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BACILLUS SUBTILIS

CARACTERSTICAS GENERALES DE BACILLUS SUBTILIS.


B. subtilis es un microorganismo autctono del suelo que a diferencia de Escherichia coli, prospera en la naturaleza, donde se encuentra ampliamente distribuido en muy diversos habitas y los cuales ha colonizado eficientemente debido a sus cualidades, entre las cuales podemos mencionar; el tener un programa gentico que le permite formar esporas, crecer en un amplio rango de temperaturas, la capacidad de moverse, mostrar velocidades de crecimiento altas, producir enzimas hidrolticas extracelulares y una variedad de antibiticos. Es una de las 40 especies reconocidas del gnero Bacillus, su identificacin es sencilla: forma esporas termoresistentes, es catalasa y Voges-Proskauer positivo, su crecimiento en agar anaerbico (agar nutritivo) es negativo y la hidrlisis del almidn es positiva. Se ha propuesto una subdivisin sobre la base de diferencias en la composicin qumica de la pared celular, su distribucin geogrfica y a la frecuencia de transformacin homo y heterogmica. B. subtilis subsp. subtilis subsp. nov. (NRRL NRS-744, ATCC 6051, cepa Marburg) y B. subtilis subsp. spizizenii subsp. nov. (NRRL B-23049), las cepas derivadas de la 168 y otras similares se agrupan junto con la especie tipo en el primer grupo y las derivadas de la cepa W23 y relacionadas en el segundo. La cepa 168 es ampliamente usada en la academia y en la industria para la obtencin de productos comerciales adems esta cepa es competente natural, es decir que en ciertas condiciones incorpora ADN forneo de manera natural, lo cual facilita la manipulacin gentica, las estrategias de biologa molecular con esta cepa y fue utilizada para secuenciar el genoma de B. Subtilis.

CONSIDERACIONES METABLICAS DE B. SUBTILIS.


Durante el crecimiento de B. Subtilis en glucosa, sin limitacin de oxgeno, se produce cido actico como subproducto. Esto sucede como respuesta a un exceso en el flujo de entrada de glucosa y por tanto a un incremento en el flujo glicoltico a cido pirvico, el cual la clula es incapaz de utilizar en su totalidad para biosntesis en el ciclo de Krebs. Este fenmeno ocurre cuando existe glucosa

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en el medio en concentraciones suficientes para controlar, por medio de la protena CcpA (protena de control catablica), regiones reguladoras CRE (elementos de respuesta catablicos) en los promotores de algunos genes entre los cuales estn ackA y pta (acetato cinasa y fosfotransacetilasa) de la va de produccin de cido actico e incluyendo tambin algunos genes de las rutas del catabolismo de la glucosa. [1]

Tipos de B. subtilis.
Bacillus es un gnero altamente presente en la rizsfera de diversos cultivos debido a su capacidad de formacin de esporas que le da una ventaja de supervivencia en la rizsfera vegetal [3]. B. subtilis es un microorganismo mesofilo y termfilo al mismo tiempo, ya que su tasa de crecimiento abarca temperaturas desde los 10 C hasta los 100 C. Otro aspecto importante es que tambin podemos encontrarlas a pHs cidos (4-5.5). La evaluacin de los niveles de crecimiento tanto a bajo pH y temperatura baja en el tiempo, revelan un patrn bifsico que se explicara por pequeos periodos de retraso del crecimiento en condiciones de estrs. Debido a las diferencias de adaptacin fisiolgica entre cepas de la misma especie se puede sugerir la existencia de una gran diversidad intraespecifica de los Bacillus aislados. Asimismo se encontraron correlaciones entre zonas de aislamientos con temperaturas de suelo ms fras y las cepas con mejores niveles de crecimiento a 20C. Se encontr que las bacterias del gnero Bacillus constituan un grupo importante. Este gnero de bacterias Gram positivas tienen la ventaja de poseer diversos mecanismos para asegurar su sobrevivencia ante condiciones fsicas

desfavorables, bajo estas condiciones Bacillus spp. Inicia una serie de respuestas; si estas respuestas fallan para poder mantenerse en estado vegetativo se induce la esporulacin. La habilidad de las especies de Bacillus de formar endosporas altamente resistentes les da una ventaja competitiva muy importante en un ambiente como el suelo. Esta capacidad de ser metablicamente muy diversos les permite tener una colonizacin exitosa en el ambiente rizosfrico. Entre algunos mecanismos promotores de crecimiento identificados en el gnero Bacillus, se

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encuentran la solubilizacin de fosfato, la sntesis de fitohormonas como el cido indol actico y la capacidad de controlar algunos hongos patgenos en la rizsfera.

B. SUBTILIS COMO MAPA GENTICO. [1]


Un estudio realizado por investigadores del Centro de Astrobiologa (CAB/CSICINTA) arroja luz sobre la funcin del ADN extracelular en la evolucin mediante transferencia gnica horizontal, es decir, entre microorganismos similares, en la bacteria Bacillus subtilis. El ADN extracelular (eDNA, por sus siglas en ingls) es material gentico libre que se encuentra en el ambiente donde habitan microorganismos, debido a la muerte celular de los mismos o bien mediante una liberacin especfica que pueden realizar determinados microorganismos. Entre sus posibles funciones se encuentran su uso como nutriente, la capacidad para ayudar en la cohesin de las clulas dentro de las comunidades microbianas y tambin pueden contribuir en la transferencia de material gentico entre la misma o diferentes especies.

ESTEQUIOMETRIA DE B. SUBTILIS.
Entre las etapas de mayor importancia en los procesos industriales se encuentran aquellas relacionada con la determinacin de trminos energticos, los que conllevan en su solucin la aplicacin de la primera ley de la termodinmica, es decir, el planteamiento y solucin de los balances de energa y el estudio de las limitaciones al intercambio energtico representado por el segundo principio, una de cuyas acepciones puede ser el balance de exerga. Tanto en una como en otra expresin se necesitan del clculo o estimacin de propiedades.

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Balance

de

exerga

La exerga se define como la capacidad especfica de trabajo de un flujo y se designa por: e = (h h0) T0 (s s0) Donde: h: s: T: Entalpa. Entropa. Temperatura.

Los

parmetros

representan

al

flujo

p0 y

T0 al

medio.

Este concepto es muy cmodo al analizar el grado de perfeccin termodinmica de cualquier aparato trmico. A un aparato trmico entra un agente de transformacin en condiciones p1 y T1 y sale en condiciones p2 y T2; dentro del aparato realiza un trabajo til. Si el proceso es reversible este trabajo til ser mximo: Wrev. mx. = (h1 h2) - T0 (s1 s2) = e1 e2 Si el proceso es irreversible, existe una prdida en la capacidad de trabajo: Wtil = W rev. mx. - W perdido La exerga se define como el trabajo mximo que puede obtenerse de la masa de una corriente al llevarla al equilibrio (fsico: presin y temperatura, y qumico: composicin) con el ambiente y puede ser calculada considerando la suma de los efectos fsicos y qumicos; expone, adems, cmo el mtodo de anlisis energtico permite considerar de manera integral los aspectos energticos, econmicos y ecolgicos al analizar procesos industriales. Existen varios mtodos para evaluar la exerga qumica apoyado en la energa libre de formacin de los compuestos involucrados, los grupos funcionales, los electrones disponibles o el poder calorfico.

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Como aproximacin puede tomarse como exerga qumica el poder calorfico del compuesto en cuestin, situacin perfectamente aplicable al caso de la biomasa. Debe tenerse presente que cuando no existen procesos de reaccin puede asumirse la exerga fsica como la exerga tota. Cuando ocurren reacciones qumicas, generalmente el valor de toda la exerga puede ser asumido como el de la qumica. Todas estas sugerencias implican la asignacin de un valor prcticamente utilitario a la exerga especfica en una situacin determinada, como lo es el caso del bagazo en el central azucarero: a la salida del molino se puede considerar slo la exerga fsica, pero cuando se usa de combustible en el horno, se asume el valor del calor de combustin (exerga qumica).

El rendimiento exergtico (e) mide el grado de perfeccin termodinmica de un sistema y se define como la relacin entre el beneficio y el gasto exergtico:

Aparatos que producen trabajo til:

Aparatos que no producen trabajo til: En cualquier caso, si los procesos son reversibles: e = 1. Este lmite superior significa que a diferencia del anlisis basado en el rendimiento energtico, existe un valor propio para la comparacin del rendimiento energtico al cual se debe aspirar, y este es 100 %.

CINTICA DE CRECIMIENTO.
El oxgeno es el aceptor de electrones mas utilizado en la naturaleza, sin embargo y debido a su poca solubilidad en medios acuosos se agota fcilmente y el ambiente tiende a volverse anaerobio. Una vez que el oxgeno se ha consumido,

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una serie de procesos de oxidacin anaerbica sigue en secuencia. Dicha secuencia est influenciada por la presencia de diversos aceptores finales de electrones. Despus de la desaparicin del oxgeno, sigue la reduccin de nitratos, la reduccin de sulfatos y la formacin de metano. [2] Se define como fermentacin al proceso que se da cuando el sustrato es catabolizado y algn intermediario de la ruta sirve a su vez como aceptor del poder reductor producido, dando como producto final una nueva molcula y energa en forma de ATP producido por fosforilacin a nivel de sustrato. Las enterobacterias, levaduras, bacterias lcticas y muchos otros microorganismos pueden fermentar azcares como la glucosa o la lactosa, incluso parcialmente en presencia de oxgeno. Los productos acumulados durante a fermentacin cido-mixta con

enterobacterias son: etanol, cido actico, cido lctico, cido frmico, cido succnico, CO e hidrgeno. Estos productos se generan a partir de varias rutas
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metablicas que tienen como precursor al cido pirvico (fig. 1.1). La va del butanodiol se presenta en microorganismos de los gneros Klesiella, Serratia y Bacillus, entre otros. Se lleva a cabo en tres reacciones a partir del cido pirvico, teniendo como intermediarios al acetolactato y la acetoina. Los diversos productos de estas vas forzosamente deben lograr un balance redox. Est reportado que cuando hay limitacin de oxgeno, B. subtilis lleva a cabo la fermentacin cido mixta y formacin de butanodiol a partir de cido pirvico, el cual es convertido por la piruvato deshidrogenasa en acetilCoA. El crecimiento de B. subtilis cuando fermenta glucosa es muy poco, y se ha encontrado que se incrementa la capacidad fermentativa y el crecimiento cuando se adicionan simultneamente piruvato y glucosa, obtenindose etanol,

butanodiol, acetoina, lactato y acetato.

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Fig. 1.1.- fermentacin acido mixta.

CONSUMO DE SUSTRATO

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Estos incluyen fuentes de carbono orgnico, nitrgeno, fsforo, azufre e iones metlicos incluyendo el hierro. Las bacterias secretan molculas pequeas que unen el hierro (siderforos, por ejemplo; enterobactina, micobactina). Los

siderforos (con el hierro unido) son entonces internalizados va receptores de mebrana por la clula bacteriana. El husped humano tambin tiene protenas transportadoras de hierro (por ejemplo: la transferrina). Por lo tanto las bacterias que compiten con el husped por el hierro de forma ineficiente no son patgenos exitosos. El desarrollo de nuevas tecnologas para obtener productos qumicos de gran volumen estn basadas en el uso de sustratos abundantes y econmicos, tales como los residuos agroindustriales, los cuales contienen principalmente mezclas de xilosa, glucosa y celobiosa. Bacillus subtilis puede utilizarse para estos fines por su capacidad de metabolizar una amplia variedad de azcares. Sin embargo sus caractersticas metablicas para usar xilosa y celobiosa en aerobiosis y para fermentar glucosa, xilosa y celobiosa no han sido estudiadas. Teniendo en cuenta que La aplicacin de la estequiometra requiere conocer los rendimientos. Estos se definen como la relacin entre el producto obtenido y el sustrato consumido (usualmente la fuente de carbono y energa). Por ejemplo el rendimiento celular se define como:
Y x
s

dX dS

X y S representan la concentracin de biomasa y sustrato respectivamente. Por lo que al reordenar esta ecuacin y derivando con respecto al tiempo tenemos:
dS 1 dX dt Y x dt
s

tambien,

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rs

1 rx Yx s

Usando rx X en la ecuacin anterior tenemos rs

Yx s

X .

La cual puede ser expresada tambin como rs qs X donde qs es la velocidad especfica de consumo de sustrato. Al comparar las dos ecuaciones anteriores tenemos:

qs

Yx s

es evidente que el crecimiento puede ser caracterizado mediante tres parmetros: KS, um e Yx/s. Estos dependen tanto del microorganismo como del medio de cultivo empleado, por lo que su evaluacin debe realizarse para cada caso en particular.

5.3 CONSUMO DE SUSTRATO PARA

MANTENIMIENTO
Los microorganismos requieren energa para su mantenimiento y para procesos tales como la motalidad. La ecuacin rs

1 rx establece que el consumo de sustrato slo es posible Yx s

cuando hay crecimiento, sin embargo cuando el sustrato considerado es la fuente de carbono y energa, puede darse el caso en que el crecimiento es nulo (r x = 0) y el consumo de sustrato no. A este consumo de sustrato que no redunda en aumento de biomasa se lo asocia con el mantenimiento de funciones vitales tales como recambio de material celular, mantenimiento de gradientes de concentracin y movilidad.

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La expresin cinetica del mantenimiento es:


rm km X

Dnde: km es el coeficiente de mantenimiento. El mantenimiento se puede expresar cuantitativamente como la masa de sustrato oxidado por unidad de masa celular y por unidad de tiempo necesario para proveer de energa al proceso. Que esta descrita por:

rm

k ,m X Ym s

Donde: km e el coeficiente de mantenimiento especifico (t-1) y Ym/s es la produccin de energa de mantenimiento por unidad de sustrato consumido por el proceso.

5.3

REQUERIMIENTO

DE

OXIGENO
Los aerobios obligados deben ser capaces de crecer en presencia de oxgeno y no llevan a cabo

fermentacin. Los anaerobios obligados no llevan a cabo fosforilacin oxidativa. Ms an, ellos mueren en presencia de oxgeno ya que carecen de ciertas enzimas como la catalasa [la cual rompe el enlace del perxido de hidrgeno, H2O2, a agua y oxgeno], la peroxidasa [por la cual NADH+ H2O2 se convierten a NAD y O2] y la super-xido dismutasa [por la cual el super-xido, O2; es convertido a H2O2]. Estas enzimas de-toxifican los radicales libres producidos a partir del perxido de hidrgeno y del oxgeno producidos durante el metabolismo aerobio (en presencia

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de oxgeno). Los anaerbios aerotolerantes son bacterias que respiran anaerbicamente, pero pueden sobrevivir en presencia de oxgeno. Los anaerobios facultativos pueden llevar cabo tanto la fermentacin como la respiracin aerbica. En presencia de oxgeno, la respiracin anaerbica de estos organismos generalmente se apaga y entonces respiran aerbicamente. Las bacterias micro-aeroflicas crecen bien a bajas concentraciones de oxgeno, pero no resisten altas concentraciones. 5.4

EFECTO

DEL

PH

LA

TEMPERATURA

SOBRE

EL

CRECIMIENTO
Los microorganismos pueden crecer en una variada gama de pH que va desde pH = 2 para los acidfilos hasta pH = 11 para alcalfilos. En general los microorganismos que toleran pH cidos no toleran pH alcalinos y viceversa. Independientemente del pH que pueda soportar un microorganismo, es importante conocer cul es el pH ptimo para el crecimiento. En la fig.1 est representada en forma general la variacin de um con el pH para hongos y bacterias. De la misma surge claramente que en general los hongos tienen un pH ptimo cercano a 5 mientras que para bacterias se da alrededor de pH = 7; adems debido a la forma "achatada" de las curvas, variaciones de 0.5 unidades de pH alrededor del ptimo no tienen mayor influencia. Durante el crecimiento los microorganismos modifican el pH del medio de cultivo, normalmente hacindolo disminuir; por tal motivo es frecuente incluir en el medio substancias que acten como tampn (buffer) a fin de evitar que el pH se aleje del ptimo. El efecto de la temperatura sobre el crecimiento es complejo. Por un lado cada reaccin qumica individual, de todas las que conforman el metabolismo, es afectada por la temperatura, por lo que un incremento de sta resulta en una mayor velocidad de reaccin. Esto se traduce en un aumento de pm con la temperatura (ver Fig.2).

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En el caso del B. Subtilis tiene un rango de ph de 4,9 - 9,3 y crecen a temperaturas de 10 - 48, pero la temperatura ptima es entre 28 - 35.

BIBLIOGRAFIAS 1. http://www.agenciasinc.es/Noticias/Descubren-como-la-bacteria-Bacillussubtilis-libera-al-medio-copias-de-su-genoma [1] 2. Espinoza J. J, 2005, Caracterizacin del proceso de crecimiento de Bacillus subtilis bajo condiciones anaerobias, tesis de doctorado en Biotecnologa, UNAM, Cuernavaca Morelos. [2] 3. Calvo P.- Ziga D., Caracterizacin fisiolgica de cepas de Bacillus spp. Aisladas de la rizosfera de papa (Solanum tuberosum), Universidad Nacional Agracia La Molina, Lima-Per, 2010. [3] 4. Dr. Castellanos J. Ing. Espinosa R., Estimacin de las propiedades relacionadas con el comportamiento energtico de la biomasa, Facultad de Qumica y Farmacia - Universidad Central Marta Abreu de Las Villas, Santa Clara- Cuba. [4] 5. http://pathmicro.med.sc.edu/spanish/chapter3.htm. Fox. A (2009).

Bacteriologia-capitulo3: nutricin, crecimiento y metabolismo de la energa; escuela de la medicina, universidad carolina del sur. Estados Unidos de Amrica. Carolina.

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6. El problema de Biofouling en intercambiadores de calor-condensadores refrigerados pro agua de mar. Emilio Egua Lpez. Universidad de Cantabria. 1998 7. Energetics and kinetics in Biotechnology. J.A.Roels. Elsevier Biomedical Press, 1983. 8. Fermentation kinetics and modeling. C.G. Sinclair and B. Kristiansen Ed.: J.D. Bu'Lock. Open University Press, 1987. 9. Breznak JA, RN Costilow 1994. Physicochemical factors in growth Cap.6 pag. 137-154. En Methods for General and Molecular Bacteriology. Ed. P Gerhardt. American Society of Microbiology, Washington, EUA. 10. Zehnder AJB, W Stumm 1988. Geochemistry and biogeochemistry of anaerobic habitats cap. 1 pag. 1-38 ed. AJB Zehnder, John Wiley and Sons. New York, EUA.

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