Arquitectura y desarrollo del micelio, y la producción de

esporas Scutellospora reticulata en cultivos monoxénicos de

raíces de zanahoria transformada con Ri T-DNA .
De Souza Adriano Francisco y Declerck Stéphane, 2003. Micología, pp. 1004-
1012

Alumna:
Lic. Shirley Amaya
 Introducción
 Hongos micorrícicos arbusculares (HMA), forman un grupo
monofilético de hongos simbiontes obligados de plantas.
 Filum Glomeromycota.
 Scutellospora, es el genero que contiene el 17% de especies
descritas.
1) Problemática
 Algunas especies son difíciles de aislar y conservar en colecciones.

x
Scutellospora crenulata Scutellospora spinosissima Scutellospora projecturata
 Cultivo monoxénico (MC)

2) Problema
 La mayoría de los datos fueron obtenidos con especies Glomus
y Gigaspora.

 Especies de Scutellospora raramente fueron reportadas.

 Objetivos

i) Establecer y describir a largo plazo cultivos de Scutellospora

reticulata (Koske, Miller and Walker) bajo cultivos monoxénicos en
asociación con raíces de zanahoria transformadas con Ri T-DNA.

ii) Describir el desarrollo fúngico, es decir la germinación de esporas,

colonización de raíces, desarrollo y arquitectura de micelio y
producción de esporas.
 Materiales y Métodos
 Aislamiento fúngico  Establecimiento de cultivos monoxénicos  Cosecha y datos recogidos
 Scutellospora reticulata EMBRAPA CNPAB11  Esporas esterilizadas superficialmente  El índice de germinación de esporas fue
proporcionado por Embrapa agrobiología, procedimiento modificado de Becard y piché analizada para 3 sets (series) de 100
seropedica, RJ, Brasil. (1992). esporas, durante 4 semanas.
 La cepa fue aislada de suelos erosionados,  Transferencia de esporas individualmente a  Desarrollo del micelio, la diferenciación
cultivada a partir de una sola espora en placas petri (agar-agua al 0.8%), pH 6.0, de puntas de hifas hinchadas, células
Brachiria decumbens (cultivadas en macetas incubadas en posición invertida, en la oscuridad auxiliares y esporas, fue analizada, en 10
de 1Lt con mezcla de suelo arcilloso y arena a 27 °C hasta la germinación. placas dispuestas aleatoriamente, por
arriba de los 8 meses.
(1:1 v/v), pH 4.8-5.2, mejorado con 5.5g/Kg de  2 o 3 días después de la germinación, se
roca de fosfato y fertilizado con solución transfiere un bloque de agar que contiene una  La dimensión de las esporas fue
nutritiva de concentración 1/10 sin fosforo. única espora a otra placa petri cerca de la raíz evaluada usando 12 esporas maduras
de la zanahoria transformada. escogidas aleatoriamente en cada unidad
 Después de 8 meses: secado- raíces experimental.
removidas- 2 esporas por cm3 con 343 µm de  Se utilizó como medio de cultivo Strullo-
diámetro- macetas almacenadas a temperatura Romand (MSR) solidificado con 4 g/L de Gel-  Después de 8 meses las esporas se
Gro. remueven del medio de crecimiento con
ambiente.
pinzas, se germina y se re-asocia con las
 Las unidades experimentales consistieron en raíces de zanahoria tranformada en el
 Después de 2 años: extracción de esporas- una espora-raíz de zanahoria en una placa petri,
reexaminación de esporas- transferencia a medio MSR, para probar su capacidad de
con 30 mL de medio MSR, incubados de forma formar nuevas colonias y esporas.
tubos de vidrio invertida en la oscuridad a 27 °C, por 8 meses.
 La anastomosis fue evaluada en 100
puntos de intersección por unidad
experimental
 Resultados
70% de esporas
pregerminadas colonizaron
las raíces de zanahoria y
Establecimiento de cultivo monoxénico,

produjeron esporas.

El desarrollo del micelio

esporulación y subcultivo

extramatrical fue extensivo

Numerosas unidades de
infección se formaron en
las raíces

La primera hija espora se

forma entre la 10 – 12
semanas después de la
colonización.

Las esporas fueron

globosas en todos los
cultivos con un diámetro
promedio de 376 µm

El promedio de germinación fue del 76% en agua- agar y el 75 % en el medio MSR

Arquitectura y desarrollo de micelio extrarradical
El micelio se caracteriza por:
 Hifas gruesas de color marrón-
anaranjado (5.7-17.6 µm) similar
a hifas corredoras (RH).

 las hifas ramificadas de menor

orden (más delgadas) formó
células auxiliares, esporas e
hifas esporogenicas, hifas
hinchadas y estructuras igual a
ramificaciones absorbentes
(BAS-L).

RH presento dos patrones

arquitectónicos que ocurren en la
misma colonia:
1) Forma círculos abiertos o
espirales
2) Creció recto y solo se curvo
ligeramente.
 Se formaron ramificaciones primarias y
secundarias y también ramificaciones de
hifas esporogenas.
Hifas hinchadas y estructuras ramificadas

Estas hifas eran numerosas y delgadas (<1-

5.3 µm), rectas y retorcidas, extendidas
radialmente en un volumen mayor a 2mm3.

Los BAS-L fueron hialinos globosos u

absorbentes.

ovoides con dimensiones de 13-18 µm por

26-36 µm.

Estas estructuras se parecían a vesículas

extrarradicales o esporas inmaduras porque
con frecuencia contenían material
citoplasmático denso que se encuentra en
esporas expandidas.
 Se observo menos del 1 % de anastomosis .

Se observo solo en las hifas secundarias que forman

BAS-L.
Anastomosis

No se observa anastomosis entre la RH

Se detecto un mecanismo para reparar el daño de las

hifas.

Se formaron puentes de hifas cuando el flujo del

citoplasma estaba obstruido o para reconectar hifas.
 Se formaron por ramificaciones
cortas que ocurren en uno o
simultáneamente en ambos lados
de una hifa.

El numero de células en cada célula

auxiliar varia de dos a más de
Células auxiliares

veinte.

Se formaron abundantemente en la
superficie de la raíz y en las células
corticales externas de la raíz.

Las células auxiliares jóvenes

contenían inclusiones
citoplasmáticas densas que se
asemejaban a las gotitas lipídicas
encontradas en esporas de AMF de
aspecto saludable.

Después de 8 meses muchas

células auxiliares estaban vacías
dejando una cicatriz.
 Discusión
• Scutellospora se mantiene en un numero relativamente bajo de
especies vivas en colecciones de cultivo.
Morton (1995)

x
S. gregaria Michrodochium

Hijri et al 2002

S. castanea
• El MC de S. reticulata proporciona una nueva perspectiva en el cultivo de este genero y amplia la gama
de géneros de HMA.
• Este sistema permite observaciones no destructivas del micelio extrarradical y la secuencia del
desarrollo de las esporas.
• La tasa de germinación de las esporas fue alto para esporas de 2 años y para esporas producidas con
ROC, lo que demuestra el potencial de supervivencia a largo plazo y la viabilidad de las esporas
producidas por MC.
• La técnica de MC les permitió estudiar el desarrollo del micelio externo y sus estructuras durante largos
periodos.
• La producción de esporas dentro de este sistema vario de entre 24 a 130 por placa petri
 Existen tres etapas de Glomus intrarradices que coinciden con S. reticulata:
• i) la proliferación de las hifas corredoras que actúan como canales conductores, que se
dividen de forma dicotómica y extienden radialmente la colonia fúngica.
• ii) el desarrollo de estructuras similares a arbusculos, que se forman en intervalos
regulares a lo largo de las hifas corredoras y que podrían desempeñar un papel
preferencia en la absorción de nutrientes.
• iii) formación de esporas en zonas ya colonizadas por hifas corredoras y estructuras
tipo arbuscular.
 La RH observada aquí es casi idéntica a lo que Friese y Allen (1991) definieron como hifas
corredoras, sin embargo observaron que estas hifas desempeñaban un papel en la
asignación de recursos dentro de la red fúngica. RH funciona como un “sistema
circulatorio”.
 BSA-L reportado aquí se asemejan a las descritas por Bago et al., (1998b) para G.
intrarradices, pero fueron menos frecuentes en puntas hinchadas.
 Se observa anastomosis entre hifas originadas de la misma espora y de diferentes esporas
del mismo aislado, esto en Glomus (Giovennanetti et al 1999, 2001, 2003).
 Las funciones de las células auxiliares sigue siendo especulativo , se formula su rol de
almacén transitorio , y su participación en la reproducción