Biosensores

“Instrumentos analíticos que transforman procesos 
biológicos en señales eléctricas u ópticas y permiten su 
cuantificación”

   
 BIOSENSORES
•  Utilizan la especificidad de los procesos biológicos:
– Enzimas   x   Sustratos
– Anticuerpos  x   Antígenos
– Lectinas   x  Carbohidratos
– Complementariedad de ácidos nucleicos. 
•  Ventajas:
– Reutilización
– Menor manipulación
– Menor tiempo de ensayo
– Repetitividad
• Tipos y usos mas comercializados:
1. Tiras colorimétricas
2. Electroquímicos:
• Potenciométricos:  Glucosa,    Lactato,  Glicerol,   
Alcohol, Lactosa, L­aminoácidos, Colesterol
•  Amperométricos: Glucosa, Sacarosa, Alcohol
3. Ópticos:  BIAcore: Ag proteicos.
   
Propiedades de un buen Biosensor

   
   
 BIOSENSORES
1. Control de metabolitos críticos durante las operaciones quirúrgicas.
2.  Consultas y Urgencias Hospitalarias:
– Obvia análisis caros y lentos en laboratorios centrales
– Acelera la diagnosis y el comienzo del tratamiento
– Menor riesgo de deterioro de la muestra
3. Diagnóstico Doméstico:
• Ensayos de Embarazos
• Control de Glucosa en diabéticos
4. Aplicaciones in vivo:
– Páncreas artificial
– Corrección de niveles de metabolitos
– Problemas : Miniaturización y Biocompatibilidad
5. Aplicaciones Industriales,  militares y medio ambientales:
– Alimentación
– Cosmética
– Control de Fermentaciones 
– Controles de Calidad
– Detección de Explosivos
– Detección de gases nerviosos y/o toxinas biológicas
– Control de polución.
   
 TIPOS DE BIOSENSORES
1. BIOSENSORES ELECTROQUÍMICOS
– Amperométricos:    Determinan  corrientes    eléctricas    asociadas  con  los 
electrones involucrados en procesos redox
– Potenciométricos: Usan electrodos selectivos para ciertos iones 
– Conductimétricos:  Determinan  cambios  en  la  conductancia  asociados   
con cambios en el ambiente iónico de las soluciones
2. BIOSENSORES TERMOMÉTRICOS
3. BIOSENSORES PIEZOELÉCTRICOS
4. BIOSENSORES ÓPTICOS
– De onda envanescente
– Resonancia de plasma superficial
5. BIOSENSORES CELULARES
6. INMUNOSENSORES

   
 UNIDADES FUNCIONALES
DE UN BIOSENSOR

Reactor Transductor Amplificador

P 4.328
Electrodo de
referencia

   
 Reactor Transductor Amplificador

P 4.328
Electrodo de
referencia

Material biológico + Analito                 Analito unido Respuesta biológica

Respuesta Electrónica

Respuesta  (Máxima respuesta electrónica posible) x (Concentración del analito)
electrónica = (Constante de semisaturación) + (Concentración del analito)

   
 Cinéticas de reacción en biosensores

   
 TIPOS DE BIOSENSORES
1. BIOSENSORES ELECTROQUÍMICOS
– Amperométricos:    Determinan  corrientes    eléctricas    asociadas  con  los 
electrones involucrados en procesos redox
– Potenciométricos: Usan electrodos selectivos para ciertos iones 
– Conductimétricos:  Determinan  cambios  en  la  conductancia  asociados   
con cambios en el ambiente iónico de las soluciones
2. BIOSENSORES TERMOMÉTRICOS
3. BIOSENSORES PIEZOELÉCTRICOS
4. BIOSENSORES ÓPTICOS
– De onda envanescente
– Resonancia de plasma superficial
5. BIOSENSORES CELULARES
6. INMUNOSENSORES

   
 Biosensores Electroquímicos 
Amperométricos:
“El electrodo de Oxígeno”

   
 Electrodo de Oxígeno

   
 Electrodo de Oxígeno

(A) Disco de resina epoxy

(B) Cátodo de platino en el centro de un
saliente.
(C) Ánodo de plata en forma circular
(D) Anillo de goma que sostiene un papel
espaciador empapado en un electrolito y una
membrana de polytetrafluoroethylene que
separa los electrodos de la mezcla de
    reacción.
 DETERMINACION DE  GLUCOSA

O2

CH2 OH CH2 OH
H Glucosa
O O
H Oxidasa H
H H
OH OH O
H H

OH OH OH

H OH H OH
Glucosa + O2 H2 O2 δ-g luconolactona + H2 O2

   
 DETERMINACION DE  GLUCOSA

Electrodo de oxígeno
O2 + 2H2 O + 2e- H2 O2 + 2OH-
2H O + 2e-
2 2 2OH-
Cátodo (Pt)
Puente de KCl

4 e- Anodo (Ag)
- + 4Ag 4Ag+ + 4e-
0 ,6 ­ 0 ,7 v 4Ag+ + 4Cl- 4AgCl

   
DETERMINACION DE  SACAROSA
Invertasa Glucosa­oxidasa
Glucosa
Electrodo

Sacarosa

flujo
O2
Fructosa
Glucosa

D­gluconolactona
respuesta H2O2

glucosa
       sacarosa

    tiempo
 DETERMINACION DE
LA FRESCURA DEL PESCADO

Tras la muerte, los nucleótidos del pescado sufren una serie de 
reacciones de degradación progresiva:

ATP > ADP > AMP > IMP > HxR > Hx > Xantina > Acido úrico

(HxR + Hx ) x 100
K= ATP + ADP + AMP + IMP + HxR + Hx

   
 DETERMINACION DE
LA FRESCURA DEL PESCADO
BIOSENSOR: 
 xantina­oxidasa y nucleósdio fosforilasa inmovilizadas sobre 
una membrana de triacilcelulosa de un electrodo de Oxígeno.
nucleósido
HxR + P fosforilasa Hx + Ribosa P
K <  20  El pescado puede ser comido crudo.
20 > K < 40 El pescado debe ser cocinado. Xantina
Hx + O2 oxidasa Xantina + H2O2
K > 40 Pescado no apto para el consumo
Xantina
Xantina + O2 oxidasa Acido úrico + H2O2

Los  nucleótidos  se  podrían  determinar  utilizando  el  mismo  electrodo  y 

muestra, pero añadiendo nucleotidasa y adenosín­deaminasa

   
 Varios mecanismos redox

   
 Mediadores 
redox en 
biosensores 
amperométricos

   
 Miniaturización
Posible por la capacidad 
del pirrol para 
polimerizar mediante 
oxidaciones 
electroquímicas en 
condiciones 
suficientemente suaves 
como para atrapar 
enzimas y mediadores 
sin desnaturalizarlos

   
 Microelectrodo glucosa/lactato
Se  puede  recubrir  la  superficie  de  pequeños  electrodos  polimerizando 
pirroles  junto  con  biocatalizadores  y  mediadores,  utilizando  métodos  de 
micro  fabricación  de  microprocesadores,  en  incluso  disponiendo  varios 
sensores en los mismos

   
 Biosensores Electroquímicos 
Potenciométricos

Determinan cambios en la concentración de iones concretos

   
 Biosensores potenciométricos

   
 Biosensor potenciométrico

   
 Biosensores Electroquímicos 
Conductimétricos

Detectan cambios en conductividad eléctrica 
causados por alteraciones en la concentración de 
iones

   
 Sensor de Urea
NH2CONH2 +3H2O

Ureasa

2HN 4 + + HCO3­ + OH­

Otros ejemplos:
amidasas,
decarboxilasas,
esterasas,
fosfatasas y
nucleasas.
   
 Biosensores Termométricos:
“Sensores bioquímicos y TELISA”

   
 Biosensor 
termométrico

Precisa un aislamiento Correcto
Puede detectar diferencias de 0,0001 ºC
   
 Reacciones usadas en 
biosensores termométricos

   
 Biosensores Termométricos
1) Poco éxito comercial
2) Ventaja: se puede acoplar fácilmente varias reacciones en un 
único reactor
3) Ejemplo:
1) Detector de Lactato
Lactato + O2­­­­­­(lactato ­oxidasa)­­­> piruvato + H2O
Piruvato + NADH+ H+­­(lactato deshidrogenasa)­­> lactato + NAD+
4) Puede utilizarse células viables
5) Puede acoplarse a un inmunoensayo enzimático: ELISA 
termométrico o TELISA

   
 Biosensores Piezoeléctricos:
“Narices bioelectrónicas”
Aprovechan las propiedades eléctricas de los cristales:
­ En transmisores y emisores de radio
­ En transistores
­ En chips

   
 Efecto Piezoeléctrico
“Producción de un campo eléctrico por 
separación de las cargas positivas y 
negativas en algunos tipos de cristales al 
someterlos a ciertas tensiones”
1) Si un cristal piezoeléctrico se somete a un campo 
eléctrico se deformará.
2) Si un cristal piezoeléctrico se somete a un campo 
eléctrico que oscila a una frecuencia determinada 
vibrará con una frecuencia característica.

   
 Efecto Piezoeléctrico
1) La frecuencia de resonancia se encuentra en el 
rango de los 10 MHz (radiofrecuencia). 
2) La frecuencia de resonancia depende de:
• La composición del cristal
• El Grosor
• La forma en que fue cortado
3) Un cristal piezoeléctrico varía su frecuencia de 
resonancia cuando se adhieren moléculas a su 
superficie.

   
 Biosensores Piezoeléctricos
1) Se detectan variaciones muy pequeñas en la 
frecuencia de resonancia: cantidades de hasta un 
ngr/cm2
2) La medida se compra con un electrodo de 
referencia con cristal sin material biológico.
3) Ejemplos:
1) Detectores gaseosos: SO2, CO, HCl, NH3, CO2
2) Detector de Cocaina
3) Detector de Formaldehido
4) Detector de Pesticidas (Organofosforados)

   
 Biosensores Piezoeléctricos
1)Detector de Cocaína:
• Anticuerpos contra cocaína fijados 
sobre un cristal piezoeléctrico.
• Detecta una parte por billón
• 50 MHz de cambio en la frecuencia de 
resonancia.
• Se limpia en segundos por aireación.

   
 Biosensores Piezoeléctricos
2) Detector de Formaldehido:

CH2 +H2O +NAD+   NADH +HC02H + H2

Catalizada por la formaldehido deshidrogenasa 
inmovilizada  con  glutation  (cofactor)  por 
entrecruzamiento  con  glutaraldehido  en  un 
cristal de cuarzo a 9 MHz

   
 Biosensores Piezoeléctricos

3) Detector de Pesticidas Organofosforados:

• Colinesterasa inmovilizada en un cristal 
de cuarzo mediante glutaraldehido.

   
 Biosensores Piezoeléctricos

Inconvenientes:
• Muy influidos por la humedad.
Baja = poco sensibles
Alta = desaparece el efecto 
piezoelectrico
• Inutilizables en líquidos.
Introducir y secar

   
 Biosensores Ópticos:

• Permiten el uso de materiales detectores no 
eléctricos, seguros en ambientes peligrosos 
o sensibles (in vivo)
• No precisan sensores de referencia

   
Biosensor de 
fibra óptica 
para lactato
•Detecta cambios en la 
en la concentración de 
oxígeno determinando la 
reducción de la 
fluorescencia de un 
fluorocromo (quenching)

   
 Biosensor de célula óptica para 
albúmina sérica

•Detecta la absorción de luz a 
630 nm que pasa a través de la 
célula detectora.
•Se evalúa el cambio de 
amarillo a azul verdoso del verde 
de bromocresol cuando se une a 
la albúmina sérica a pH 3.8
•Respuesta lineal a la albúmina 
en un intervalo de 5 a 35 mg/cm3

   
 Biosensores Ópticos
1) Detección de Vapores:
• Ensayo sólido colorimétrico que detecta vapor de 
alcohol utilizando alcohol­oxidasa, peroxidasa y 2,6­
diclorindofenol sólidos dispersados sobre placas de TLC 
(cromatografía en capa fina) de celulosa microcristalina 
transparente.
2) Tiras colorimétricas de un solo uso:
• Los más utilizados: análisis de sangre y orina.
• Control de la glucemia en diabéticos
­ Glucosa oxidasa, peroxidasa de rábano y un 
cromógeno que cambia el color al ser oxidado

Cromógeno (2H) + H2O2­­­­(peroxidasa)­­­>colorante + 2H2O
   
 Biosensores Ópticos
3) Reacciones luminiscentes:
• Utilización de luciferasa
• Detecta la presencia de microorganismos en orina al 
liberar ATP en su destrucción

Luciferina + ATP­­­­(luciferasa)­­­> oxiluciferina + CO 2 + AMP + ppi + luz

   
 Biosensores ópticos de onda evanescente

Menor índice de refracción >

Mayor índice de refracción >

“Un  haz  de  luz  será  reflejado  en  su  totalidad  cuando  incida 
sobre  una  superficie  transparente  presente  entre  dos  medios, 
cuando  proceda  del  medio  con  mayor  índice  de  refracción  y 
cuando el ángulo de incidencia sea mayor que un valor critico” 

   
 Biosensores ópticos de onda evanescente

Menor índice de refracción >

Mayor índice de refracción >

“En el punto donde se produce la reflexión, se induce un campo 
electromagnético  que  penetra  en  el  medio  que  tiene  menor 
índice de refracción”
“Este  campo  es  denominado  onda  evanescente  y  decae 
exponencialmente  con  la  distancia  de  penetración, 
desapareciendo tras unos pocos nanómetros” 
   
 Biosensores ópticos de onda evanescente

Menor índice de refracción >

Mayor índice de refracción >

“La onda evanescente decae exponencialmente con la distancia 
de penetración, desapareciendo tras unos pocos nanómetros” 
“La  profundidad  a  la  que  penetra  depende  del  índice  de 
refracción, de la longitud de onda de la luz utilizada y puede ser 
controlada con el ángulo de incidencia.

   
 Biosensores ópticos de onda evanescente

Menor índice de refracción >

Mayor índice de refracción >

“La  onda  evanescente  puede  interaccionar  a  su  vez  con  el 

medio,  provocando  un  campo  electromagnético  que  puede 
volver al medio con mayor índice de refracción, dando lugar a 
cambios en la luz que continúa a lo largo de la guía de ondas.”

   
 Inmunosensor de onda evanescente
Especialmente indicados para 
inmunoensayos:
•No es necesario separar el resto 
de los componentes de una muestra 
clínica
•La onda solo penetra hasta el 
complejo antígeno anticuerpo
•Se excitan fluorocromos unidos 
a la superficie mediante la onda 
evanescente, y la luz emitida por 
ellos volverá a la fibra óptica
•La cantidad de muestra 
necesaria es mínima

   
 Resonancia de plasma superficial

“Si  la  superficie  del  cristal  está  recubierta  por  una  capa 
metálica  (oro,  plata,  paladio)  los  electrones  de  su  superficie 
pueden  oscilar  en  resonancia  con  los  fotones  generando  un 
onda  de  plasma  superficial  y  amplificando  el  campo 
evanescente en la cara mas alejada del metal”

   
 Resonancia de plasma superficial

“Si  la  capa  de  metal  es  lo  suficientemente  delgada  como  para 
permitir  al  campo  evanescente  penetrar  hasta  la  superficie 
opuesta, el efecto será muy dependiente del medio adyacente al 
metal”

   
 Resonancia de plasma superficial

“Este fenómeno sucede sólo cuando la luz incide con un ángulo 
específico, el cual depende de la frecuencia, el grosor de la capa 
metálica  y  el  índice  de  refracción  del  medio  que  se  encuentra 
inmediatamente sobre la superficie metálica”

   
 Resonancia de plasma superficial

“La  producción  de  esta  resonancia  de  plasma  superficial 

absorbe parte de la energía de la luz reduciendo la intensidad de 
la luz reflejada internamente”

   
 Resonancia de plasma superficial

“Los  cambios  que  suceden  en  el  medio  provocados  por 

interacciones  biológicas  pueden  ser  apreciados  detectando  los 
cambios  de  intensidad  de  la  luz  reflejada  o  el  ángulo  de 
resonancia”

   
 Cambio en la absorción por 
efecto de la resonancia de plasma 
superficial
“Detección  de  la 
gonadotropina 
coriónica  humana 
(hCG) mediante un 
anticuerpo  unido  a 
la  superficie  del 
biosensor: 
La  unión  cause  un 
cambio  en  el 
ángulo  de 
resonancia”
   
 Resonancia de plasma superficial

•Permiten detectar partes por millón
•Un análisis típico requiere 50µl de muestra y tarda 5 a 10 minutos
•Puede utilizarse con DNA y RNA.

   
 Biosensores celulares

   
 Inmunosensores

   
 Tipos de 
inmunosensores