Directos y tinciones

Directos
Es lo más rápido y fácil que se puede hacer. Consiste en tomar una muestra,
ponerla en un porta objeto, colocarle un cubre objeto arriba y observarla en el
microscopio.

Luego se realiza un informe semi-cuantitativo

Los directos se ven con poca luz

Los gram se ven con mucha luz

Tinciones

Directos—> pinta de forma directa

Cambios de ph—>
Redox
Funciones biológicas—> x ejemplo para ver si una célula está viva o muerta

Estructura químicas

La mayoría de las tinciones se basan en el anillo bencénico y principalmente

a la Anilina
Anillo de benceno + radical amonio

Cromóforo
Es un enlace que ocurre entre dos átomos que retienen una longitud de onda y reflejan
otra, esto depende de los enlaces, ej: C-C, S-C, N-C

Tinciones fluorescentes

Algunas moléculas tienen varios bencenos con electrones deslocalizados por lo que el
electrón se excita a cierta longitud de onda, sube su spin de energía, pero cómo no
puede estar eternamente libera energía en forma de luz para volver a su spin normal,
es por eso que emite fluorescencia.
Se necesita un microscopio de inmunofluorescencia para poder ver esta luz.
El electrón al cambiar sus niveles pierde mucha energía, por lo que se debe leer rápido

Tinción de gram
Es utilizada para diferenciar bacterias con una pared gruesa o delgada de péptico glicano

Gran negativo: delgada pared de mentido galicano

Gram positivo: gruesa pared de péptico galicano

Las tinciones utilizadas van a teñir el peptido galicano y esta

va a variar dependiendo si hay mucho o poco
¿Cómo está hecho el partido glicano?
Dos azúcares principales: n-acetil glutamina y n-acetil murámico, además de un
tetrapéptido formado por p-alanina, ácido glutámico l-ananina y ácido diamimo
pirémico

Gracias a enzimas transpeptidasas que realizan enlaces peptídicos

y enzimas transglicosilazas que enlazan dos hidratos de carbono

¿Cómo se sintetiza?
Se forman primero los azucares y se unen al partido en el citoplasma, estos
deben acoplarse a un transportador lipídico ya que debe atravesar la bicapa
lipídica interna y deje las moléculas fuera, luego que salgan los precursores es
donde empiezan a actuar las enzimas para formar la pared de peptidoglicano

En los gram positivo también encontramos acido teicoico y lipoteicoico ( con ácido grasos) hechos principalmente de ribitol.

En los gram negativos encontramos una bicapa externa por sobre

el peptidoglicano→ La capa externa de la capa externa está hecha
de lipopolisacárido (lps)

El LPS está formado por:

• lípido A → monederos de HC unidos a ácidos grasos
• núcleo de polisacáridos
• antígeno O

Proceso de tinción
En primer lugar se tienen bacterias sin teñir
→ Se le agrega cristal violeta que se va unir al pertidoglicano
→ Luego se le agrega Lugol que va a potenciar esta unión
En este punto todo está teñido con cristal violeta, sin poder diferenciar si hay bacterias gram (+) o (-)
→ Después se decolora usando alcohol acetona
Aquí las bacterias con una pared gruesa de peptido galicano soportan la decoloración mientras que las de delgada pared se decoloran
→ Cómo las bacterias gran (-) están desteñidas se aplica una tinción de contraste (safranina) que permite visualizarlas
 Tinción de Ziehl-Neelsen
Esta tinción se une a los ácidos micólicos que tienen ciertas bacterias
(mycobacterias)

Cuando los ácidos micólicos tienen más de 70 carbonos

en su cadena se tiñen muy bien con esta tinción

Tinción de esporas

Hay bacterias que forman esporas → formas de resistencia

Se ocupa verde malaquita para teñir las esporas y cómo tinción
de contraste se ocupa la safranina que tiñe células vegetativas

Tinción de cápsulas

Es una tinción negativa (contratinción) que utiliza tinta china la cual es

incapaz de penetrar la cápsula por lo que se tiñe todo el medio de
negro mientras que la bacteria al no estar teñida se we brillante por
el paso de la luz