Instituto de Ciencias Ambientales y Biolgicas de la
Universidad de Lancaster, Lancaster, LA1 4 YQ, Reino Unido
INDIVIDUALES DE LAS NACIONES EUROPEAS Y ESCANDINAVAS La mayora de las naciones de Europa y Escandinavia en general, evaluar cada sitio contaminado en una base de caso por caso, y muchos aprobar la lista holandesa de criterios de limpieza del suelo para orientacin general. Sin embargo, algunos estn actualmente desarrollando sus propias normas nacionales, por ejemplo, Alemania. Los Pases Bajos tienen una poltica nacional de mantenimiento del suelo multifuncionalidad y ha establecido una lista de criterios genricos, para evaluar la importancia de la contaminacin del suelo y aguas subterrneas. Tierra contaminada por lo general debe ser limpiado con la calidad de mltiples funciones Por el contrario, el Reino Unido tiene una poltica de limpieza de sitios contaminados en una base de caso por caso en relacin con el uso a que la tierra se va a dar. La biorremediacin implica el uso de microorganismos para degradar los constituyentes orgnicos peligrosos a sustancias inocuas, tales como dixido de carbono y agua. El proceso de degradacin se puede mejorar mediante cambios en las condiciones fsicas o qumicos en el suelo, tales como el pH del suelo, la humedad y la aireacin, y tambin por la adicin de nutrientes. La adicin de microorganismos adaptados especficamente tambin puede mejorar el proceso. Mtodos de biorremediacin utilizan para tratar la tierra contaminada con compuestos orgnicos, incluyendo hidrocarburos aromticos policclicos, y se componen de uno o una combinacin de los tres sistemas descritos a continuacin IN SITU BIORREACTORES CAMA PREPARADA
Propiedades de PAHs La degradacin microbiana de los HAP El destino de los HAP en el suelo
La aclimatacin y adaptacin La degradacin microbiana en el campo Vas Bioqumicas El compuesto especfico producido depende de si los grupos hidroxilo en las dihydrodiols son orto o para entre s.
Las vas de degradacin de los HAP se resumen
Phanerochaete chrysosporium Hongo de podredumbre blanca, capaz de degradar un nmero de compuestos xenobiticos, incluyendo PAHs. Produce enzimas degradantes de lignina extracelular (ligninasa), que tiene el potencial de degradar compuestos de alto peso molecular (HMW) y/o compuestos insolubles que no pasan a travs de las paredes celulares de las bacterias. Las ligninasas se basan en un sistema suplementario de enzimas para suministrar el perxido de hidrgeno necesario para iniciar la oxidacin de la lignina. La lignina tiene una composicin aleatoria y una estructura de alto polmero. Entonces las ligninasas, tienen una amplia gama de sustrato y baja especificidad y por lo tanto tienen el potencial de degradar muchos y diferentes contaminantes orgnicos.
Microorganismos Los HAP se degradan de dos maneras, ya sea como nica fuente de carbono y energa para los microorganismos o por co-metabolismo (o co-oxidacin si se produce la oxidacin). En este ltimo, una enzima producida para la degradacin de un cierto compuesto de soporte del crecimiento tambin degrada un PAH que no se utiliza ni es esencial para crecimiento. Co-oxidacin se ha observado para mejorar la degradacin en particular,de molculas de alto peso molecular (HMW) de PAH, es decir, aquellos con cuatro o ms anillos aromticos . Sims et al. (1988) observ que HMW HAP eran ms resistentes a degradacin cuando en el suelo estaban presentes compuestos puros; que en el mismo suelo con mezclas de residuos complejos.
Durante la biorremediacin de suelos, el uso de la PAH como nica fuente de carbono y energa se considera favorable, porque se da oxidacin completa a dixido de carbono y se puede producir agua. Mineralizacin completa de molculas con bajo peso molecular (BPM) PAHs (de dos y de tres anillos) en suelos contaminados por una variedad de microorganismos de origen natural.
Los gneros de bacterias que son los ms estudiados, incluyen: Aeromonas, Alicaligenes, Bacillus, Beijerinckia, Corynebacteria, cyanobacter, Flavobacterium, Micrococcus, Mycobacterium, Nocardia, Pseudomonas, Rhodococcus, y Vibrio. HAP con cuatro o ms anillos condensados son menos solubles, ms estables, y por tanto ms recalcitrantes. Slo recientemente, en estudios de laboratorio, investigadores han aislado un nmero de microorganismos del suelo contaminado que han demostrado la capacidad de mineralizar cuatro aros PAHs como su nica total fuente de carbono y energa (co- metabolismo).
Las especies son:. Rhodococcus sp, que degrada pireno y criseno, Pseudomonas paucimobilis, que degrada fluoranteno , y Denitrificans Alicalienes, que degradan fluoranteno. Metabolismo de hongos con HAP con ms de tres anillos aromticos es menos estudiado. La mayora de los mecanismos reportados son co-metablico. Sin embargo, al menos 22 PAHs de dos, tres y cuatro anillos, incluyendo fenantreno, fluoreno, fluoranteno, antraceno y pireno, han sido sometidos a 70-100% de eliminacin en el laboratorio, por el hongo de podredumbre blanca, algunos producen CO 2 , durante 27 das de incubacin en cultivos con limitados nutrientes. La degradacin de benzo (a) pireno en dixido de carbono y agua tambin ha sido reportado (Sanglard et aL, 1986). Sin embargo, aunque el potencial de eficacia de este hongo tiene que ser demostrado en el campo, puede ser utilizado en el futuro para degradar sustratos de alto peso molecular, con ayuda de bacterias que degraden las molculas de menor peso molecular resultantes (LMW) metabolitos.
Factores ambientales que afectan a biodegradacin La eficacia de la biodegradacin de HAP se puede mejorar mediante el control de las condiciones ambientales dentro del suelo.
El logro de ptimas condiciones para la degradacin es una parte importante de cualquier proyecto de tratamiento. El pH del suelo y C: N: P pueden ser mantenidos por la adicin de materiales apropiados, tales como cal, nutrientes y fertilizantes. El contenido de humedad es controlado y la textura del suelo mejor por la clasificacin y homogeneizacin.
Tabla 4. Condiciones Ambientales que afectan la degradacin de contaminantes orgnicos en el suelo. Parmetro Condiciones requeridas para la actividad microbiana Valores ptimos para la degradacin de HAP Humedad del Suelo 25-85% de agua capacidad de retencin 30 90% (1) pH del Suelo 5.5 8.5 7.5 7.8 (1), 7.0 (3) Potencial Redox Aerobios y anaerobios facultativos > 50 mV Anaerobios < 50 mV
Contenido de Oxigeno Aerbico, aire mnimo o espacio por poro lleno al 10% Anaerbico < 1% del volumen 10 40% O 2 (2) Contenido de nutrientes N y P para el crecimiento microbiano, C : N : P 120 : 10 : 1 (valor ptimo aproximado) P (5), C : N 60 : 1 (1), C : P 800 : 1 (1), Concentracin de Sal <4% (6) Temperatura (C) 15 45 30(2,3,7) 20(1), 27 (4), 24-30(6) Adaptado de Sims et al (1990) (1) Dibble y Bartha (1979) (5) Manilal y Alexander (1991) (2) Bauer y Capone (1985) (6) Heitkamp et al (1988a) (3) Weissenfels et al (1990b) (7) Walter et al (1991) (4) Song et al (1991) N: Nitrogeno C: Carbono P: Fosforo En las instalaciones de tratamiento de tierras se cultivaban camas peridicamente para mejorar la aireacin, aunque muchos esquemas de biorremediacin usan aireacin forzada. Sin embargo, la provisin de un suministro adecuado de oxgeno es difcil de lograr, sobre todo para los proyectos in situ, debido a la baja solubilidad del oxgeno. Adems de caro. Por lo tanto, el perxido de hidrgeno (H 2 0 2 ) ha sido utilizado para proporcionar oxgeno a niveles ms altos que pueden ser alcanzados por aireacin. El perxido de hidrgeno, sin embargo, es altamente reactivo y puede ser txico en altas concentraciones. Su descomposicin incontrolada puede resultar en un desperdicio por liberacin de gases; esta descomposicin se ha atribuido a catalizadores inorgnicos en el suelo, tales como hierro, y tambin para la produccin bacteriana de la enzima catalasa. El mantenimiento de una temperatura adecuada para degradacin microbiana tambin es difcil de lograr, especialmente para proyectos in- situ, y es ms fcil de mantener mediante el uso de biorreactores. Como en tiendas de campaa, tneles erigidos sobre las camas de tratamiento tienen calefaccin durante los estudios en el Lugar para elevar las temperaturas, sobre todo en invierno. Las emisiones de voltiles tambin pueden ser contenidos y tratado en estas tiendas de campaa.
Adicin de surfactante Muchos HAP se absorben fuertemente al suelo, lo que limita su disponibilidad para la degradacin microbiana. De hecho, la baja solubilidad acuosa puede ser el factor limitante de la velocidad que controlan las tasas de degradacin de la HMW HAP en suelos. Los tensioactivos han mostrado mejorar la desorcin y solubilizacin de los HAP. El no Inico octil y el nonil phenylethoxylates de nueve a doce unidades de etoxilato han demostrado ser ms efectiva para la mejora de la desorcin de los HAP antraceno, fenantreno y pireno en suspensiones de agua en el suelo . Para el suelo: ms de 0,1% en volumen de surfactante se requiere para iniciar la solubilizacin, y 1% en volumen result en 70-90% de solubilizacin.
La concentracin de agente tensioactivo utilizado es importante. Las altas concentraciones pueden inhibir la actividad microbiana, o el tensioactivo puede ser utilizado preferentemente como padre sustrato. Ms investigacin es necesaria para comprender plenamente el mecanismo responsable antes de la prediccin precisa de las concentraciones requeridas del agente tensioactivo en el campo.
Degradabilidad de los tensioactivos utilizados tambin es importante para limitar an ms la contaminacin. Knaebel et aL (1990) demostraron que los etoxilatos de alcohol lineal y lineal tensioactivos de sulfonato de alquil benceno fueron degradados por microorganismos en suelo natural y sugiri que este ocurri en concentraciones muy bajas (<50 ng g-1 de suelo). Debido a los altos costos involucrados con el uso de surfactante, microorganismos que producen biotensioactivos bajo condiciones de la degradacin de HAP se podran utilizar para reducir los costes de tratamiento. Sin embargo, los microbios que producir biotensioactivos y degradan HAPs an no son identificadas y su uso en el campo tiene que ser probado.
Siguen existiendo muchos problemas con el uso de surfactante en forma de la obstruccin, la toxicidad y degradabilidad, y la investigacin para superar estos problemas contina. TRATAMIENTO DE HAP EN SUELOS CONTAMINADOS Condiciones y contaminantes varan para cada sitio. Un estudio a completa escala es necesario antes del comienzo de cualquier biorremediacin. Estudios de tratabilidad en el laboratorio y en el lugar tambin son esenciales para evaluar condiciones de biodegradacin ptima. Es importante que los estudios de tratabilidad incorporen elementos para evaluar la desintoxicacin de las aguas subterrneas y del suelo. Jones y Paz (1989) observaron una correlacin entre la mutagenicidad en suelos y la elevada concentracin total de HAP; por lo tanto, se recomienda la prueba de Ames, y la respuesta de Ames para dar una medida de la desintoxicacin de suelos contaminados con HAP. El resultado debe ser la remediacin del sitio de manera eficaz y econmica. Se describe estudios de tratabilidad y estudios de casos para el suelo contaminado por diferentes fuentes mediante el uso de los datos para evaluar el destino de los HAPs individuales cuando estn disponibles. Estudios de la remediacin en suelo contaminados con petrleo tienen tambin a incluirse en los casos a causa de la presencia de HAP, en particular en las fracciones ms pesadas de petrleo. In-situ tratamiento Aprill et al. (1990) evalu procesos de la biorremediacin in situ para dos procesos como la preservacin de madera y los desechos de refinacin de petrleo en suelos no climatizados (~ PAH vari desde 490 hasta 6646 mg kg de suelo -l). Las condiciones en el suelo no se han alterado para mejorar degradacin. Se evalu suelo y la desintoxicacin del agua. La degradacin de LMW PAHs era generalmente mayor que HMW HAP. Disminucin de HMW PAHs se correlacion con el aceite y la grasa contenidos en los desechos, pero no con la disminucin de LMW PAHs.
Weissenfels et al. (1990a) estableci goteando en columnas para dos tipos de suelos, uno de una planta de impregnacin de madera con altas concentraciones de PAHs de LMW (suelo A), y un segundo de una antigua planta de coque con altas concentraciones de HMW PAHs (suelo B). Los resultados muestran que, despus de la incubacin de ocho semanas, el porcentaje de degradacin de LMW HAP era generalmente mayor que el de HMW HAP.
Morgan y Watkinson (1990) tambin evaluaron el potencial in-situ de limpieza de suelo arenoso contaminado con el petrleo crudo, aceite lubricante y gasolina. Todos estos materiales contienen algo de concentracin de PAHs.Los autores concluyeron que la biorremediacin in-situ por microorganismos parecen ser ms eficaces para los hidrocarburos destilados de baja y media, tales como aceite, que consta de HAP anillo inferior lubricante, compuestos aromticos voltiles, y compuestos alifticos. Tabla 5. Estudios de tratamiento In- Situ y proyectos a gran escala Autor Estudios de tratamiento Casos de estudios Aprill et al. (1990) Weissenfels et al. (1990a) Morgan y Watkinson (1990) Van der Hock et al. (1989) Ellis et al. (1991) Locacin -- -- -- Deventer, Pases bajos Blekholmstorget, Estocolmo. Tipo de suelo Arena, marga, no aclimatados. -- Arena contaminada -- Base de material de arcilla de relleno (2-15m) Contaminacin
Refinera de petrleo y preservacin de madera adicin de contaminantes al suelo. Suelo contaminado por impregnacin de madera y plantas de coque, HAP presentes. Gasolina, aceite lubricante, aceite crudo. Antigua planta de asfalto orgnicos voltiles, fenoles, HAPs superior a 10m de profundidad HAPs 24 000 mg.kg -1 de suelo. Creosota: desde <10 hasta >32 000 mg.kg -1 en suelo, 0.9-4.5m de profundidad. Descripcin reactores discontinuos columnas de suelo Goteo en columna de suelo. Cultivos discontinuos, (lodos de suelo) Recirculacin y tratamiento de las aguas subterrneas Recirculacin y tratamiento de las aguas subterrneas, 15 000 m 3 de extensin de sabanas en contaminantes. Condiciones de uso Sin tratamiento 100g anillos Raschig 150g suelo, 100ml medio de circulacin de sal mineral (MSM) Temperatura del ambiente, pH 7.2
Adicin de nutrients, fertilizantes, KNO3, NH4NO3 NaH2PO4 urea, 20C, sin control del pH MSM, DO 8.5 ml/l, 35% H 2 O 2 (100mg.lt-1), nutrientes K2HPO4, inoculacin de bacterias, temperatura del ambiente, surfactantes, Etileno BCP & CD916, Lankrob(0.5% w:w). Duracin del tratamiento 354 dias 8 semanas 2.5 aos Tabla 6. Porcentaje de HAP perdido en los estudios de tratamiento
Duracin In situ En el sitio Bioreactor (1) 354 dias (2) Suelo A 8 semanas (2) Suelo B 8 semanas (3) 2 semanas 12 semanas (2) Suelo A 4 semanas (2) Suelo B 4 semanas Naftalina 100 (69273) 97 (8) 100 84 (92) 0 (56) Metil naftalina 99 (100) 100 Dimetil naftalina 99 (241) 100 Trimetil naftalina 100 (210) 100 Fluoreno 59-97 (21-177) 70 (670) 0 (7) 95 (670) 45 (7) Fenantreno 40-97 (120-833) 70 (1440) 0 (27) 71 (89) 98.8 97 (1440) 30 (27) Metil Fenantreno 61 (208) 100 Dimetil Fenantreno 27 (191) 100 Antraceno 46-97 (20-243) 33(766) 0 (6) 68 (766) 32 (6) Fluoranteno 11-38 (55-2600) 70 (1350) 3 (34) 95 (1350) 30 (34) Pireno 35-74 (143- 3000) 71 (983) 2 (28) 29 (27) 97 94 (98) 19 (28) Metil pireno 46 (16) 90 Benzo(a) antraceno 0-31 (14-320) 62 (356) 4 (16) 87 (356) 17 (16) Criseno 30-62 (21-173) 53 (321) 9 (11) 78 (321) 6 (11) Benzo(a) pireno 29 (94) 3 (14) 74 (94) 11 (14) Dibenzo(a) antraceno 17 (10) 0 (2) 73 (10) 0 (2) 1) Aprill et al (1990) 2) Weissenfels et al (1990a) 3) Wang et al (1990) * No inoculado Las figuras en parntesis indican la concentracin inicial de HAP en mg.kg -1
La biorremediacin in situ a escala completa ha consistido en general en la recirculacin y tratamiento de las aguas subterrneas contaminadas. En una antigua planta de produccin de asfalto en los Pases Bajos, donde el suelo estaba contaminado con voltiles orgnicos, fenoles, y PAH, el agua subterrnea se extrae y es tratado en tres reactores biolgicos, tanto en el lugar y en el laboratorio (Van der Hock et aL, 1989). Buenos resultados con la eliminacin de HAP (95%) del agua subterrnea en el sitio se logr mediante el uso de una columna con flujo de aire ascendente (UAC). En las instalaciones de laboratorio, alta remocin de HAP fue logrado (99-100% Epah despus de 146 das) cuando un contactor biolgico rotatorio (RBC) se realiz en paralelo con un flujo de aire ascendente. Slo el 8,1% del porcentaje de los HAP en el lodo RBC, principalmente aquellos con tres o ms anillos. Sin embargo, las pruebas del suelo revel que, despus de enjuague prolongado (146 das / hasta 675 veces enrojecida), el 46% de la concentracin inicial del suelo PAH se ha mantenido.
El Tratamiento In Situ
En las instalaciones de biorremediacin con frecuencia se ha utilizado para tratar los residuos aceitosos (Bossert et al, 1984). Un nmero de factores ambientales pueden aumentar la eficacia del tratamiento en tierra de lodos aceitosos (Dibble y Bartha, 1979). Sin embargo, la degradacin de los destilados de petrleo crudo y especficos individuo asociado PAHs se ha estudiado en slo unos pocos casos La biodegradacin jugado un papel relativamente menor en la reduccin del menos destilado de los combustibles en comparacin con la vaporizacin y fue ineficaz en la eliminacin de los combustibles ms pesados. Sin embargo, biorremediacin de suelos contaminados con combustibles medianamente destilados fue efectivo. Pruebas de tratabilidad lismetro al aire libre en los derrames de la combustibles destilados medianos (es decir, combustible de aviacin, combustible para calefaccin, y diesel, todos los cuales contienen HAP, aunque el combustible diesel contiene las concentraciones ms altas de HMW HAP) mostraron que la biorremediacin, que consiste en el control del pH, fertilizacin y laboreo semanal y que implica el uso de microorganismos indgenas, fue eficaz en el aumento de la velocidad de biodegradacin Bioreactores
El uso de biorreactores ha aumentado recientemente, ya que las condiciones ptimas de degradacin son ms fciles de mantener y una buena mezcla del suelo con la de poblacin microbiana y otros aditivos, tales como nutrientes y surfactantes, se puede lograr. Sin embargo, los gastos de funcionamiento son generalmente ms altos que in-situ y una seleccin de tratamientos. El uso de biorreactores a gran escala para el tratamiento de suelos contaminados est en su infancia, y muchos prototipos estn actualmente bajo prueba El uso del biorreactor tiene ventajas en trminos de tiempo y eficacia cuando se compara con el tratamiento de biorremediacin in situ aunque LMW PAHs se degrada, la degradacin de HMW HAP es an muy limitada en biorreactores.
LAS TECNOLOGAS EMERGENTES
Un nuevo nmero de tratamientos o alternativas de biorremediacin actualmente estn surgiendo para la descontaminacin de HAP suelos contaminados, aunque su eficacia para su uso en el campo an no ha sido probada degradacin anaerbica Biorremediacin de suelos contaminados con PAH principalmente ha logrado en condiciones aerbicas, donde el oxgeno molecular es el aceptor de electrones.
Degradacin Anaerbica El hecho que en todos los ambientes donde los hidrocarburos naturales se forman el oxigeno no esta presente, ha hecho pensar a la comunidad cientfica que los hidrocarburos no podran ser degradados anaerbicamente. Pero a finales de 1980s se descubrieron algunos microorganismos que si tenan cierta actividad degradadora bajo condiciones totalmente estrictas.
Este conocimiento es tan reciente que an no se comentan ni en los libros de textos mas especializados en el tema ni siquiera la posibilidad. Actualmente se est trabajando mucho en este inslito campo por la importancia que tiene y las aplicaciones potenciales que pueda tener en la biorremediacin. Hay que tener en cuenta que en la mayora de los lugares contaminados donde se quiere aplicar estas tcnicas de biorremediacin hay condiciones anoxignicas o de seguida se consume el oxigeno. Lo que se hacia hasta ahora en estas situaciones es insuflar aire en estos ambientes mediante una bomba para favorecer la degradacin aerbica. Evidentemente esta tcnica hace encarecer el proceso aparte que a veces la difusin de oxigeno no puede ser posible.
Otras Formas De Tratamiento Los hidrocarburos poliaromticos (PAHs) absorben rayos ultravioleta (uv) energa de la luz y estn sujetos a la descomposicin fotoltica, aunque los costos de ruptura total son relativamente caros. La irradiacin con luz UV (300 nm) o luz natural, en presencia de un oxidante diluido, H202, se ha demostrado que degradar soluciones diluidas de benzo (a) pireno en pruebas de laboratorio (Miller et al., 1988). Por lo tanto, la fotlisis puede ser utilizada para hacer las PAHs ms susceptibles al ataque microbiano durante la biodegradacin en algunos suelos contaminados. En estudios preliminares, Aprill y Sims (1990) han utilizado pastos de la pradera para mejorar la degradacin de HMW HAP en el suelo. Mecanismos de eliminacin de posibles incluyen el aumento de la interaccin microbiana debido a rhizo- efectos esfera, mayor incorporacin abitica de bio metabolitos intermedios lgicamente generados, y la incorporacin directa en el material hmico. Se requiere ms investigacin para investigar estos mecanismos, pero posibles aplicaciones futuras incluyen la limpieza de los bajos niveles de HAP en los suelos Conclusiones (i) El aislamiento y la aplicacin con xito en el campo de los microorganismos que son capaces de utilizar los PAH con cuatro o ms anillos como su nica fuente de carbono y energa;
(ii) Una mayor investigacin y mejora del mecanismo de co- metablica de degradacin de los HAP, ya que la mayora de HMW PAHs son degradados por este mecanismo;
(iii) Una mayor investigacin y de mejora de los factores que controlan PAH disponibilidad y la degradacin para su uso en todos los mtodos de tratamiento, pero en particular los biorreactores: cuenta con surfactantes alternativos, eliminacin de materiales txicos para los microorganismos, y la adicin de perxido de hidrgeno sin excesiva auto-descomposicin; Conclusiones (iv) La investigacin de los factores que controlan la aclimatacin y tcnica microbiana para disminuir el perodo de aclimatacin; (V) Una mayor investigacin de tcnicas innovadoras bioremedia- cin, como la degradacin anaerbica, y tambin tcnicas de pulido, que pueden ser utilizados para eliminar los HAP HMW de suelo tratado. Esta revisin ha destacado el hecho de que las condiciones encontradas en cada sitio son nicas y que una evaluacin del sitio completo es necesario identificar el esquema de remediacin ms apropiado para un sitio en particular. Tratabilidad y estudios a escala piloto tambin son importantes para minimizar los problemas asociados con la aplicacin en el campo y mejorar la rentabilidad.