Ambiente y Monitoreo Ambiental

Departamento de Química
Profesora: María Soledad Astorga

Laboratorio N°2
“DETERMINACIÓN DE COLIFORMES EN AGUA
DE MAR”

Integrantes: Diego Mendoza Vidal

Fecha de entrega: 14/09/2023

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Profesora: María Soledad Astorga

Introducción:
La determinación de coliformes en agua de mar es un proceso esencial para evaluar la
calidad microbiológica de este recurso natural. Los coliformes son un grupo de bacterias
que se encuentran comúnmente en el intestino de mamíferos, incluyendo a los
humanos, y su presencia en el agua de mar puede indicar la posible contaminación por
materia fecal u otros contaminantes orgánicos. Para este laboratorio vamos a explorar
el método de filtración por membrana en agar Chromocult que es una técnica
comúnmente utilizada en microbiología para evaluar la calidad del agua. Y también
discutiremos de los resultados obtenidos.

Objetivos:
• El Objetivo principal de este estudio fue determinar la concentración de
coliformes en el sector costero de Punta Arenas.

Ubicación de la muestra:
Sector costero de la región de Punta Arenas, para ser más específicos en las
coordenadas 53°09'42.8 S 70°53'19.9 W, donde se realiza el “Chapuzón del estrecho”
evento que se realiza todos los años desde 2008 y cual por temas de la pandemia covid-
19 no se realizo en los años 2020 y 2021, para retomarse nuevamente en los años 2022
y 2023 del vigente año.

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Hipótesis:
• Si el agua de mar donde se realiza el chapuzón no recibe descargas de residuo
líquido, entonces no debería contener coliformes fecales.
• Si bien el sector no recibe descargas de residuo líquido, puede contener un
mínimo de coliformes fecales por ubicarse cerca de la desembocadura del rio de
las minas, las cuales podrían desplazarse por las corrientes marinas.

Metodología:
La determinación de Escherichia coli y coliformes totales en agua mediante el método
de filtración por membrana en agar Chromocult es una técnica comúnmente utilizada
en microbiología para evaluar la calidad del agua.
La filtración por membrana es el mecanismo mediante el cual se atrapan en la
superficie de la membrana microorganismos cuyo tamaño es mayor que el tamaño del
poro 0.45 um, esto gracias a que una bomba eléctrica ejerce una presión diferencial
sobre la muestra de agua haciendo que se filtre. Los contaminantes de tamaño menor
que el específico del poro atraviesan la membrana o se quedan retenidos en su interior,
las bacterias quedan en la superficie de la membrana y luego está es llevada a un medio
de enriquecimiento selectivo, en el IDEAM se utiliza el medio de cultivo Chromocult el
cual promueve el crecimiento y la identificación.
El medio de cultivo contiene el sutrato Salmon GAL – 6 cloro – 3 indol y βD
galactopiranosido es un sustrato cromogénico que es usado para la detección de la
enzima galactosidasa de colonias bacterianas en un ensayo colorimétrico; que da como
resultado el cambio de la colonia a un color rojo salmón. Esta reacción se observa
cuando hay coliformes totales. Para diferenciar la E.coli de los coliformes totales se
hace por medio del sustrato cromogénico X-Glucorósido, que reacciona con la enzima
glucoronidasa pero estas también reaccionan con el Sustrato Salmón- GAL produciendo
un color azul - violeta en la colonia.

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Resultados:
Los volúmenes de agua de mar que se usaron para su filtración fueron de 1ml y 10ml,
los cuales se diluyeron con agua destilada hasta un volumen de 100ml.

También se recomiendan los intervalos de colonias que se pueden contar sobre un filtro
que son los de la tabla siguiente:

Microorganismo Numero de colonias

Indicador 1ml 10ml
Coliformes Fecales 1 1
E.coli 1

Discusión:
Podemos ver que, si hubo facilidad a la hora de obtener y analizar
los resultados, ya que, si se pudieron obtener los resultados
esperados, al tener un numero contable de coliformes totales en
las dos filtraciones de agua. Esto puede ser por que donde se sacó
la muestra, está alejado de la desembocadura del alcantarillado.
También puede ser por que la zona donde se sacó la muestra fue
en el sector costero de la costa y no a la profundidad del mar,
donde por lo tanto el número de coliformes fecales y de E.coli
podrían haber sido más elevados.

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Conclusión:
Se puede comprobar que la hipótesis para este muestreo es
válida, ya que, se pudo determinar mediante un muestreo
realizado en la zona, el cual posteriormente se analizó en el
laboratorio por medio de filtración por membrana en agar
Chromocult el cual es un sustrato cromogénico que es usado para
la detección de la enzima galactosidasa de colonias bacterianas, la
que posteriormente resulto en tener una colonia de coliformes
totales.