Dr.

Eduardo Chancay López

Jefe de la Cátedra de Bacteriología
Los antibiogramas o antibioticograma, son
métodos de laboratorio que estudian la
sensibilidad de un microorganismo a la acción
de los ANTIBIOTICOS. El término sensible es
muy usado como sinónimo de susceptible.
Susceptible significa que un microorganismo es
inhibido o muerto en las pruebas in vitro por una
concentración del antibiotico accesible en la
sangre, cuando ese mismo antibiotico se utiliza
in vivo.
DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ
JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
2
Un "ANTIBIOGRAMA" consiste en
poner en contacto al germen que
hemos cultivado con distintos
antibióticos para ver cual de ellos
es el que mejor va como
tratamiento.

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
3
 OBJETIVOS:

Medir la sensibilidad de una cepa

bacteriana que se sospecha que es
la responsable de una infección.

Seguir la evolución de las

resistencias bacterianas.

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
4
 ¿CUANDO DEBEMOS SOLICITAR UN ANTIBIOGRAMA?

A) El microorganismo aislado, causante de la patología, no es uniforme

en su comportamiento frente e los antibioticos usuales; es decir,
cuando la bacteria es de un tipo frecuentemente resistente a los
antimicrobianos. Ejemplo: bacilos Gram (-), Mycobacterium
tuberculosis.

B) En infecciones microbianas graves que comprometen seriamente la

salud del paciente; es decir, cuando es probable que el proceso
infeccioso sea mortal, a menos que sea tratado en forma específica,
por ejemplo: endocarditis, absceso cerebral, septicemias,
osteomielitis.

C) Si se desconoce la susceptibilidad del microorganismo aislado a los

antibioticos de uso frecuente.
DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ
JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA 5
 ¿TIPOS DE ANTIBIOGRAMA?

 Según las necesidades respiratorias de los microorganismos

se pueden realizar dos tipos de estudios, como son el
antibiograma para gérmenes aeróbicos y el antibiograma
para gérmenes anaerobios.

 El antibiograma para gérmenes aeróbicos son los únicos que

se realizan en forma sistemática en muchos laboratorios.

 El antibiograma es una prueba que se utiliza para medir la

susceptibilidad de los microorganismos en presencia de
sustancias antibióticas. Esta capacidad puede ser estimada
ya sea, por el método de dilución o de difusión.

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
 REQUISITOS QUE DEBE REUNIR UN ANTIBIOGRAMA:

Debe ser de amplio espectro nutritivo, para que permita el

crecimiento de la mayoría de microorganismos.

Debe tener un pH estable (7,2 - 7,4) y no sufrir

oscilaciones por acción de los microorganismos sobre los
componentes del medio; la acidez favorece la actividad de
beta-lactámicos, tetraciclina, y novobiocina; y la
alcalinidad la de los aminogucósidos y macrólidos.

-No debe contener inhibidores de antimicrobianos como

son peptonas, sales de Ca++ y Mg++, o cualquier otro
antagonista por competencia.

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ 7

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA

Las pruebas de susceptibilidad pueden
clasificarse en:

PRUEBAS CUANTITATIVAS (DILUCION)

PRUEBAS CUALITATIVAS (DIFUSION)

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

8
JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
 Es considerado el método de referencia. En este método,
placas conteniendo una determinada concentración de un
antibiótico son inoculadas con el microorganismo en
estudio y luego incubadas por 16 a 18 horas. Después de
la incubación, se examina si el organismo crece o no en
cada una de las placas, con lo cual se determina la
concentración inhibitoria mínima (CIM) para el
antibiótico.

 MIC (Concentración Mínima Inhibitoria).- Es la

concentración más baja que inhibe el desarrollo de las
bacterias después de la incubación nocturna. El valor
MIC es entonces comparado con las concentraciones
conocidas de la droga obtenidas del suero del paciente o
de los fluidos orgánicos del mismo, para en esta forma
sentar la respuesta clínica probable.

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
En los métodos de dilución en caldo, base de
casi todos los métodos utilizados en la
actualidad, se colocan concentraciones
decrecientes del agente antimicrobiano,
generalmente diluciones 1:2, en tubos con un
caldo de cultivo que sostendrá el desarrollo del
microorganismo.
El caldo más comúnmente usado para estas
pruebas es el de Mueller-Hinton suplementado
con los cationes magnesio y calcio.

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA 10
Sobre el agar uniformemente sembrado con el
organismo de ensayo, se colocan discos de papel
filtro impregnado de antibiótico.

Por difusión se forma un gradiente de

concentración del antibiótico desde el disco hacia la
periferia y el desarrollo de microorganismos es
inhibido a cierta distancia del disco cuyo diámetro
está relacionado, entre otros factores, a la mayor
susceptibilidad del microorganismo

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

11
JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
•Es el método de difusión en discos, y se lo ha catalogado como un
método de referencia en la susceptibilidad antimicrobiana y podrá
ser utilizado como una técnica rutinaria en el laboratorio. Este
método es apropiado particularmente en pruebas con bacterias de
la familia Enterobacteriaceae, pero puede ser también
recomendado como un método general para todos los patógenos de
crecimiento fácil y rápido, exceptuando los anaerobios estrictos.

•Interpretación: En éste método la interpretación de los resultados

está basado sobre la relación entre la concentración inhibitoria
mínima (MCI) y el diámetro de la zona de inhibición

El sistema más simple comprende solamente dos categorías

susceptibles y resistentes, ésta clasificación aunque ofrece muchas
ventajas para los propósitos estadísticos epidemiológicos es
demasiado inflexible para la utilización del clínico. En el método de
Kirby Bauer modificado se reconocen tres categorías de
susceptibilidad que son sensible, resistente e intermedio.

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA 12
 Cuando se prepara él inoculo a partir de un cultivo primario, se
tocan con el asa de inoculación 4 o 5 colonias bien aisladas y de
apariencia morfológica idéntica. Este crecimiento se transfiere a un
tubo con caldo nutritivo o caldo de Muller Hinton.
 Se incuba de 2 a 5 horas en general a una temperatura de 35°C,
luego se hace una comparación del caldo cultivado con el
nefelómetro, se ajusta la turbidez del caldo diluyéndolo con caldo
estéril o solución salina estéril, este ajuste es necesario para
asegurar el desarrollo resultante sea confluente.
 Las cajas son inoculadas mojando la torunda estéril en él inoculo
(ésta torunda debe ser de madera), desechar el exceso de caldo por
presión y rotación de la torunda contra las paredes del tubo.
Extender entonces él inoculo sobre el agar, debe pasar la torunda 2
a 3 veces sobre la superficie del medio, girando cada vez la caja 60
grados, para asegurar una siembra uniforme.
 Dejar secar la caja sin sobrepasar los 15 minutos antes de aplicar
los discos.
 La caja debe ser colocada en el incubador a 35°C, dentro de los 30
minutos posteriores a su preparación.
 Después de la incubación se mide el diámetro de cada zona de
inhibición, anotándolo en mm.

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ 13

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA

Existen diversos factores técnicos que influirán en el
tamaño de la zona de inhibición, entre los cuales
tenemos:

Densidad del inóculo.

Potencia de los discos de antibióticos

Temperatura de incubación

Tamaño de las cajas, fondo del agar y espacio entre discos

Tiempo de espera para la aplicación de disco

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

14
JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
 DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ
JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
 Intermedia: Intermedia:

RESISTENTE
Sensible:

Resistente:

Sensible:

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ 16

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
 Intermedia.-

Sensible:

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
17
 Zona De Inhibición.- Se considera así al círculo alrededor del disco en
el que hay ausencia total de crecimiento bacteriano.

Lectura.- Hay algunas formas de interpretar las zonas de inhibición, las

más comunes son:

 Usando una regla; en éste caso la zona de inhibición son medidas en

mm, y los diámetros son interpretados de acuerdo al antibiótico y su
concentración en mg.

La tendencia actual; es la de que los técnicos hagan interpretaciones

binarias es decir, sensible o resistente, quedando incluida la respuesta
intermedia en la resistente.

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
18
 Sensible.- Un microorganismo es llamado sensible a un
antimicrobiano cuando la infección causada por él es probable que
responda favorablemente al tratamiento con éste agente a las dosis
usuales recomendadas.

 Intermedia.- Cuando la infección es probable que responda

favorablemente el tratamiento a dosis inusualmente altas del
antimicrobiano.

 Resistente.- Es término que implica la expectativa de que el

microorganismo no responda a una droga dada, independientemente
de la dosis y localización de la infección.

 La última decisión para usar un antibiótico en particular y la dosis a

ser administrada dependerán no solamente del resultado de la
prueba de susceptibilidad, sino también de su interpretación.

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
19
 MÉTODO DE EPSILON-TEST

 Es uno de los métodos más  El microorganismo a investigar

recientes que se han se inocula en una placa y
presentado en el mercado y sobre ella se deposita la tira
resulta de una curiosa del antibiótico (o antibióticos) a
combinación de ensayar
características de los
métodos anteriores.
 Se trata de una técnica
cuantitativa en placa que  Tras la incubación de 16-24
permite obtener una lectura horas a 35ºC se observan las
directa de CMI en µg/ml, ya placas y se valora la zona de
que se emplean tiras inhibición, de forma elíptica,
plásticas impregnadas en
alrededor de cada tira.
concentraciones crecientes
de antibiótico indicadas en
una escala graduada sobre
la propia tira.
DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ
20
JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA
MÉTODO DE EPSILON-TEST

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA 21
 MÉTODOS
AUTOMATIZADOS

 Estos novedosos métodos

utilizan sistemas de micro
dilución en medio líquido
sobre microplacas con
pocillos en "U“.

 Interpretan el crecimiento
bacteriano en los
diferentes pocillos por
medio de un
autoanalizador.

DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA 22
 DR EDUARDO CHANCAY LOPEZ 23

JEFE DE LA CATEDRA DE BACTERIOLOGIA