Cadena Respiratoria
Tiene lugar en la membrana mitocondrial interna, la cual está compuesta por crestas
Comienza con la entrada de electrones provenientes de los aceptores NADH,
FADH2, de las vías catabólicas.
Moleculas transportadoras de electrones
Estos transportadores pueden transportar átomos de hidrógeno o electrones
1. Ubiquinona (Q): único componente de naturaleza lipídica y de pequeño
tamaño, por ende se mueve de forma rápida en la membrana lipídica de
la MMI. La ubiquinona oxidada se representa con la letra Q, gana un H+ y
un electrón y pasa a Semiquinona radical (QH*), gana otro electrón y H+,
quedando en su forma completamente reducida: Ubiquinol (QH2).
2. Citocromos: proteínas con grupos proteicos Hemo, que contienen átomos
de hierro que pueden pasar de ferroso a férrico o viceversa. Estos captan
y ceden únicamente electrones. El citocromo c de la mitocondria es una
molécula soluble que se asocia mediante interacciones electrostáticas a la
parte exterior de la MMI
3. Centros Fe-sulfurados: Coordinación de átomos de hierro con azufre de las
histeinas
E = E°´ + RT / n7 ln [e´aceptor/e- dador]
El potencial redox estándar permite predecir la secuencia de la transferencia de
electrones en la cadena respiratoria. Los electrones tienden a fluir desde los
transportadores de E°´ más bajo hacia los E°´ mas elevados.
Pasaje de electrones a la ubiquinona: Complejos
El NADH es capaz de oxidarse por un complejo de NADH deshidrogenasa
(complejo 1), esto sucede mediante la liberación de H (H+ y e-) que se dirigen al FMN
y posteriormente el pasaje únicamente de electrones a los centros Fe-sulfurados.
Estos electrones irán a reducir a la ubiquinona a partir de electrones que se
tomarán del medio. El complejo 2, a partir del succinato que es oxidado por el FAD, (le
saca electrones) y pasan los electrones por los centros Fe-S también irán a reducir a
la Q.
Complejo 1: NADH ubiquinona oxidoreductasa (solo para NADH)
Se oxida el NADH, el NAD vuelve a las rutas catabólicas a recolectar nuevos H+,
los electrones liberados pasan por la reducción del FMN, por los centros Fe-S y
finalmente 2e- van a reducir la ubiquinona en ubiquinol. En este punto se genera un
primer bombeo de protones (4H+) al espacio intermembrana, que va a ser más
positivo por el gradiente de H+, quedando más negativo el lado de la matriz.
Este complejo puede ser inhibido por: rotenona, amital y piericidina A.
NADH + H + Q NAD + QH2
Complejo 2: Succinato ubiquinona oxidoreductasa (solo para FADH2)
El complejo 2 contiene a la enzima succinato deshidrogenasa del ciclo de krebs
y transfiere electrones del succinato, captados por el FAD, a la ubiquinona. Los
electrones pasan a los centros Fe-S y 2e- y 2H+ reducirán a la ubiquinona. No se
bombean protones
Otras enzimas FAD dependientes, como la glicerol-3 P deshidrogenasa y Acil-
CoA deshidrogenasa también ceden sus electrones directamente a Q
Complejo 3: Citocromo bc1 (ubiquinona: citocromo c oxidoreductasa)
Está compuesto por el citocromo b y c1, tiene centros
Fe-S. Este complejo oxida la ubiquinona, es decir toma los
electrones de los complejos 1 y 2 los cuales son
transferidos al citocromo c que se encuentra en la cara
externa de la membrana mitocondrial interna. Bombea al EI
4 protones.
Citocromo c
Transfiere electrones desde el citocromo c1 hacia la
citocromo oxidasa. Se une muy débilmente a la membrana
mitocondrial interna.
Se da el ciclo Q: La Q puede aceptar 2e pero el
citocromo c solo 1, por eso al llegar QH2 al complejo 3, un
electrón se dirige al citocromo mientras que el restante va a otra ubiquinona, esto
vuelve a suceder y cuando la ubiquinona que junto los electrones restantes se reduce
totalmente (QH2) realiza el proceso normal.
Complejo 4: Citocromo oxidasa
Cataliza la reducción de oxígeno a agua, y existe una nueva etapa de bombeo
de 2 protones en contra del gradiente.
Los electrones vienen del citocromo c, se transfieren al cobre a, cobre b, y
oxigeno mas protones se forma el agua. De esta transferencia se libera energía, y
parte de ella ayuda a bombear los protones.
En suma
En los complejos 1, 3 y 4 parte de la liberación de energía se conserva en un
gradiente de protones.
El complejo 1 y 2 pasan electrones a Q y el complejo 3 al complejo cuatro
La energía de la transferencia de electrones se conserva en el gradiente de
protones. El gradiente de protones genera un gradiente electroquímico, cuya energía
almacenada se denomina fuerza proton motrizl la cual tiene 2 componentes
ლ Energía química potencial (el pH se hace mas acido por la acumulación de
H)
ლ Energía eléctrica potencial (acumulación de cargas +)
El gradiente electroquimico se utiliza en la sintesis de ATP
El gradiente generado es la fuerza protomotriz que permite la síntesis de ATP.
Existe un quinto complejo (ATP sintasa) que cataliza la síntesis de ATP a partir de ADP
+ Pi. Este compuesto está embebido en la membrana y está compuesto por F1, que
se encuentra hacia el interior de la membrana, la encargada de realizar la reacción, y
F0 se comporta como un transportador de protones a través de un poro.
F1 tiene subunidades alfa y beta, cada una de
las subunidades beta tiene un sitio catalítico para la
síntesis del ATP
ლ β-ATP
ლ β-ADP
ლ β-vacía
En sus sitios activos se da la catálisis rotacional:
Una subunidad comienza tomando una conformación
β-ADP que une al ADP +Pi del medio, a continuación
la subunidad cambia su conformación a β-ATP que
une y estabiliza el ATP y finalmente β-vacía libera el
ATP. Para cada cambio de conformación “giro” se
gasta un H+ que pasa por F0.
La liberación de energía del gradiente
suministra la energía necesaria para “acoplarse” a la reacción endergónica de la
síntesis de ATP.
Inhibidores del transporte de electrones
Del complejo 1
ლ Rotenona
ლ Amital
Del complejo 3
ლ Antimicina A
Del complejo 4
ლ CN (cianuro)
ლ CO
Agentes desacoplantes
Ácidos débiles con propiedades hidrofobicas que Actúan como ionóforos
disipando el gradiente de protones. Desacoplan la cadena respiratoria de la
fosforilación oxidativa.
El gradiente de protones es utilizado tambien para
el transporte
La fuerza protón motriz ayuda al ATP a salir al
Espacio intermembrana. El ATP sale a través de
transportadores como por ejemplo la nucleótido de
adenina translocasa, que transportan ATP (4 cargas
negativas) al exterior y ADP (3 cargas negativas) al
interior, utilizando a su favor el gradiente. Asimismo, el
fosfato también es transportado gracias al gradiente
hacia el interior de la matriz, mediante la fosfato
translocasa, la cual promueve el cotransporte paralelo
de fosfato y H+ a la matriz.
Una característica de la membrana mitocondrial
interna es que es impermeable al NAD+, es decir que no existen transportadores de
NAD+ y NADH. Si existen lanzaderas, las cuales sirven para sacar equivalentes de
reducción e intercambiar NADH desde el interior al exterior.
Consumo O2 y Sintesis de ATP
Normal
Si al principio agregamos succinato/piruvato (sustratos
respiratorios) sabemos que el consumo de oxígeno va aumentar
por acción del Complejo IV. En el próximo paso cuando
agregamos ADP + Pi se observará que el consumo de oxígeno
va aumentar más aún, esto es debido a que en la síntesis de ATP
es llevada a cabo gracias al paso de protones a través de la ATP
sintetasa. Cuando le agregamos ADP + Pi permitiendo la
fabricación de ATP; al final se observa que vuelve a tener la
misma pendiente que el principio, indicando que se consumió gran parte de ADP + Pi
Con Presencia de Rotenona
Los electrones no pueden ingresar a la cadena respiratoria no llegarán al
complejo IV ocasionando que no haya un consumo de oxígeno por parte de las
mitocondrias. Si se agrega ADP tampoco aumentará la pendiente ya que no se podrá
utilizar para la síntesis de ATP, debido a que los protones
no pasan por la ATP sintasa.
En cambio, los electrones del succinato ingresan a
la cadena de transporte de electrones por medio del
complejo II, por lo que en presencia de rotenona de igual
manera hay un aumento en la pendiente de la curva,
debido a que los electrones podrán continuar en la cadena
consumiendo oxígeno. El resto del proceso y la síntesis de
ATP sucederá con normalidad.
Con Presencia de Dinitrofenol
El dinitrofenol es un agente desacoplante, ya que
tiene la capacidad de aislar el flujo de los electrones y el
bombeo de protones de la síntesis de ATP.
En la cadena respiratoria, este agente desacoplante
disipa el gradiente de H+, reduciendo la producción de
ATP. La disipación del gradiente de H + promueve el
aumento en el transporte de electrones, por lo tanto el
agregado de un desacoplante promueve el consumo del
oxígeno (aumenta la velocidad del transporte de
electrones). Sin embargo, los H + no ingresan a la matriz
por la porción de la ATP sintasa, por lo que no hay síntesis de ATP.
