MICROBIOLOGÍA Y CONSERVACIÓN
EN LA INDUSTRIA CÁRNICA
Javier Garcia Pina
Chemital S.A.U.
SEPTIEMBRE 2015
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Sobre la Microbiota láctica alterante de productos
cárnicos cocidos (1)
La microbiota láctica es la causante de la mayoría de los casos de la
alteración de productos cárnicos cocidos: jamón cocido, salchichas tipo
frankfurt, mortadelas,…
Consecuencia del desarrollo Síntomas de la alteración en el producto cárnico
microbiota láctica cocido
Formación de gas (CO2) Pérdidas de vacio, hinchazón de envases,…
Disminución de la capacidad de retención de agua en el
Descenso del pH producto produciéndose sinéresis: lechosidad más o
menos turbia.
Producción de ácidos Acidez organoléptica . Olores y sabores desagradables
(Principalmente ác. acético)
Formación de H2O2, que oxida la Decoloraciones, coloraciones verde-marrón.
nitrosomioglobina
Producción de dextrano Limosidad superficial.
(Por Leuconostoc)
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Morfología de bacteria Gram-positiva
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PARED CELULAR DE GRAM-POSITIVA Y GRAM-NEGATIVA
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MEMBRANA PLASMÁTICA
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Descripción matemática del crecimiento
El crecimiento de los microorganismos, en muchos casos, es por
división binaria. Se distinguen cuatro fases:
- fase de latencia
- fase exponencial
- fase estacionaria
- fase de muerte
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Descripción matemática del crecimiento
N0 = población inicial
Nt = N0 × 2n Nt = población al tiempo t
n = nº de generaciones en el tiempo t
log Nt = log N0 + n × log 2
n log Nt - log N0
n= log Nt - log N0 K= =
t 0,3010 t
0,3010
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Ecuación de GOMPERTZ
-{B(t-M)}
Lt = A + Ce -e
Donde:
• L(t): log del número de bacterias al tiempo t.
• A: log del número inicial de bacterias.
• C: log del aumento del número de bacterias cuando el cultivo llega a la fase
estacionaria.
• M: tiempo (h) en el que el cultivo llega a su máxima velocidad de
crecimiento.
• B: velocidad de crecimiento en el tiempo M.
• T: tiempo
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Fig.2. Curva de crecimiento de Buchanan y Phillips para Listeria monocytogenes cultivada
aeróbicamente en caldo de fosfato triptona a 19ºC. La curva de crecimiento ha sido generada utilizando
el mejor ajuste de la ecuación de Gompertz. Las estrellas indican los tiempos asociados a los valores
máximos y mínimos de la velocidad de crecimiento. A, C, B y M son parámetros de Gompertz. EGR=
velocidad de crecimiento, GT= tiempo de generación, LPD= duración de la fase lag y MPD= máxima
densidad de población.
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FASE DE LATENCIA
La LPD puede calcularse usando la relación:
LPD= M-(1/B)
Que utiliza la tangente en el momento de la máxima velocidad de crecimiento,
extrapolándola hacia la asíntota más baja.
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Clasificación de los microorganismos de importancia en los
alimentos según sus temperaturas óptimas aproximadas (ºC)
Tipo Temperatura Temperatura Temperatura
de organismo mínima* óptima máxima
Psicrófilos -15 10-15 18-20
Psicrótrofos -5 20-30 35-40
Mesófilos +5-10 30-37 c.45
Termotrofo 10 42-46 c.50
Termófilos 25-45 50-80 60-85
* Por razones prácticas definidas como la temperatura a la que el tiempo de generación o duplicación es mayor
de 103 minutos.
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Valores de aw para los diferentes tipos de alimentos
Alimentos aw
Carne cruda 0,97
Jamón cocido 0,97
Salchichas cocidas (tipo frankfurt) 0,97
Frutas 0,97
Pan blanco 0,96
Mermelada 0,86
Nueces 0,80
Miel 0,75
Cereales de desayuno 0,35
Galletas 0,20
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Valores mínimos aproximados de aw necesarios para el
crecimiento de microorganismos de importancia alimenticia.
Organismos aw mínima
Grupos Bacterias productoras de alteraciones 0,91
Levaduras productoras de alteraciones 0,88
Mohos productores de alteraciones 0,80
Bacterias halofílicas 0,75
Mohos xerofílicos 0,65
Levaduras osmofílicas 0,60
Organismos Achromobacter 0,96
específicos
Aerobacter aerogenes 0,95
Bacillus subtilis 0,95
Clostridium botulinum 0,95
Escherichia coli 0,96
Pseudomonas 0,97
Staphylococcus aureus 0,86
Saccharomyces rouxii 0,62
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Límite inferior del pH para el desarrollo.
5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.0
─Cl. botulinum────────────
─ Cl. perfringens──────────
─ Staph. aureus─────────
───Listeria monocytogenes──
────Bacillus sp ───────────────────
───── E. coli ────────────────────
────── Salmonellae ───────────────
────── B coagulans───────────────────
─────── Bacterias del acido láctico─────────
───────── Levaduras y mohos ─────────────────────────
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ORGANISMOS Tª Rango Mín. aW Máx. Sal Requerimientos O2 Productos cárnicos asociados
PATÓGENOS requerida pH %
BACTERIAS GRAM - POSITIVAS
Bacillus cereus 4-49; 30 4.3-9.3 0.91 10.0 Aeróbico facultativo Carnes, sopas y salsas
Clostridium botulinum Aeróbico Carnes, pollo y productos de la mar
GRUPO I 3-48; 30 4.6-9.0 0.94 5.0
GRUPO II 10-48; 37 5.0-9.0 0.97 10.0 Anaeróbico a
aerotolerante
Clostridium perfringens 12-50;43-45 5.0-9.0 0.95 6.0 Facultativo Carne cruda, bajo cocida, pollo y jugo
de carne asada
Listeria monocytogenes 0-45;30 4.4-9.0 0.92 10.0 Facultativo Carnes delicatessen, frankfurts y
productos de la mar
Staphylococcus aureus 7-48;37 4.0-10.0 0.86 10-18 Facultativo Carnes delicatessen y ensaladas de
carne
GRAM-NEGATIVAS
Aeromonas 0-45;28 4.5 min 6 Facultativo Carne, pollo, productos de la mar y
agua contaminada de los alimentos
Campylobacter 32-45;42-45 4.9-9.0 0.98 3.5 Microaerofílico Pescado fresco
Enterohemorrhagic 7-45;35-40 4.4-10 0.95 6-8 Facultativo Ternera fresca
Escherichia coli 4.0-9.0
Salmonella 5-47;37 4.6-9.0 0.93-0.95 4-8 Facultativo Carne fresca
Vibrio 5-43;30-37 4.5-11.0 0.94-0.96 0.5-8.7 Facultativo Productos de la mar frescos, bajo cocidos y
agua contaminada de los alimentos
Yersinia 0-44;32-34 4.6-9.0 0.95 5-8 Facultativo Cerdo crudo, ternera y tripas de cerdo
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ORGANISMOS Tª requerida Rango Mín. aW Máx. Sal % Requerimientos O2 Signos de deterioro Alimento
DE pH
DETERIORO
BACTERIAS GRAM-POSITIVAS
Coryneformes Mesófilo 5.0-9.0 0.94 8.0 Facultativo Limo y agrio B;E
psicrotrófico
Lactobacillus Psicrotrófico 2.8-6.8 0.90 6.5 Microaerofílico a Limo, Limo filamentoso, C;E;F
facultativo agrio, coloración verdosa y
olor
Enterococcus Mesófilo 4.3-9.0 0.90 10.0 Facultativo Agrio, coloración verdosa Y B;G;F
amarilla , limo y deterioro
Pediococcus Psicrotrófico
Carnobacterium Psicrotrófico (6.8-9.0) (26.4)
Leuconostoc Psicrotrófico 5.5 mín. 0.9 14.0 Facultativo Limo, Limo filamentoso, B;G;F
gas, coloración verdosa y
olor
Weissella 4.8 Olor- limo-coloración
verdosa
Staphylococcus Mesófilo 4.0-10.0 0.86 10.0-18.0 Facultativo agrio B;C;F
Micrococcus
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ORGANISMOS Tª requerida Rango Mín. aW Máx. Sal Requerimientos O2 Signos de deterioro Alimento
DE DETERIORO pH %
BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS
Aeronomas Mesófilo 4.5 min 6 Facultativo Producción gas I
psicrotrófico
Acinetobacter Mesófilo 3.3 min 0.96 10.0-25.0 Aeróbico a facultativo Olor
Moraxella Psicrotrófico Facultativo
Pyschrobacter Psicrotrófico
Enterobacterias Mesófilo 4.4-9.0 0.94 4.0-8.0 Facultativo Producción gas-olor- A
deterioro
Pseudomonas Psicrotrófico 5.0-8.0 0.95 4.8 Anaerobio obligado Olor- limo-coloración verdosa A,D
Shewanella
LEVADURAS
Candida Mesófilo 1.6-4.5 0.88 12.0 Facultativo Olor
Saccharomyces Psicrotrófico
Torulopsis
Zygosacchromyces 0.62
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ORGANISMOS DE Tª requerida Rango Mín. aW Máx. Sal Requerimientos O2 Signos de deterioro Alimento
DETERIORO pH %
HONGOS
Aspergillus Psicrotrófico 2.0-8.5 0.61-0.80 6 Aerobio estricto Coloraciones: verde, negra y
azul
Puntos blancos
Penicillium
Rhizopus
ALIMENTOS
A: Alimentos ricos en proteínas
B: Carnes curadas y salchichas
C: Carnes fermentadas y salchichas
D: Refrigerados
E: Condiciones de vacío poco O2
F: Concentración elevada de sal
G: Concentración baja de sal
H: Bajo pH
I: Pescados y productos de mar
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Ejemplo de “obstáculos”
La UE en 2005 publicó, en el Reglamento sobre criterios
microbiológicos, que un alimento no permite el crecimiento de Listeria
monocytogenes si tiene las siguientes características intrínsecas:
• pH es igual o menor a 4,4
• aW es menor o igual a 0,92
• pH es menor o igual a 5,0 con una aW menor o igual a 0,94
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, cuyo
bacteriocinas
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Utilización combinada de conservantes
No se acostumbra a utilizar un solo conservante, siendo lo usual
emplear una mezcla de ellos. Con ello se pretende:
Ampliar el espectro de acción
Conseguir efectos sinérgicos
Reducir la concentración de conservantes individuales
También es frecuente utilizarlos conjuntamente con métodos físicos
de conservación (calor, irradiación, refrigeración, altas
presiones...)
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Conservantes en la Industria Cárnica
Ácidos Orgánicos y sus sales
Ácidos Sórbico y Sorbatos E-200, E-202, E-203
Parabenos E-214 a E-219
Nitrato y Nitrito E249, E-250, E-251, E-252
Dióxido de Azufre y Sulfitos E-220 a E-228
Nisina E-234
Pimaricina o Natamicina E-235
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¿Dónde actúan los conservantes?
DNA
SÍNTESIS PROTÉICA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
MEMBRANA CELULAR
PARED CELULAR
EL MECANISMO DE TRANSPORTE DE NUTRIENTES
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Nitrato y Nitrito
NITRATO
Su acción antimicrobiana se dirige exclusivamente hacia las
bacterias anaeróbicas y se debe fundamentalmente al nitrito que se
genera.
El nitrato es convertido en nitrito por acción de las bacterias.
NITRITO
La acción antimicrobiana se debe al ácido nitroso, y a los ácidos de
nitrógeno producidos a partir del mismo.
Su efecto aumenta conforme baja el pH.
Inhibe la acción de enzimas bacterianas, como las del sistema de
la deshidrogenasa y de la utilización de la glucosa.
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Nitrato y Nitrito
Vía metabólica en Clostridium. Tanto la piruvato-ferrodoxina
oxidoreductasa como la ferrodoxina, reaccionan con el óxido nítrico.
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Ácidos Orgánicos
El pH y el contenido en ácidos orgánicos de un alimento son dos factores
que determinan, no sólo los microorganismos que pueden sobrevivir
durante el período de almacenamiento sino también su capacidad para
alterar dicho alimento.
Propiedades de los ácidos orgánicos y ésteres:
El valor pKa
El coeficiente de reparto
La solubilidad
La volatilidad
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Mecanismos de acción antimicrobiana
Acidificación del medio externo
Acidificación del citoplasma
Acción sobre los lípidos y proteínas de las membranas
Quelación de metales
Acción sobre el metabolismo
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Ácidos Orgánicos. Mecanismo de acción vs
longitud de la cadena de carbonos
Longitud de la Depen Solubilidad Acción por Agotamiento Sobre la Inhibición Dosis de uso
cadena dencia en lípidos disminución energético estructura de del efectivo a
del pH del pH la membrana transporte pH=7.0
celular de nutrientes
Cadena corta 3%
1-4 Carbonos ++ - ++ - - -
Cadena media 0.5-3%
5-7 Carbonos + + + + ± +
Cadena larga 0.5%
7 Carbonos - ++ - ++ ++ ++
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Acidificación del citoplasma. La teoría clásica del ácido débil
Anión Ácido Ácido
Anión + Protón
pH 4,75 pH 6,50
En cuanto a la liberación de protones esta dependerá de:
a) Del valor pKa del ácido
b) De la concentración
c) Del pH del medio
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Espectro antimicrobiano en medios de cultivo de los
ácidos orgánicos utilizados en los alimentos
Concentraciones de ácido no disociado precisas para a inhibición
del crecimiento de la mayor parte de cepas
Ácido Orgánico Levaduras Mohos Enterobacteriaceae Micrococcaceae Bacillaceae
Ácido acético 0,5 0,1 0,05 0,05 0,1
Ácido benzoico 0,05 0,1 0,01 0,01 0,02
Ácido cítrico >0,005d >0,005 >0,005 >0,001d >0,005
Ácido láctico >0,01 >0,02 >0,01 >0,01 >0,03
Metil paraben 0,1 0,1 0,2 0,4 0,2
Etil paraben 0,1 0,05 0,1 0,1 0,1
De Chichester y Tanner, 1972 y de datos no publicados de S. Warren y B. Freame.
Valores expresados como porcentaje en la solución.
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Proporción de ácido no disociado a diferentes
valor de pH
Valores de pH
Ácidos Orgánicos 3 4 5 6 7
Ácido acético 98,5 84,5 34,9 5,1 0,54
Ácido benzoico 93,5 59,3 12,8 1,44 0,144
Ácido cítrico 53,0 18,9 0,41 0,006 <0,001
Ácido láctico 86,6 39,2 6,05 0,64 0,064
Metil, Etil y propil parabensb >99,99 99,99 99,96 99,66 96,72
Valores expresados en %
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Bacteriocinas
Nisina
Proteína de 34 aminoácidos producido por Lactococcus lactis.
Actúa sobre la membrana citoplasmática.
Actúa sobre bacterias gram-positivas, bacterias lácticas, Bacillus,
Clostridium y Listeria.
Pediocina, Sakacina y Bisina
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Bacteriocinas
Nisina
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Natamicina
Antibiótico producido por Streptomyces natalensis.
Activo frente a hongos levaduras, pero no sobre bacterias y virus.
Inhibe el desarrollo de hongos y levaduras en unos niveles de
1-10 ppm.
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Extractos Botánicos
Los ingredientes botánicos antimicrobianos, con potencial para ser utilizados
como bioconservadores pueden agruparse en:
Compuestos fenólicos Quinonas Flavonas
Taninos Cumarinas Flavonoides
Alcaloides Terpenoides Flavonoles
…
La fracción aceite esencial de ingredientes botánicos frecuentemente es la fracción
química más inhibidora del crecimiento y supervivencia de microorganismos.
Entre los extractos botánicos que han demostrado tener actividad antimicrobiana
destacan los de:
Ajo Clavo Albahaca Cardamomo
Comino negro Cacao Tomillo negro Café
Canela Cilantro Arándanos Pimienta negra
Nuez moscada Limón Palo Santo …
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CONSERVANTES CHEMITAL
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Preparación de cultivo microorganismos alterantes
o patógenos: eg Listeria monocytogenes
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Laboratorio de Bioseguridad III
Evaluación Con requerimientos para trabajar con
Análisis y evaluación de microorganismos patógenos de
muestras durate 90 días bioseguridad III
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INBAC
Productos con acción bacteriostática de uso universal en
alimentos, a base de ácidos orgánicos y mono y diglicéridos de
ácidos grasos.
Actúan sobre la membrana citoplasmática, desorganizando su
estructura y alterando su funcionalidad.
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INBAC-ADL
INBAC-MDA
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1,00E+06
1,00E+05
1,00E+04
Aerobic psychrotrophs (Control)
Lactic Acid Bacterias (Control)
1,00E+03 Lactic Acid Bacterias (ADL)
0 7
Aerobic psychrotrophs (ADL)
44 58
Days 77
Efectividad del INBAC ADL sobre aerobios psicrótrofos y bacterias acidolácticas
en jamón cocido loncheado, XXXX ppm
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Evolución de las cepas de Listeria monocytogenes sobre mortadela
formulada con distintas concentraciones de Inbac MDA.
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Resultado del challenge test realizado a las tres formulaciones de
mortadela con distinta concentración de Inbac MDA con bacterias
acidolácticas (Leuconostoc mesenteroides, Lactobacillus brevis y
Lactobacillus plantarum).
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EXTRACTO DE ESPECIAS 65/S
EXTRACTO DE ESPECIAS 65/S es un conservante basado en aceites
esenciales de ajo, canela, clavo y romero para ser usado en productos
cocidos de gama alta.
Es efectivo frente a bacterias gram-positivas y acidolácticas en especial.
Prolonga la vida útil del producto cárnico sin cambiar las propiedades
organolépticas originales.
El extracto de especias se etiqueta como aroma natural.
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Eficacia del EE65/S frente a bacterias acidolácticas a distintas concentraciones
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SPICEBAC
SPICEBAC es un aroma natural basado en aceites esenciales y extracto
de plantas.
Es particularmente efectivo frente a:
Bacterias acidolácticas: Lactobacillus, Wisella, Leuconostoc, etc…
Listeria monocytogenes
Bacillus y otras bacterias esporuladas
Flora gram-negativa: Enterobacteriaceae, Pseudomonas, etc…
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Efectividad del SPICEBAC SP en jamón cocido (80% inyección) a 3000 ppm.
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MICROBIOLOGÍA PREDICTIVA
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PASOS EN LA CONSTRUCCIÓN DE MODELOS
EN MICROBIOLOGÍA PREDICTIVA
• Obtención de datos experimentales:
- Diseño experimental: selección de las combinaciones que
serán analizadas
- Selección del método de análisis: cuantitativo/ cualitativo;
medio selectivo/ no selectivo.
- Obtención de curvas de crecimiento/ inactivación.
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• Obtención de modelos primarios:
- Selección del modelo para el ajuste de datos
experimentales primarios.
- Obtención del parámetro respuesta.
• Obtención de modelos secundarios:
- Obtención de la superficie respuesta que
relaciona los parámetros del modelo con la
respuesta microbiana.
• Obtención de modelos terciarios:
- Software que permite al usuario obtener
predicciones a partir de las condiciones
experimentales elegidas.
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Obtención de los modelos primarios:
Ajuste matemático según el modelo DM-fit (Baranyi):
9 nitritos0:ADL0-5ºC
Log(ufc/g)
5
4 Valores
3 Ajuste
0
0 10 20 30
tiempo(días)
Parámetros obtenidos:
µ : velocidad máxima (fase exponencial)
Fase latencia
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Obtención de modelos secundarios: velocidad
Surperficie respuesta de Listeria monocytogenes a diferentes niveles de
ADL-Inbac y temperaturas
Parámetro Coeficientes
1 Constante (K) 0.4511
0.9 Temperatura (a) -0.037214
0.8 Inbac-ADL (b) -0.0001762
0.7 Nitritos (c) 0.0010527
log (cfu/g)/dias
0.6 TxADL (d) -2.22E-05
0.5
TxNitritos (e) -6.06E-06
0.4
ADLxNitritos (f) -1.63E-07
0.3
T2 (g) 0.0092009
0.2
ADL2 (h) 4.07E-08
0.1
0 9 Nitritos2 (i) -3.57E-06
0 7
00 00
10 00 00
temperatura
15 20 00 00
5
25 30 00
35 40 00 00
45 50
Inbac -ADL (ppm)
Log (ufc/g)/d= K+a x T+b x ADL+c x Nit+d x T x ADL+e xT x Nit+f x ADL x Nit+g x T2+h x ADL2+ ix Nitritos2
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Obtención de modelos secundarios: fase de latencia
Surperficie respuesta de Listeria monocytogenes a diferentes niveles de ADL-
Inbac y temperaturas
Parámetro Coeficientes
Constante (K) 8
35
Temperatura (a) -0.77432
Inbac-ADL (b) 0.0051022
30
Nitritos (c) -0.023283
25
TxADL (d) 1.75E-04
Fase latencia(d)
20 TxNitritos (e) -0.0014171
ADLxNitritos (f) -1.10E-06
15
T2 (g) -0.02999
10 ADL2 (h) -1.26E-07
4500
3500
Nitritos2 (i) 3.73E-04
5
2500 Inbac-ADL
0 1500
5 6 7 8 0
9 10
Temperatura
Fase lat (d) = K+a x T+b x ADL+c x Nit+d x T x ADL+e xT x Nit+f x ADL x Nit+g x T2+h x ADL2+ ix Nitritos2
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PÁGINAS WEB
• http://browser.combase.cc
• http: //mrv.nfri.affrc.go.jp
• http://www.hibro-uco.es
• http://3.test.dezone.dk
• DTU. Food spoilage and safety predictor (FSSP)
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Obtención del modelo terciario:
Construido en el programa Excel.
PARAMETROS RANGO DATOS
TEMPERATURA 5-10°C 5
INBAC 0-5000ppm 3000
NITRITOS 0-150ppm 0
CONCENTRACIÓN INICIAL 1-3 (Log ufc/g) 1
TIEMPO CONSERVACIÓN 0-30 dias 30
CONCENTRACIÓN FINAL Log (ufc/g) 3,848323588
RATE 2,93E-01 5 3000 0
LAG 2,03E+01 10 1000 150
TEMP INBAC NIT
Listeria monocytogenes (log ufc/g)
9
8 1
Log(ufc/g)0 2,8
7
6 30
tiempo (días)
5 1 Log(ufc/g)
Log(ufc/g)f 4 5
3
2
TEMP. MIN1 5
TEMP.MAX0 10
INBAC MIN 0 5 10 15 0 20 25 30 35
INBAC MAX 5000 (dias)
Tiempo
NITmin 0
NITmax 150
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MUCHAS GRACIAS
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