Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Bioquímica
Omar Olin García Frías
Victor Manuel Guzmán Santos
3IV2 Sección 1

“Determinación de aminoácidos terminales con

grupo alfa amino libre por el método de sanger”
Objetivos:
 Identificar el aminoácido alfa-amino terminal de las cadenas de la
hemoglobina mediante el método de Sanger.
Resultados:

Cálculo del Rf
Muestra Frente del disolvente(cm) Frente fase móvil(cm) Rf
42 27 0.6428
Problema
42 17 0.4047
DFNB 41.7 18 0.4316
Fenilalanina 41.5 23.5 0.5662
Valina 41.2 27.1 0.65
Alanina 41 21.3 0.5195

Discusión:
Para reaccionar el reactivo de Sanger con la hemoglobina, se añade bicarbonato
de sodio para desprotonar el grupo amino y permitir que ataque nucleofílicamente
al carbono del péptido. Se detiene la reacción de dinitrofenilación al crear un
ambiente básico y luego se reintroducen protones con ácido clorhídrico para
estabilizar. El exceso de compuesto no reaccionado se elimina mediante
 extracciones con éter, utilizando sulfato de cobre como inhibidor para prevenir la
formación de peróxidos. Después, se separan los aminoácidos hidrolizando en un
medio ácido a alta temperatura y presión. El aminoácido dinitrofenilado se aísla
mediante extracción con éter. Luego se elimina el éter y se identifica el aminoácido
terminal mediante cromatografía descendente, donde se determina que la valina
es el aminoácido terminal de la hemoglobina, gracias a su similitud en las
distancias recorridas y el Rf calculado, que corresponde a lo reportado en la
literatura, aunque también se observa la presencia de DNFB, indicando una
posible deficiencia en la eliminación de este durante el proceso.
Conclusiones
Se ha demostrado prácticamente, gracias al cromatograma y los correspondientes
cálculos de Rf, que la hemoglobina posee al aminoácido N-(2,4-Dinitrofenil)-L-
valina como aminoácido alfa amino terminal.
Bibliografía

 Shendure J, Ji H (2008). "Next-generation DNA sequencing". Nature

Biotechnology. 26 (10): 1135–1145. doi:10.1038/nbt1486
 França, L. T. C. (2002). «A review of DNA sequencing techniques.». Quarterly Reviews
of Biophysics
 Christopher K, Ahern, G.; González de Buitrago, J.M , (2002). Bioquímica. Addison
Wesley.
 Lehninger, 2000. Principios de bioquímica. Omega, Barcelona.
 Pato P., 2008. Bioquímica II. Alfa, Buenos Aires.