RETICULOCITOS

ONTOGENIA

PROERITROBLASTO

En condiciones normales se encuentra en la médula ósea de 1 a 4%. Es una célula

ovoide, su núcleo es el doble de un hematíe normal con un diámetro de 14-19 μm.
Esta célula capta el hierro circulante en el plasma y lo almacena para su uso posterior.
Da origen por divisiones mitóticas al eritroblasto basófilo.

Núcleo: Grande, redondo, de color púrpura claro con cromatina laxa uniforme
dispuesta en forma filamentosa, puede tener de 2 a 3 nucleolos rodeados de
cromatina intensa y la relación nucleo – citoplasma se encuentra aumentada.

Citoplasma: Escaso, basófilo por la gran cantidad de ácidos nucleicos presentes y que
son útiles para la producción de proteínas que se emplearán en la síntesis de
hemoglobina

ERITROBLASTO BASOFILO

Constituye del 2 al 5% de las células nucleadas de la médula ósea. Ligeramente es más

pequeño que su antecesor con un diámetro de 12-17 μm.

Núcleo: Grande, redondo, céntrico, de color púrpura oscuro, con cromatina más
definida, de aspecto grueso, no tiene nucleolos visibles, en caso de verse nucleolos
tienen bordes difusos sin cromatina circunscrita.

Citoplasma: Intensamente basófilo debido a la gran cantidad de ácidos nucleicos

presentes en él. Estas células también captan el hierro circulante y lo almacenan para
usarlo posteriormente en la síntesis de hemoglobina. No tiene granulaciones. Da
origen por divisiones mitóticas al eritroblasto policromático. Relación
núcleo/citoplasma: aumentada.
ERITROBLASTO POLICROMATOFILO

Constituye del 5 al 26% de las células hemáticas de la médula ósea. Ligeramente más
pequeño que su antecesor, posee un diámetro de 12-15 μm.

Núcleo: Céntrico, redondo, de cromatina compacta y condensada. Relación

núcleo/citoplasma: intermedia.

Citoplasma: Ligeramente gris azulado por la síntesis a gran escala de Hemoglobina, la

cual es acidófila. Da origen por divisiones mitóticas al eritroblasto ortocromático

ERITROBLASTO ORTOCROMATICO

Constituye del 1 al 20% de las células hemáticas de la médula ósea. Posee un diámetro
de 12-15 μm.

Núcleo: Oscuro, homogéneo, de cromatina condensada, sin estructura nuclear

(picnótico), Es incapaz de replicar su DNA y por lo tanto no puede efectuar divisiones
mitóticas.

Citoplasma: Abundante, acidófilo debido a que se ha formado ya la mayor parte de

hemoglobina que va a estar presente en el eritrocito maduro.
RETICULOCITO (ERITROCITO POLICROMATOFILICO)

Tiene un diámetro de 7-10 μm. Es el eritrocito joven que ha perdido el núcleo por
fragmentación. Como queda suficiente ARN en el citoplasma toma el colorante básico,
además del colorante ácido por la presencia de hemoglobina. De allí, la coloración
violácea que se observa en estas células.

Estos restos de ARN pueden ser visualizados por medio de una tinción supravital que
utiliza el tinte azul cresil brillante, y en cuyo caso determinaremos el índice
reticulocitario donde su valor normal en sangre periférica va de 0,5 a 1,5%.

Estos valores aumentan cuando la médula produce un exceso de eritrocitos por un

aumento en las demandas en sangre periférica como en los casos de anemia severa.
Un aumento de eritrocitos policromatofílicos en el frotis de sangre periférica se
denomina morfológicamente policromatofilia.

En la secuencia de maduración del eritrocito, éste permanecerá dos días en la medula

ósea y un día en la sangre periférica, al madurar el eritrocito disminuye la cantidad de
ARN.
ERITROCITO

Los eritrocitos de frente tienen un diámetro de 7 - 8 micras y de perfil 2,5 micras y 1,2
micras de espesor.
La misión de los eritrocitos es proteger y transportar la Hb para que ésta pueda realizar
su función respiratoria. Para ello, tanto el núcleo como las estructuras citoplasmáticas
han sido reemplazados por una solución altamente concentrada de Hb, en la que
también se encuentran diversas enzimas, imprescindibles para mantener un reducido
metabolismo celular.
Al no tener núcleo, esta célula no puede replicarse ni sintetizar proteínas. Algunas
funciones de los hematíes son:
• Transportan Hb (la cual lleva el oxígeno desde los pulmones a los tejidos).
• Transportan el CO2 desde los tejidos a los pulmones. Esto, en parte, lo consigue
porque contiene gran cantidad de anhidrasa carbónica, la que cataliza la reacción
entre el dióxido de carbono y el agua, formando ión bicarbonato (HCO3-).
• Son un excelente amortiguador ácido-base.

DETERMINACION DE RETICULOCITOS

Con el uso del colorante supravital (Azul brillante de cresilo 1%) se precipita el ARN
ribosómico residual dentro de los reticulocitos. Se prepara un frotis sanguíneo con la
mezcla de sangre anticoagulada y colorante supravital que se examina al microscopio.

El número de reticulocitos se expresa como porcentaje del número total de eritrocitos

contados. Otras inclusiones del eritrocito (cuerpo de pappenheimer, cuerpos de
Howell-Jolly y cuerpos de Heinz) también se tiñen con el Azul brillante de cresilo y
deben diferenciarse de los reticulocitos. Los cuerpos de Heinz se presentan como
inclusiones de color verde azul situados en la periferia del eritrocito, los cuerpos de
Howell-Jolly suelen ser una o dos inclusiones redondas teñidas de color morado
oscuro, los cuerpos de pappenheimer con indistinguibles del retículo de los
reticulocitos. Si se sospecha de cuerpos de pappenheimer debe realizarse una tinción
de hierro con azul de Prusia para verificar su presencia ya que el retículo no se tiñe con
este colorante. Puede producirse interpretaciones erróneas cuando solo se informa el
porcentaje de reticulocitos presente en la sangre periférica, ya que los resultados
dependen del número total de eritrocitos presentes en sangre periférica. Si la cifra
total de eritrocitos esta disminuida, el porcentaje de reticulocitos no reflejan de
manera precisa la producción de nuevos eritrocitos por la medula ósea. Puede usarse
la cifra de reticulocitos para evitar errores de interpretación debido a la cifra total de
eritrocitos y al aumento en la estimulación de la medula ósea.

Con el advenimiento de la citometría de flujo y la función cada vez mayor que

desempeña en el laboratorio, pueden ahora practicarse conteos automáticos de
reticulocitos.

Métodos: ► Coloración supravital (azul brillante de cresilo 1%)

►Azul de metileno nuevo

►Citometría de flujo

Muestra: sangre entera recolectada con EDTA.

VALORES DE REFERENCIA
VARONES 0.5 – 2%
MUJERES 0.5 – 2%
NIÑOS 0.5 – 3%
LACTANTES 3 – 6%

VALORES ABSOLUTOS
Rn 110.000 – 330.000/mm3
Adultos 24.000 – 84.000/mm3 (hasta 100.000 es normal)

INDICES RETICULOCITARIOS

Los métodos automatizados permiten la determinación de distintos parámetros

reticulocitarios. El citometro de flujo mide simultáneamente los índices eritrocitarios y
reticulocitarios. Los reticulocitos son teñidos con un colorante de ácidos nucleicos y
luego se miden la dispersión y absorción utilizando el canal laser de diodo. Los
parámetros obtenidos son: el volumen reticulocitario (MCVr), la concentración
corpuscular media de hemoglobina reticulocitaria (CHCMr) y el contenido de Hb
de los reticulocitos (CHr), siendo este último el más importante.

Contenido de hemoglobina de los reticulocitos (CHr)

Es una medida directa de la hemoglobina (Hb) presente en los reticulocitos nuevos en

sangre periférica. Valores de CHr menores a 26 pg inadecuada disponibilidad de hierro
(Fe) para una optima eritropoyesis. Las principales aplicaciones clínicas de CHr son las
siguientes:

Identificación temprana de una deficiencia de hierro

La deficiencia de hierro es uno de los déficits nutricionales más comunes y la principal

causa de anemia ferropénica en niños y mujeres adultas. Por consiguiente, es esencial
el diagnostico temprano de la deficiencia de hierro para evitar las complicaciones
sistémicas de una anemia ferropénica. El diagnostico de deficiencia de hierro se basa
en los siguientes indicadores bioquímicos: sideremia, transferrina, saturación de Tf y
ferritina. Actualmente se adicionan: receptores de transferrina sérica circulante y el
contenido de hemoglobina reticulocitaria (CHr). El diagnostico de anemia ferropénica
se basa en la presencia de anemia microcítica hipocrómica y eritrocitos con altos
niveles de zinc-protoporfirina (ZPP) además de Fe, transferrina y ferritina. Se demostró
que CHr y Hb (no así la ferritina) son los únicos parámetros significativos para predecir
la deficiencia de Fe y la anemia ferropénica. Además, con cada incremento unitario en
el CHr se reducen en 30% y 45% las probabilidades de deficiencia de Fe y anemia
ferropénica respectivamente.

Grado de absorbancia de los reticulocitos:

S e observa en el histograma de reticulocitos y es una medida de la madurez de los

mismos. Los reticulocitos se clasifican en reticulocitos de alta, media o baja absorción.
Los reticulocitos de alta absorción, con un alto contenido de ARN son las células más
inmaduras (fluorescencia).

Ejemplos prácticos

3 reticulocitos ------------- 1000 elementos

X -------------- 100 hematíes

X = 0.3% (Valor relativo)

0.3 reticulocitos ------------ 100 hematíes

X ------------- 5 x 106 GR

X = 15000 reticulocitos

En base al valor de reticulocitos

Anemias arregenerativas = reticulocitos normal

Anemias regenerativas = reticulocitos aumentados

Formula de corrección (cuando el recuento de GR es muy alto o cuando está muy

bajo)

IRC = retic (%) x Hto del paciente

Hto normal (45%)

Consideraciones técnicas prácticas

►si el hematocrito es normal usamos volúmenes iguales de sangre y colorante

►si el hematocrito esta disminuido usamos doble volumen de sangre por cada parte
de colorante

RETICULOCITOS AUTOMATIZADO SYSMEX XT-2000i

Los reticulocitos son eritrocitos jóvenes que se diferencian de los eritrocitos maduros
debido a que conservan en su citoplasma restos de ARN, ribosomas y mitocondrias que
pueden ser identificados mediante diferentes colorantes. La cantidad de reticulocitos
en sangre indica la tasa de producción de eritrocitos en la medula ósea. Normalmente,
los reticulocitos permanecen 2 a 3 días en la medula ósea y de 24 a 48 hs en la sangre
periférica hasta cuando se completa su hemoglobinización y se tornan de aspecto
maduro.

Recientemente los autoanalizadores de hematología han incorporado dentro de los

parámetros constitutivos del hemograma, el recuento de reticulocitos y los parámetros
con el relacionados como las subpoblaciones de acuerdo con la fluorescencia (elevada,
media y baja) que corresponden al grado de maduración de los mismos, en donde los
primeros son los reticulocitos mas jóvenes o inmaduros, en tanto que los últimos
representan los reticulocitos más maduros y cercanos al eritrocito maduro.

Un parámetro relacionado con los reticulocitos con futuro en el ámbito clínico es el

índice de reticulocitos inmaduros que corresponde a la sumatoria de los reticulocitos
de media y alta fluorescencia, ya que permite identificar con mayor antelación la
recuperación de la medula ósea post-trasplante puesto que aparecen a los 13 días, a
diferencia de los neutrofilos que aparecen a los 27 días y las plaquetas a los 38 días y
en este mismo sentido, se considera que un incremento del 2% en la fracción de
reticulocitos inmaduros durante dos días consecutivos es indicador sensible de la
recuperación de la actividad de la medula ósea.

Observaciones

El recuento de reticulocitos es la prueba más simple para evaluar la actividad

eritropoyética de la medula ósea. Así, las anemias en donde hay aumento de
reticulocitos (reticulocitosis) se consideran que son regenerativas, mientras que
cuando están bajos (reticulocitopenia) son arregenerativas. Considerando lo anterior,
el recuento de reticulocitos constituye un estudio complementario imprescindible en
el estudio y clasificación de las anemias. También es de utilidad clínica en situaciones
en donde la medula ósea es objeto de agresión, como sucede tras la radioterapia o la
quimioterapia antineoplásica, ya que permite evaluar la capacidad de respuesta de la
medula ósea. Los reticulocitos, especialmente la fracción de alta fluorescencia, al ser la
primera en aparecer y la más sensible, es un excelente marcador en el trasplante de
medula ósea y en la inmunosupresión en el manejo de la anemia aplásica, entre otras
indicaciones clínicas.
El recuento manual de reticulocitos tiene un coeficiente de variación muy alto, que de
acuerdo con estudios está alrededor del 30% a pesar de que se hagan dentro de los
mejores estándares de calidad. Otra alternativa al recuento de reticulocitos por varios
años fue la citometría de flujo con tiazol, entre otros colorantes. El recuento de
reticulocitos como parte del hemograma está disponible en la mayoría de los
autoanalizadores de hematología de cuarta generación y no hay duda de la
importancia de tenerlo disponible en todos los hemogramas que se hagan en el futuro.

UTILIDAD CLINICA

Evaluación de la función eritropoyética.

Diagnóstico diferencial de anemias arregenerativas y formas regenerativas.
Monitoreo de la respuesta a terapias en caso de anemias por deficiencia de Fe, cobre,
vitamina B12 y B6.
Monitoreo de eritropoyesis después de transplante de médula ósea en el caso de
anemia aplásica.
Evaluación de deficiencia funcional de Fe con la determinación del índice CHr.
Evaluación y clasificación de anemias en base al índice IMR y el recuento de
reticulocitos.

LA CUENTA DE RETICULOCITOS AUMENTADA

Indica que existe mayor proporción de glóbulos rojos conforme la médula ósea
sustituye a las células que se pierden o se destruyen en forma precoz. Si se identifica
reticulocitosis, puede haber alguna enfermedad oculta como hemorragia crónica o
hemólisis (anemia de células falciformes y talasemia)

Existe reticulocitosis en:

Anemia hemolítica:
Inmunológica
Problemas primarios de la membrana eritrocitaria
Hemoglobinopatía y anemia de células falciformes
Deficiencia de enzimas eritrocitarias
Contacto con toxinas
Traumática o microangiopática
Hiperesplenismo
Parasitosis

Tres a cuatro días de una hemorragia.

Después del tratamiento de la anemia

a) La reticulocitosis se utiliza como índice de la efectividad del tratamiento

b) Después de administrar una dosis adecuada de hierro en una anemia por deficiencia
de hierro, la elevación de los reticulocitos es mayor al 20 por ciento.
c) Se produce una elevación proporcional cuando la anemia perniciosa es tratada
mediante una transfusión o con vitamina B12

La cuenta reticulocítica baja significa que la médula ósea no produce suficiente

eritrocitos y ocurre en:
A. Anemia por deficiencia de hierro.
B. Anemia aplásica
C. Anemia perniciosa no tratada
D. Infección crónica
E. Radioterapia
F. Endocrinopatías
G. Tumor en la médula ósea
H. Síndromes mielodisplásicos

INTERFERENCIAS:

Los reticulocitos normalmente aumentan en los lactantes y el embarazo

El paciente que ha sido transfundido recientemente tiene una cuenta inferior
por dilución.
La presencia de cuerpos de Howell-Jolly eleva en forma artificial la cuenta cuando se
utiliza el método automatizado.

VARIABLES POR DROGAS

Aumentado:
Allopurinol, aminopirina, antipiréticos, antipirina, arseniales, aspirina, corticotropina,
plomo,levodopa, metil-dopa, naproxeno, nitrofuranos, penicilina, procainamida,
quinidina, sulfonas.

Disminuido:
Cloramfenicol, clorpropamida, citaralina, datinomicina, metatrexato, rinblastina.

TECNICA MANUAL RETICULOCITOS

REALIZACION

Los reticulocitos son células sanguíneas que presentan la particularidad de reaccionar

con ciertos colorantes supravitales, por ejemplo el azul brillante de Cresilo, formando
un precipitado azul, de sustancia granulo-filamentosa que permite su identificación.

Técnica

1. En tubo de hemolisis agregar en partes iguales sangre total y colorante

2. Colocar el tubo en baño María a 37ºC durante 15 minutos
3. Una vez finalizado el periodo de incubación, resuspender las células mediante
agitación suave y practicar extendidos, secar al aire
4. Examinar la preparación al microscopio usando el objetivo de inmersión. Se
escoge un área donde las células aparezcan individualizadas, sin superposición.
Con esta técnica los hematíes se ven de color gris pálido azulado y el material
reticular intensamente teñido de azul. Se cuentan los reticulocitos
relacionándolo a 100 hematíes, se hace esta operación en 10 campos y luego se
hace un promedio.