Desarrollo de Productos

Naturales Fitoterapéuticos y
Cosmecéuticos a partir de
Plantas nativas de Bolivia

Dra. Giovanna Almanza

Laboratorio de Bio-orgánica
Instituto de Investigaciones Químicas
UMSA
Definición de Productos
Fitoterapéuticos y Cosmecéuticos
 Los productos fitoterapéuticos son aquellos
productos con propiedades terapéuticas que tienen
como principio activo un extracto o “fitocomplejo”
de una planta medicinal
 También son llamados: Productos Naturales (Perú),
Medicamentos Naturales (Bolivia) o Productos
Fitofármacos, entre otros.
 Los productos naturales Cosmecéuticos son aquellos
cosméticos de origen natural que además tienen
alguna propiedad terapéutica
BOLIVIA UN PAIS MEGADIVERSO
Importancia de Productos Naturales
Las plantas medicinales representan cerca del 25% del total de las
prescripciones médicas en los países industrializados. En los países
en desarrollo representa el 80% del arsenal terapéutico.
 El 25% de los fármacos para la salud está constituido por moléculas
de origen vegetal
 Plantas como Biofábricas
 Escasez de nuevos descubrimientos por los procesos tradicionales
de síntesis química.

NP mimic biological
Synthetic
from N Natural Product

NP mimic

Derived from NP

synthetic
 LOS COSTOS DE UN PRODUCTO FARMOQUIMICO

ug Dicovery Today, 10, 2005

Importancia de Productos Naturales
Fitoterapéuticos y Cosmecéuticos
Los productos naturales tienen una aceptación cada vez mayor en el
mercado farmacéutico y cosmético, particularmente aquellos que
cuentan con el debido respaldo científico que asegura su eficacia e
inocuidad.
…el “producto natural” es más seguro más manejable y menos tóxico
que un producto sintético (no se han observado efectos colaterales –
prevención de enfermedades no cura de enfermedades)
Los extractos o los fitocomplejos están constituidos por varias
moléculas bioactivas algunas potencialmente tóxicas, la concentración
podría ser crucial!!!
Las pruebas científico-clínicas se constituyen en la parte más
importante y más requerida en países como Bolivia, para la
industrialización de estos productos con fines de comercialización
interna y externa
El mercado de “Productos Naturales” está creciendo a nivel
internacional, particularmente en países como Canada, Japón,
Dinamarca, Paises Bajos y Alemania.
 COMPLEJO
Ciclo de Investigación, PRODUCTIVO
Desarrollo e Innovación
Actores: Investigadores UMSA-LAFAR-FHI
Identificación de potenciales
Productos Fitoterapéuticos
Respaldo científico-clínico de
Productos fitoterapéuticos
Obtención, control y
Ciclo de Producción primaria
estandarización del principio
Actores: Productores, Proveedores,
activo (Extracto)
Agrónomos, biólogos, ONG,
Programa de Biocomercio

Cultivo orgánico
Almacenamiento, secado y molienda

Ciclo de Transformación y
Mercadeo
Actores: Industria Farmacéutica Socios estratégicos:
Transformación a forma farmacéutica Gobierno
Control de calidad ONGs
Investigación de mercado Médicos Tradicionales
Marketing y comercialización Naturistas
NORMATIVA EN BOLIVIA
 Bolivia cuenta hoy con una ley de Medicamentos No 1737, sancionada el 17
de diciembre de 1996 y su decreto supremo reglamentario No 24672 del 21
de junio de 1997. Complementando esta ley y considerando que Bolivia
cuenta con un importante potencial fármaco-botánico y una tradición
milenaria en el uso de las plantas medicinales, en 1999 se dicta en La Paz las
Normas para Medicamentos Naturales Tradicionales y Homeopáticos

 Acción terapéutica
 Patología tratada
 Ensayo microbiológico
 Ensayo pre- clínico /farmacológico / experimentales
 Ensayo toxicológico
 Eficacia / Efectos clínicos (si corresponde)
 Características fisicoquímicas
 Características macroscópìcas
 Características microscópicas: Histiología, morfología.
 Ensayo Fitoquímico (identificación de principios activos, si corresponde)
 Estudios de estabilidad
 Propiedades organolépticas
 Almacenamiento/Conservación
 Características botánicas
 Evaluación de riesgos
 Toxicología / Inocuidad
 Uso tradicional / Etnobotánica
 Metodología para la investigación
química de fitofármacos (OMS)
(Napralert- Illinois- 1999)

Etapa I: Caracterización fitoquímica preliminar

Confección del informe de revisión bibliográfica sobre la

composición química de la especie
 Preparación de extractos alcoholicos o hidroalcohólicos (30-80
% v/v)
Realización del screening Fitoquímico para determinar tipos de
Metabolitos secundarios presentes en la planta.
 Realización de un screening toxicológico y farmacológico:
Extractos secos (Liofilización o rotaevaporación a sequedad)
 Determinación de componentes
Etapa II: bioactivos

∗Estudio fitoquímico (bioguiado)

∗Aislamiento y elucidación estructural del principio (s) activo (s)
∗Evaluación farmacológica in vitro e in vivo
Se analizará por el Comité de Expertos.
∗Métodos de fraccionamiento para obtener fracciones de mayor acción
farmacológica.
∗Crear procedimiento de extracción en mayor escala para obtener
más cantidad de sustancia activa para estudios de Farmacología
y
Toxicología.
Una vez conocido el compuesto o los compuestos que
poseen actividad (fitocomplejo)

Marcadores químicos de Control de

Calidad de los extractos a utilizarse
en los productos fitoterapéuticos
 Establecimiento de técnicas de análisis
Etapa III: de marcadores químicos de actividad .

∗Desarrollar técnicas analíticas para determinar la concentración de los

compuestos relacionados con la acción farmacológica
( GC/MS- HPLC-TLC).
¿Qué parte de la planta posee mayor principio activo?.
¿Cuál es la mejor etapa de recolección?
∗Desarrollar métodos físicos, químicos y físicoquímicos que
permitan caracterizar farmacognosticamente la planta o parte de la
planta con fines de normalización y diferenciación quimiotaxonómica
de especies.
∗Desarrollar métodos físicos, químicos y físicoquímicos que permitan
obtener especificaciones de calidad del extracto activo por su
normalización después de desarrollado su proceso tecnológico.
 Etapa IV: Establecimiento de las especificaciones
de calidad del producto fitoterapéutico

∗Responsabilidad del Comité de Expertos determinar la forma

farmacéutica más aconsejable según su uso y destino.

∗Se validarán los métodos químicos, físicos y físico químicos para

establecer especificaciones de calidad, para su normalización y registro
 Etapa I
Estudio
Preliminar Selección de
plantas
 En el campo científico, hasta ahora se
han realizado los estudios químicos y
biológicos preliminares de 26 especies
vegetales reconocidas en el Ministerio
de Salud por su uso tradicional, dando
varias publicaciones en revistas
científicas del área.
 Entre estas especies estudiadas
resultaron muy interesantes las
Chillkhas
 Etapa I
Estudio
Preliminar
Baccharis latifolia

Chillkhas
 B. latifolia (Chillkha negra)
 B. pentlandii (Chillkha clara)
 B. papillosa antes B. obtusifolia
(Chillkha redonda, jathun thola)
Tienen un reconocido uso
tradicional en Bolivia y otros
países latinoamericanos, en el
tratamiento de enfermedades
como el reumatismo, problemas
del hígado y principalmente se
usan en cataplasmas para aliviar
inflamaciones externas causadas
por fracturas y dislocaciones

B. papillosa
subsp. papillosa
 Etapa I
Estudio
Preliminar
Antecedentes químicos del género
Baccharis OR

O
R'O
 La familia americana del género
Baccharis abarca cerca de 400
especies, de las cuales más de 60 OR'' O
especies han sido investigadas
químicamente, aislándose B. alaternoides
principalmente flavonoides y
diterpenos tipo clerodano, labdano
y kaurano

CHO

OH
O

B. oxydonta
CHO

B. munitiflora
 Etapa I
Estudio
Preliminar
Actividad antioxidante de
flavonoides
 Los compuestos flavonoidicos
han sido estudiados por su
actividad biológica en diversos
campos. Particularmente son
bien conocidos como
antioxidantes a través de
diferentes mecanismos, como:
 Scavengers de radicales libres
 Inhibidores de procesos de
lipoperoxidación
 Acomplejantes de metales de
transición
 Etapa I
Estudio
Preliminar
Relación de Ac. Antioxidante con
otras actividades (Antiinflamatoria)
.

Búsqueda basada en
datos etnofarmacológicos:
Plantas usadas para inflamaciones, Actividad Antinflamatoria
Asma, problemas hepáticos, entre otros

Inhiben la Actividad Antimiutagénica

formación de ROS
Actividad Actividad Anticancerígena
Antioxidante
Enfermedades de piel
Inhiben la reactividad
de ROS
(Scavengers of free radicals) Enfermedades
neurodegenerativas

Pancreatitis y Hepatitis
 Etapa I
Estudio
Preliminar
Estudio fitoquímico y
farmacológico preliminar
Especie Esteroles Taninos Flavonoides Saponinas Alcaloides ABTS
Triterpenos (%I)

B. boliviensis ++ + +++ - - 52.8

B. Incarum +++ - ++ +++ +/- 42.2

B. latifolia ++ - ++ + +/- 85.9

B. santelices + - ++ + - 96.8

B. papillosa ++ - ++ + - 89.3

B. pentlandii ++ - ++ + - 57.8

B. leptophylla +++ - +++ + - 40.3

B. genistilloides + - ++ + - 79.8

Baccharis sp + ++ +++ +/- +/- 48.3

 Etapa I
Estudio
Preliminar
Chillkhas – Ac. Antiinflamatoria in vitro
Treatmente Extract Dose PGE2 (ng/ml)a LTC4 (ng/ml)a
Control – – 0.1±0.5 0.4±0.1
Cells alone – – 0.0±0.3 0.0±0.2
Indomethacin – 100 µM 0.0±0.1** –
NDGA – 25 µM – 0.0±0.2**
Baccharis obtusifolia Hexanic 12.5 µg/ml – –
Dichloromethanic 25 µg/ml – 0.0±0.3**
Ethanolic 200µg/ml – 0.0±0.2**

Aqueous 200µg/ml – 0.0±0.9**

Baccharis latifolia Hexanic 25 µg/ml 0.0±0.2** 0.0±0.2**
Dichloromethanic 25 µg/ml 0.0±0.1** –
Ethanolic 200µg/ml 0.0±0.5** 0.0±0.1**
Aqueous 200µg/ml 0.0±0.2* 0.0±0.7**
Baccharis pentlandii Hexanic 12.5 µg/ml 0.0±0.2** –
Dichloromethanic 50 µg/ml 0.0±0.5** 0.0±0.2**
Ethanolic 200µg/ml 0.0±0.1** 0.0±0.2**
Aqueous 200µg/ml – –

a All values are mean±S.E.

* Significant (Student’s t-test P < 0.05).
** Significant (Student’s t-test P < 0.01).
Journal of Ethnopharmacology
103 (2006) 338–344
 Etapa I
Estudio
Preliminar Chillkhas- Ac. Antiinflamatoria in
vivo

Eduardo Gonzales et.al. Revista Boliviana de

Química 2007
 Etapa II
Comp. Ac.
Met. Ex.
Especies seleccionadas para
estudios más profundos

 Baccharis latifolia
 Baccharis papillosa subsp.
papillosa
Compuestos aislados anteriormente en B. obtusifolia

Zdero, C. 1987

Estudio fitoquímico preliminar sobre extractos en B.

obtusifolia

extracto extracto extracto extracto

metanólico etanólico diclorometánico hexánico

Vivanco, O. 2004 24
 Etapa II
Comp. Ac. Obtención de extractos
Met. Ex.
enriquecidos en componentes
activos
 Metodología UV de optimización de Extracto Etanólico
Colecta 1 (Julio 2006) : 20,68%
Colecta 2 (Enero 2007) : 16,46%

Univ. Oscar Mamani

Metodología ácido base de obtención de Extracto

fenólico de polaridad media
Colecta 1 (Julio 2006) : 5.34 %
Colecta 2 (Enero 2007): 5.52%

Univ. Rodrigo Villagomez

 Etapa II
Aislamiento de comp. fenólicos Comp. Ac.
Met. Ex.
de B. papillosa antes B. obtusifolia
Planta % Ex. ETOH % Ex. Fenólico O OH
(planta seca) (ex. EtOH)
HO O HO O

B. latifolia 15,2 % 37,4 %

O O
B. pentlandii 10,2 % 23,5 % OH O OH O

B. obtusifolia 18,3 % 25,8 %

Zil-1 Zil-2 and Zil-4

OH
OH

HO O
OH

O
OH O
HOOC
Zil-7 and Zil-8 Zil-12

Tesis Zilma Escobar Se obtuvo un extracto menos

complejo y rico en compuestos
de interés
 Etapa II
Determinación de Comp. Ac.
absorbancia UV Met. Ex.

 Se estudio sobre la región UVB (290-320) Y UVA

(320-400) , por ser causantes de enfermedades tales
como el cáncer de piel, daño a los ojos,
envejecimiento prematuro de la piel, debilitamiento
del sistema inmunologico.

27
 Etapa II
Estudio de Absorbancia UV de Comp. Ac.
Met. Ex.
extractos etanòlicos
Extractos etanólicos

72 Hrs 0.2 g/L

15 min 0.2 g/L

UVB (290-320) UVA (320-400) 28

 Etapa II
Estudio de Absorbancia UV de Comp. Ac.
Compuestos aislados Met. Ex.

312 /
344 / 1.88
1.49

356 /
2.12
347 /
1.08

UVB (290-320) UVA (320-400)29

 Etapa II
Comp. Ac.
Cuantificación y Met. Ex.
rendimientos

Julio

Enero

BP-1 BP-2 BP-3 BP-4

30
 Etapa II
Estudio de la actividad Comp. Ac.
antioxidante FRAP y ABTS Met. Ex.

METODO FRAP TROLOX (TAC =1)

Compuesto Primera Segunda Tercera Promedio Desviación
TAC final
medición medición medición estándar
TAC µmol/l TAC µmol/l TAC µmol/l µmol/l

BP-1 0.231 0.231 0.238 0.23 0.002

BP-2 0.087 0.087 0.071 0.08 0.005

BP-3 0.705 0.705 0.707 0.70 0.001

BP-4 1.744 1.723 1.656 1.71 0.003

METODO ABTS TROLOX (TAC =1)

Compuesto Primera Segunda Tercera Promedio Desviación
TAC final
medición medición medición µmol/l estándar
TAC µmol/l TAC µmol/l TAC µmol/l
BP-1 0.120 0.120 0.124 0.12 0.001

BP-2 0.088 0.088 0.086 0.08 0.002

BP-3 0.385 0.385 0.398 0.39 0.002

BP-4 1.042 1.042 1.073 1.05 0.003

REALIZADO POR LIC. LESLIE TEJEDA 31

 Etapa II
Revisión de actividades Comp. Ac.
biológicas
BP-1
-mayor actividad antiinflamatoria que la indometacina
Met. Ex.

-antineoplasica, contra Adenocarcinoma, Leucemia, Sarcoma.

-contra virus de Herpes.
-hepatoprotector

BP-2
-Antiinflamatorio (patentado)
-Inhibe células tumorales
-combate el chagas (epimastigotes de Trypanosoma cruzi)
-hepatoprotector

BP-3
-combate el cáncer: colon, próstata, estomacal y de sangre.
-dermatofitosis.
-afecciones pulmonares.

BP-4
-antiinflamatoria
-Alzhaimer.
-Antioxidante.
-Diabetes.
-Asma. 32
 Potencial producto fitoterapéutico
“CREMA ANTIINFLAMATORIA
NATURAL”

 Potencial producto cosmecéuticos

“CREMA FOTOPROTECTORA
NATURAL”
 Estudios de Productos Fitoterapéuticos

Ensayos pre-clínicos y clínicos

Estudios biológicos complementarios Cultivos

Identificacion para probar su seguridad y eficacia
compuestos activos Producción de
(Marcadores químicos) materia prima

Extractos bioactivos con Producción de fitofármacos

Compuestos de B. latifolia
Control de calidad (técnicas
reconocido interés B. papillosa analíticas para los marcadores
biológico
químicos
Financiamiento
ASDI 2004-2010 Producción y Registro
FEMCIDI-OEA 2008-2010 Empresa Farmacéutica LAFAR
S.A.
Otros financiamientos: Mercado
LAFAR S.A. (100.000 Bs), IDH IIQ, IBMB, IIFB, Medicina,
(520.000 Bs 2007-2009) IE, Agronomia
 Potencial producto fitoterapeutico –
Preparación de cremas LAFAR S.A.

Medición del índice de

acidez y del PH

Envasado de cremas
 Etapa III
Técnicas
Análisis cromatográfico: Analíticas
TLC y HPLC-MS

ACIDO SULFURICO CLORURO

FERRICO

BP-1 BP-2 BP-3 BP-4

BP-1 BP-2 BP-3 BP-4

1 2 3 4 5 6 7 8

1 2 3 4 5 6 7 8
1 2 3 4 5 6 7 8

Diclorometano – Metanol 5%

BP-4

BP-1 BP-2 BP-3

36
 Etapa III
Metodología HPLC para el Técnicas
control de extractos Analíticas

B. papillosa subsp.
papillosa
Ext. ETOH 15 min
0.156 g/L

B. papillosa subsp.
papillosa
compuestos puros
0.6 g/L

37
 Etapa III
317.111 Técnicas
4
Analíticas
C16 H12 O7
316.3 g/mol

301.121
2

C16 H12 O6
300.3 g/mol

233.160
0

C14 H16 O3
232.3 g/mol

315.1448

C17 H14 O6
314.2 g/mol
38
Absorbancia UV de diferentes extractos
de Baccharis. Potencial fotoprotector B.
papillosa
Evaluación fotoprotectora en bacterias
Echerichia coli

En correlación
con los datos de
absorbancia UV.
La B. papillosa
es la que
mejores
resultados
muestra
Toxicidad en Drosophila melanogaster
B. latifolia

Alta bioactivacion

100

sobrevivientes
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0

l
m

m
m

m
g/

g/

g/

g/

g/
g/
0m

1m

2m

4m

6m

8m
concentración

UVAT- IBMB
 Genotoxicidad SMART
Somatic Mutation and Recombination
Test
Frec. Manchas/ Individuo

10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0

CN URE MMC 1 2 4 6 8

UVAT- IBMB
A. Pillco y G. Rodrigo, “Estudio genotoxicológico de
Baccharis latifolia”, Biofarbo, Vol XII, Nº12, p. 21, 2005
 Actividad Antiinflamatoria in vivo
-IIFB

Para este estudio se utilizaron 25 ratones de 25 a 20 gramos de peso,

separados en grupos de 5, donde se probaron la fórmula 1 y la fórmula 3 de la
pomada de chillkha, además del extracto puro de chillkha y de otras pomadas
antiinflamatorias como la hidrocortisona y el diclofenaco sódico. Primeramente
se les colocó al nivel de las orejas Croton una sustancia irritante que provoca
inflamación. Luego se les colocó las pomadas mencionadas anteriormente.
Posteriormente se espera por un lapso de 4 horas y se procede a eliminar a los
ratones mediante una tracción cervical y se les corta las orejas, seguido a esto
se procede a medir el peso de las orejas. Se supone que la crema más eficaz
es aquella donde se obtuvo el menor peso.
Estudios pre-clínicos de cremas
anti-inflamatorias
 Estudios pre-clínicos preliminares
de Actividad Antiinflamatoria - IIFB
Peso DS ES % Reducción
Promedio inflamación

Grupo Control 0,00975 0,002861 0,00143

Grupo Diclofenaco0,00725 0,004437 0,00222 25,6%

Grupo 0,005 0,001247 0,00061 48,7%

Hidrocortisona

Grupo 0,004 0,001414 0,00071 58,9%

Indometacina

Grupo Formula 0,0064 0,001496 0,00066 34,3%

0,1%

Grupo Formula 0,0048 0,0016 0,00071 50,7%

1%

Grupo Extracto 0,002135 0,0038 0,0009 78,1%

Toxicidad aguda del
Extracto
Ensayos clínicos de Crema de
Chillkha 1%
 Participantes
 - IIQ-UMSA (Laboratorio de Bioorgánica del Instituto de Investigaciones Químicas de la
Universidad Mayor de San Andrés)
 Giovanna Almanza, Yonny Flores, Oscar Mamani, Angela San Martín, Santiago Tarqui,
Arnold Tito, Rodrigo Villagomez, Cecilia Curi, Jimena Yupanqui y Zilma escobar
 - IBMB-UMSA (Unidad de Biotecnología Vegetal y Unidad de Genotoxicología del
Instituto de Biología Molecular y Biotecnología de la Universidad Mayor de San Andrés)
 Oscar Plata, Juan Carlos Bermejo, Freddy Arano, Carmen Ormachea y Jorge Quezada
 - UVAG-IBMB-UMSA (Unidad de Vigilancia Ambiental y Genotoxicidad del Instituto de
Biología Molecular y Biotecnología de la Universidad Mayor de San Andrés)
 Gloria Rodrigo
 - US-IE (Unidad de Suelos, Instituto de Ecología de la Universidad Mayor de San Andrés)
 Patricia Amurrio
 - LPB-UMSA (Herbario Nacional de Bolivia, Instituto de Ecología de la Universidad
Mayor de San Andrés)
 Esther Valenzuela
 - IIFB-UMSA (Laboratorio de Farmacología del Instituto de Investigaciones Fármaco
Bioquímicas de la Universidad Mayor de San Andrés)
 Eduardo Gonzales, Daly Apaza Ticona, Claudia Godoy Puente, Brenda Siñani Callisaya
 - Medicina-UMSA (Departamento de Bioquímica de la Facultad de Medicina de la
Universidad Mayor de San Andrés)
 Lily Salcedo
 - LAFAR S.A. (Laboratorios Farmacéuticos Sociedad Anónima)
 Enrique Ocampo, Roger Cabezas, Mauricio Saavedra
 - Centro Privado de Rehabilitación (Zona de Miraflores) y Clínica de la “Liga
Deportiva Mejillones” de la ciudad de La Paz
 Dalton Salinas, Abraham Flores
 Gracias

Agradecimientos especiales a ASDI-Sarec

Por el financiamiento de los estudios químicos, el
equipamiento obtenido y la formación de RRHH
A la UMSA por los fondos IDH otorgados el 2007,
2008 y 2009, los RRHH y la infraestructura
A LAFAR S.A. por el financiamiento de estudiantes y
la preparación de cremas
A la OEA por el nuevo impulso que está dando al
proyecto
A todos los que ya participaron y los que tienen
interés en participar por creer en el proyecto