MULTIPUNTO

COMO GRAFICAR EN EL EQUIPO

¿CUÁL ES EL FILTRO IDEAL?

Cada solución coloreada tiene un filtro ideal para poder leer:

 Glucosa: color rojo fresa y el filtro es de 550 nm
Albúmina, color verde, filtro es de 600 nm

Elegimos cuál es el filtro ideal, Ej: Absorbancias leídas en el filtro 405 nm,
colocamos en las abscisas las concentraciones y en las ordenadas las
absorbancias. A mayor concentración mayor absorbancia
 Graficar en el Equipo, Aplicando MULTIPUNTO

 Oprimir PGM (4)

 Seleccionar el filtro (en este caso el 2 de 405 nm donde se
produjo mayor absorbancia
 Oprimir Enter
 Oprimir tecla No o 0
 Oprimir Enter (sale en pantalla Sample Blank)
 Oprimir tecla No
 Graficar en el Equipo, Aplicando MULTIPUNTO
 Sale en pantalla Standares (colocar cuantos standares se tiene Ej: 3

 Enter 1 valor – Enter 2 valor – Enter 3 valor – Enter

Sale Código de unidades en pantalla – Orpimir No
 Enter – Conc – No
Doble Enter – sale Rangos – Oprimir No
 Sale en pantalla Read Blank Tube – Leer el blanco
Leer los standares (que son las diferentes disoluciones)
Sale en pantalla Plot curve – Oprimir Yes y grafica
Oprimir 2 veces Clear
Para Guardar se procede de la siguiente manera:
Se realiza la práctica de punto final para Glucosa sin oprimir Clear
Se procede de la siguiente manera:
 Oprimir Alt (sale en pantalla Save test Y/N=Guardar o no guardar)
 Oprimir Yes – Sale en pantalla Nombre – Oprimir Yes (aparece el alfabeto)
 Oprimir las teclas 4 hacia la izquierda y 6 hacia la derecha
Oprimir Enter para cada letra y formo en este caso la palabra Glucosa
Ir al espcio en blanco – Oprimo 2 veces Enter (sale el número del test, Ej: 5 y
ya está grabado
 Si necesito volver a ver – Oprimir Test y el número donde se ha grabado
 Longitud de onda

Es la distancia lineal entre dos puntos equivalentes de ondas sucesivas, y se

miden en nm (nanómetros)
1m = 10° = 1m
1 cm = 10-2 = 0,01 m
1 mm = 10-3 = 0,001 m
1 µm = 10-6 = 0,000001 m
1 nm = 10-9 = 0,000000001 m
Efecto Fotoeléctrico

Es la transformación de luz en electricidad

E=hxv v= c/
 Efecto Fotoeléctrico

• E = Es la Energía de u fotón de luz

• h = Constante de Plank = 6.626 x 10 -34 Julios/seg
• c = Velocidad en el vacio = 3 x 10 8 m/seg
• = Longitud de onda
Efecto Fotoeléctrico
Calcular la Energía de un fotón de luz visible de 505 nm de longitud de onda

6,626 x 10-34 J/s x 3x10 8 m/s 19,878 x 10 -26 J

E= = = 0,0394 x 10-17 J
505 nm x 10-9 m 505 x 10-9
1 nm
PROCESO ANALÍTICO
¿Cómo se divide el Proceso Analítico?

 Preanalítica: comprende la fase desde la

preparación del paciente y toma de muestra
hasta la preparación de ésta para su análisis

 Analítica: abarca todos los procedimientos

relacionados con la medida de la magnitud
que se estudia.

 Postanalítica: Incluye la elaboración del

informe analítico y envío al médico solicitante.
Fase Preanalítica
 El tiempo que transcurre entre la petición de
las determinaciones analíticas por parte del
clínico y el análisis de la muestra es lo que se
conoce como fase preanalítica. Una
preparación correcta del paciente, así como
una correcta extracción del espécimen,
cumplimentación de peticiones, transporte,
identificación, preparación para su análisis
etc., son aspectos fundamentales en esta fase.
Etapas de la Fase Preanalítica
1.- Solicitud del Análisis por parte del Clínico

Revisar la papeleta o solicitud del medico:

 Identificación de la petición: a ésta se le asigna un código de

identificación (número de petición, número de volante) que la identifica
inequívocamente en el sistema del que procede.
 Tipo de petición: ordinaria o urgente. Normalmente el tipo de petición
condiciona una logística diferente.
 Datos de filiación del paciente: son los que identifican inequívocamente al
paciente y lo relacionan con otros datos. Ejemplo: nombre, apellidos,
número historia, número de la S.S., etc.
Etapas de la Fase Preanalítica
 Datos clínicos y demográficos: son necesarios para la correcta interpretación de los
resultados, para llevar a cabo estudios complementarios, revisar la congruencia de los
resultados y realizar recomendaciones desde el laboratorio. Ejemplo: fecha de
nacimiento, sexo, diagnóstico y otras informaciones en función de las pruebas
solicitadas.

 Datos administrativos de la solicitud: indican de qué persona y organización procede la

solicitud, a dónde se envía el informe y quién se hace cargo administrativamente de la
petición (médico, procedencia, destino, etc.).

 Pruebas o estudios solicitados: Aquí se indica qué pruebas o grupos de pruebas se desea
realizar y sobre qué espécimen; por ejemplo: glucosa en suero, amilasa en orina.
Etapas de la Fase Preanalítica
2.- Registro de Datos

La entrada de datos al SIL es otro paso crítico.

Cualquier error a este nivel va a repercutir
directamente en la veracidad del resultado y por
otro lado la propia velocidad de entrada de estos
datos va a condicionar toda la logística del
laboratorio, ya que hoy en día no se puede
comenzar ningún procesamiento de las muestras
hasta que los datos no estén en el SIL. Por estos
motivos se tiende a utilizar sistemas cada vez más
rápidos y fiables.
Etapas de la Fase Preanalítica

3.- Extracción de la Muestra

 Una vez realizada la solicitud, éste debe de
acudir al lugar de extracción de muestras. En
otros casos, como en el de los pacientes
ingresados, es el personal de enfermería el que
se desplaza al lugar donde se encuentra el
paciente.
Etapas de la Fase Preanalítica

4.- Etiquetado de la Muestra

Una vez obtenidas las correspondientes
muestras, se les colocan etiquetas con el número
de identificación que corresponde a la solicitud.
Las etiquetas contienen números o códigos de
barras, fecha, iniciales o nombre completo del
paciente.
Etapas de la Fase Preanalítica
5.- Distribución del trabajo
 Dependiendo del análisis que se va a realizar se distribuye
la muestra a la sección correspondiente (inmunología,
serología, hormonas, etc)
 Una vez que se dispone de la muestra preparada
adecuadamente en el área o laboratorio que va a realizar
los análisis, el SIL puede emitir listas u hojas de trabajo que
indiquen qué pruebas se van a realizar en esa área o
equipo.
Etapas de la Fase Preanalítica
Cuando la muestra (s) se debe(n) obtener fuera del laboratorio, se
adicionan los siguientes pasos, una vez que se ha leído la solicitud
del médico y se ha extraído la muestra:
6.- Transporte de Muestras

Una vez realizada la extracción, los diferentes especímenes deben

ser organizados por códigos de procedencia para facilitar un
reconocimiento rápido y efectivo durante el transporte y posterior
recepción de estos.
Etapas de la Fase Preanalítica

 Después de asegurar que los especímenes están

correctamente identificados, se envían en gradillas, de
forma ordenada según códigos de barras y tipo de tubo y
en posición vertical para evitar interferencias de diverso
tipo. Algunos tipos de muestras especialmente sensibles
es posible que necesiten además sistemas de
refrigeración, recipientes especiales para protegerlas de
la luz, etc.
Etapas de la Fase Preanalítica

Existen una serie de normas generales establecidas para cada tipo de

espécimen:
 Sangre: los especímenes de sangre deben ser recibidos por el
personal del laboratorio en 1-2 horas como máximo desde la
extracción. Durante su transporte, ha de evitarse la agitación (por la
posible hemólisis) y se deben proteger de la exposición directa a la luz
(debido a la degradación de algunos constituyentes, como la
bilirrubina).
Etapas de la Fase Preanalítica

 Para la determinación de algunos parámetros inestables

(lactato, amonio, renina plasmática, fosfatasa ácida, ...) los
especímenes deben mantenerse refrigerados a 4 ° C,
inmediatamente después de la toma, y deben transportarse en
hielo.

 Los tubos de sangre deben estar en posición vertical durante su

transporte, con el tapón hacia arriba, lo que favorece la
formación completa del coágulo y reduce la agitación del
contenido del tubo.
Etapas de la Fase Preanalítica

 Orina: los especímenes para análisis de orina se

recogen y transportan en contenedores de plástico
estériles y desechables (de unos 200 ml). La orina de
pacientes pediátricos se recoge en bolsas flexibles de
polietileno, que pueden sellarse para el transporte.
Etapas de la Fase Preanalítica
 Heces: se puede transportar en los contenedores para
orina citados anteriormente.

 Si un espécimen externo no puede enviarse al laboratorio

en un momento determinado, se deberá centrifugar para
separar el suero o plasma de las células y guardar en
condiciones adecuadas hasta que pueda ser llevado al
laboratorio.
Etapas de la Fase Preanalítica
7.- Recepción y distribución de Muestras
 En primer lugar se hace una recepción que supone la aceptación de
la solicitud y las muestras. Para ello debe hacerse una inspección
física de las muestras y su identificación, se controla el tiempo
transcurrido desde la extracción y la temperatura a la que han
permanecido las muestras.
 Aquí se registran las incidencias detectadas, las horas de llegada, el
registro de la presencia de la muestra, peticiones incongruentes o
redundantes, protocolos inadecuados, etc.
 Una vez aceptadas las muestras y solicitudes, las muestras deben
ser clasificadas, centrifugadas en caso necesario, destaponadas, y si
es necesario alicuotadas subfraccionadas en varios contenedores).
Etapas de la Fase Preanalítica
Factores Fisiológicos
 Edad: algunas magnitudes presentan diferentes valores según la edad,
por lo que es importante conocer la edad del paciente para poder
interpretar correctamente un resultado. Ej.- Una fosfatasa alcalina con
niveles patológicos para un adulto es normal para un niño en edad de
crecimiento; el número de hematíes, hemoglobina y hematocrito se
encuentra más elevado en neonatos que en adultos; los niveles normales
de PSA son superiores en ancianos mayores de 65 años, etc.
 Sexo: algunas magnitudes como CK, mioglobina, creatinina, ácido úrico
etc. presentan diferencias según el sexo del paciente.
Etapas de la Fase Preanalítica
 Embarazo: diversas magnitudes se ven afectadas por un efecto de “dilución” producido
por el aumento del volumen plasmático, aumenta el aclaramiento de creatinina. Se
produce un incremento de los niveles séricos de lípidos(colesterol, triglicéridos, etc. ).

 Ciclos biológicos: es importante informar sobre el momento del ciclo en que se extrae la
muestra ya que ciertos parámetros pueden variar siguiendo ritmos biológicos. Así, las
hormonas sexuales varían a lo largo del ciclo menstrual(FSH, LH, estradiol, etc.).

 Estación: algunos parámetros varían según el periodo estacional. Así, los niveles de
vitamina D se incrementan en verano.

 Altura: algunos parámetros como la hemoglobina aumenta con la altura.

 Estilo de vida: el tipo de dieta, consumo de café, alcohol, tabaco, etc. También son
variables fisiológicas a tener en cuenta.
Etapas de la Fase Preanalítica
Factores que Influyen en al toma de Muestra:
 Ayuno: como norma general se recomienda un ayuno de 8 horas previo a la
extracción. Además, hay determinaciones que exigen una dieta especial en los
días previos. En estos casos se proporcionará al paciente instrucciones claras.

 Tiempo de aplicación del torniquete: si se mantiene más tiempo de lo

recomendable (1-2 minutos) puede producirse una hemoconcentración, con el
consiguiente aumento de determinados parámetros.

 Pacientes con sueros terapéuticos: se recomienda, en la medida de lo

posible,que se extraiga la muestra del brazo opuesto al que se tiene la infusión.
Etapas de la Fase Preanalítica
 Ejercicio intenso: realizar ejercicio intenso en los días previos a la toma demuestra
puede alterar ciertos parámetros como los niveles de CK, Lactato, etc.

 Anticoagulantes: es importante el uso del anticoagulante adecuado según la

prueba a determinar (EDTA para hematimetría, citrato para coagulación básica,
Heparina litio para determinaciones bioquímicas…). Además se debe conocer la
sal en la que se presenta el anticoagulante (sódica, potásica, etc.) y las
interferencias que puede presentar en ciertos parámetros. Es fundamental
mantener la proporción adecuada entre la cantidad de sangre y el anticoagulante,
ya que si no se mantiene se invalida la muestra.
Etapas de la Fase Preanalítica
Errores en la Fase preanalítica Extra laboratorio:
 Solicitud de análisis por parte del médico clínico: elección de la magnitud,
información precisa.

 Características y condiciones previas del paciente: edad, sexo, biorritmo, estado

físico, ayuno, reposo, hábitos alimentarios y tóxicos, medicación.

 Obtención del espécimen: identificación del espécimen y del paciente, tubos y

contenedores apropiados, orden correcto de llenado de los tubos, evitar la
contaminación de las infusiones intravenosas.

 Transporte al laboratorio.
Etapas de la Fase Preanalítica
Errores en la Fase Preanalítica Intra – Laboratorio
 Registro administrativo: entrada de datos del paciente y peticiones.

 Almacenamiento: tiempo de espera de las muestras hasta su manipulación.

 Centrifugación.

 Distribución y alicuotado.

 Preparación de especímenes.

 Elección del espécimen correcto.

Etapas de la Fase Preanalítica
Entre las posibles causas de error se pueden citar:
 La medicación administrada al paciente y una mala preparación del mismo para la magnitud
a medir.

 La extracción incorrecta de la muestra: estasis venoso, toma de una vía, higiene

defectuosa.

 La recogida en recipiente inadecuado, conservante incorrecto, contaminación por arrastre

en el llenado de los tubos.

 El transporte y almacenamiento sin las condiciones adecuadas o de duración prolongada,

que puede alterar las condiciones físico-químicas de las muestras o deteriorarlas.

 La centrifugación insuficiente o excesiva.

 La demora en la medida de la magnitud o la mala preparación del espécimen

Trazabilidad de las Muestras
 Las normas legales y administrativas y los sistemas de calidad nos
obligan a que todo el proceso de laboratorio sea “rastreable”, de tal
manera que el sistema permita reconstruir todo lo acontecido desde
que se realiza la solicitud hasta que se recibe o se ve el informe.
 Esto supone conocer qué persona o instrumento ha llevado a cabo
cualquier acción en todo el proceso, el momento en que ha ocurrido y
el resultado de la acción.
 Algunos ejemplos serían: quién y cuándo se hizo la solicitud, quién y
cuándo obtuvo la muestra y cuántos tubos se extrajeron, quién y
cuándo realizó el fraccionamiento de una muestra(alícuota) y cuántas
fracciones (alícuotas) se obtuvieron, cuándo ha entrado una muestra
en un determinado analizador y qué pruebas se le solicitaron, etc.
Fase Analítica
 Recurso humano: La primera y por lo tanto la más importante es
la competencia del personal con base en su educación, formación,
habilidades y experiencia.

ANALISIS DE MUESTRA SANGUINEA

 Reactivos: la calidad, la estabilidad, la cadena de frío y la caducidad

de los reactivos son aspectos claves por donde se empieza a
garantizar un buen resultado en la etapa analítica.

 Equipos: la calibración, verificación y mantenimiento de los equipos

son fundamentales, y son fuente de no conformidades, especialmente
porque se manejan con un erróneo criterio de contención de costos.
Procesamiento de la Muestra, Realización
del Análisis

 La realizan el personal del Laboratorio, técnicos y

Químicos.
 Consiste, cuando la Muestra está preparada para
su proceso, hay que tener en cuenta los
siguientes factores:
Reactivos:
 Material de vidrio
 Equipo
 Soluciones de control
 Métodos de confiabilidad y aplicabilidad
Fase Post-Analítica
Interpretación de los resultados
La realizan el personal del laboratorio técnicos y químicos.
Incluye:
 Confirmación de los resultados
 Intervalos o rangos de referencia de la población,
 La puntualidad o prontitud en la entrega de los resultados,
 El informe del laboratorio el formato establecido, la
confidencialidad de la información de los resultados.
PRUEBAS CINÉTICAS
O ENZIMÁTICAS
¿Qué son?
■ Son métodos donde se produce una reacción,
donde el NAD reducido para a NAD oxidado,
este cambio es medido a 340nm en dos
tiempos diferentes, un tiempo de prelectura y
el segundo tiempo de lectura del metabolito
analizado
Dentro de las pruebas Cinéticas, tenemos 2 tipos de pruebas
importantes y más utilizadas:
1. Métodos Cinéticos Estándar: Son aquellos que utilizan un
patrón de referencia para poder comparar y saber la
concentración del metabolito a analizar. Entre estos
tenemos Urea Y Creatinina
2. Métodos Cinéticos Factor: Son aquellos que van a utilizar un
factor para poder tener la concentración del metabolito a
analizar. Dentro de estas tenemos: las Transaminasas GOT,
GPT, Fosfatasa alcalina, GGT. Enzimas cardíacas: CPK,
CKMB, LDH
Práctica: Urea
Método cinético Ureasa
Urea o Nitrógeno ureico en sangre.-
La Urea es el resultado final del metabolismo de las
proteínas, se forma en el hígado a partir de la
destrucción de las proteínas.
Durante la digestión las proteínas son separadas en
aminoácidos, estos contienen N que se libera como
ión amonio y el resto de la molécula se utiliza para
generar energía en las células y tejidos.
Práctica: Urea
Método cinético Ureasa
El amonio se une a pequeñas moléculas para producir
Urea, la cuál aparece en la sangre y es eliminada por
la orina. Si el riñón no funciona bien la Urea se
acumula en la sangre y se eleva su concentración.
Es un parámetro que indica la función renal.
Enfermedades como la glomerulonefritis aguda, la
nefritis crónica, el riñón poliquístico y la necrosis renal
elevan el nitrógeno ureico.
 Objetivos:
■ Aplicar el manejo adecuado de la técnica para la
determinación de urea en una muestra biológica
■ Establecer los valores de referencia de la urea y
comparar con el valor de nuestra muestra problema
a analizar.
■ Definir cuales son las principales patologías que se
presentan si tenemos valores altos o bajos de urea
en una muestra biológica.
Fundamento del método
■ La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea dando amonio y CO2. El amonio formado
se valora mediante una reacción enzimática (GLDH), pasando NADH a NAD+ . La
disminución de la absorbancia frente al tiempo es proporcional a la concentración
de urea.
Ureasa
Urea + H2O +2H+ 2 NH3 + CO2

GLDH
2NH3 + α-cetoglutarato + 2NADH H2O + NAD+ 2L-glutamato
Preparación
Muestra Clínica
Suero o Plasma
Material necesario:
1 Micropipeta de 1 mL
1 Micropipeta de 200 µL.
1 Piseta con agua destilada
2 Celdas de plástico de 3 ml
5 Tubos de vidrio de 13X100
Puntas para micropipeta.
Gradilla.
Procedimiento:
Equilibrar los reactivos a la temperatura de trabajo antes de agregar la
muestra.
Llevar a cero con agua destilada.
En una cubeta mantenida a temperatura de trabajo colocar: Reactivo de
trabajo 1ml, y estándar 10 µL.
Mezclar inmediatamente (sin invertir) y disparar simultáneamente un
cronómetro. A los 60 segundos exactos medir la absorbancia (D1 o S1 )
y continuar la incubación. Medir nuevamente la absorbancia (D2 o S2 ) a
los 120 segundos (60 segundos después de la 1° lectura). Determinar la
diferencia de absorbancia (∆A). Utilizar esta diferencia para los
cálculos.
 Procedimiento:
Equipo: Fotocolorímetro a 37°C con filtro de 340nm

BLANCO ESTÁNDAR MUESTRA

ESTÁNDAR 10 µL
MUESTRA 10 µL
REACTIVO 1 gta 1 gta 1 gta

Estándar: Solución de Urea 0,60g/l (28,04mg/dl de BUN)

Reactivo 1: Viales conteniendo2-oxoglutarato,NADH,ureasa y glutamato deshidrogenasa)
Reactivo 2: Solución de buffer pH 7,8

Mezclar por agitación e incubar por 5 minutos a 37°C

Procedimiento:
Luego agregar:
Reactivo 1 1ml 1ml 1ml……..
Reactivo 2 1ml 1ml 1ml……..

Mezclar por agitación suave e incubar 5 minutos a 37°C

Luego agregar:
Agua Destilada 10ml 10ml 10ml……..
Mezclar por inversión retirando del baño, tiempo de reacción 2 minutos
Después de 10 minutos leer en el fotocolorímetro
 Cálculo de Resultados

0,60 g/l

Urea (g/l) = f x (D1 - D2 ) f =

(S – S )
1 2
 TÉCNICAS DE
COLORIMETRIA PUNTO
FINAL
Tenemos 2 tipos de pruebas más
importantes:

a.PRUEBAS DE PUNTO FINAL

b.PRUEBAS CINÉTICAS O
ENZIMÁTICAS
 PRUEBAS DE PUNTO FINAL
¿Qué son?
Son aquellas pruebas donde el analito reacciona con un sustrato
o reactivo y se lee después que ha pasado un determinado
período, todos estos procedimientos están estandarizados en un
tiempo determinado, Ej: Glucosa 10´, Proteinas 5´, Colesterol –
Triglicéridos 5´.
Cada uno de estos reactivos son específicos para cada uno de los
metabolitos que se van a analizar.
Dentro de estas pruebas tenemos algunos reactivos que
necesitan una temperatura de 37°C y otros que son a temperatura
ambiente, por eso es necesario leer los prospectos.
 ¿Porqué se llaman Pruebas de Punto
Final?

Porque se incuba la muestra y el reactivo durante

un tiempo determinado y a una temperatura
determinada para que se complete totalmente la
reacción, si no fuera así y quedase parte de la
sustancia sin consumir, al medir el producto,
estaríamos midiendo menos cantidad de la que
realmente hay; POR TANTO SE MIDE AL FINAL
DE UN TIEMPO FIJO DE INCUBACIÓN
¿Cómo sabemos que un determinado
paciente diabético su Glucosa es
150mg/dl?

¿QUÉ NECESITAMOS?
La mayoría de las pruebas de Punto Final
necesitan un patrón o estándar de
comparación que viene en el prospecto,
el reactivo y la muestra
 PRÁCTICA PARA DETERMINACIÓN DE
GLUCOSA
Lo más importante en estas pruebas es tener todos los reactivos y el
material adecuado para la determinación
MATERIALES
Fotocolorímetro
Reactivo de trabajo
Muestra
Estándar
Tobo de hemólisis
Gradilla
Pipeta automática
 PROCEDIMIENTO

MÉTODO PUNTO FINAL

1.Limpiar los tubos uno por uno
2.Seleccionar los tubos buenos y desechar los tubos
rayados
3.Numerar los tubos de cada uno de los pacientes
4.Colocar 1ml del reactivo a cada uno de los tubos
5.Colocar el Estándar o Patrón 0,01 ml al tubo respectivo
6.Colocar la muestra 0,01ml al tubo respectivo
 BLANCO TEST ESTANDAR

MUESTRA ------------------- 0,01 ml -------------------

ESTANDAR --------------------- -------------------- 0,01 ml

REACTIVO 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml

 PROCEDIMIENTO
6. Incubar en baño maría por 10 minutos a 37°C. El nivel del
agua en el baño debe ser superior al nivel de los reactivos en
los tubos de ensayo.
7. Determinar las absorbancias del test y Estandar a
Longitud de onda de 550 nm después de los 10 minutos,
ajustando el cero con el blanco, el color es estable por 30
minutos
8. El equipo encender 10 minutos antes
9. Se van a leer todas las muestras y estándares: Clic en Abs
– Leer el Blanco o Reactivo – Leer en Estándar dos veces –
Leer las muestras – Hacer los cálculos.
CÁLCULOS
Absorbancia del test
Glucosa (mg/dl) = x 100
Absorbancia del Estándar

También se puede emplear el método del factor

100
Factor de Calibración =
Absorbancia del Estándar

Glucosa (mg/dl)= 0,362 x 294 = 106 (0,362 Abs del test, 294 Factor de calibración)