UNIVERSIDAD POLITECNICA DE SINALOA

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA MC.YADIRA VALDEZ

BIOLOGIA MOLECULAR GRUPO:BT51-52
TECNICAS INMUNOLOGICAS 22/MARZO/2024

1. INVESTIGAR LAS TECNICAS INMUNOLOGICAS.

TECNICA DEFINICION FUNDAMENTO APLICACIONES DESARROLLO TECNICA

Precipitación La inmunoprecipitación se
basa en la capacidad de los
anticuerpos para unirse de
manera específica a una
proteína de interés.
El proceso implica la
formación de un complejo
antígeno-anticuerpo,
donde el anticuerpo se une
selectivamente a la
proteína que se quiere
purificar. Luego, este
complejo se precipita
utilizando diferentes
métodos, como la adición
de agentes precipitantes
como el cloruro de calcio o
la inmunoglobulina G (IgG)
unida a resina, para aislar la
proteína de interés de la
mezcla.
Purificación de proteínas La inmunoprecipitación ha evolucionado con el
específicas: Permite la obtención tiempo, desde las primeras versiones que
de una proteína de interés de una utilizaban anticuerpos policlonales hasta técnicas
mezcla compleja, lo que es crucial más sofisticadas que emplean anticuerpos
en la investigación biomédica y la monoclonales altamente específicos. También se
producción de proteínas han desarrollado variantes de la técnica, como la
recombinantes para estudios inmunoprecipitación en masa, donde se capturan
funcionales. múltiples proteínas simultáneamente utilizando
matrices de afinidad de alta capacidad.
Identificación de proteínas
interactoras: Utilizando la
inmunoprecipitación seguida de
técnicas como la espectrometría
de masas, se pueden identificar
proteínas que interactúan con la
proteína de interés, lo que es
fundamental para comprender las
vías de señalización y las
interacciones proteína-proteína.

Estudios de modificaciones post-

traduccionales: Permite analizar
las modificaciones químicas de las
proteínas, como la fosforilación o
la ubiquitinación, al purificar
proteínas específicas y analizar sus
perfiles de modificación.

Análisis de complejos proteicos:

Ayuda a estudiar la composición y
la estructura de complejos
proteicos al purificar complejos
multicomponentes utilizando
anticuerpos específicos para cada
componente.
Aglutinación Es la formación visible de Se basa en la reacción entre Diagnóstico de enfermedades La técnica de aglutinación ha evolucionado con el
agregados o un anticuerpo y un infecciosas: La aglutinación se tiempo, y existen diferentes variantes de la misma,
conglomerados de antígeno. Cuando los utiliza para detectar la presencia de como:
partículas o células, anticuerpos se encuentran antígenos o anticuerpos en
provocada por la unión de con su antígeno muestras biológicas, como sangre, Aglutinación en tubo: Se realiza mezclando la
anticuerpos a antígenos correspondiente, forman suero o saliva. Por ejemplo, en el muestra con un suero que contiene anticuerpos
específicos presentes en complejos inmunes que diagnóstico de enfermedades específicos. Si los antígenos están presentes en la
esas partículas o células. pueden ser visibles como la sífilis, la fiebre tifoidea, la muestra, se formarán grumos visibles.
macroscópicamente como brucelosis y otras infecciones
agregados o grumos, lo que bacterianas o virales. Aglutinación en lámina (placa) o portaobjetos:
se conoce como Similar a la aglutinación en tubo, pero se lleva a cabo
aglutinación. Pruebas de compatibilidad en una superficie plana, como una placa de
sanguínea: En transfusiones de microtitulación o un portaobjetos, donde se
sangre, la aglutinación se utiliza observan los conglomerados.
para determinar la compatibilidad
entre el tipo sanguíneo del Aglutinación en gel: Se utiliza un gel que atrapa los
donante y el receptor. Por ejemplo, complejos antígeno-anticuerpo y forma un patrón
en el sistema ABO y Rh. de aglutinación que puede ser observado
visualmente.
Identificación de agentes
patógenos: La aglutinación se Aglutinación en látex: Se utilizan partículas de látex
emplea para identificar bacterias, recubiertas con anticuerpos para detectar
virus u otros microorganismos en antígenos específicos, lo que facilita la detección de
muestras clínicas o ambientales. la aglutinación mediante cambios visuales en la
solución.
Pruebas de embarazo: Algunas
pruebas de embarazo se basan en Estas variantes han mejorado la sensibilidad y la
la detección de la gonadotropina especificidad de la técnica, haciéndola útil en una
coriónica humana (hCG) mediante amplia gama de aplicaciones clínicas, diagnósticas y
aglutinación. de investigación.

Neutralización Se refiere al proceso de La base de esta técnica
determinar la capacidad de radica en la capacidad de
un agente (generalmente ciertos anticuerpos para
anticuerpos) para bloquear la actividad
neutralizar la actividad funcional de un agente
biológica de un patógeno, patógeno específico. Por
inhibiendo su efecto ejemplo, los anticuerpos
nocivo en las células neutralizantes pueden
huésped. interferir con la capacidad
de un virus para infectar
células huésped al unirse a
Identificación de grupos
sanguíneos: La aglutinación se
utiliza para determinar los grupos
sanguíneos, como A, B, AB y O.
Evaluación de anticuerpos Selección del agente patógeno: Se elige el virus,
neutralizantes: Es crucial en la toxina u otro patógeno objetivo para el cual se
investigación y desarrollo de desea evaluar la capacidad de neutralización.
vacunas para determinar si los
anticuerpos generados son Obtención de anticuerpos: Se necesitan
capaces de neutralizar la infección anticuerpos específicos contra el agente patógeno,
por el patógeno correspondiente. que pueden obtenerse a través de la inmunización
de animales o cultivos celulares que produzcan
Estudio de la respuesta anticuerpos monoclonales.
inmunitaria: Permite comprender
cómo el sistema inmunológico

ELISA directa Es una técnica
inmunológica utilizada
para detectar la presencia
y cuantificar la cantidad de
un antígeno específico en
una muestra biológica. Se
basa en la unión directa de
un anticuerpo marcado
con una enzima a un
antígeno presente en la
muestra.
proteínas de la superficie responde ante diferentes agentes Ensayo de neutralización: Se lleva a cabo in vitro,
viral importantes para la patógenos, identificando qué donde se mezcla el agente patógeno con diferentes
entrada en la célula. anticuerpos son más efectivos en la concentraciones de anticuerpos para determinar la
neutralización. dosis mínima de anticuerpo requerida para
neutralizar la actividad del patógeno.
Evaluación de terapias antivirales
y antitoxinas: Se utiliza para Análisis de resultados: Se evalúa la capacidad de los
estudiar la eficacia de fármacos anticuerpos para neutralizar la actividad del
antivirales o antitoxinas al evaluar patógeno, generalmente mediante la observación
su capacidad para neutralizar la de la reducción de la infección o efecto tóxico en
actividad biológica del patógeno o células huésped.
toxina en cuestión.
Esta técnica es esencial tanto en la investigación
Diagnóstico de infecciones virales: básica como en la aplicación clínica para
En algunos casos, se puede utilizar comprender y combatir enfermedades infecciosas y
para confirmar la presencia de un toxinas perjudiciales.
virus específico midiendo la
capacidad de suero o plasma del
paciente para neutralizar la
infección viral in vitro.
Se basa en la interacción Diagnóstico médico: El ELISA A lo largo del tiempo, el ELISA directo ha
específica entre un directo se utiliza ampliamente en el evolucionado en términos de sensibilidad,
anticuerpo y un antígeno. diagnóstico de enfermedades especificidad y automatización. Se han desarrollado
Los anticuerpos son infecciosas, como el VIH, la variantes, como ELISA de múltiples etapas
proteínas producidas por el hepatitis, la enfermedad de Lyme, (sándwich), ELISA competitivo, ELISA de captura,
sistema inmunológico en entre otras. También se emplea en entre otros, para adaptarse a diferentes
respuesta a la presencia de el monitoreo de niveles de necesidades y mejorar la eficiencia de detección.
antígenos, que son hormonas, proteínas y marcadores
sustancias extrañas como biológicos relevantes en la salud
proteínas, virus, bacterias u humana.
otras moléculas que
desencadenan una Investigación científica: Es una
respuesta inmune. En el herramienta esencial en la
ELISA directo, un investigación biomédica para
anticuerpo específico para estudiar la expresión de proteínas
el antígeno de interés se específicas, la interacción
une a una superficie sólida, antígeno-anticuerpo, la respuesta
como un pocillo de una inmune y otros procesos biológicos
placa de microtitulación. relacionados con la inmunología.
Control de calidad en la industria
farmacéutica y alimentaria: Se
utiliza para verificar la presencia de
componentes específicos, como
proteínas, en productos

ELISA Indirecta Es una técnica Se basa en la capacidad de
inmunológica utilizada los anticuerpos para unirse
para detectar anticuerpos específicamente a anticuerpos
específicos en una muestra antígenos. En esta técnica,
biológica. se recubre una placa de
microtitulación con el
antígeno de interés. Luego,
se agrega la muestra que se
quiere analizar, que puede
contener anticuerpos
contra el antígeno. Si estos
anticuerpos están
presentes en la muestra, se
unirán al antígeno en la
placa.
Después de lavar para
eliminar cualquier
componente no unido, se
añade un anticuerpo
secundario que se une a los
anticuerpos primarios (de la
muestra) y que está
marcado con una enzima.
La enzima suele ser la
peroxidasa o la fosfatasa
alcalina.
Posteriormente, se añade
un sustrato que la enzima
puede detectar y convertir
en un producto detectable,
generalmente un colorante.
La intensidad del color
generado está
directamente relacionada
con la cantidad de
farmacéuticos, alimentos y
bebidas.
Detección de alérgenos: Permite
identificar alérgenos en alimentos,
productos químicos y otros
materiales, lo que es crucial para el
control de calidad y la seguridad
alimentaria.
Diagnóstico de enfermedades Preparación de la placa de microtitulación: Se
infecciosas: detección de recubre la placa con el antígeno de interés y se
contra agentes bloquean los sitios no ocupados con una proteína
patógenos como virus, bacterias y como la caseína o el suero bovino.
parásitos.
Adición de la muestra y anticuerpo secundario: Se
Monitoreo de respuestas añade la muestra que se quiere analizar y el
inmunes: seguimiento de la anticuerpo secundario marcado con una enzima
producción de anticuerpos en que se une a los anticuerpos primarios en la
respuesta a vacunas o infecciones. muestra.
Investigación biomédica: estudio Lavado: Se lava la placa para eliminar componentes
de la respuesta inmunitaria en no unidos y reducir el ruido de fondo.
diferentes contextos, como
enfermedades autoinmunes o Adición del sustrato: Se agrega el sustrato para la
alergias. enzima, que produce un cambio de color
proporcional a la cantidad de anticuerpos presentes
en la muestra.
Lectura y análisis: Se mide la absorbancia o el
cambio de color para cuantificar la cantidad de
anticuerpos presentes en la muestra original.
 anticuerpos presentes en la
muestra original.
Inmunofluorescencia Es una técnica Se basa en la capacidad de
inmunológica que utiliza los anticuerpos para unirse
anticuerpos marcados con específicamente a localización
fluorocromos para antígenos. En esta técnica,
detectar y visualizar los anticuerpos se marcan
antígenos específicos en con fluorocromos, que
muestras biológicas emiten fluorescencia
mediante la emisión de cuando se iluminan con luz
fluorescencia. ultravioleta o láser de
longitud de onda específica.
Cuando estos anticuerpos
marcados se incuban con la
muestra biológica que
contiene el antígeno de
interés, si hay unión
específica entre el
anticuerpo y el antígeno, se
forma un complejo
inmunológico.
Al exponer la muestra al haz
de luz apropiado, el
fluorocromo se activa y
emite fluorescencia, lo que
permite visualizar la
ubicación y distribución del
antígeno en la muestra bajo
un microscopio de
fluorescencia.
Radioinmunoensayo Se define como una técnica El RIA se basa en la
inmunológica que utiliza capacidad de los
un isótopo radioactivo anticuerpos para unirse
para cuantificar la selectivamente a un
concentración de un antígeno específico. En esta
antígeno específico en una técnica, se marca el
muestra biológica. anticuerpo o el antígeno
con un isótopo radioactivo,
como el yodo-125 (^125I) o
el tritio (^3H). Cuando la
muestra que se está
analizando contiene el
antígeno en cuestión, los
Investigación biomédica: Permite A lo largo del tiempo, la inmunofluorescencia ha
estudiar la distribución y evolucionado con el desarrollo de fluorocromos más
de proteínas, eficientes, anticuerpos más específicos y técnicas de
antígenos celulares y componentes procesamiento de muestras más avanzadas. Se han
celulares en células y tejidos, lo que introducido variaciones de la técnica, como la
es fundamental para comprender inmunofluorescencia indirecta y la
procesos biológicos y patológicos. inmunofluorescencia directa, que ofrecen
flexibilidad en el diseño experimental y la detección
Diagnóstico médico: Se utiliza en el de antígenos.
diagnóstico de enfermedades
autoinmunes, infecciosas y Además, el uso de microscopía confocal y técnicas
cancerosas al detectar la presencia de imagen digital ha mejorado la resolución y el
de anticuerpos o antígenos análisis cuantitativo de las imágenes obtenidas
específicos en muestras clínicas, mediante inmunofluorescencia, ampliando aún más
como suero, sangre, orina o tejidos su utilidad en la investigación y el diagnóstico.
biopsiados.
Identificación de
microorganismos: Permite la
identificación de microorganismos,
como bacterias, virus u hongos, en
muestras clínicas o ambientales
mediante la detección de
antígenos microbianos.
Estudios de interacción proteína-
proteína: Facilita la investigación
de interacciones entre proteínas al
permitir la visualización de
proteínas marcadas con
fluorocromos en células o tejidos.
Diagnóstico Médico: Se utiliza en El RIA fue desarrollado en la década de 1960 por
laboratorios clínicos para detectar Solomon Berson y Rosalyn Yalow. Su trabajo
y cuantificar hormonas, como la pionero en el uso de anticuerpos marcados con
hormona tiroidea (TSH, T3, T4), radioisótopos permitió la cuantificación precisa de
hormona luteinizante (LH), hormonas y otros compuestos biológicos en
hormona estimulante del folículo muestras biológicas.
(FSH), insulina, entre otras.
También se emplea en la detección El desarrollo posterior de técnicas más sensibles,
de marcadores tumorales y en el como el ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent
seguimiento de tratamientos. Assay), ha complementado al RIA en muchos casos.
Sin embargo, el RIA sigue siendo una técnica
Investigación Biomédica: Es importante en la investigación y el diagnóstico
fundamental en estudios de clínico debido a su alta especificidad y sensibilidad
 anticuerpos marcados se investigación para medir la para la detección de moléculas específicas en
unen a él, formando un concentración de proteínas, concentraciones bajas.
complejo antígeno- péptidos, enzimas y otros
anticuerpo. biomarcadores en muestras
biológicas. Esto permite
La cantidad de complejo comprender procesos fisiológicos,
formado es proporcional a estudiar enfermedades y
la concentración de desarrollar terapias.
antígeno presente en la
muestra. Luego, se mide la Estudios Farmacocinéticos: Se
radiactividad del complejo utiliza en farmacología para
utilizando un contador de estudiar la absorción, distribución,
radioactividad, lo que metabolismo y excreción de
permite cuantificar la fármacos en el organismo,
concentración del antígeno determinando sus concentraciones
en la muestra original. en sangre u otros fluidos
biológicos.

Análisis Ambiental y Alimentario:

Puede aplicarse para detectar
contaminantes, toxinas y
sustancias químicas en muestras
ambientales, como agua y suelo,
así como en alimentos y piensos.
Westernblot Es una técnica bioquímica Separación por Investigación biomédica: El Western blot ha evolucionado con
e inmunológica utilizada electroforesis: Primero, las Para estudiar la expresión de mejoras en la sensibilidad, automatización
para detectar proteínas proteínas en una muestra
específicas en una se separan según su
proteínas en diferentes y detección. Se han desarrollado variantes
muestra, basándose en la tamaño mediante condiciones fisiológicas o como el "mini Western blot" para análisis
separación por electroforesis en gel de patológicas. rápidos de muestras, y se han mejorado los
electroforesis y la poliacrilamida (PAGE). Esto métodos de transferencia y detección para
detección con anticuerpos. permite la separación de las
Diagnóstico de aumentar la eficiencia y precisión de la
proteínas en función de su
peso molecular.
enfermedades: En el análisis técnica. Además, se ha integrado con
de muestras clínicas para técnicas como la inmunoprecipitación y la
Transferencia a una detectar marcadores proteómica para estudios más avanzados
membrana: Después de la proteicos de enfermedades de proteínas y sus interacciones.
separación por como el VIH, cáncer, etc.
electroforesis, las proteínas
se transfieren ("blotting")
desde el gel a una Validación de anticuerpos:
membrana de nitrocelulosa Para confirmar la
o PVDF. Esto se logra especificidad y sensibilidad
aplicando una corriente de anticuerpos utilizados en
eléctrica para que las
 proteínas migren desde el otras técnicas como ELISA o
gel hacia la membrana. inmunofluorescencia.
Detección con anticuerpos:
La membrana se incuba con Estudios de expresión
anticuerpos primarios génica: Para evaluar la
específicos que se unen a la expresión de proteínas
proteína de interés. Luego, codificadas por genes de
se añaden anticuerpos
secundarios marcados con
interés.
enzimas o fluorocromos
que permiten visualizar la
presencia de la proteína
específica.

Revelado y detección:
Finalmente, se agrega un
sustrato para la enzima o se
detecta la fluorescencia
para revelar la presencia de
la proteína en la
membrana. Esto genera
una señal que se puede
capturar y analizar,
indicando la presencia y
cantidad de la proteína de
interés.
Quimioluminiscencia Implica la detección de Se basa en la producción de
la luz emitida durante luz por la liberación de
una reacción específica energía durante una
entre un anticuerpo y reacción química. En el
contexto inmunológico, se
un antígeno, utilizando
utiliza principalmente en
sustratos que generan ensayos inmunológicos
luz como resultado de la basados en la unión de
reacción enzimática. anticuerpos a antígenos.
Cuando un anticuerpo se
une a su antígeno objetivo
en presencia de sustratos
quimioluminiscentes, se
desencadena una reacción
que libera energía en forma
de luz detectable.
Diagnóstico médico: Se utiliza para La quimioluminiscencia en inmunología ha
detectar la presencia de evolucionado con el desarrollo de sustratos
marcadores biológicos, como quimioluminiscentes más sensibles y
antígenos virales o anticuerpos, en específicos, sistemas de detección mejorados
muestras clínicas como sangre,
(como detectores de fotones), y la
suero o saliva. Esto es útil en el
diagnóstico de enfermedades
automatización de los ensayos para mayor
infecciosas, autoinmunes y eficiencia y precisión. Además, se han diseñado
alérgicas. kits comerciales que facilitan su aplicación en
laboratorios clínicos y de investigación.
Investigación biomédica: Es una
herramienta fundamental en la
investigación de la respuesta
inmunitaria, la función de los
anticuerpos y antígenos, así como
en el desarrollo de nuevas terapias
y vacunas.
Control de calidad en la industria
farmacéutica y de alimentos: Se
utiliza para verificar la presencia y
cantidad de componentes
específicos en productos
farmacéuticos, alimentos y
bebidas, garantizando su seguridad
y calidad.

Detección de biomarcadores en
investigación clínica: Permite
cuantificar la expresión de
biomarcadores asociados con
enfermedades como el cáncer,
enfermedades autoinmunes y
trastornos metabólicos.