M.C.

Jaime Armendriz Velzquez

A lo largo de la evolucin, las plantas han desarrollado diferentes respuestas y adaptaciones que les permiten sobrevivir en condiciones de constante dficit hdrico (Nilsen y Orcutt, 1996).

Algunas plantas poseen adaptaciones como el desarrollo del metabolismo C4 y del metabolismo cido de las crasulceas o CAM, que les permiten explotar ambientes ms ridos (Black y Osmond, 2003; Lttge, 2004).

Cuando el dficit hdrico se desarrolla lentamente, las plantas pueden presentar respuestas de aclimatacin que tienen efectos sobre el crecimiento, como la disminucin de la expansin foliar y el aumento del crecimiento radicular (Potters et al., 2007; Shao et al., 2008)

Otro mecanismo de resistencia a nivel fisiolgico es el cierre de estomas, estructuras responsables de la mayor proporcin de prdida de agua en las plantas (Taiz y Zeiger, 2006). Esta respuesta est mediada por la hormona cido abscsico (ABA) (Leung y Giraudat, 1988; Zhang y Outlaw, 2001).

Una de las principales respuestas al estrs hdrico es la modificacin de la expresin gnica, relacionada con la produccin de enzimas clave en la va de sntesis de osmolitos, protenas con funcin protectora, enzimas antioxidantes, factores de transcripcin y otras protenas involucradas en las respuestas al estrs hdrico (Bray, 1997; Zhu et al., 2002).

Entre las protenas ms importantes por su efecto protector potencial estn las LEA (Late Embriogenesis Abundant Proteins) y las que funcionan como antioxidantes (Danon et al., 2004).

Se ha propuesto que las protenas LEA protegen protenas y membranas del dao debido a la deshidratacin (Bray, 1993). Durante el estrs hdrico tambin se induce la expresin de varios factores de transcripcin que median la respuesta de genes a estrs hdrico algunos de los cuales se unen a secuencias especficas en la regin promotora de los genes (Guiltinan et al., 1990; Busk et al., 1997)

El ABA est involucrado en el proceso de adaptacin de la planta a diferentes tipos de estrs ambiental, y se ha comprobado que durante estos estreses los niveles de ABA se incrementan en los tejidos vegetativos (Zeevaart y Creelmen, 1988). Esta relacin llev a proponer que el ABA es uno de los mediadores de dichas respuestas y que sus niveles en una planta pueden ser determinantes de su comportamiento frente a una condicin de estrs.

Estos niveles son modulados por un balance preciso entre la biosntesis y el catabolismo de esta hormona. Aunque muchos genes que se expresan durante el estrs hdrico estn regulados por el ABA, se ha encontrado que la expresin de algunos es total o parcialmente independiente de ABA (Chandler y Robertson, 1994)

Esto podra sugerir la presencia de factores adicionales involucrados en la modulacin de algunos genes durante estrs. La informacin reciente sobre las diferentes respuestas y adaptaciones de las plantas al dficit hdrico, indican la percepcin y las vas de sealizacin del estrs hdrico y la expresin de genes de manera dependiente e independiente de ABA durante el estrs por dficit hdrico.

El dficit hdrico no slo ocurre cuando hay poca agua en el ambiente, sino tambin por bajas temperaturas y por una elevada salinidad del suelo. Estas condiciones, capaces de inducir una disminucin del agua disponible del citoplasma de las clulas, tambin se conocen como estrs osmtico (Levitt, 1980).

El ABA regula dos procesos bsicos para el desarrollo de las plantas; uno es la maduracin y germinacin de la semilla, donde est involucrado en los procesos de adquisicin de la dormancia, acumulacin de reservas nutritivas y adquisicin de la tolerancia a desecacin (Busk y Pags, 1998; Leung y Giraudat, 1998).

De otro lado, est involucrado en el proceso de adaptacin de la planta a diferentes tipos de estrs ambiental como el fro, la salinidad y la deshidratacin. Se ha comprobado que durante estos estreses los niveles de ABA se incrementan en tejidos vegetativos. Esta relacin llev a proponer que el ABA es uno de los mediadores de dichas respuestas (Galau et al., 1986; Zeevaart y Creelmen, 1988; Bray, 1991).

La fitohormona ABA es sintetizada a partir del precursor carotenoide C40,por la va 2-Cmetil-d-eritritol-4-fosfato (MEP). La primera enzima relacionada directamente con su sntesis es la 9-cis-epoxicarotenoide dioxigenasa (NCED), la cual est localizada en los plstidos y rompe un precursor epoxicarotenoide para formar xantosina (C15) y un metabolito (C25)

La forma biolgicamete activa de ABA se produce a partir de cis-xantosina por dos pasos enzimticos va aldehdo abscsico y es catalizada por AtABA2. La oxidacin del aldehdo abscsico a cido carboxlico es el ltimo paso en la biosntesis del ABA y es catalizado por una abscsico aldehdo oxidasa (AAO), la cual requiere un cofactor molibdeno (MoCo) para su actividad cataltica

Adicional a esta regulacin, la sobreexpresin de genes que codifican enzimas regulatorias de la va MEP (1-doexi-Dxylulosa 5-fosfato sintasa), de la biosntesis de carotenoides (fitoeno sintasa) y del ciclo de las xantofilas (ZEP) causan un aumento en la acumulacin de ABA en semillas y plntulas

Durante el estrs abitico varios de estos genes estn sobre-expresados. En L. esculentum y Arabidopsis la expresin del gen zep se induce en races por estrs hdrico rpido o progresivo(Audran et al., 1998; Bittner et al., 2001). La induccin de la expresin del gen nced, en condiciones de estrs hdrico, se ha observado en races y hojas en varias especies incluyendo P. vulgaris y Arabidospsis. Adicionalmente, la sobre-expresin del gen Atnced3 en plantas transgnicas de Arabidopsis aumentan los niveles de ABA y la tolerancia a la deshidratacin

Por vas catablicas los niveles de ABA activo en las plantas pueden disminuirse por un proceso de degradacin y por la conjugacin con azcares. En el proceso de degradacin, el ABA es primero hidrolizado a 8-hidroxi ABA (C-8), el cual es convertido a cido faseico.

La familia de genes P450 CYP707 de Arabidopsis codifica para las enzimas que catalizan este paso (Kushiro et al., 2004). El anlisis de estos genes indica que su expresin est regulada tanto por estrs como por desarrollo.

En la otra va, el ABA es conjugado con la glucosa por una ABA glucosiltransferasa para obtener una forma fisiolgicamente inactiva, ABA glucosil ester (Hirayama y Shinozaki, 2007) que es liberada por una -glucosidasa (BG). En Arabidopsis se determin que la protena AtBG1 est involucrada en la regulacin de los niveles endgenos de ABA(Hirayama y Shinozaki, 2007).

Los genes inducidos durante estrs a travs del ABA pueden dividirse en dos grupos. Estn los que se inducen por ABA y cuya expresin es independiente de la sntesis de protenas, es decir, donde no se requiere sntesis de protenas de novo para su induccin. De otro lado, estn los genes inducidos por ABA de una manera dependiente de la sntesis de novo de protenas

En la regulacin transcripcional de genes por el ABA se han identificado factores que actan tanto en cis como en trans. La caracterizacin de los promotores de los genes inducibles por ABA, Em de trigo y rab16A de arroz, mostr que un elemento en cis conocido como ABRE (Abscisic Acid Response Element) es importante para la transcripcin dependiente de ABA

Actualmente, ms de 20 elementos tipo ABRE funcionales han sido hallados en promotores de genes que responden al ABA. El elemento es definido como una secuencia de 8-10 pares de bases con una secuencia ACGT, que corresponde al ncleo o centro del factor transcripcional en cis conocido como caja G.

El ABRE no es el nico elemento que tiene un ncleo de ACGT; estos elementos ACGT son hallados en muchos promotores y median la induccin por luz, anaerobiosis, luz UV y cido cumrico. Por tanto, es evidente que, adems del ncleo ACGT, otros factores son importantes para determinar su especificidad.

Por tal razn, no todas las secuencias que tienen un ncleo de ACGT funcionan como ABRE, aunque estn en un promotor de un gen inducible por ABA. As, el elemento ABRE es una secuencia que contiene un ACGT y que est definido ms por su funcin, ya que las secuencias que lo flanquean no muestran consenso

Para los genes hva1 y hva22 se encontr que adems de los elementos que contienen ncleos de ACGT se requieren secuencias adicionales denominadas CE (coupling elements) para mediar la induccin de estos genes en respuesta a ABA.

A partir del anlisis de estos promotores, se determin el complejo mnimo de respuesta a ABA (ABRC) que consta de un coupling element y un ABRE capaces de conferir induccin por ABA a un promotor mnimo (Vasil et al., 1995). Las secuencias de los elementos CE son diferentes pero presentan un alto contenido de citocinas y guaninas. Los ABRC tambin pueden estar compuestos por dos cajas G, como sucede en el promotor del gen Em de trigo.

Entre los elementos que median la respuesta al ABA se han descrito elementos tipo Myb y Myc en el gen rd22 de A. thaliana. Puesto que estos elementos median la respuesta del gen rd22 a estrs hdrico y parecen regular la induccin de una manera dependiente de la sntesis de protenas, se ha sugerido que Myb y Myc pueden regular genes cuya induccin por ABA depende de la sntesis de protenas, lo cual no sucede en la regulacin va ABRE.

Otros elementos en cis involucrados en la induccin de la transcripcin por ABA incluyen el sph o ASCE que media la induccin del gen C1 en el endospermo de maz (Hattori et al., 1992), un elemento del promotor del gen cdet274-45 de C. plantagineum y el motivo TT del gen dc3 de zanahoria (Kim et al., 1997); este ltimo motivo es considerado como un ABRE imperfecto.

Aunque la expresin de muchos genes que se inducen durante estrs hdrico se incrementa considerablemente por aplicaciones de ABA, no hay una correlacin consistente entre los niveles de mRNA y los niveles de ABA en estas condiciones.

El gen de la kinasa RPK1, aislado de A. thaliana, es inducido tanto por deshidratacin como por tratamiento con ABA (Hong et al., 1997). Al examinar la respuesta a deshidratacin de este gen en las mutantes de A. thaliana deficientes en la sntesis de ABA (aba-1) y en las mutantes insensibles (abi-1, abi-2 y abi-3), se encontraron los mismos niveles de mRNA respecto a las plantas control.

Analizando el promotor del gen rd29A de A. thaliana (Yamaguchi-Shinozaki y Shinozaki, 1994) se identific un elemento en cis de 9 pares de bases, de respuesta a deshidratacin (DRE). Este elemento DRE es necesario para la induccin por estrs del gen rd29A, aun en ausencia de niveles elevados de ABA. La misma secuencia ha sido hallada en promotores de otros genes que responden a ABA y en genes regulados por estrs osmtico y baja temperatura en Arabidopsis

Estos genes se inducen por el respectivo estrs en las mutantes de A. thaliana aba o abi, lo cual sugiere que la expresin de estos genes bajo estrs no requiere ABA, aunque respondan a tratamientos con ABA. Estas observaciones prueban que la habilidad de un gen para responder a ABA, en condiciones ptimas de crecimiento, no implica necesariamente que la respuesta de este gen bajo estrs est regulada a travs de ABA.

Varios factores de transcripcin, que interactan con la secuencia DRE de 9 pares de bases, han sido detectados en extractos nucleares de plantas de Arabidopsis no tratadas y deshidratadas (Nakashima et al., 2000). La sobre-expresin de los genes rd29A y dreb1a de Arabidopsis en plantas de papa produjeron un incremento en la tolerancia al congelamiento

Dos dependientes de ABA (una dependiente de la sntesis de protenas y la otra independiente de la sntesis de protenas) y dos independientes de ABA, a travs del elementos tipo DRE/CTR Se ha demostrado que la va independiente para fro tambin est regulada por elementos tipo DRE/CTR que responden exclusivamente a fro.

Entre los mecanismos que explican la capacidad de las especies vegetales para tolerar el estrs por sales, se encuentran: el ajuste osmtico, la exclusin de iones a nivel radicular, la retencin de iones en las vacuolas, la eliminacin del exceso de sales a travs de glndulas o estructuras especializadas y la prdida de sales a travs de la cada de las hojas y prdida de los frutos.

El ajuste osmtico est generalmente ligado a la sntesis de solutos orgnicos, como la betana, colina, glicina-betana, prolina y sacarosa o a la acumulacin de iones inorgnicos. Estos llamados solutos compatibles tienen la funcin de estabilizar la estructura cuaternaria de las protenas y algunos sirven de aceptores de radicales libres.

Las plantas superiores pueden acumular L-prolina (Pro) en respuesta a diversos estrs edioambientales, como sequa y salinidad, bajas temperaturas o radiacin ultravioleta. La acumulacin de prolina estabiliza las membranas y los componentes subcelulares, incluyendo el complejo II de la cadena de transporte electrnico mitocondrial. Existen estudios que proponen a la prolina como aceptor final de los radicales libres y estabilizador del potencial redox por reaprovisionamiento de la provisin de NADP+. Adems, la prolina induce la expresin de genes de respuesta a estrs salino que tienen elementos de respuesta a prolina (PRE, ACTCAT) en sus promotores

En plantas, la prolina es sintetizada a partir del glutamato o la ornitina. La primera es considerada la va predominante en el estrs salino, ya que en estas condiciones disminuyen las actividades de la alanina y aspartato aminotransferasas, acumulndose glutamato. En esta va, la biosntesis de la prolina comienza con la fosforilacin y reduccin del glutamato a glutamil-5-semialdehdo (G5SA) por la enzima bifuncional D1-pirrolina-5-carboxilato sintasa (P5CS). G5SA es convertido a prolina a partir del pirrolina-5-carboxilato (P5C) por la D1-pirrolinacarboxilato reductasa (P5CR). La actividad a-glutamil quinasa de P5CS representa el paso limitante de la velocidad de reaccin de esta va y es sensible a retroinhibicin por Prolina

En Arabidopsis thaliana, la sequa y el estrs salino activan diferencialmente la expresin de dos genes de P5CS: AtP5CS1 (At2g39800) y AtP5CS2 (At3g55610). AtP5CS1 es responsable de la acumulacin de prolina durante el estrs salino y la sequa. La expresin de AtP5CS1 es activada por una va de traduccin de seales dependiente de cido abscsico (ABA) y modulada por la luz y los brasinoesteroides. La transcripcin de AtP5CS2 es ligeramente elevada por el estrs salino e inducida por bajas temperaturas a travs del factor de transcripcin CBF3. El catabolismo de la Pro es controlado por la ProDH (At3g30775), cuya transcripcin es activada por incrementos en los niveles de prolina y reprimida en condiciones de estrs osmtico.

La acumulacin de prolina ha sido correlacionada con el grado de deterioro inducido por el estrs. Por otro lado, la expresin de P5CS fue fuertemente inducida por el estrs salino. Esto sugiere que P5CS en la biosntesis de la prolina juega un papel protector en las condiciones de estrs, quizs controlando el potencial redox y estimulando la va de las pentosas fosfato para la regeneracin del NADP+. Algunos sugirieron que la acumulacin de prolina inducida por el estrs salino puede ser causada por la expresin de P5CS. Por otra parte, el arroz transgnico que sobreexpresa P5CS produce ms biomasa en condiciones de estrs salino, que el arroz no transformado y se ha discutido que el papel principal de P5CS es ms en la respuesta al estrs que en el metabolismo de la prolina.