y la variación de estos factores podría cambiar las características
tintoriales de la muestra a teñir al verse favorecida por características más ácidas o básicas.
Los diferentes colores que se observan en la célula provocan el llamado efecto Romanowsky,
que tiñe de púrpura a los núcleos y gránulos neutrofílicos y de color rosa al citoplasma. Los
ácidos nucleicos se tiñen de azul, permitiendo así distinguir a los parásitos en el interior de los
eritrocitos.

TINCIÓN GIEMSA
Usos

Usada en hematología, la tinción de Giemsa permite la diferenciación de las distintas células

sanguíneas. La solución de Giemsa colorea y revela eritrocitos, basófilos, eosinófilos,
polimorfonucleares, linfocitos, plaquetas y la cromatina de los núcleos. Tiene utilidad sobre
todo para poner de manifiesto las rickettsias localizadas dentro de las células huéspedes,
también para teñir frotis de sangre en el examen para protozoos. Se pueden emplear, como
variaciones, otras coloraciones como es la técnica de citoconcentración para parásitos
sanguíneos, la cual tiene un bajo coste y ofrece la posibilidad de aislar e identificar en el
mismo sedimento el parásito principal, con excepción de los trofozoitos jóvenes y
el Plasmodium falciparum; también se emplea la tinción de Wright. Este método de tinción
permite también la tinción diferencial de zonas con un alto contenido de ADN, y
concretamente de uniones A-T. Esto permite distinguir perfectamente en microscopio óptico
el núcleo celular, los cromosomas durante la mitosis, y en algunos casos, incluso el ADN
mitocondrial (kinetoplasto de algunos protozoos, como Trypanosoma).
Fundamento
Resultados en general

1. Citoplasma: morado
2. Núcleos: azul
3. Eritrocitos: rosa - naranja
4. Gránulos de las células cebadas: púrpura
5. Bacterias: azul
6. Parásitos: azul
Composición

La técnica de Giemsa está formada por varios colorantes: los tintes neutros utilizados
combinan el azul de metileno y el azur como tintes básicos y la eosina como tinte ácido, lo
que da una amplia gama de colores. El azul de metileno es un colorante metacromático, de
ahí que muchas estructuras se tiñan de púrpura y no de azul. El pH de la solución de
coloración es crítico y se debe ajustar con solución tampón.

Procedimiento

1. Preparar una extensión de sangre bien fina en un porta limpio, dejar secar (1-2 horas
aproximadamente).
2. Cubrir la preparación con metanol durante 3 minutos.
3. Dejar escurrir y secar al aire.

4. En el momento de empezar la segunda fase de la tinción, tomar 0,2 ml de Azur-Eosina-Azul

de Metileno solución según Giemsa (lento) y diluir en 2 ml de solución tampón pH 7,2.
Homogeneizar.
5. Cubrir la preparación con esta solución diluida durante 25 minutos.
6. Lavar durante dos minutos con solución tampón pH 7,2.
7. Dejar secar la preparación al aire, en posición vertical.
8. Observar la preparación con objetivo de inmersión.
Resultados

Tinción Giemsa modificada

La solución de Giemsa modificada ha sido especialmente diseñada por PanReac AppliChem

con el objetivo de aumentar el contraste y la intensidad de la coloración, manteniendo el
resto de las propiedades con respecto a la solución original.
Procedimiento de Tinción Giemsa modificada

1. Preparar una extensión de sangre bien fina en un porta limpio, dejar secar (1-2 horas
aproximadamente).
2. Cubrir la preparación con metanol durante 3 minutos.
3. Dejar escurrir y secar al aire.

4. En el momento de empezar la segunda fase de la tinción, tomar 5 ml de Azur-Eosina-Azul

de Metileno según Giemsa solución modificada y diluir en 50 ml de solución tampón pH 7,2.
Homogeneizar.
5. Cubrir la preparación con esta solución diluida durante 25 minutos.
6. Lavar durante 1 minuto con solución tampón pH 7,2.
7. Volver a lavar durante 1 minuto con solución tampón pH 7,2.
8. Dejar secar la preparación al aire en posición vertical.
9. Observar la preparación con objetivo de inmersión.
Resultados de Tinción Giemsa modificada
Referencias
http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
https://www.itwreagents.com/itwreagents_files/ce_ivd_instructions/CEIVD10/es_ES.pdf
http://www.laboquimia.es/pdf_catalogo/PANREAC_Tincion_de_Giemsa_modificada.pdf
http://www.cromakit.es/pdfs/inserts/998440.pdf