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Extracción de Limoneno de Citrus x sinensis por método Soxhlet y arrastre de

vapor

Experiment Findings · March 2020

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Ana Marcela Gallego Johan Sebastián Ríos Zambrano

Pontificia Universidad Javeriana - Cali Pontificia Universidad Javeriana - Cali
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 1 Laboratorio Extracción de Limoneno

Extracción de Limoneno de ​Citrus x sinensis ​por método Soxhlet

y arrastre de vapor

Ana Marcela Gallego​1​., Johan Sebastián Ríos​1

1​
Facultad de Ingeniería, Pontificia Universidad Javeriana Cali, Colombia

Recibido: 30 de marzo 2020

Abstract

In the present work, two solid-liquid separation methods were developed in order to obtain
the essential oil of (+)-Limonene using orange peels (​Citrus x sinensis​) as raw material.
Firstly, 128,07 g of small peels were placed in a volumetric flask to carry out the steam drag
distillation, and later 44,57 g of peels were distilled in a Soxhlet equipment using ethanol
(70% v/v) as organic solvent and ether (70% v/v) for the orange-mandarine mixtures
respectively. Once the distillates were obtained, an evaluation was carried out with aqueous
solution of potassium permanganate (KMnO4) in order to evaluate unsaturations in the final
compound, which concluded with positive results for the test reaction.

Key words: ​Limonene, essential oil, Soxhlet method, Steam Drag, unsaturations

Resumen

En el presente trabajo, se desarrollaron dos métodos de separación sólido-líquido con el

objetivo de obtener el aceite esencial de (+)-Limoneno empleando cáscaras de naranja
(​Citrus x sinensis​) como materia prima. En primer lugar, se dispuso de 128,07 g de cáscaras
pequeñas en un matraz volumétrico para ejecutar la destilación por arrastre de vapor y
posteriormente se destilaron 44,57 g de cáscaras en un equipo Soxhlet empleando etanol
(70% v/v) como solvente orgánico y éter (70% v/v) para las mezclas naranja-mandarina
respectivamente. Una vez obtenidos los destilados, se realizó la evaluación en disolución
acuosa con permanganato de potasio (KMnO4) con el propósito de evaluar insaturaciones en
el compuesto final, que concluyó con resultados positivos para la reacción de prueba.

Palabras clave: ​Limoneno, aceite esencial, método Soxhlet, arrastre de vapor, insaturaciones.
 2 Laboratorio Extracción de Limoneno

Introducción

El limoneno es uno de los metabolitos secundarios producidos por la planta ​Citrus x sinensis
(naranja), que pertenece al tipo de moléculas insaturadas como los monoterpenos que a su vez se
incluye en la familia de los anillos aromáticos, resinas y compuestos fenólicos. El aceite esencial
de limoneno se concentra mayormente en las cáscaras de frutas cítricas (Virot ​et al.​, 2008) que
comparte un interés científico por sus relevantes propiedades como posible represor temprano
de carcinomas mamarios (Haag., Lindstrom y Gould, 1992), insecticida natural, e incluso es
usado para la extracción de aceite salvado de arroz como alternativa de solvente al n-hexano
(Mayor ​et al.​, sf). Los aceites esenciales, al encontrarse en numerosa cantidad de tejidos
vegetales, pueden ser extraídos con métodos comunes como la destilación ya que su
consistencia es similar a los aceites grasos, diferenciándose de estos, por su alta volatilidad. Dos
de las técnicas más usadas para aislar el limoneno son la destilación por arrastre de vapor y el
equipo Soxhlet, que presentan mayor rendimiento en un proceso de aislamiento de este tipo de
sustancias (Cedeño ​et al.​, 2019).
El 1-metil-4-(1-metiletenil)-ciclohexeno ​(C​10​H​16​) ​al poseer un centro
estereogénico, contiene dos isómeros ópticos con propiedades distintas
como su aroma a pineno y limoneno, según la base de datos
ChemSpider (2020) (Figura 1), siendo el (+)-limoneno el isómero
fácilmente reconocible por el olfato como fuerte limón. Según Balboa
(2016), mediante diversos estudios que se han implementado en las
propiedades químicas del (+)-limoneno, se puede determinar su
densidad con certeza del 98,6% con 0,8411 g/​cm3 con un punto de
ebullición de 176 ​℃,​ lo que permite destilar el aceite por arrastre de
vapor que basa su principio en la destilación de dos líquidos
heterogéneos inmiscibles entre sí.
La destilación por arrastre de vapor se desarrolla generalmente para extraer principios activos de
las plantas incluyendo sus raíces, flores, frutos, hojas, semillas y cortezas debido a que el equipo
es útil para separar compuestos de alta volatilidad, baja presión de vapor, alto punto de
ebullición y que presentan insolubilidad en agua (Cedeño ​et al.​, 2019). Con el equipo de
separado Soxhlet, se pretende separar el líquido en el estado más puro posible por medio de un
ciclado en continuo de evaporación y sifonado; dicho proceso se repite hasta conseguir el
agotamiento del solvente en la matriz de proceso tal como lo describen Lamarque, Zygadlo y
Labuckas (2009), y que generalmente emplea solventes orgánicos apolares como el éter
dietílico, n-hexano, ciclohexano, acetato de metilo, 1-butanol, diclorometano, propanol y
pentano. Con el empleo de ambas técnicas de destilación, se pretende evidenciar
comparativamente la mayor eficiencia de extracción ya que ambas metodologías requieren de
dos a tres horas de proceso supervisado. Aunque se logre obtener el compuesto deseado, queda
la posibilidad de presentar impurezas en la sustancia como producto de factores externos del
mismo experimento; por la misma razón se deben apropiar todas las posibilidades que den
cabida a errores metodológicos.
 3 Laboratorio Extracción de Limoneno

Procedimiento experimental

Se utilizaron cáscaras de naranja como materia prima, las cuales se obtuvieron de pelar cinco
naranjas verdes (menos maduras) y once naranjas amarillas (más maduras), que se
adquirieron en los mercados de la ciudad de Cali. Al pelar las naranjas se tuvo en
consideración la recomendación de no maltratarlas demasiado para evitar la pérdida del
aceite esencial y de conservar la pulpa blanca que va adherida a la cáscara. De la cantidad de
cáscaras menos maduras, gran parte de esta se empleó en el proceso de destilación. Para esto
se cortaron las cáscaras en trozos de alrededor de un centímetro cuadrado, las que se iban
depositando en un matraz redondo hasta llenar un poco más de la mitad de este, resultando en
un peso de 128,07 gramos de cáscara de naranja.
Posteriormente, se llenó el matraz con suficiente agua para sumergir todos los trozos de
cáscara y se ubicó en una placa calefactora establecida a 60 ℃ , para calentar la mezcla hasta
el punto de ebullición, procurando que no sucediera de manera violenta y que el calor se
repartiera de manera uniforme por todo el matraz, para lo cual, se envolvió alrededor de la
parte visible de este una manta ‘dulce abrigo’. Todo esto, con la intención de tener una
evaporación equitativa del líquido y poder obtener de manera eficiente el aceite esencial de
las cáscaras. De la boca del matraz se ubicó un adaptador de dos bocas, que permitió ubicar
en la boca central un termómetro y en la boca lateral el aparato de destilación, junto al cual se
posicionó una probeta de 50 ml para recolectar el producto final (Figura 2). Se realizaron
cuatro estaciones con este tipo de montaje, donde los demás grupos trabajaron cáscaras de
mandarina, melón y sandía (Figura 3).

Figura 2: Montaje destilación. Tomado de: Propia autoría

 4 Laboratorio Extracción de Limoneno

.
Figura 3: Montaje destilación de mandarina (izquierda) y naranja (derecha). Tomado de: Propia autoría

El proceso de destilación tomó alrededor de una hora y media, empezando a recoger líquido
de la destilación cuando la temperatura dentro del matraz alcanzó los 95℃. Seguidamente, el
volumen obtenido en la probeta se transfirió a un embudo de decantación y se mezcló con 10
ml de éter etílico y se procedió a realizar repeticiones en donde se agitaba la mezcla y se
liberaba el gas posteriormente. A partir de este proceso se pudo evidenciar la presencia de
dos fases líquidas dentro del embudo, una de color blanco (fase orgánica) y la otra
transparente (fase inorgánica), por lo que se prosiguió a separar ambas fases, ya que en la
fase orgánica se encontraba el aceite esencial y el éter etílico.
Posteriormente, se ubicó el embudo de separación en un soporte y debajo de este se dispuso
un vaso de precipitado, donde primero, se dejó caer el líquido de la fase inorgánica y, luego
en un recipiente diferente se separó la fase orgánica. Como el objetivo era medir la densidad
de la fase orgánica, se pesó una probeta vacía y luego se trasladó el líquido del vaso de
precipitado a la probeta en donde se midió el volumen obtenido y por diferencia de masas se
pudo obtener el peso de la fase orgánica.
El objetivo principal de esta práctica fue comprobar la existencia de enlaces dobles entre
carbonos en las soluciones obtenidas después de la destilación y decantación, ya que esto
comprobaría la presencia de limoneno en el líquido. Para realizar esto, en un vaso de
precipitado se vertió un poco del líquido de la fase orgánica y se le añadió permanganato de
potasio, donde la mezcla debe tornarse de violeta a café claro sí se oxidan los dobles enlaces
y se rompen.
Paralelamente al proceso de destilación y decantación, también se llevó a cabo el proceso de
extracción utilizando el equipo Soxhlet disponible en el laboratorio de química de la
Universidad Javeriana Cali. Nuevamente, la materia prima fueron las cáscaras de naranja; en
su mayoría las cáscaras menos maduras restantes y unas pocas de las amarillas, pero los
trozos empleados eran mucho más grandes, acumulando un peso de 44,57 gramos. Se
realizaron cinco montajes, uno por cada fruta (sandía, melón, naranja, y mandarina), siendo el
solvente para estas etanol, y uno cuyo sólido eran cáscaras de naranja y mandarina, siendo el
solvente éter (Figura 4).
 5 Laboratorio Extracción de Limoneno

Figura 4: Montaje Soxhlet. Propia autoría.

En el matraz, que se observa en la parte inferior, se dispusieron los solventes mencionados,

los cuales fueron calentados hasta su punto de ebullición; para el etanol alrededor de 80 ℃ ​y
para el éter aproximadamente 35 ℃ . Al evaporarse estas sustancias, subieron hasta el
condensador, donde al transformarse en líquido bajaban, quedando en el mismo espacio que
las cáscaras. Al final de la cámara del sólido se ubicó algodón para evitar que trozos del
sólido o partículas grandes fueran al matraz. El líquido se acumuló hasta producir el ‘efecto
sifón’ y se liberó de nuevo en el matraz con las partículas objetivo disueltas, incluyendo el
limoneno. Este proceso de extracción se dejó actuar por cerca de dos horas y al final se
obtuvieron productos de color amarillo e impregnados del olor de la fruta correspondiente.
Estos productos se llevaron seguidamente a un rotavapor, en donde se tenía la intención de
evaporar los solventes orgánicos empleados para obtener los aceites esenciales puros. Esto
debido a que un rotavapor funciona a temperaturas altas y reduciendo la presión dentro del
sistema que propicia una disminución en los puntos de ebullición de los solventes. En el
rotavapor, la muestra se pone en un matraz que girará semi-sumergido en agua caliente, para
repartir el calor de manera homogénea, produciendo que el solvente se evapore, ascienda
hasta el condensador que posteriormente lo devuelve al estado líquido y lo separa en un
matraz diferente (​ Rotary Evaporation., 2019)​. Este proceso no pudo ser llevado a cabo por
inconvenientes con el horario de laboratorio, pero se explicó el proceso y se dejaron las
muestras para desarrollarlo en otra ocasión

Resultados y discusión

El proceso de destilación para cada grupo tuvo variantes en factores como; cantidad de masa
empleada, temperatura en la cual inició la destilación, volumen obtenido y olor percibido
durante el proceso, valores que se encuentran en la tabla 1. Así mismo, hay que resaltar que
la extracción utilizando el equipo Soxhlet tampoco contó con una equivalencia en la cantidad
de masa destinada. Aunque las descripciones de los olores tienen adjetivos comunes, cada
uno se caracterizó por tener conexión al olor normal de la fruta utilizada, solamente que el
olor durante la destilación resultaba mucho más fétido y fuerte, siendo percibido por cada
participante como poco deseable.
 6 Laboratorio Extracción de Limoneno

FRUTA MASA OLOR COLOR VOLUME TEMPERATURA DESCRIPCIÓN

N
Matraz Soxhlet Volumen Cuando inició
que se condensación
mezcló con
éter
Mandarina 120.33 g 35.42 g Ácido, 43 ml 91 ⁰C Penúltimo proceso en
picante Transparente alcanzar la
temperatura de
destilación.
Sandia 146,34 g 69,05 g Agrio, 50 ml 98 ⁰C Primer proceso en
fétido, Transparente ejecutarse por
picante completo, puesto que
alcanzó el punto de
ebullición más rápido.
Melón 175,48 g 60,01 g Ácido, 45 ml 96 ⁰C Segundo proceso en
picante Transparente alcanzar la
temperatura de
destilación
Naranja 128,07 g 44,57 g Naranja 22,5 ml 95 ⁰C Menor rendimiento del
dañada Transparente proceso siendo este el
último producto
obtenido
Tabla 1: Valores obtenidos en la destilación. Elaboración propia.

Según los resultados que se observan en la tabla se evidencia que la cantidad de muestra para
el proceso de destilación fue diferente por grupo y esto se pudo dar porque las cáscaras de las
frutas son de distinta constitución, por lo cual la porción que se requirió para llenar un poco
más de la mitad del matraz fue desemejante afectando el peso registrado. Con respecto al
olor, se percibió que todas las muestras compartían el hecho que al estar en agua hirviendo,
se emitía un fuerte aroma desapacible llevando consigo la esencia del fruto en cuestión,
remarcando que el de melón y la sandía era más incómodo el aroma en comparación con el
de la mandarina y naranja, que derivó como de fruto dañado.
Seguidamente, se constató que los procesos de destilación sucedieron en intervalos distintos,
como tal es el caso del melón y la sandía que destilaron en un menor tiempo comparados con
la naranja y mandarina; fue evidente además que estos últimos productos presentaron una
evaluación positiva con el permanganato de potasio, conjeturando una posible relación entre
el tiempo de destilación y la presencia de dobles enlaces. Por otro lado, hubo varianzas
significativas en la cantidad de producto en cada grupo, mayoritariamente porque cada uno
decidió trabajar un valor específico y no esperar por la producción de más líquido, pero el
que presenta mayor variación es el conseguido en el proceso de las cáscaras de naranja y esto
se debe a que por errores procedimentales se perdió una parte del mismo. Por último, cuando
se iba recogiendo el producto en la probeta, todos los líquidos mantuvieron una apariencia
muy homogénea, donde fueron transparentes, sin notar la presencia de partículas en el
líquido, esto debido a que las moléculas extraídas estaban disueltas en el agua, incluyendo el
 7 Laboratorio Extracción de Limoneno

limoneno.
Prosiguiendo con el análisis, como resultado del proceso de destilación con cáscaras de
naranja se obtuvo un volumen de 22,5 ml, al cual se le añadió 10 ml de éter. A este producto
se le realizó el proceso de decantación, en donde se obtuvieron 8 ml de fase orgánica con un
peso de 4,68 gramos. Según estos valores, se calculó la densidad de esta fase, siguiendo la
fórmula:

Densidad = M asa/V olumen

Y obteniendo el resultado:

Densidad = 4, 68 g/8 ml = 0, 585 g/ml

Después de realizar esta medida, se prosiguió a comprobar la presencia de dobles enlaces

carbono-carbono para constatar la presencia de limoneno. De los cuatro grupos presentes, al
agregar permanganato de potasio a la fase orgánica de la destilación, se evidenció el cambio
de color de violeta a café claro solamente en el producto de cáscaras de naranja y
mandarinas; esto era lo esperado debido a que el limoneno es ampliamente encontrado en
aceites de cítricos (​ ​Sung J., 2007., p. 259​)​. En la figura 5 se puede ver el contraste entre ambos
resultados:

Figura 5: Prueba con permanganato de potasio. Propia autoría.

Por otro lado, del proceso de extracción del aceite esencial utilizando el Soxhlet se
obtuvieron cinco productos líquidos, los cuales tuvieron en su mayoría color amarillo, pero
variando en la tonalidad producida (figura 6). Durante el proceso, se evidenció el ‘efecto
sifón’ que debe entenderse como lo que sucede cuando en la cámara del sólido se acumula
demasiado líquido y por la altura que alcanza puede traspasar la primera curva del tubo en
forma de u invertida, permitiendo así que el líquido fluya hacia el matraz llevando consigo el
limoneno disuelto en el líquido (​ ​Serway y Vuille., 2015., p. 307​)​. Después de permitir que el
proceso ocurriera por dos a tres horas, se recolectó y se llevó a un rotavapor, con la intención
de evaporar el solvente (etanol o éter) y obtener de manera pura el aceite esencial, pero este
proceso no pudo ser llevado a cabo.
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Figura 6: Productos de destilación utilizando el Soxhlet. Propia autoría.

Conclusiones

La destilación por arrastre de vapor separó efectivamente el aceite esencial de (+)-limoneno

a 95 ℃ , demostrando su efectividad de extracción con los compuestos de alto punto de
ebullición y alta volatilidad aunque en el caso particular de ​Citrus x sinensis ​tardó más
comparado con el equipo Soxhlet. Se cumplió con el objetivo particular de evidenciar la
presencia de dobles enlaces en el extracto final que contrastó con la teoría estructural del
limoneno como componente terpénico. Todos los solventes orgánicos comprobaron
remarcablemente su utilidad con la extracción del aceite esencial y sus usos fueron
demostrables para este protocolo. Como consecuencia de los resultados obtenidos, fue
notable resaltar el éxito y aproximación en el proceso de laboratorio siendo los
procedimientos los pasos clave para futuras investigaciones con esta sustancia natural.

Referencias

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