Universidad Autónoma de Baja California

Facultad de Ciencias Marianas

Biotecnología en acuicultura

BIOTECNOLOGÍA DE MACROALGAS

Cultivo y domesticación del alga parda Eisenia arborea en laboratorio.

Docente: José M. Sandoval

Alumno: Brian Jaciel Alvarado Ibarra

Matricula: 361162

24 de noviembre de 2023
Introducción

Una actividad a desarrollar durante la materia es poder mantener un cultivo de algas, en este caso la
práctica tiene como objetivo conocer como es el desarrollo de una alga que se puede encontrar en
nuestra región, la especie seleccionada es Eisenia arborea que podemos encontrar en los
intermareales costeros hasta zonas con profundidades de hasta 40 metros. Para poder llevar a cabo
el cultivo de esta especie es necesario realizar actividades como la recolección de ejemplares del
medio natural para iniciar un cultivo, obtener esporas, observar y registrar el crecimiento de los
gametofitos. Durante todo este proceso se llevan a cabo diversas metodologías: la preparación de
medios de cultivos como el PRVOSOLI, establecer parámetros de luz y temperatura adecuados según
la etapa de crecimiento en que se encuentren los organismos, llevar protocolos de higiene para evitar
contaminación; actividades de limpieza y desinfección de material que es requerido utilizar en el
mantenimiento de los cultivos, todas estas actividades cumplen una función importante para tener un
cultivo sano. Utilizar una especie de la región nos facilita contar con organismos para seguir
experimentado con su cultivo. Comprender como es el ciclo de vida de las algas está ligado con la
creación de sistemas de producción para aprovechar el potencial que tienen estos organismos.

Eisenia arborea es un alga parda perteneciente al orden de las laminarias y a la familia Alariaceae.
Es un alga que se puede encontrar en el Pacífico oriental hasta la bahía Magdalena. En Baja California
se explota de forma artesanal para crear harinas y fertilizantes. Es un organismo en el que
encontramos alternancia hereditaria, con una fase gametofito sexual dioica y una fase caracterizada
por un esporofito diploide sexual. El crecimiento de las algas laminarias está determinando por los
factores ambientales a los cuales son expuestas, se ha reportado que la luz y la temperatura juegan un
papel importante en el crecimiento de los esporofitos (Altamirano Gomez, 2017, (Sanchez Medina,
2008).

Materiales y metodología
1- Sitio de colecta y muestreo.
• La colecta de ejemplares de Eisenia arborea se realizó el día 28/09/23, se lleva a cabo
durante la bajamar en la zona del intermareal rocoso de la Bahía de Todos Santos con
coordenadas 31°51'40.1"N 116°39'12.4"W (Figura 1)
 Figura 1. Sitio de colecta de E.arborea

Figura 2. Alumnos localizando ejemplares de E. arborea

• Una vez localizado los ejemplares se buscaron láminas en donde se observarán soros
esporangiales, para eso fue necesario observar laminas a contra luz. (Figura 3)
 Figura 3. Búsqueda de láminas con soros esporangiales

• Aquellas laminas seleccionadas se guardaron en una hielera para conservarlas en una

temperatura constante y una vez obtenidas las suficientes laminas se regresó al laboratorio
para guardarlas.
• En el laboratorio se seleccionaron las laminas en mejor estado y descartaron aquellas que
podían presentar alta cantidad de contaminantes.
• Para presérvalas se colocaron en papel secante humedecido con agua destilada y se
apilaron, colocando una capa de papel secante y una de láminas (figura 4), una vez
terminado se metió todo el paquete de láminas en una bolsa y se dejó en un refrigerador.
 Figura 4 . Selección de láminas y resguardo.

2- Cultivo de Eisenia arborea en laboratorio.

2.1- Preparación de nutrientes

• Para llevar a cabo el cultivo de E.arborea se preparó el medio de cultivo Provasoli.

• La preparación de las soluciones para el cultivo se repartió entre las diversas sesiones
de laboratorio, en la sesión 2 se preparó la solución de nitrato y glicerol fosfato.
• Se pesaron 5.6 gr nitrato y se diluyeron en 100 ml de agua destilada.
• Se pesaron 0.8 gr de glicerol fosfato y se diluyo en 100 ml de agua destilada.

2.2- Cultivo en laboratorio

• El proceso para obtener las esporas se realizó una semana después de la colecta de
láminas. Este proceso consistió en diferentes pasos:
• Se lavaron las láminas con agua de mar y se cepillaron, se retiro la mayor cantidad
de agua con papel secante y gazas.
• La siguiente etapa fue la desecación en donde las láminas se colocaron en una charola
y se quedaron debajo de una campana de extracción por 1 hora.
 Figura 5. Etapa de secado de láminas.

• Durante el tiempo de secado se lavó material y se prepararon los carretes

sumergiéndolos por breve tiempo en agua hirviendo.

Figura 6. Preparación de carretes.

• El siguiente paso fue rehidratar las láminas, en este punto se seleccionaron aquellas
laminas que se observaran mas limpias y con una alta cantidad de esporangios, se
colocaron en un matraz de 500 ml con agua de mar filtrada por 15 minutos dejando
el matraz debajo de la campana de extracción y mezclando cada 5 minutos.

Figura 7. Rehidratación de láminas

• Después de los 15 minutos se tomo una muestra para realizar un conteo en una
cámara neubauer para determinar la cantidad de esporas que se liberaron y conocer
el numero de esporas por ml.
• Se preparo un área estéril, limpiando la mesa de trabajo con alcohol y encendiendo
un mechero bunsen.
• Se coloco 1 carrete en un frasco y se llenaron con 700 ml de agua de mar estéril,
contando con 4 recipientes listos para inocular.
 Figura 8. llenado de recipientes con agua de mar estéril.

• Se tomaron 30 ml de la solución stock de esporas para sembrar en cada recipiente y

se taparon los frascos.
• Se metieron a una incubador sin aireación y en oscuridad, por 72 horas.
• Después de las 72 horas se proporciono aireación y luz.
• La intensidad de luz fue subiendo de forma gradual. La siguiente semana de la
siembra se subió la intensidad de la luz a 40-50 micro-Einsteins/m2/s, para tomar
esta medida fue necesario utilizar un sensor LICOR

Figura 9. medición de luz. Figura 10. Sensor LICOR

 • En la segunda semana después de la siembra por primera vez se agregaron nutrientes
en el medio, para esto se preparó una zona estéril. En 3 litros de agua de mar
esterilizada se agregaron 1 ml cada solución de nutrientes por litro. Se sacaron los
carretes y se colocaron en papel secante, se vacío el agua de los recipientes, se
enjuago con un poco de agua de mar esterilizada y se lleno con 700 ml de agua de
mar esterilizada y enriquecida.
• El mantenimiento del cultivo continuo durante el paso de las semanas, cada viernes
se realizaba un recambio de agua y se adicionaba la cantidad correspondiente de
nutrientes y se tomaba una muestra para observar el estado de crecimiento del alga
(figura 11)
• Ocasionalmente se iban a girar los carretes para permitir que a los esporofitos
recibieran condiciones iguales de luz (figura 12).
• Para mantener un control se registraba en una bitácora los días que se giraban los
carretes, temperatura y observaciones (figura 13).

Figura 11. Mantenimiento de carretes de Figura 1 2. Rotación y seguimiento de Figura 13. Bitácora de seguimiento del mantenimiento.
cultivo de E. arborea. carretes cultivo.
Resultados
Esporulación: 29 septiembre del 2023(día 1)
Se revisaron al microscopio la liberación de esporas de E. arborea (figura 14) y se sembraron en los
carretes, a simple vista no se podía observar nada en los cultivos (figura 15).

Ilustración 14 y 15. Esporas de E. arborea y carretes en donde fueron sembrados.

Crecimiento
Fecha: 13 de octubre (día 15 de crecimiento, semana 2)
Formación de gametofitos, con un tamaño entre los 5-14 µm (figura 16), sin diferenciación sexual.

Figura 16. Tamaño de gametofitos a la segunda semana de crecimiento.

 Fecha:20 de octubre (día 22 de crecimiento, semana 3)
Tamaño de gametofitos incremento, se reportaron gametofitos entre las 50-80 µm de largo con
diferenciación sexual notable en algunos casos (figura 17 y 18). A partir de esta semana se observaron
presencias de protozoarios en uno de los cultivos (figura 19).

Ilustración 17. Gametofito de E. arborea Figura 18. Crecimiento de Figura 19. Presencia de protozoarios en uno de
gametofitos. los cultivos.

Fecha: 27 de octubre (día 29 de crecimiento, semana 4)

Incremento casi al doble el tamaño de algunos esporofitos reportando de 120 a 190 µm (figura 20),
la diferenciación sexual es mas notable. En los cuatro cultivos se reportó presencia de protozoarios.

Figura 20. Semana 4 de crecimiento de gametofitos.

Fecha: 6 de noviembre (día 39 de crecimiento, semana 6).

El mantenimiento se debió realizar el 3 de noviembre, pero se realizaron tareas de apoyo a pozas de
Ulva sp por lo tanto las tareas de mantenimiento se hicieron el lunes 6 de noviembre sin realizar
observaciones al microscopio.
Fecha: 10 de noviembre (día 43 de crecimiento, semana 6).
Ultimo dia de seguimiento del crecimiento de gametofitos de E. arborea. Se observaron desarrollo de
frondas de 400 µm figura (20 y 21)

Figura 20 y 21. Frondas de E.arborea

Fecha: 15 de noviembre (día 48 de crecimiento, semana 7).

Este día no se realizaron observaciones del cultivo, se procedió a enredar el nylon en donde estaban
fijados los gametofitos en cuerdas para ser llevadas y sembradas a 12 m en campo Kennedy, como
una actividad de para reforestación.

Figura 22 y 23. Siembra en línea madre y crecimiento de gametofitos en nylon.

Discusiones
Cultivar a una especie en laboratorio nos permite controlar la mayoría de parámetros para ir
observando parte del ciclo de vida, este era el objetivo de realizar el cultivo de E. arborea. Como se
pudo observa a tercera semana de crecimiento de los gametofitos se pudieron distinguir el dimorfismo
sexual, Sánchez-Medina (2008) reporto que a los 18 días ya era posible distinguir los sexos de los
gametofitos, nuestra observación fue realizada a los 22 días de crecimiento porque así estaba
planeado, existe la posibilidad que si la muestra se hubiera observado a los 18 días ya se pudieran
observar algunos gametofitos machos o hembras.
En cuanto a la temperatura e irradiancia que se mantuvo en lo incubadores (50 µmol m-2 s-1 y 16Oc)
Perez-Garcia (2015) reporta que si se expone a irradiancias mayores a las que se presentan en su
medio (56 µmol m-2 s-1 ) es posible incrementar el crecimiento de los esporofitos, si se incrementa la
irradiancia hasta valores de 90-120 µmol m-2 s-1 E.arborea no se ve afectada, el factor que puede
limitar su crecimiento es la temperatura, recomienda mantener un rango entre los 15-18,
preferiblemente mantener el cultivo a 15OC, sin la temperatura incrementa puede verse afectado el
desarrollo de los gametofitos.
En comparación a lo que obtuvo Sánchez Medina (20008), los esporofilos cultivados en el laboratorio
crecieron de manera satisfactoria pero un factor que cambia en el método que usamos fue la
exposición a luz, si bien nosotros al comienzo dejamos unos días sin luz ni aireación, Sanchez-
Medina no realizo esta actividad, sumado a esto al mes de crecimiento aumento la irradiancia a casi
el doble para acelerar la maduración.
El principal conflicto fue es la presencia de protozoarios en los cultivos, no se reconoció la causa,
pero lo más probable fue por una mala ejecución en el mantenimiento. No se pudo identificar si los
protozoarios estaban impactando a la población de gametofitos, el crecimiento de los gametofitos se
siguió observando en todo momento.

Conclusiones
Incrementar la irradiancia pudo acelerar el crecimiento de los gametofitos.
El crecimiento de los gametofitos de E. arborea se cumplió
El mantenimiento adecuado y los protocolos de limpieza son un factor importante para evitar
organismos que pueden afectar el cultivo.

Referencias
Altamirano Gomez, Z. (2017). Maricultivo de Eisenia arborea y Macrocystis pyrifera en la Bahia de
Santa Maria, Baja California, Mexico: validacion de sitio. [Tesis para maestria].
Sanchez Medina, R. (2008). DESCRIPCION DE LA HISTORIA DE VIDA Y DESARROLLO DE
Eisenia arborea Areschoug BAJO CONDICIONES DE LABORATORIO [Tesis para licenciatura].
Universidad Autonoma de Baja California.
Perez Garcia, J. M. (2015). Condiciones optimas de temperatura e irradiancia para el crecimiento de
esporofitos juveniles de Eisenia arborea y su capacidad de recuperacion bajo condiciones de estres
termico [Tesis de Maestria]. Universidad Autonoma de Baja California.