Curso anlisis de semen

segn los criterios de la OMS2010 (2 parte)

Mariam Corts Tormo
R2 Anlisis clnicos

Anlisis de semen

Evaluacin inicial macroscpica

Qu hacemos con la muestra recogida?

Licuefaccin
Viscosidad
Apariencia
Volumen
pH

Identificar la muestra
Introducirla en estufa 37C
Si es posible someter a
rotacin con un agitador
orbital
Iniciar la observacin
preferiblemente a los 30 min
Nunca despus de 1 h.

Anlisis de semen

Evaluacin inicial macroscpica

La licuefaccin se ensaya visualizando la muestra

Licuefaccin
Una muestra normal es una muestra licuada y homognea
Tras
la eyaculacin el semen es una muestra semislida
Viscosidad
coagulada
AApariencia
los pocos minutos comienza a licuarse y a homogeneizarse
Volumen
Qu pasa s encontramos hilos de moco y cuerpos gelatinosos?
pH
Sin importancia clnica
Dificultan el anlisis
Intentar eliminarlos a la hora de manipular la muestra para las
diferentes pruebas

Anlisis de semen

Evaluacin inicial macroscpica

Licuefaccin
Ocurre, normalmente, dentro de los primeros 15min. a T
ambiente
Si en 60min. no ha licuado hay que researlo
Si hay dudas sobre la licuefaccin, se puede observar al
microscopio
Tpica imagen de una muestra
no licuada
Manchas que recuerdan
acmulos de grasa

Anlisis de semen

Evaluacin inicial macroscpica

Licuefaccin
Qu ocurre si no licua a los 60 min.? Hay que licuarla

Evitar la formacin
de burbujas para no
alterar la muestra

Anlisis de semen

Evaluacin inicial macroscpica

Licuefaccin
Ensayo
de la viscosidad:

Viscosidad
Con pipeta pasteur, dejando caer la muestra gota a gota

Aparienciavarilla de vidrio en la muestra

Introduciendo
Volumen
pH

Anlisis de semen

Evaluacin inicial macroscpica

Viscosidad
Una muestra con viscosidad es homognea. No
confundir con licuefaccin
Alta viscosidad interfiere con las determinaciones
de movilidad, concentracin, anticuerpos
antiespermatozoide y bioqumica
Se elimina igual que en el caso de no licuefaccin

Anlisis de semen

Evaluacin inicial macroscpica

Licuefaccin
Viscosidad
Apariencia
Volumen
pH

Un semen normal
debera ser homogneo,
gris opalescente

Anlisis de semen

Evaluacin inicial macroscpica

Licuefaccin
Mediante
pesada:

Viscosidad
Densidad = 1

Apariencia
Masa= Volumen

Volumen
Pesar el recipiente (con etiqueta)= A

pHel recipiente con el semen = B

Pesar
(B A) = n gramos = n ml

Recipientes de recogida graduados:

Medida directa del volumen

No medir el volumen mediante

transferencia a pipetas, jeringas o
probetas, etc
La transferencia da lugar a
mayores errores que con mtodos
anteriores

Anlisis de semen

Evaluacin inicial macroscpica

Licuefaccin
Refleja
el balance entre las diferentes secreciones,

Viscosidad
principalmente entre el pH alcalino de las vesculas
seminales
y el cido de la prstata

Apariencia
Usar

tiras 6.0-10
Volumen
Chequear el color antes de 30 sg

pH
Chequear las tiras reactivas con soluciones patrn de pH
Lmite inferior de referencia = 7.2
pH < 7.0 + oligo/azoospermia + volumen bajo
Sugiere agenesia u obstruccin de vesculas seminales y/o conductos
deferentes

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Evaluacin inicial microscpica

Microscopio de contraste de fases (se aconseja
atemperado a 37 C
Observacin a 100x (10x10)
Agregaciones
Aglutinaciones
Clulas no espermticas
Observacin a 200x-400x (10x20; 10x40)
Estimacin de la dilucin para calcular la
concentracin espermtica
Movilidad espermtica

Anlisis de semen

Evaluacin inicial microscpica

Anlisis de semen

Evaluacin inicial microscpica

Muestra a 37 C
Homogeneizar bien la muestra:
Ideal utilizar agitador orbital
Aspirar la muestra 10 veces con pipeta de
plstico de 1,5 mm dimetro
Una falta de homogeneizacin provocar:

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Evaluacin inicial microscpica

Agregaciones
Adherencia de espermatozoides (inmviles o mviles) a
clulas no espermticas o detritos
Son no especficas. Ninguna significacin clnica

Anlisis de semen

Evaluacin inicial microscpica

Aglutinaciones
Espermatozoides
mviles unidos a otros
spz. Mviles
Son
especficas.
Pueden tener significacin
clnica
No
son
evidencia
suficiente para deducir
presencia
de
Ac
antiespermatozoides, pero
s nos sugieren investigar
su presencia

Anlisis de semen

Evaluacin inicial microscpica

Clulas no espermticas

Anlisis de semen
Movilidad
Clasificacin

PR: espermatozoides con movimiento progresivo, bien lineal o

crculos amplios , independientemente de la velocidad

Anlisis de semen
Movilidad
Protocolo

Hacer doble contaje

Contar al menos 5 campos/porta

Contar al menos 200 spz/porta

Anlisis de semen
Movilidad
Evaluacin de resultados
Se utiliza la grfica del
intervalo de confianza del 95%
para diferencias entre dos
porcentajes
Es el mximo error esperado
entre dos contajes en el 95%
de los casos cuando el nico
error es atribuible al contaje
S es >, preparar y contar 2
nuevas preparaciones de la
muestra

Anlisis de semen
Movilidad
Evaluacin de resultados
Ejemplo:
Muestra (x2) en porta 400x
IM : 1 =38 ; 2 =50

Supera la diferencia
mxima admisible
que est alrededor
de 9

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Movilidad
Evaluacin de resultados

Anlisis de semen
Concentracin

Observacin previa
Dilucin segn observacin
Contaje en cmara por duplicado
Evaluar resultados
Clculo final de la concentracin

Anlisis de semen
Concentracin

Observacin previa

Anlisis de semen
Concentracin

Observacin previa

Dilucin
segn observacin
Material
necesario:
Pipetas
de desplazamiento

Contaje
en cmara directo
por duplicado
Pipetas
automticas
normales, de

Evaluar
resultados
desplazamiento por aire

Clculo final de la concentracin

Medio de dilucin Weigman

Anlisis de semen
Concentracin

Dilucin segn observacin

Anlisis de semen
Concentracin

Observacin previa

Dilucin
segnrecomendadas:
observacin
Cmaras
de recuento
Hemocitmetro
m de profundidad)

Contaje en(100
cmara
por duplicado
Muestras

Evaluarfijadas
resultados
Cmaras de recuento NO recomendadas:

Clculo final de la concentracin

Cmaras de pequeo volumen=

pocos spz

Cmaras llenadas por capilaridad= llenado desigual

Muestras no fijadas=

spz mviles

Anlisis de semen
Concentracin

Contaje en cmara por duplicado

Anlisis de semen
Concentracin

Contaje en cmara por duplicado

Empezar a contar en la rejilla 5 hasta 200 spz
Contar filas completas
Si en una fila no llegamos a 200 spz seguir
por la otra fila
Si en mitad de una fila llegamos a 200 spz
hay que seguir contando hasta acabar la fila
Si con la 5 no completamos los 200 spz
seguimos por la 4 y luego por la 6
Cuando se hace la dilucin hay que contar
todas las rejillas

Anlisis de semen
Concentracin

Contaje en cmara por duplicado

Anlisis de semen
Concentracin

Observacin previa
Dilucin segn observacin
Contaje en cmara por duplicado
Evaluar resultados
Clculo final de la concentracin

Si la diferencia entre los dos contajes supera el lmite permitido habr que
empezar desde el principio, preparar dos nuevas diluciones y realizar de
nuevo el doble contaje

Anlisis de semen
Concentracin

Observacin previa
Dilucin segn observacin
Contaje en cmara por duplicado
Evaluar resultados
Clculo final de la concentracin

Anlisis de semen
Concentracin

Valores lmite y su IC 95%

Anlisis de semen
Concentracin
Cmara Makler
Fcil de usar
Se carga con 10l de semen
Se cuenta toda la cuadrcula el resultado divido entre 10 es la concentracin
en milln/ml
Se evala a la vez concentracin y movilidad
Por qu la OMS no aconseja su uso?
Volumen bajo (profundidad 10 m)
Mayor dificultad movimiento spz
Menos exacto en concentracin

Dificultad para fijar el cubre

Mayor riesgo de error

Estandarizacin
Control de calidad

Anlisis de semen
Morfologa
Protocolo
Muestras por duplicado
Limpiar vigorosamente los portas con papel e identificar

Anlisis de semen
Morfologa
Protocolo

Anlisis de semen
Morfologa

Protocolo
Tinciones

Anlisis de semen
Morfologa
Protocolo
Tincin Diff-Quik

Observacin en
100x (inmersin)
Contar al menos
200spz
Muestras por
duplicado

Anlisis de semen
Morfologa

Clasificacin

Anlisis de semen
Morfologa
Clasificacin
No se cuentan ni los flagelos ni
las cabezas sueltas

Anlisis de semen
Morfologa

Evaluacin de resultados
Si el error es mayor, no
es necesario volver
a
repetir
las
preparaciones pero s el
contaje
El lmite inferior de
referencia en este nuevo
manual es del 4%, a
diferencia del 15 % del
manual anterior

Anlisis de semen
Vitalidad

Fundamento
Es una medida indirecta del estado de la membrana
plasmtica
Espermatozoide intacto = membrana intacta
Espermatozoide muerto = membrana daada
Debe realizarse rutinariamente en todas las muestras
Es importante cuando la movilidad progresiva es < 40%

Anlisis de semen
Vitalidad

Fundamento

No existe un alto grado de correlacin entre Test colorantes y Test hipoosmticos

ya que miden efectos caractersticos distintos de la membrana plasmtica

Anlisis de semen
Vitalidad

Fundamento colorantes

Anlisis de semen
Vitalidad
Eosina

Anlisis de semen
Vitalidad

Eosina/Nigrosina
Mejor contraste de la imagen

Permite guardar y reevaluar la muestra

Anlisis de semen
Vitalidad

Imgenes de la coloracin

Si slo se tie la zona del cuello o la cabeza tiene una ligera coloracin
rosa se considerar el spz como vivo

Anlisis de semen
Vitalidad

Fundamento hipoosmtico

Anlisis de semen
Vitalidad

Asociacin de las dos tcnicas

Miden el
estado
estructural de
la membrana
plasmtica

Miden estado funcional

de la membrana
plasmtica

Anlisis de semen
Vitalidad

Evaluacin de resultados

El lmite inferior de referencia en este nuevo manual es de 58% a

diferencia del 75% del manual anterior

Anlisis de semen
Vitalidad
Utilidad

evaluacin resultados movilidad

descartar problemas recogida muestra
sdme kartagener

Anlisis de semen

Anticuerpos antiespermatozoide

Anlisis de semen

Anticuerpos antiespermatozoide
El nuevo manual de la OMS:
Sigue manteniendo la obligatoriedad de realizar el estudio de AAE en
todos los seminogramas
Es importante su realizacin en movilidad baja o presencia de
aglutinaciones
No siempre que hay aglutinaciones hay AAE
Se considera que existe un factor inmunolgico cuando ms del 50% de
los spz mviles de un eyaculado presentan AAE
En casos positivos se estudiar:
Isotipos presentes
Intensidad de la respuesta
Localizacin Ac

Encontrar Ac no implica necesariamente facto inmunolgico. Realizar

pruebas funcionales

Anlisis de semen

Anticuerpos antiespermatozoide

Anlisis de semen

Anticuerpos antiespermatozoide
MAR test directo
Emplea semen completo
Test rpido, fcil y sensible
Menor informacin que IBT
Muestras de menos movilidad que IBT
Permite detectar IgG e IgA de origen
secretor

Anlisis de semen

Anticuerpos antiespermatozoide
MAR test directo

Anlisis de semen

Anticuerpos antiespermatozoide
IB test directo
Matriz poliacrilamida
Emplea semen lavado
Detecta IgG como IgA tanto
de origen secretor como no
secretor
Ms informacin al no
interferir el lquido seminal

Anlisis de semen
Otras clulas

Un nmero alto de estas clulas puede ser debido a:

Procesos inflamatorios
Alguna patologa o alteracin testicular

Anlisis de semen
Otras clulas

Anlisis de semen
Otras clulas

Clulas espermatognesis inmaduras

Fin segunda parte