Revista polaca de estudios ambientales vol. 12, núm.

1 (2003), 15-25

revisión

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Resumen

Se sabe que muchos hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAP) son tóxicos y cancerígenos para los seres humanos, y su contaminación

de suelos y acuíferos es una gran preocupación medioambiental. Algunos microorganismos, principalmente de los géneros Pseudomonas y Mycobacterium,

se descubrió que eran capaces de transformar y degradar los HAP. Estas capacidades pueden resultar útiles para eliminar los HAP del medio

ambiente. La aplicación exitosa de bacterias para la biorremediación de sitios contaminados con PAH requiere una comprensión más profunda de

cómo procede la degradación microbiana de PAH. En esta revisión, se resumen las bacterias involucradas y las vías metabólicas para la

degradación de muchos HAP y se discuten los aspectos biológicos de la biorremediación de HAP.

Palabras clave: bacterias, HAP, vías metabólicas, degradación, biorremediación

Introducción Se sabe que el fenantreno es un fotosensibilizador de la piel humana y un alérgeno

suave [1]. También se ha descubierto que es un inductor de los intercambios de

cromátidas hermanas y un potente inhibidor de las comunicaciones intercelulares

Los hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAP) son contaminantes importantes
gapjunction [2]. Los HAP pueden absorberse en suelos y sedimentos ricos en materia
que se encuentran en el aire, el suelo y los sedimentos. Estos compuestos entran al
orgánica, acumularse en los peces y otros organismos acuáticos y pueden transferirse
medio ambiente de muchas formas. Los PAH y sus derivados son productos
a los seres humanos a través del consumo de mariscos [3].
generalizados de la combustión incompleta de materiales orgánicos que surgen, en

parte, de la combustión natural, como incendios forestales y erupciones volcánicas,

Debido a que muchos PAH son tan tóxicos, existe interés en comprender
pero en su mayor parte por actividades humanas. En las últimas décadas, la principal
los procesos fisicoquímicos y las reacciones de degradación microbiana que
fuente de contaminación por HAP es la producción industrial, el transporte, la quema
afectan la movilidad y el destino de estos compuestos en el agua subterránea y
de basura, la gasificación y la incineración de residuos plásticos.
el sistema de sedimentos del suelo. La biodegradación de los HAP puede
considerarse, por una parte, parte de los procesos normales del ciclo del
carbono y, por otra, la eliminación de contaminantes artificiales del medio
El destino de los hidrocarburos aromáticos policíclicos en la naturaleza es
ambiente. El uso de microorganismos para la biorremediación de ambientes
de gran preocupación ambiental debido a sus propiedades tóxicas,
contaminados con HAP parece ser una tecnología atractiva para la restauración
mutagénicas y cancerígenas. Por ejemplo,
de sitios contaminados.
* Autor correspondiente
 dieciséis

&' ' ( ! Valor de p entre 3 y 5, los HAP son muy tóxicos para las células completas [4].

Algunas propiedades de los HAP seleccionados se presentan en la Tabla 1.

Los hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAP) son un grupo de
compuestos que contienen carbono e hidrógeno, compuestos por dos o más
anillos aromáticos fusionados en arreglos lineales, angulares y de racimo (Fig. 1).
Muchos PAH contienen una “región de la bahía” y una “región K”. Los
epóxidos de las regiones bay y K, que pueden formarse metabólicamente,
son muy reactivos tanto química como biológicamente. El fenantreno es el
hidrocarburo aromático más simple que contiene estas regiones. La región
de la bahía del fenantreno es un área estéricamente impedida entre los
átomos de carbono 4 y 5 y la región K es el doble enlace 9, 10, que es el
doble enlace aromático más oleínico con alta densidad de electrones (Fig. 1).
Según la teoría electrónica de Schmidt-Pullman, los epóxidos de la región K
deberían ser más cancerígenos que el hidrocarburo original.
Los HAP de bajo peso molecular (LMW) (dos o tres anillos) son
relativamente volátiles, solubles y más degradables que los compuestos de
mayor peso molecular. Los HAP de alto peso molecular (HMW) (cuatro o
más anillos) se absorben fuertemente en suelos y sedimentos y son más
resistentes a la degradación microbiana. Debido a su estado sólido, alto
peso molecular e hidrofobicidad, expresado como su log
)
!
Naftalina
La biodegradación del naftaleno es el mejor estudiado de los HAP
porque es el HAP más simple y soluble, y los microorganismos que
degradan el naftaleno son relativamente fáciles de aislar. Se han aislado
repetidamente cepas bacterianas capaces de degradar hidrocarburos
aromáticos, principalmente del suelo. Suelen ser bacterias gramnegativas,
la mayoría de ellas pertenecen al género Pseudomonas. Las vías
biodegradativas también se han informado en bacterias del género Mycobacterium,
Corynebacterium, Aeromonas, Rhodococcus, y Bacilo [ 5-8].
La secuencia bioquímica y las reacciones enzimáticas que
conducen a la degradación del naftaleno fueron presentadas por
primera vez por Davies y Evans [9]. Otros estudios han indicado que
inicialmente las bacterias oxidan el naftaleno incorporando ambos
átomos de oxígeno molecular en la molécula aromática para formar cis- 1,2-dihidroxi-1,2
Naftaleno dioxigenasas de

Pseudomonas sp. NCIB 9816 y Pseudomonas putida

ATCC17 484 actúan como sistemas de enzimas multicomponente que son
responsables de la naftaleno cis- formación de dihidrodiol [5, 10]. Estos
constan de tres componentes proteicos: una flavoproteína (reductasa), una
ferredoxina de dos hierro, dos de SIESTA
azufre ferredoxina y la oxigenasa terminal
ISP. La naftalenioxigenasa
SIESTA
es muy inestable y para estudiar
SIESTA
su actividad es
necesaria una rápida purificación. La dioxigenasa terminal tiene un peso
molecular de 158 kD y está compuesta por dos subunidades que se
establecieron en 55 y 20 kD. También se ha aislado una naftaleno
oxigenasa de células de

Corynebacteriumrenale, que pudo utilizar naftaleno como principal

fuente de carbono y energía [5]. La enzima tiene un peso molecular de
aproximadamente 99 kD y se formó cis- 1,2dihidroxi-1,2-dihidronaftaleno
como metabolito predominante.

El segundo paso en la oxidación bacteriana del naftaleno es la

conversión de cis- 1,2-dihidroxi-1,2-dihidronaftaleno a
Figura 1. Estructuras de HAP representativos.
1,2-dihidroxinaftaleno. Esta reacción es

Cuadro 1. Propiedades químicas y físicas de HAP seleccionados.

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Degradación bacteriana y biorremediación de ...
catalizado por naftaleno (+) - cis- dihidrodiol deshidrogenasa y requiere
NAD + como aceptor de electrones. La enzima tiene un peso molecular
de aproximadamente 102 kD, consta de cuatro subunidades de 25,5 kD y
Bacillus thermoleovorans. Aparte de los metabolitos típicos de la
es altamente estereoselectiva para el isómero (+) - cis- 1,2-dihidroxi-1,2dihidronaftaleno.
En Pseudomonas sp. el siguiente paso conduce a la escisión enzimática
de 1,2-dihidroxinaftaleno para
cis- 2-hidroxibenzalpiruvato, que luego se convierte vía
serie de dioxigenasas para salicilato y piruvato. El salicilato es oxidado
por la salicalato hidroxilasa a catecol, que puede sufrir tanto orto o meta fisión la oxidación de naftaleno en pseudomonas se encuentran en
dependiendo del metabolismo bacteriano [11, 12]. Las vías propuestas
para la oxidación del naftaleno por algunas bacterias del género
Pseudomonas se ilustran en la Fig. 2. Se ha informado de una vía
similar para el metabolismo de la naftaleno por
Aeromonas sp. [14]. Se ha observado un metabolismo diferente de los
salicilatos en Pseudomonas testosteroni. Estas bacterias convirtieron el
salicilato en ácido gentísico (Fig. 2). Metabolismo del naftaleno por una cepa
de Mycobacterium sp. implica tanto la monooxigenación como la
dioxigenación con la formación de ambas cis- y trans- 1,2-dihidrodioles (la
proporción de cis- a trans- diol 25: 1). La reacción es catalizada por el
citocromo P-450 monooxigenasa que forma naftaleno.
1,2-óxido que luego se convierte en el trans- diol por una enzima
epóxido hidrolasa. El esquema de reacción es
Fig. 2. La ruta propuesta para la oxidación del naftaleno por algunas bacterias del
género Pseudomonas [ 5, 13].
17
común en células eucariotas, pero se describió por primera vez en bacterias
[6]. Recientemente se ha descrito una ruta diferente de degradación del
naftaleno en la bacteria termofílica.
degradación del naftaleno conocidos de los mesófilos, se
identificaron intermedios como el 2,3-dihidroxinaftaleno, el ácido
2carboxinámico, el ácido ftálico y el benzoico en la ruta de esta
bacteria [8].
Muchas investigaciones han indicado que los genes que codifican
plásmidos. Hay tres plásmidos conocidos que determinan la
degradación del naftaleno: NAH7, NPL1 y pND 13, pero el plásmido que
se ha estudiado más intensamente es NAH7. Este plásmido especifica
una vía degradativa completa para la degradación del naftaleno, con la
formación de salicilato como intermedio principal [15]. El plásmido
NAH7 es de 83 kB y consta de dos grupos, que forman nah 1 y nah 2
operones nah AF = nah 1 y nah GM = nah 2 = sal). los nah 1 operón
incluye nah Los genes AF que codifican la conversión de naftaleno en
salicilato y la nah 2 (sal) operón incluye nah GM que codifica el
metabolismo del salicilato a piruvato y acetaldehído. los
sal operón (56 MD de tamaño) especifica una degradación completa del
salicilato que incluye una función meta vía [16].
A diferencia de Pseudomonas stutzeri La cepa AN10 es una cepa
degradadora de naftaleno cuyos genes disimilatorios están codificados
cromosómicamente [17, 18]. La organización genética de su vía
catabólica de naftaleno es similar a la encontrada en otras vías de
degradación de naftaleno bien caracterizadas, como el plásmido
arquetípico NAH7 de P. putida G7 [15, 19, 20] y el plásmido NAH
pWW60-1 de P. putida NCIB9816 [21, 22]. La vía de degradación de
naftaleno de P. stutzeri AN10 está codificado por 19 genes distribuidos en
dos operones: Superior y inferior
vías y muestra altos grados de similitud de genes catabólicos homólogos.
Tales eventos aceleran la evolución de las vías catabólicas modernas,
proporcionando nuevo material genético dentro del medio ambiente y
resultando en un potencial de biorremediación natural mejorado.
Fluoreno
Estudios recientes han demostrado que durante la transformación del
fluoreno o la biodegradación por bacterias se produjeron varios intermedios
diferentes. Pseudomonas sp. la cepa F274 produjo seis metabolitos
principales. Cinco de ellos fueron identificados como 9-fluorenol,
9-fluorenona, 1,1-dihidroxi-1hidro-9-fluorenona,
8-hidroxi-3,4-benzocoumarina y
ácido ftálico. La identificación de 8-hidroxi-3,4benzocumarina y ácido
ftálico sugiere que el anillo de cinco miembros del diol angular se abre
primero y que el derivado 2-carboxi resultante del 2,3-dihidroxibifenilo
se cataboliza mediante reacciones análogas a las de la degradación
del bifenilo, lo que lleva a a la formación de ácido ftálico [23].
Alternativamente, en algunas bacterias, la oxigenación inicial puede
tener lugar para producir 3,4-dihidroxidroxifluoreno seguido de fisión
del anillo extradiol y una mayor degradación a 3,4-dihidrocumarina. Pseudomonas
 18

cepacia cepa F297 fluoreno degradado vía Fisión de es un metabolito nuevo en estudios de biodegradación del antraceno; sin
3,4dihidroxifluoreno y extradiol en 1-indanona como metabolito embargo, la metilación de un intermedio de PAH dihidroxilado se encontró
terminal [7]. previamente durante el metabolismo del fluoranteno. La ruta propuesta para
Recientemente se ha encontrado una nueva vía catabólica del la degradación del antraceno por Mycobacterium sp. PYR-1 se muestra en
fluoreno en Brevibacterium sp. cepa DPO1361 en la que la hidroxilación en la Fig.3.
C-9 de fluoreno generó 9-fluoroenol, que luego se deshidrogenó a
9-fluorenona [24]. A continuación, este intermedio se somete a
dioxigenación en un sitio angular para formar
1,10-dihidro-11,10-dihidroxifluoreno-9-ona, cuyo anillo de cinco miembros
se escinde posteriormente para generar un bifenilo sustituido.

Otra vía de degradación del fluoreno por

Staphylococcus auriculans DBF63 fue descrito por Monna y
colaboradores [25]. La formación de 9-fluorenol, 9-fluorenona,
4-hidroxi-9-fluorenona, 1-hidroxi-9-
Se observó fluorenona y acumulación de
1,1-dihidroxi-1-hidro-9fluorenona cuando esta cepa creció en fluoreno.
Durante la degradación del fluoreno por Arthrobacter sp. Se
identificaron nuevos metabolitos de la cepa F101: 3-hidroxi-1indanona,
1-indanona, 2-indanona, 3- (2-hidroxifenil) propionato y el compuesto
identificado tentativamente como formil indanona. La 2-indanona puede
transformarse en la lactona aromática, 3-isocromanona [26, 27].

Antraceno y fenantreno

Estos hidrocarburos aromáticos tricíclicos se encuentran ampliamente

distribuidos por el medio ambiente. Se han utilizado como sustratos
modelo en estudios sobre la degradación ambiental de los HAP, ya que
ambas estructuras se encuentran en los HAP cancerígenos como el benzo
[a] pireno, el benz [a] antraceno y el 3-metilcolantreno.

Los cultivos puros y los cultivos mixtos de bacterias aisladas de

ambientes marinos y de agua dulce tienen la capacidad de metabolizar
el antraceno y el fenantreno como única fuente de carbono. El Fig. 3. La ruta propuesta para la degradación del antraceno por Mycobacterium

antraceno puede ser completamente mineralizado por Pseudomonas, sp. cepa PYR-1 [30].

Sphingomonas, Nocardia, Beijerinckia, Rhodococcus y Mycobacterium siendo

el intermedio oxigenado inicial un dihidriol [28-30]. Aparte de Mycobacterium,
estas especies oxidan el antraceno en las posiciones 1,2 para formar cis-
1,2-dihidroxi
1,2-dihidroantraceno y luego convertirlo en 1,2 dihidroxiantraceno a
través de la dihidrodiol deshidrogenasa dependiente de NAD +. En el
siguiente paso, estas bacterias oxidan el 1,2dihidroxiantraceno al
producto de fisión del anillo. cis- Ácido 4- (2hidroxinaft-3-il)
-2-oxobut-enoico con posterior
conversión a ácido 2-hidroxinaftoico. El producto de fisión del anillo se
metaboliza a salicilato y catecol a través de
2,3-dihidroxinaftaleno. El catecol se degrada a compuestos alifáticos
simples por una vía similar a la conversión de catecol en la vía de
degradación del naftaleno [5, 28]. Varios Mycobacterium especies
metabolizan fenantreno en diferentes sitios de la molécula,
presumiblemente vía tanto la dioxigenasa como la monooxigenasa
atacan el núcleo aromático. El antraceno resultante cis- El
1,2-dihidrodiol se deshidrogena a 1,2-dihidroxiantraceno. La
acumulación de 1-metoxi-2-hidroxiantraceno proporciona más
evidencia de la dioxigenación del antraceno. Esta
Varios investigadores han informado de las vías del
metabolismo del fenantreno por las bacterias [13, 31-33]. Se han
realizado estudios sobre muchas cepas de
Pseudomonas, Arthrobacter, Aeromonas, Sphingomonas, Acidovorax,
Brevibacterium, Mycobacterium y Nocardia
[5, 14, 34-37].
En general bacterias del género Pseudomonas
oxidar inicialmente el fenantreno en las posiciones 1,2 y 3,4 para formar cis-
1,2-dihidroxi-1,2-dihidrofenantreno o cis-
3, 4 - dihidroxi - 3, 4 - dihidrofenantreno. El fenantreno- cis- El
3,4-dihidrodiol es el isómero predominante que se convierte en
3,4-dihidroxifenantreno. El producto de escisión del anillo se
metaboliza adicionalmente a ácido 1hidroxi-2-naftoico, que
posteriormente se descarboxila oxidativamente a
1,2-dihidroxinaftaleno y luego se somete a meta- escisión para formar
ácido salicílico [13, 28, 38]. El ácido salicílico también puede
degradarse aún más
vía la formación de catecol o ácido gentísico. Tanto el catecol como el ácido
gentísico se someten a una fisión de anillo para formar intermedios del ciclo de TCA
[39]. Kiyohara y Nagao [14] encontraron
Degradación bacteriana y biorremediación de ...
que una cepa de Aeromonas y algunos vibrios utilizan una vía
alternativa para el metabolismo del fenantreno. Ellos encontraron que Aeromonas
cepa el fenantreno convertido en ácido 1-hidroxi-2-naftoico; sin
embargo, no pudo catalizar la descarboxilación de 1-hidroxi-2-naftoato
a 1,2-dihidroxinaftaleno. Alternativamente, Aeromonas
1-hidroxi-2-naftoato convertido vía una escisión intradiol para
formar o- ácido ftálico. Esto luego fue hidroxilado y descarboxilado
a protocatecuato, que se sometió a orto o meta escisión a ácido
pirúvico, que finalmente entró en el ciclo del ácido tricarboxílico
[40].
Se detectó un nuevo intermedio, 1-naftol durante la utilización de
fenantreno por Brevibacterium sp. HL4 y
Pseudomonas sp. DLC-P11. Brevibacterium sp. Fenantreno
degradado HL4 vía Ácido 1-hidroxi-2-naftoico, 1naftol y ácido salicílico,
mientras que Pseudomonas sp. Fenantreno degradado DLC-P11 vía la
formación de ácido 1hidroxi-2-naftoico, 1-naftol y o- ácido ftálico (Fig.
4). Ambas transformaciones son nuevas y no se han informado
previamente en la literatura [36].
Pinyakong et al. [ 37] describió y caracterizó metabolitos en la
degradación del fenantreno por la cepa que utiliza fenantreno
recién aislada Esfingomanas sp.
Fig. 4. Las vías propuestas para el metabolismo del fenantreno por
Brevibacterium sp. HL4 y Pseudomonas sp. DLC-P11 [36].
19
cepa P2. Sugirieron que esta cepa puede degradar el fenantreno vía dioxigenación
en las posiciones 1,2 - y 3,4 seguida de meta- escote. Como los
productos de escisión de anillos son inestables, cis- Ácido 4-
(1-hidroxinaf-2-il) -2oxobut-3-enoico, cis- Ácido 4- (2-hidroxinaf-1-il)
-2-oxobut3-enoico y cis- El ácido o-hidroxibenciliden-pirúvico se
puede descarboxilar y oxidar fácilmente a 7,8benzocumarina,
5,6-benzocumarina y cumarina, respectivamente.
Los resultados obtenidos por PCR sugieren que los genes de
degradación de PAH están dispuestos en un operón policistrónico en el
cromosoma o un plásmido. Se encontraron genes de degradación del
fenantreno en plásmidos en diferentes cepas de Comamonas testosteroni,
Beijerinckia sp. y
Alcaligenes facealis AFK2 [41-43]. Aunque se ha descubierto que estos
plásmidos están implicados en la degradación del fenantreno, no se
pudo obtener ningún derivado curado. Se necesitan más estudios para
determinar el papel y la estructura de estos plásmidos en la vía de
degradación del fenantreno. Goyal y Zystra [44] demostraron que Comamonas
testosteroni cepa tiene los genes responsables de la degradación de
este compuesto en el cromosoma. Usando el todo nah operón como
sonda, no observaron ninguna señal de hibridación con el ADN total
aislado de esta cepa. Estos resultados sugieren que la secuencia del
gen era diferente a la del nah operón.
Otros hidrocarburos aromáticos policíclicos
La biodegradación de los HAP que contienen más de tres anillos
aromáticos no se comprende tan bien como la utilización de hidrocarburos
aromáticos dicíclicos y tricíclicos. Esto puede deberse al gran tamaño y la
extrema insolubilidad de HAP como el fluoranteno, el benzo [a] antraceno, el
benzo [a] pireno y el pireno [5, 6]. Se ha prestado especial atención a la
oxidación inicial de HAP, enzimas involucradas en la biodegradación y la
identificación de intermediarios. Aún así, se sabe poco sobre las vías
metabólicas completas y el control genético de los procesos de
biodegradación.
Fluoranteno
El fluoranteno es degradado principalmente por bacterias del género Mycobacterium
y Alcaligenes. Degradación por
Mycobacterium sp. La cepa PYR-1 implica dioxigenación en las
posiciones 1,2 y 7,8, produciendo fluoreno-9ona o acenafteno-7-ona
después de la fisión del anillo. En una cepa de Alcaligenes denitrificans este
último se oxida adicionalmente por oxidación a
3-hidroximetil-3,4-dihidrobenzocumarina [7]. En otra cepa Mycobacterium
sp. KR20 se produjeron al menos siete metabolitos durante el
metabolismo del fluoranteno. Cinco de ellos fueron identificados
mediante técnicas espectroscópicas de RMN y EM como: cis- 2,3-fluoreno-dihidriol,
9-carboximetilen-fluoreno-1-
ácido carboxílico, cis- 1,9-dihidroxi-1-hidro-fluoreno-9-
ácido uno-8-carboxílico, 4-hidroxibenzocromeno-6-ona-
Ácido 7-carboxílico y ácido benceno-1,2,3-tricarboxílico [45].
 20

Benz [a] antraceno

Se han descrito vías para la degradación parcial de la

degradación del benz [a] antraceno para las bacterias.
Beijerinckia y Mycobacterium. Los estudios iniciales mostraron que las cepas
mutantes de Beijerinckia sp. B836 y Beijerinckia
sp. B1 implicó dioxigenación en las posiciones 1, 2, 8, 9 o 10, 11 con
producción de tres dioles distintos después de la inducción por
crecimiento en bifenilo [5, 46]. El principal isómero de dihidrodiol
formado fue cis- 1,2-dihidroxi-1,2dihidrobenz [a] antraceno. Estos
dioles se degradaron adicionalmente a 1-hidroxi-2-carboxiantraceno
o los correspondientes fenantrenos. Por otra parte,

Mycobacterium sp. La cepa RJGII-135 formó el 5,6 dihidrodiol como

metabolito predominante y, en segundo lugar,
8, 9 y 10, 11-dihidrodioles [47].

Pireno y benzo [a] pireno

Muchos investigadores han informado de la degradación bacteriana del

pireno, un PAH pericondensado, y algunos de ellos han identificado Fig. 5. La ruta esquemática propuesta para la degradación del pireno por Mycobacterium
sp. AP1 [53].
metabolitos y rutas propuestas. Curiosamente, las micobacterias se han
aislado repetidamente como bacterias que pueden degradar el pireno y el
benzo [a] pireno. Aunque estas bacterias son conocidas por su crecimiento
comparativamente lento, su crecimiento en PAH es más rápido que el de pireno-4,5-diona casi estequiométricamente, lo que sugiere que la

otras bacterias: por ejemplo, la tasa de crecimiento de
Mycobacterium sp. BB1 en pireno fue dos veces más rápido que
Rhodococcus sp. UW1 [48]. Mycobacterium sp. pireno mineralizado cuando
se cultiva en medio de sal mineral suplementado con nutrientes orgánicos.
pireno-4,5-diona se forma por oxidación de cis- 4,5-dihidro-
4,5-dihidroxipireno a 4,5-dihidroxipireno y posterior autooxidación
de este metabolito [54].
Mycobacterium sp. Se ha encontrado que la cepa RJGII-135 mineraliza
no sólo pireno sino también un benzo [a] pireno [55]. Un análisis de los

Se detectaron siete metabolitos del metabolismo del pireno mediante HPLC productos de degradación muestra que el benzo [a] pireno se transformó por

[48]. Tres productos de la oxidación del anillo, cis- 4,5-pirendihidrodiol, dioxigenación en el

trans- El 4,5-pirenodihidrodiol y el pirenol, y cuatro productos de la fisión
del anillo 4-hidroxiprinaftenona, ácido 4-fenantroico, ácido ftálico y
ácido cinámico se identificaron mediante MS, NMR y GC. El ácido
4-fenantroico fue el producto principal. La detección de ambos cis- y trans-
Los 4,5dihidrodioles sugirieron múltiples vías para el ataque oxidativo
inicial del pireno. Se confirmaron los metabolitos clave de la vía
propuesta para Mycobacterium sp. cepa RJGII-135 [49], M. flavescens [ 50]
y Mycobacterium
sp. KR2 [51]. Se demostraron intermedios similares para Rhodococcus
sp. UW1, que es capaz de utilizar pireno y criseno como únicas
fuentes de carbono y energía [52]. Además de los principales
metabolitos descritos,
Mycobacterium sp. La cepa AP1 es capaz de formar un nuevo
metabolito identificado como ácido 6,6-dihidroxi-2-2-bifenil dicarboxílico,
que demuestra una nueva vía que implica la escisión de ambos anillos
centrales de pireno [53]. La ruta esquemática propuesta para la
degradación del pireno por Mycobacterium sp. La cepa AP1 se muestra
en la Fig.5.
En un estudio reciente se ha demostrado que Sphingomonas
yanoikuyae cepa R1 puede transformar pireno en cis- 4,5dihidro-4,5-dihidroxipireno
y pireno-4,5-diona. Esta cepa R1 y Pseudomonas saccharophila P15
transformado cis- 4,5-dihidro-4,5-dihidroxipireno para
Posiciones 4,5, 7,8 y 9,10. El criseno-4,5-dicarboxilato se formó
presumiblemente por fisión intradiol del 4,5-dihidroxi [a] pireno,
mientras que los 7,8- y 9,10- dihidrodioles sufrieron una fisión
extradiol a dihidropireno carboxilatos [7]. La vía propuesta para la
degradación del benzo [a] pireno por Mycobacterium sp. RJGII-135
(basado en metabolitos aislados) se ilustra en la Fig.6.
Biorremediación de aromáticos policíclicos
Hidrocarburos
Ha habido un creciente interés en la biorremedación de ambientes
terrestres y acuáticos contaminados con HAP. El interés en los
mecanismos de biodegradación y el destino ambiental de los
contaminantes está motivado por su distribución ubicua y sus posibles
efectos nocivos sobre la salud humana [56-58].
La concentración de hidrocarburos aromáticos policíclicos en el medio
ambiente varía ampliamente, dependiendo del nivel de desarrollo industrial, la
proximidad de los sitios contaminados a la fuente de producción y el modo de
transporte de PAH. Las concentraciones de HAP notificadas en el suelo y los
sedimentos varían de 1 g / kg a más de 300 g / kg [58-60].
Hay dos razones para limitar la biorremediación de los sitios contaminados
con HAP. En primer lugar, se han utilizado con éxito métodos biológicos para la
limpieza municipal e industrial.
Degradación bacteriana y biorremediación de ...
aguas residuales, pero sus aplicaciones en la remediación de tierras aún se
encuentran en una etapa de infancia. En segundo lugar, debido a su estructura
química y propiedades, las bacterias no los degradan fácilmente y pueden persistir
durante mucho tiempo en el medio ambiente. Por ejemplo, las semividas en suelos y
sedimentos de la molécula de fenantreno trepador pueden oscilar entre 16 y 126 días,
mientras que para el benzo [a] pireno de cinco anillos puede oscilar entre 229 y 1400
días [61].
Se ha prestado considerable atención al uso potencial de
microorganismos para remediar suelos contaminados con contaminantes
orgánicos persistentes [62, 63]. Dado que los HAP son compuestos hidrófobos
con baja solubilidad en agua, tienen tendencia a unirse a la materia orgánica o
al suelo, lo que limita su disponibilidad para los microorganismos. A pesar de
estas propiedades, se han aislado muchas cepas bacterianas por su
capacidad para transformar, degradar y utilizar PAH como fuente de carbono y
energía [64, 65].
La biodegradación de los HAP por bacterias se ha observado en
condiciones aeróbicas y anaeróbicas. La biodegradación anaeróbica
avanza muy lentamente y el mecanismo bioquímico de este proceso
aún no se ha determinado en detalle [66]. Coates et al. [ 67] demostró
que una amplia variedad de contaminantes de hidrocarburos se pueden
degradar en condiciones de reducción de sulfato y
Fig. 6. Las vías propuestas para el metabolismo del benzo [a] pireno por Mycobacterium
poblaciones mixtas de bacterias. Según lo informado por Tadros et al. [ 74] individuo
sp. RJGII-135 [47].
21
sugirió que podría ser posible utilizar la reducción de sulfato en lugar de la
respiración aeróbica como estrategia de tratamiento para los sedimentos dragados
contaminados con hidrocarburos. La degradación de los PAH por las bacterias se
produce principalmente en condiciones aeróbicas que implican la oxidación del anillo
mediada por la oxigenasa y la posterior formación de catabolitos: fisión y
metabolismo del anillo.
Para mejorar la biodegradación, algunos investigadores han utilizado
tensioactivos o disolventes orgánicos para mejorar la disponibilidad de HAP
en los microorganismos [68-72]. El uso de tensioactivos como SDS,
TritonX-102, Brij 35, Marlipal 013/90 y Genapol X150 aumenta la
concentración de compuestos hidrófobos en la fase acuosa por solubilización
o emulsificación. La solubilización se produce por encima de un umbral
específico de tensioactivo, la concentración micelar crítica (CMC) donde las
moléculas de tensioactivo se agregan a las micelas. Otro parámetro
importante que describe las propiedades físicas de los tensioactivos es el
equilibrio hidrófilo-lipófilo (HLB), que está determinado por la relación de las
partes hidrófila e hidrófoba de la molécula de tensioactivo [73]. Aunque se
han estudiado los tensioactivos en sistemas complejos de agua-aceite, los
efectos no se comprenden bien. En algunos experimentos, los tensioactivos
estimularon la biodegradación, mientras que en otros actuaron como
inhibidores [68]. Se han propuesto varias hipótesis para explicar este efecto
inhibidor. Una propuesta es que si los microorganismos no tienen acceso
directo a los HAP dentro de las micelas, la tasa de transporte de masa entre
estas micelas y la fase acuosa limitaría la biodegradación. La segunda
hipótesis sugiere que la inhibición de la biodegradación ocurriría si el
surfactante es tóxico o si es usado preferentemente por microorganismos
como fuente de carbono y energía.Además, varios estudios también han
sugerido que el uso de surfactantes por encima de la concentración micelar
crítica (CMC) disminuiría la desorción y limitaría la biorremediación [55]. Todo
esto sugiere que las influencias de los tensioactivos en los procesos de
degradación dependen de muchos factores como la cepa bacteriana,
estructuras químicas y concentración de PAH, y tipos y concentraciones de
tensioactivos utilizados. Por ejemplo, en condiciones insaturadas (pero
húmedas), un tensioactivo, Witconcol SN70, estimuló la mineralización del
pireno, mientras que el mismo tensioactivo inhibió la mineralización del pireno
en los lodos del suelo [71].
El aumento de la tasa de biodegradación se ha observado en estudios en los
que se utilizaron disolventes orgánicos para mejorar la biodisponibilidad de los PAH a
las bacterias. Sotavento et al. [ 65] utilizando acetona y etanol encontró que las tasas
de biodegradación total de PAH para suelos pretratados con estos solventes se
estimaron en aproximadamente dos veces más rápido que los suelos sin
pretratamiento con solventes. Aproximadamente el 90% del total de PAH en la tierra
Vandalia (EXC) pretratada con acetona y etanol se eliminaron en 17 días, mientras
que se necesitaron 35 días para lograr el mismo porcentaje de eliminación para la
tierra no pretratada.
La mayoría de los estudios sobre la biodegradación de los HAP se realizaron
mediante cultivos puros de microorganismos o mediante sistemas enzimáticos
purificados, pero se sabe menos acerca de la degradación y transformación de
estos compuestos en suelos y sistemas acuáticos donde están presentes
 22

las cepas podrían degradar varios PAH, pero se prefiere uno. El cultivo mixto,
aislado de sedimentos costeros, degradó el fluoreno y el naftaleno más rápido
que las cepas bacterianas individuales originadas en la comunidad indígena de
bacterias. El cultivo de microorganismos mezclado con metabolismo colectivo
puede resultar en una mayor utilización de PAH, ya que los productos de
biotransformación intermediarios de un microorganismo pueden servir como
sustratos para el catabolismo y el crecimiento por otros [31, 75].
Es difícil estudiar la biodegradación de los HAP en entornos naturales
debido a una serie de factores que determinan la tasa de degradación y la
extensión del metabolismo bacteriano. Los factores ambientales incluyen
temperatura, pH, concentración de oxígeno, salinidad, intensidad de luz, tipo
de sedimento, presencia de co-sustratos y estación. Además, el grado de
degradación de los hidrocarburos aromáticos policíclicos aumenta
significativamente en presencia de otros nutrientes. Por ejemplo, la adición de
nitrógeno inorgánico y fósforo estimuló la degradación de los HAP en la capa
superficial del suelo y la arena del acuífero [76, 77]. La investigación futura
debe centrarse en identificar los factores que aumentan la degradación de los
HAP por las especies autóctonas de los suelos y sedimentos.
Los estudios sobre el metabolismo de los PAH están entrando en una nueva
era con la aplicación de microorganismos modificados genéticamente (GEM) para los
procesos de biorremediación. Los microorganismos modificados han mostrado
potencial para la biorremediación de muchos contaminantes químicos; sin embargo,
la mayoría de los estudios se han realizado a escala de laboratorio [78, 79].
La Universidad de Tennessee en colaboración con el Laboratorio
Nacional Oak Ridge ha logrado el primer lanzamiento de campo de un GEM
con fines de biorremediación. El GEM involucrado fue un Pseudomonas
fluorescens, cepa HK44. El plásmido naftaleno-catabólico pUTK21 se
enzimas, o un ensayo de PCR dependiendo de estos genes. Estos sistemas de
detección permiten a Hamann y colaboradores [83] demostrar que el ADN
genómico de diferentes cepas de Pseudomonas, Mycobacterium, Gordona,
Sphingomonas, Rhodococcus
y Xanthomonas se hibridó con un fragmento de ndoB, que codifica la
proteína de azufre de hierro grande (ISPa) de la naftaleno
dioxigenasa de Pseudomonas putida
PaW736 (NCIB 9816). Usando un enfoque de reacción en cadena de la polimerasa
(PCR), algunos Pseudomonas cepas mostraron un fragmento de PCR del tamaño
esperado con cebadores específicos de ndoB y, además, algunas cepas de Gordona,
Mycobacterium, Pseudomonas, Sphingomonas y Xanthomonas se detectaron con
grupos de cebadores degenerados específicos para el centro ISPa [2Fe-2S] -rieske
de diversas dioxigenasas de hidrocarburos aromáticos. Esto puede ser una base
para el aislamiento de nuevos genes catabólicos de PAH, que podrían usarse para
evaluar el potencial de degradación de PAH de poblaciones mixtas.
En el lugar La biorremediación es la aplicación de un tratamiento biológico
para la limpieza de productos químicos peligrosos presentes en el suelo. La
optimización y el control de las transformaciones microbianas de los
hidrocarburos orgánicos policíclicos requieren la integración de muchas
disciplinas científicas y de ingeniería.
Agradecimientos
Agradecemos al Dr. David Necklen y al Dr. Izabela Radecka (Universidad
de Wolverhampton, Reino Unido) por mejorar el lenguaje de este documento y
por sus útiles comentarios.
Referencias

introdujo en esta cepa y adicionalmente contiene un transposón lux gen

fusionado dentro de un promotor de los genes catabólicos de naftaleno & '() * ++ & $ &, -. &.
[80-82]. En presencia de naftaleno, aumentaron la expresión de genes / &01* 2 3
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catabólicos, la degradación de naftaleno y la respuesta bioluminiscente
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a los requisitos de investigación para la reproducibilidad y para garantizar que ,- <** + y
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Degradación bacteriana y biorremediación de ... 25

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