Prueba Citrato de Simmons
de agua destilada
El agar citrato de Simmons es un
medio sólido utilizado como prueba
bioquímica de identificación de
microorganismos, especialmente de
bacilos gramnegativos.
El agar citrato de Simmons es usado
para identificar ciertos
microorganismos, en especial los
bacilos pertenecientes a la familia
Enterobacteriaceae y otros bacilos no
fermentadores de glucosa.
Fundamento. Microorganismos
capaces de utilizar fosfato de amonio
y citrato de sodio como única fuente
de nitrógeno y carbono
respectivamente crecen en este
medio produciendo una reacción
alcalina y evidenciando un cambio de
color por la presencia de un indicador
azul de bromotimol cambiando el
medio de verde a azul.
Metodología.
Se eligieron tres placas Petri
contaminadas (las cuales contenían
agar nutritivo) para elegir tres
colonias para su identificación
bioquímica. Se utilizaron 7 tubos de
ensayos, 6 para las pruebas y uno
como blanco. Utilizamos el medio de
cultivo deshidratado Agar Citrato de
Simmons. Se realizaron por
duplicados por cada colonia las
pruebas bioquímicas.
Preparación del medio de cultivo
deshidratado Agar Citrato de
Simmons.
Se peso en la balanza analítica 24. 2
g del medio de cultivo deshidratado
Agar Citrato de Simmons para 800 ml
(Ilustración 1). Se
dejo reposar de 10 a
15 minutos. Una vez
pesado agregamos Ilustración 1 Agar
una pequeña cantidad Citrato de Simmons.
de agua destilada en
una botella graduada y agregamos el
medio de cultivo, vertimos el resto de
agua destilada y agitamos con una
varilla de vidrio.
Calentamos en un
termo agitador hasta
el punto de ebullición
durante 1 minuto para
disolverlo por Ilustración 2 Calentando
en el termo agitador.
completo (Ilustración
2).
Se esterilizo el medio de cultivo a una
temperatura de 121 °C y a una
presión de 15 PSI. en la autoclave
durante 15 minutos.
Posteriormente, se dejó que bajara la
temperatura, para agregarlo en los
tubos de ensayos. Agregamos el
medio de cultivo cerca del
mechero de Busen, en los
7 tubos de ensayo se
agregaron 3 ml del medio
de cultivo.
Se dejo solidificar en
posición inclinada de
manera que el medio en el fondo del
tubo alcance una profundidad de 1.0
a 1.5 cm (Ilustración 3).
Ilustración 3 solidificación
en posición inclinada
 Siembra Koneman, E. et al. 2003. “Diagnóstico
Microbiológico”. Argentina. 5ª edición.
Se tomaron tres colonias de las tres
Editorial Médica Panamericana.
placas Petri contaminadas, se tomó
Varias p.
una muestra de la colonia
con asa de siembra Gil, M. (2023, 31 marzo). Agar citrato
estéril, se inocula el agar de Simmons. Lifeder.
de superficie inclinada con https://www.lifeder.com/agar-citrato-
una sola estría en la de-simmons/
superficie.
Incubación
Se incubaron los tubos de ensayos
por 24 horas a una temperatura de 37
°C (Ilustración 4).

Ilustración 4
Incubación
Resultados.
La prueba dio como resultado
negativo, en las tres colonias, ya que
se obtuvo ausencia de crecimiento y
permanencia del color verde del
medio de cultivo en el término de 24
horas, lo que indica que no se obtuvo
metabolismo del citrato con formación
de productos alcalinos en ninguna de
colonias. Como se muestra en
siguiente tabla (tabla 1).
Tabla 1 Resultados de la Prueba Citrato de Simmons

Colonia Colonia Colonia Blanco

1 2 3

Citrato
de
Simmo
n

Bibliografia