Guia de Practicas Análisis Clínico I

UNIVERSIDAD MARÍA AUXILIADORA – UMA
ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ÁREA ANÁLISIS CLÍNICO I
MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE ANÁLISIS CLÍNICO I
Q.F. MARIA CLAUDIA SOTO PRUDENCIO
SEMESTRE 2023-I
LIMA-2023
Universidad María Auxiliadora - UMA

UNIVERSIDAD MARÍA AUXILIADORA - UMA

CURSO ANÁLISIS CLÍNICO I
PRÁCTICA N° 1: LINEAMIENTOS GENERALES EN EL LABORATORIO DE

ANÁLISIS CLÍNICO I
1. OBJETIVOS
 Informar y promover las normas de seguridad en el laboratorio.
 Minimizar los factores de riesgo de todo el personal que realiza
cualquier actividad en el laboratorio con el fin de conservar la salud.
2. INTRODUCCIÓN
Debido a los riesgos que implica la manipulación cotidiana de sustancias
perjudiciales al organismo, el personal debe siempre comportarse
respetuoso de los peligros inherentes a sus actividades y ejercer las
mayores precauciones.
Es importante conocer el daño que estas sustancias, manipuladas de

forma incorrecta o mal desechada, pueden ocasionar al personal y al
ecosistema.
Respetar lo mencionado ayudará a preservar la salud e integridad física,

nos sensibilizará sobre el hecho de que nuestra labor conlleva un riesgo
para el personal y el medio ambiente, y nos permitirá desarrollar el
sentido crítico necesario para enfrentar situaciones imprevistas.
Se sugiere que las normas de seguridad se lean y analicen

cuidadosamente antes de iniciar cualquier actividad en el laboratorio.
3. NORMAS DE SEGURIDAD GENERALES

Se deben tener en cuenta las siguientes normas de seguridad en el
laboratorio:
1) El personal que se encuentra a cargo del laboratorio debe estar

capacitado para la realización de los procedimientos según la
actividad principal del área.
2) Conocer la ubicación de los elementos de seguridad en el lugar de
trabajo, como: extintores, salidas de emergencia, lavaojos,
gabinete para contener derrames, entre otros.
3) No comer, beber, fumar o maquillarse dentro de los laboratorios.
4) Evitar la utilización de pulseras, anillos, relojes, ya que en ellos se
pueden acumular residuos químicos, biológicos y material
2
particulado, el cual puede ocasionar una contaminación por

contacto con el mismo.
5) No guardar alimentos en el laboratorio, ni en las refrigeradoras,
este es de uso exclusivo para la refrigeración de sustancias,
compuestos o elementos químicos o biológicos.
6) Mantener el orden y la limpieza. Cada persona es responsable
directa de la zona que le ha sido asignada y de todos los lugares
comunes.
7) Lavarse las manos cuidadosamente después de realizar
actividades en el laboratorio, especialmente cuando se manejen
materiales peligrosos (sustancias químicas y biológicas).
8) No correr en los laboratorios.
9) No bloquear las rutas y salidas de emergencia con equipos,
máquinas u otros elementos que entorpezcan la circulación normal
de los peatones y la evacuación en caso de emergencia.
10) Todo el personal del laboratorio deberá contar con el equipo de
protección, según la actividad que realicen (mandil, gorra,
mascarilla, guantes y/o lentes de seguridad).
11) Antes de retirarse del laboratorio, verificar que los equipos estén
desconectados y las llaves de agua se encuentren cerradas. De
igual forma, que los recipientes que contienen sustancias químicas
estén cerrados y en la zona destinada para almacenamiento.
12) Proteger ojos y cara de salpicaduras o impactos. Utilizar las gafas
de seguridad, viseras o pantallas faciales, según la actividad a
realizar dentro del laboratorio.
13) Es obligatorio el uso de batas.
14) Se deberán usar guantes de nitrilo cuando se manipulen sustancias
químicas; máquinas y herramientas; elementos cortopunzantes
como jeringas, material de vidrio, cuchillas, etc.
15) No se deberán reutilizar guantes que estén contaminados con
sustancias peligrosas ya sean químicas, biológicas o radiactivas,
ya que pueden ser un riesgo de contaminación en la manipulación
del cambio en los elementos de la actividad por realizar.
16) Será necesario el uso de mascarillas, respiradores, tapabocas
cuando el personal vaya a estar expuesto a materiales peligrosos
como en las sustancias volátiles, material particulado, olores
ofensivos.
17) Se deberá usar el gorro en procedimientos que se consideren
peligrosos como la manipulación de sustancias químicas,
elementos y/o sustancias biológicas y otras actividades donde el
material particulado pueda estar en el ambiente.
18) Abstenerse de tocar objetos y superficies (teléfono, manijas de
cajones o puertas, cuadernos, etc.) con guantes contaminados. En
caso de haberlo hecho limpie inmediatamente la superficie
contaminada.
19) Para el transvase de líquidos utilice propipetas, bombas de
transvase o dosificadores y evite “pipetear” con la boca.
20) Las prácticas que produzcan gases, vapores, humos o partículas,
que pueden ser inhaladas, deben llevarse a cabo bajo cabina de
extracción (campana extractora).
3
21) Verificar la ausencia de vapores inflamables antes de encender una

fuente de ignición, ya que se pueden producir accidentes en la
formación de incendios dentro del laboratorio.
22) Etiquetar todo material: corrosivo, tóxico, inflamable, oxidante,
radiactivo, explosivo o nocivo, entre otros, de acuerdo con lo
establecido por el Sistema Globalmente Armonizado (SGA).
23) Se deben tener las hojas de seguridad y tarjetas de emergencia de
cada sustancia. Estas hojas de seguridad y tarjetas de emergencia
deben imprimirse y tenerse en un lugar de fácil acceso, ya que
estas deben ser de consulta permanente
24) En las áreas de los laboratorios donde se realice el
almacenamiento de sustancias químicas se debe disponer de
extintores multipropósito.
25) Los recipientes deben permanecer herméticamente cerrados y
deben encontrarse en perfecto estado (sin fisuras, golpes, entre
otros). Con el fin de evitar derrames y mezclas con otros productos
incompatibles
26) Los envases abiertos que por alguna razón hayan perdido las tapas
deben cerrarse con cinta u otro elemento hermético antes de su
recolocación en el área de almacenamiento y reenvase.
27) Es necesario tener en cuenta los envases que contienen los
líquidos corrosivos y tóxicos, ya que, por ejemplo, el ácido
fluorhídrico debe conservarse en botellas especiales ya que este
ácido reacciona con el vidrio. No debe almacenarse cerca de
recipientes de este material o de barro que contengan otros ácidos.
28) No tener instalaciones eléctricas precarias o provisionales. Se dará
aviso inmediato al área de mantenimiento en caso de filtraciones o
goteras que puedan afectar las instalaciones o equipos, al mismo
tiempo que puedan provocar incendios por cortocircuitos. El
mantenimiento de las instalaciones debe ser realizado por personal
experto en la materia.
29) No haga experimentos sin autorización ni supervisión.
30) Manipular equipos calientes con guantes de asbesto o pinzas, para
evitar quemaduras.
31) Mantener la mesa de trabajo libre de objetos innecesarios.
32) Nunca devolver al envase original los residuos o remanentes de los
reactivos utilizados.
33) Nunca probar el sabor o el olor de ningún producto, a menos que
sea estrictamente necesario y seguro.
34) Para oler una sustancia, esta no debe ponerse directamente debajo
de la nariz; por el contrario, se mueve la mano sobre ella para
percibir su aroma sin peligro (abanicar).
35) Los productos químicos nunca se tocan directamente con las
manos, especialmente aquellos que, además de su toxicidad,
pueden producir quemaduras graves. Todo manejo se realiza
usando espátulas.
36) Si se derrama ácidos o bases fuertes, solventes u otro material
toxico, inmediatamente retirarse del laboratorio.
37) No debe mirarse dentro de un tubo o cualquier otro material que
contenga una reacción o sustancia que se esté calentando.
4
38) Las soluciones concentradas de álcalis o ácidos deben

neutralizarse antes de ser desechados.
39) Al preparar soluciones de ácidos, se debe añadir lentamente con
agitación y con enfriamiento externo, el ÁCIDO AL AGUA, nunca el
agua sobre el ácido ya que la reacción es muy exotérmica y puede
proyectarse violentamente.
40) Antes de poner calentar líquidos, estos deben estar bien mezclados
(si son miscibles); en caso contrario, al hervir el de menor punto de
ebullición puede proyectarse o explotar. Los de bajo punto de
ebullición no se deben calentar nunca en recipientes de cuello
corto.
4. LIMPIEZA.
Un laboratorio limpio es un laboratorio seguro.
 La mesa de trabajo debe estar limpia todo el tiempo, antes,
durante y después de trabajar.
 El material de vidrio roto se debe de levantar inmediatamente, no
se debe de colocar en el tacho de basura y se debe rotular
correctamente.
 Los restos de reactivos que cayeron sobre la superficie de trabajo
o en el piso deben limpiarse inmediatamente.
 Bote los desperdicios en los tachos de residuos peligrosos, no en
los fregaderos, canales o en el piso.
 Pregunte a su profesor cómo disponer de los remanentes (sólidos
o líquidos) de una reacción. Nunca bote al fregadero algo sin
permiso del profesor.
 Los derrames químicos en la piel o en la ropa deben limpiarse
inmediatamente. Use bastante agua. Para reactivos insolubles en
agua, use primero alcohol etílico y luego agua. Los reactivos
salpicados en los ojos deben lavarse inmediatamente con
bastante agua. Use los lavaojos ubicados en el laboratorio.
5. SIMBOLOS DE RIESGO
Para manejar con seguridad las sustancias químicas se han ideado
diversos códigos, dependiendo del fabricante, pero en general los
sistemas clasifican las sustancias en las siguientes categorías, utilizando
diez símbolos.
5
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7
6. ACCIDENTES COMUNES Y PRIMERA RESPUESTA

Los accidentes más frecuentes en el laboratorio son las quemaduras,
explosiones, incendios e intoxicaciones, y sus causas pueden deberse a
la adquisición de hábitos incorrectos o a ignorancia de la peligrosidad del
trabajo que se realiza.
Deben aplicarse medidas generales de atención inmediata en todos los

casos de accidentes, las cuales tienen por objeto retirar a la persona
accidentada de la situación de riesgo o de la acción del agente nocivo,
solicitando el auxilio médico lo antes posible, si el caso lo amerita.
A continuación, se detallan algunos procedimientos de primera
respuesta para eventuales accidentes:
 Ojos en contacto con sustancias químicas: Enjuagar

ampliamente con un chorro suave de agua. Desplazar bien los
párpados y mover los ojos hacia todos los lados. Inmediatamente
después pasar a tratamiento oftalmológico, reportar el producto
químico en cuestión.
 Exposición a vapores de sustancias químicas: Trasladar
inmediatamente a la persona afectada hacia un lugar al aire libre,
para que respire aire fresco.
 Contacto de sustancias químicas con la ropa y piel: Quitarse
inmediatamente toda la indumentaria que esté impregnada con
productos químicos, y lavar con abundante agua la zona del
cuerpo que haya entrado en contacto con los reactivos.
 Quemaduras por superficie caliente: Verter agua fría sobre la
parte afectada hasta que se calme el dolor; si la piel se observa
muy dañada y el dolor persiste, buscar atención médica.
 Quemaduras por ácido: Echar abundante agua a la parte
afectada. Neutralizar la acidez que haya quedado en la piel con
disolución de bicarbonato de sodio al 1%.
 Quemaduras por álcalis o bases: Aplicar agua abundante y
neutralizar con solución de ácido bórico al 2 %.
 Ingestión de sustancias químicas: En caso de ingesta de
reactivos, acudir inmediatamente al médico, indicando la causa
del accidente y también la información completa del reactivo
químico, la cual está contenida en la MSDS.
 Cortaduras: Lavar la herida con agua y jabón. No importa dejar
sangrar un poco la herida, pues ello contribuye a evitar una
infección. Aplicar después agua oxigenada y cubrir con una gasa
parafinada, sujetándola con esparadrapo o venda. Si persiste la
hemorragia o han quedado restos de objetos extraños (trozos de
vidrio), se deberá acudir a un centro de asistencia sanitaria.
 Control de derrames o escapes: Las cantidades de sustancias
químicas usadas en los laboratorios generalmente son pequeñas;
sin embargo, pueden ocurrir derrames que ameriten acción rápida
y ordenada. El mejor control de derrames en un laboratorio es la
prevención y planificación de los experimentos en forma
consciente y ordenada, evitando las improvisaciones y el tomar
riesgos innecesarios.
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7. CUESTIONARIO
1. Explique brevemente que es el Sistema Globalmente Armonizado
(SGA), cuál es su función principal.
2. Explique brevemente que es la Asociación Nacional de Protección
contra el Fuego (NFPA, por sus siglas en ingles), cuál es su
propósito.
3. Explique el rombo de la NFPA.
4. ¿Qué significa el número CAS? Para qué sirve.
5. Mencione 20 reactivos que consideres tóxico, inflamable o reactivo.
6. Mencione 20 solventes.
7. Mencione las diferencias de usar un guante de látex, neopreno o de
nitrilo.
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CURSO DE ANÁLISIS CLÍNICO I
PRÁCTICA N° 2: TOMA DE MUESTRA DE SANGRE TOTAL, PLASMA,

SANGRE DESFIBRINADA. RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS FORMES.
RESISTENCIA GLOBULAR.
1. OBJETIVOS
 Distingue los diversos métodos para la toma de muestra de los
diversos líquidos biológicos.
 Explica las diferencias entre los líquidos de sangre total, plasma y
suero sanguíneo.
 Identifica los diversos elementos formes.
 Diferencia los elementos formes en sangre fresca y coloreada.
2. INTRODUCCIÓN
La toma de muestra de sangre o de cualquier fluido biológico tiene
importancia en la buena determinación de los análisis clínicos ya que
constituyen el primer paso en todo el proceso dependiendo de una serie
de factores. El reconocimiento de los elementos formes nos informa
acerca de las características y diferenciaciones en una muestra de
sangre fresca y sangre coloreada.
Líquidos Biológicos:
1. Sangre
2. Orina
3. Esputo
4. Jugo Gástrico
5. Contenido Duodenal
6. Líquido Cefalorraquídeo
7. Liquido sinovial
8. Líquidos serosos (pleural, peritoneal, articular)
9. Líquido amniótico y seminal
10. Heces
Las determinaciones hematológicas y bioquímicas pueden realizarse en
sangre total, suero o plasma.
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3. MATERIALES Y EQUIPOS
 Agujas descartables 20 G x 1 ½
 Algodón
 Agua destilada
 Alcohol 70°
 Porta-objetos y cubre-objetos
 Tubos de ensayo
 Viales con anticoagulantes
 Perlas de vidrio
 Matraz
 Pipetas
 Centrifuga
 Microscopio
4. MUESTRAS
 Sangre total
5. REACTIVOS
 Anticoagulantes:
De Wintrobe:
Oxalato de Amonio ------ 1.2 gr.
Oxalato de Potasio ------ 0.8 gr.
Agua destilada ------ 100 mL.
Formol al 40% ------ 1 mL.
Haskins Trotman: Oxalato de potasio al 2%

Citrato Trisódico al 3.8%
Oxalato de Sodio al 1.34%
Heparina al 0,75%
EDTA
 Colorante Wright
 Aceite de cedro
6. PROCEDIMIENTO
I. Toma de muestra.
a. Sangre venosa:
1. El paciente permanecerá sentado con el brazo extendido
reposando sobre la mesa apoyado sobre una almohadilla.
2. Se colocará una ligadura de goma a unos 7 cm. por encima del
codo, teniendo la precaución de no comprimir fuertemente.
Esta ligadura colocada más de 2' provoca una
hemoconcentración con acumulaciones subproductos
metabólicos.
3. Se elige la vena más prominente sobre la superficie de flexión
del codo (VENA MEDIANA CEFALICA)
4. Se desinfecta la región con una torunda de algodón empapada
al alcohol 70°.
5. Se atraviesa la piel con la aguja manteniendo el bisel hacia
arriba directamente sobre la vena penetrando en ella.
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6. Una vez lograda la cantidad de sangre necesaria se afloja la

ligadura mientras la aguja permanece aún en la vena.
7. Se saca la aguja y se aplica una torunda ligeramente
humedecida en alcohol 70° flexionando el codo.
8. Para efectuar los frotis se tomará una gota de sangre tomada
directamente de la aguja antes de mezclarla con el
anticoagulante sobre un portaobjetos desengrasados y secos.
En niños que no son muy palpables las venas se tomará la
sangre de la vena yugular.
b. Sangre capilar:
1. Se obtiene por punción cutánea y se utiliza cuando se
requieren pequeñas cantidades de sangre.
2. Debe utilizarse una lanceta en la yema del dedo. En los niños
en el lóbulo de la oreja o bien en el talón dilatado y la sangre
fluya espontáneamente.
II. Obtener los siguientes componentes.

a. Sangre total y plasma
En un vial con anticoagulante colocar 5 mL. de sangre, mezclar y
centrifugar 10 minutos a 1500 rpm.
b. Suero
En un tubo de ensayo sin anticoagulante colocar 5 mL. de sangre
centrifugar 10 minutos a 1500 rpm.
c. Sangre Desfibrada
En un vaso pequeño o matraz que contiene perlas de vidrio,
colocar 3 a 5 mL. de sangre sin anticoagulante. Se agita durante 15
minutos. La FIBRINA se deposita sobre estos cuerpos en forma de
filamentos elásticos y blancos. El líquido que queda se denomina
sangre desfibrinada y está constituida por suero y glóbulos que se
puede confirmar por centrifugación.
La fibrina es de color blanco y se observa lavando con agua
destilada.
d. Reconocimiento de Elementos Formes
1. En Muestra Fresca:
Colocar 1 gota de sangre en un porta-objeto y colocar un cubre
objeto y observar.
- Elementos de forma discoidea de color amarillo: eritrocitos
unidos formando pilas por el fenómeno de la tensión
superficial, estos discos se observan de color rosado.
- Elementos transparentes e incoloros: Leucocitos.
- Plaquetas: no se visualizan por ser muy pequeños.
- Tamaño:
Eritrocitos: 7.2 u
Leucocitos: 5 a 20 u
Plaquetas: 2 a 4 u
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2. En Muestra Coloreada – Método de frotis

En otro porta-objeto colocar 1 gota de sangre en uno de los
extremos y con otro porta-objeto haciendo un ángulo de 45
grados hacer un frotis. Secar al medio ambiente.
Se lleva a colorear con colorante Wright: con 10 a 12 gotas
cubriendo el frotis. Mezclar soplando por 30 segundos. Se
adhiere agua destilada, nuevamente se sopla mezclando. Dejar
en reposo por 10 minutos. Lavar con agua de caño escurrir la
lámina en forma vertical.
Una vez seco se coloca 1 gota de aceite de cedro, elevar el
condensador y observa con objetivo de inmersión (x100).
Se observa:
- Eritrocitos en forma discoidea con un halo en la parte central.
- Leucocitos:
Mononucleares: Monocito: 16 a 22 u y Linfocito: 7 a 10 u
Polimorfonucleares: Neutrofilos, Eosinófilos, Basófilos: 9 a 12
u
7. RESULTADOS
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta
práctica.
8. CONCLUSIONES
Los alumnos reportaran en su informe las conclusiones obtenidos en
ésta práctica.
9. CUESTIONARIO
9.1. ¿Qué diferencia encuentra Ud. entre sangre capilar, sangre venosa
y sangre arterial?
9.2. ¿Cómo se obtiene la sangre desfibrinada?
9.3. ¿Cuál es la composición química del anticoagulante de Wintrobe y
cómo actúa en la sangre evitando la coagulación de la misma?
9.4. ¿Qué diferencias existen entre suero y plasma?
9.5. ¿Cómo se observan los elementos formes en sangre fresca y
sangre coloreada? Dibuje utilizando colores.
10. FUENTE DE INFORMACIÓN

10.1. Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona:
Toray Masson S.A; 2001.
10.2. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su
interpretación. 3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985.
10.3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patología
estructural y funcional. 6a ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana;
1999.
10.4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires:
Interamericana; 1999.
13

PRÁCTICA N° 3: HEMATIMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS.
1. OBJETIVOS
 Reconoce la cámara de Neubauer y los campos donde se efectúan
los contajes correspondientes de los elementos formes.
 Opera con destreza el proceso del recuento de glóbulos rojos.
2. INTRODUCCIÓN
La hematimetría es un método para contar los glóbulos rojos de la
sangre. La hemoglobina es una proteína que se encuentra en el interior
de estos elementos y su función fundamental es la de transportar el O2 y
el CO2. El concepto de anemia descansa sobre la determinación de
estos componentes, estas pruebas se realizan habitualmente como parte
del hemograma completo.
 Algodón
 Alcohol 70°
 Papel toalla
 Viales con anticoagulante EDTA
 Microscopio
 Cámara de Neubauer
 Pipeta de Thoma para glóbulos rojos
4. MUESTRAS
 Sangre total
5. REACTIVOS
Líquido de Dilución: Las más conocidas son las de GOWER, HAYEM y
MARCANO
Solución de Gower:
Sulfato de Sodio .....................12,5 gr.
Ácido Acético Glacial ………….3,3 mL
Agua destilada CSP .................200 mL.
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6. PROCEDIMIENTO
I. Toma de muestra.
Sangre venosa:
codo, teniendo la precaución de no comprimir fuertemente. Esta
ligadura colocada más de 2' provoca una hemoconcentración con
acumulaciones subproductos metabólicos.
3. Se elige la vena más prominente sobre la superficie de flexión del
codo (VENA MEDIANA CEFALICA)
4. Se desinfecta la región con una torunda de algodón empapada al
alcohol 70°.
5. Se atraviesa la piel con la aguja manteniendo el bisel hacia arriba
directamente sobre la vena penetrando en ella.
7. Se saca la aguja y se aplica una torunda ligeramente humedecida
en alcohol 70° flexionando el codo.

1. Aspirar sangre hasta 0.5 ó 1 según la dilución 1 en 200 ó 1 en
100.
2. La sangre que moja la superficie externa de la pipeta se limpia
rápidamente con papel especial o con gasa.
3. Si la sangre pasa la marca de 0.5 ó 1 se retira por capilaridad
tocando la punta de la pipeta con gasa o algodón.
4. Completar con el líquido de dilución hasta la marca de 101.
5. Mientras se aspira el líquido de dilución, se hace girar la pipeta
entre el pulgar y el índice de la mano derecha.
6. Retirando la boquilla se imprimen movimientos durante 1 ó 2
minutos.
7. Desechar las primeras gotas y sin pérdida de tiempo tocar con
una gota pequeña el borde de la superficie pulimentada en que
están en contacto la cuadricular de la cámara y el portaobjeto.
8. Esta gota se insinúa por debajo del cubre-objeto por capilaridad.
9. La suspensión no debe escurrirse en los surcos laterales ni debe
formarse burbujas de aire.
10. Dejar transcurrir 2 ó 3 minutos para que se depositen los
glóbulos.
11. Llevar la cámara a la platina del microscopio. Iluminar bien.
Comprobar si hay uniforme de distribución de hematíes.
15
12. Efectuar el recuento con el objetivo de gran aumento,

manteniendo el condensador bajo y el diafragma parcialmente
cerrado, nunca se tocará el cubre-objeto con el lente, ello induce
a errores al modificar la posición de los corpúsculos.
13. Para evitar toda confusión al contar los glóbulos, se incluyen los
hematíes que tocan las líneas divisorias izquierda y superior
como si estuviera dentro de los cuadrados, los que tocan los
lados derecho e inferior no se toman en cuenta.
No debe haber diferencia de más de 18 unidades de número de
glóbulos rojos entre los 5 cuadrados.
Se divide en cuadriculas laterales:

A-B-C-D y una central. Para el
recuento de eritrocitos de utiliza la
cuadricula central.
Se debe seguir un orden y Esta cuadricula central se

tener cuidado de no contar 2 divide en 5 cuadrantes,
veces la misma célula, cuatro laterales y uno central.
porque el resultado sería
errado.
16
III.Cálculos:
Con la dilución al 1 en 200 contar los glóbulos comprendidos en 5
grupos de 16 luego se aplica la siguiente fórmula: (Cálculo razonado)
N x 10 x 200 x 400
Eritrócitos /mm3 = -----------------------------
80
a) Donde:
N: Número total de hematíes en 80 cuadraditos.
10: Altura de la cámara. Para referir a 1mm3 de sangre diluida.
200: Dilución de la pipeta para referir al 1mm3 de sangre sin diluir.
400: Número total de cuadraditos.
80: Para referir al número de cuadraditos en el que se ha llevado
acabo el recuento.
b) Cifras normales:
 Mujeres: 3.9 – 5.1 mill/mm3
 Hombres: 4.5 – 5.5. mil/mm3
c) Interpretación:
 La disminución de hematíes se denomina ANEMIA u
OLIGOCITEMIA y se da también en leucemia y después de
hemorragias.
 El aumento se denomina POLICITEMIA o POLIGLOBULIA.
 Hay poliglobulia en el recién nacido hasta 7x10 6 y va
descendiendo gradualmente para llegar al del adulto hacia los
15 años.
 La policitemia carece de importancia y en patología es
infrecuente.
17
7. RESULTADOS
práctica.
8. CONCLUSIONES
ésta práctica.
9. CUESTIONARIO
 ¿Cuál es el fundamento del proceso de la hematimetría?
 ¿Cuál es la composición química de los líquidos de Hayem y Marcano
en hematimetría?
 Explique mediante un esquema el retículo de Thoma
 Explique por qué las personas que habitan en alturas se encuentra en
policitemia.

 Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray
Masson S.A; 2001.
 Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación.
3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985.
 Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patología
1999.
 Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires:
18

PRÁCTICA N° 4: DOSAJE DE HEMOGLOBINA (Hb): MÉTODO DE LA

CIANOMETAHEMOGLOBINA.
1. OBJETIVOS
 Explica bioquímicamente el proceso para la determinación de la
hemoglobina.
 Determina en el laboratorio el dosaje de hemoglobina.
2. INTRODUCCIÓN
La Hemoglobina es una molécula formada por 2 estructuras el grupo
Hemo y la Globina. Todas las moléculas de Hb se encuentran en el
interior de los glóbulos rojos y su función fundamental es la de
transportar el O2 y el CO2.
La determinación de Hb en sangre es un parámetro que nos ayuda en el
diagnóstico de la anemia.
 Algodón
 Alcohol 70°
 Papel toalla
 Micropipeta
 Espectrofotómetro
4. MUESTRAS
 Sangre total
5. REACTIVOS
a. Reactivo de Drabkin:
 Bicarbonato de Sodio 1 gr.
 Cianuro de Potasio 50 mg.
 Ferricianuro de potasio 200 mg.
 Agua destilada csp 1000ml.
 Preparación del reactivo de trabajo: Dilución 1:10

1mL del Reactivo del trabajo (Reactivo de Drabkin) y 10 mL de
agua destilada.
19
Guardar en frasco oscuro, la solución de es de color amarillo pálido, es

un reactivo tóxico.
b. Solución Standard:
 Solución de cianometahemoglobina titulada según las
recomendaciones del Comité Internacional para Estandarizar de
Hematología, contiene preservantes.
6. PROCEDIMIENTO
I. Toma de muestra.
Sangre venosa:
alcohol 70°.

1. En tres tubos de ensayo rotular Blanco, estándar y Muestra,
deben estar bien secos.
2. Agregar a cada uno de ellos 2.5 ml de reactivo de Drabkin.
3. Adicionar al tubo de la muestra 0,01 mL de sangre (capilar o
venosa)
BLANCO STÁNDARD MUESTRA
Reactivo de trabajo 2.5 mL 2.5 mL 2.5 mL
Stándard --------- 0,01 mL ---------
Sangre total --------- --------- 0,01 mL
Mezclar y dejar en reposo por espacio de 10 minutos a
temperatura ambiente.
4. Medir la absorbancia a 540 nm llevando a cero con el blanco del

reactivo.
5. Medir la absorbancia del standard y la muestra.
6. El color obtenido es estable por a lo menos 1 hora.
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III.Cálculos:
 Concentración del standard (Cc std) = 12 g/dL
 Factor: Cc std / abs std
 Hb (g/dL) = factor x Abs muestra problema
IV. Valores normales:

 Nacimiento: 14 - 24 g/100 mL
 3 meses: 10.5 - 14.5 g/100 mL
 Adulto: sexo femenino 12-16 g/100 mL y sexo masculino 14-18
g/100 mL
V. Interpretación:
 Aumento: hipercromemia: niños recién nacidos, personas que
viven en altura, procesos hematopoyéticos.
 Disminución: hipocromemia u oligocromemia: anemias
7. RESULTADOS
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en esta
práctica.
8. CONCLUSIONES
ésta práctica.
9. CUESTIONARIO
 Explique el fundamento del dosaje de Hemoglobina
 ¿Cuál es la estructura bioquímica de la hemoglobina?
 ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de la hemoglobina?
 ¿Cómo se relaciona el hematocrito con la hemoglobina?

 Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 7ª ed. Buenos Aires:
Panamericana; 1997.
 Gradwhol. Métodos y diagnóstico del laboratorio clínico. 8ª ed.
Buenos Aires: Médica Panamericana; 1986.
 Guerci A. Laboratorio. Métodos de análisis clínicos y su interpretación.
3ª ed. Buenos Aires: Librería El Ateneo; 1985.
 Krupp M. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. México DF:
Manual Moderno S.A.; 1986.
21

PRÁCTICA N° 5: LEUCOMETRÍA: RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS.
1. OBJETIVOS
 Conoce el procedimiento para el recuento de glóbulos blancos.
 Diferencia los recuentos de glóbulos blancos y rojos.
 Aplica fórmulas para el recuento de glóbulos blancos.
2. INTRODUCCIÓN
La leucometría es una de las técnicas para realizar el recuento de los
leucocitos, que corresponde al número de elementos celulares por
unidad de volumen presente en una muestra de sangre después de
provocar la lisis de los hematíes. Diversas son las causas o patologías
que pueden aumentar (Leucocitosis) o disminuir (Leucopenia) los
glóbulos blancos e influenciar en el diagnóstico clínico.
 Algodón
 Alcohol 70°
 Papel toalla
 Pipeta de Thoma para el recuento de Leucocitos.
 Microscopio
4. MUESTRAS
 Sangre total
5. REACTIVOS
a) Líquido de Turck:
Violeta de genciana o azul de metileno 3 gts.
Ácido Acético glacial 3 mL.
Agua destilada csp. 100 mL.
 Solución hipotónica que destruye los eritrocitos, dejando intacto los

leucocitos y tiñendo el núcleo para mejorar la visibilidad para el
analista.
22
6. PROCEDIMIENTO
I. Toma de muestra.
Sangre venosa:
alcohol 70°.

1. Aspirar sangre hasta 0.5 ó 1 (1:20 ó 1:10) según la dilución en la
pipeta de Thoma.
2. La sangre que moja la superficie externa de la pipeta se limpia
rápidamente con papel especial o con gasa.
3. Si la sangre pasa la marca de 0.5 ó 1 se retira por capilaridad
tocando la punta de la pipeta con gasa o algodón.
4. Completar con el líquido de dilución hasta la marca de 11.
5. Mientras se aspira el líquido de dilución, se hace girar la pipeta
entre el pulgar y el índice de la mano derecha.
6. Dejar en reposo de 5 a 15 minutos para la completa destrucción
de los hematíes y perfecta tinción de los núcleos leucocitarios.
7. Desechar las primeras gotas y sin pérdida de tiempo tocar con
una gota pequeña el borde de la superficie pulimentada en que
están en contacto la cuadricular de la cámara y el cubreobjetos.
8. Esta gota se insinúa por debajo del cubre-objeto por capilaridad.
10. Reposar 5 minutos para que se depositen los leucocitos sobre el
retículo.
11. Llevar la cámara a la platina del microscopio. comprobar con débil
aumento la uniforme distribución celular.
12. Con el objetivo de menor aumento contar los leucocitos
contenidos en los 4 campos cuadrados situados en las esquinas
23
de retículo.
Se volverá a repetir el procedimiento si la diferencia entre 2 cuadrados
sea mayor de 8 células.
III.Cálculos:
 La cantidad encontrada en los 4 cuadrados se divide entre 2 y al
resultado se añade 2 ceros o se multiplica por 50 También
(Leucocitos/mm3 = Leucocitos contados * 20 * 2.5)
 Leucocitos/mm3 = N * 10 * 20
N = Total de leucocitos en 4 cuadrados dividido entre 4

10 = Para referir al mm3
20 = Dilución cuando se aspira sangre hasta 0.5
24
6,000 a 9,000 por mm3 de sangre.

V. Interpretación:
La disminución de leucocitos se denomina LEUCOPENIA y se
presenta en algunas enfermedades infecciosas como ocurre en la
angina agranulocítica o granulocitopenia idiopática, anemia
perniciosa, clorosis, mala nutrición, fiebre tifoidea, malta, virales:
rubéola, sarampión, hepatitis, parotiditis, etc.
El aumento de denomina LEUCOCITOSIS. Existe una leucocitosis
fisiológica con neutrofilia entre 12,000 y 14,000 en el recién nacido,
durante el embarazo en el 9º mes, durante el parto, durante la
digestión. De orden patológico: la leucocitosis se debe a la
quimiotaxia y al estímulo de los órganos hematopoyéticos (la
quimiotaxia es la propiedad que tiene ciertos agentes de atraer o
repeler células vivas) Una inflamación tiene poder quimiotáctico de
atraer muchos leucocitos, lo mismo ocurre con las bacterias y alguno
tóxico sé que atraen leucocitos a la circulación general.
7. RESULTADOS
práctica.
8. CONCLUSIONES
ésta práctica.
9. CUESTIONARIO
 ¿Cuál es el fundamento del reactivo de Turck en el recuento de
leucocitos?
 ¿Qué dificultades considera Ud. se pueden encontrar al realizar un
recuento de leucocitos?
 ¿Qué importancia clínica tendría el recuento de leucocitos?
 Fisiológicamente ¿Cuándo se presenta leucopenia y cuando
leucocitosis?

 Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray
Masson S.A; 2001.
 Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación.
3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985.
 Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patología
1999.
 Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires:
25

PRÁCTICA N° 6: RECUENTO DE PLAQUETAS.
1. OBJETIVOS
 Determinar la cantidad de plaquetas que se pueden encontrar en una
muestra de sangre mediante la cámara de Neubauer para detectar o
diagnosticar trastornos o enfermedades como trombocitopenia
(niveles bajos) y trombocitosis (niveles altos).
2. INTRODUCCIÓN
Las plaquetas o Trombocitos son células sanguíneas que encontramos
en la sangre, los cuales son los principales responsables de la
coagulación sanguínea que se originan en la médula ósea a partir del
megacariocito. Los megacariocitos son células de gran tamaño que se
rompen en distintos fragmentos para formar plaquetas, estos fragmentos
celulares no tienen núcleo, pero si contienen unas estructuras llamadas
gránulos que tienen una serie de proteínas necesarias para producir la
coagulación de la sangre. La actividad plaquetaria esencial es la de
conformar el tapón hemostático primario en los mecanismos de la
coagulación (Hemostasia). La visualización de una extensión de sangre
permite descubrir ciertas alteraciones de la serie plaquetaria y su
cuantificación para determinar si existe una disminución
(Trombocitopenia) ó un aumento (Trombocitosis).
 Algodón
 Alcohol 70°
 Papel toalla
 Tubo de ensayo
 Cámara de Neubauer
 Láminas de cubreobjeto
 Plata Petri
 Micro pipeta
 Microscopio
26
4. MUESTRAS
 Sangre total
5. REACTIVOS
a) Oxalato de amonio
 El fundamento del método consiste en la producción de hemólisis

(deterioro de los glóbulos rojos), por la utilización de un líquido
hipotónico, y el mantenimiento de las plaquetas intactas y sin
agrumar.
6. PROCEDIMIENTO
I. Toma de muestra.
Sangre venosa:
alcohol 70°.

1. En un tubo de ensayo medir 0.38 mL de Oxalato de Amonio 1% y
agregar 0.02 mL de muestra.
2. Agitar vigorosamente por 5 minutos y dejar en reposo
aproximadamente 5 minutos para completar la destrucción de los
hematíes y perfecta tinción de la estructura de las plaquetas.
3. Colocar una gota pequeña en el borde de la superficie
pulimentada en que están en contacto la cuadricular de la cámara
Neubauer y el cubre objeto.
27
5. Colocar el Neubauer con la muestra, en una cámara húmeda,

elaborado con placa Petri, en su interior algodón o papel húmedo,
y dejar en reposo por 15 minutos. (Para evitar que la muestra se
seque en la cámara, el Oxalato de Amonio actúa y las plaquetas
aumenten de volumen).
6. Llevar la cámara a la platina del microscopio. comprobar con el
débil aumento la uniforme distribución celular.
7. Con el objetivo 10x contar las plaquetas contenidos en los 4
campos cuadrados situados en las esquinas de retículo.
No debe haber diferencia de más de 18 unidades de número de

glóbulos rojos entre los 5 cuadrados.
Se divide en cuadriculas laterales:

A-B-C-D y una central. Para el
recuento de plaquetas de utiliza la
cuadricula central.
Se debe seguir un orden y Esta cuadricula central se

tener cuidado de no contar 2 divide en 5 cuadrantes,
veces la misma célula, cuatro laterales y uno central.
porque el resultado sería
errado.
III.Cálculos:
 Plaquetas/mm3 = N * 1000
N= Total de plaquetas en los 5 cuadrantes.

Factor: 20 x 10 x 1/ 0.2 = 1000
- 20 = Dilución
- 10 = Altura de la cámara
- 1= Superficie de recuento de un cuadrante
- 0.2 = Superficie total o real de recuento.
28

15,0000 a 45,0000 por mm3 de plaquetas o 150 a 450 x109 L.
7. RESULTADOS
práctica.
8. CONCLUSIONES
ésta práctica.
9. CUESTIONARIO
 Mencione los principales métodos directos e indirectos para el
recuento de plaquetas.
 2. Explique el fundamento del método de Fonio.
 3. Explique el fundamento del método de Rees-Ecker.
 4. Mencione las patologías en que se presenta aumenta o
disminución de las plaquetas.
 5. ¿En qué se diferencia la determinación del recuento de glóbulos
rojos y el recuento
 de plaquetas al utilizar la cámara de Neubauer?

 Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica
panamericana; 1999.
 Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico.
2a ed. Barcelona: Masson; 2005.
 Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y
citológicos. Madrid: Masson; 2005.
 Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007.
 Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México
D.F.: Manual moderno, 2006.
 Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en
hematología. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.
29

PRÁCTICA N° 7: TIEMPO DE COAGULACIÓN, TIEMPO DE SANGRÍA Y

RETRACCIÓN DEL COAGULO.
1. OBJETIVOS
 Aplica las técnicas apropiadas para determinar el tiempo de
coagulación, tiempo de sangría y de protrombina.
 Hace la interpretación clínica y correlacionar las coagulopatias.
 Utiliza el método espectrofotométrico para el dosaje de fibrinógeno.
2. INTRODUCCIÓN
Debido a la enorme complejidad de todos los procesos que intervienen
en el hecho hemostático, resulta imposible determinar la verdadera
capacidad hemostática in vivo de un individuo mediante la realización de
pruebas en el laboratorio. Sin embargo, la realización y valoración de
unas cuantas técnicas puede ser suficientes muchas veces para
presuponer, con un alto margen de seguridad, la existencia, o no de un
riesgo hemorrágico. Atendiendo a los puntos fundamentales de la
fisiología de la coagulación de la sangre, se deduce que la valoración
rutinaria de la hemostasia debe englobar por lo menos la prueba de
Quick, el tiempo de coagulación sanguínea, cuantificación del
fibrinógeno y de las plaquetas.
30
 Algodón
 Alcohol 70°
 Papel toalla
 Laminas portaobjeto
 Cronometro
 Capilares
 Lancetas
 Tubos de ensayo
 Baño Maria
4. MUESTRAS
 Sangre total
5. REACTIVOS
a) Anticoagulante de Wintrobe.
b) Reactivo de Tromboplastina.
c) Reactivo de Protrombina.
6. PROCEDIMIENTO
I. Toma de muestra.
Sangre venosa:
alcohol 70°.
31
II. Tiempo de sangría o de hemorragia
MÉTODO DE DUKE: 1’ – 3’
1. Limpiar con suavidad el lóbulo de la oreja utilizando una pieza de
algodón con alcohol al 70%. No frotar. Dejar secar.
2. Hacer un pequeño corte de 3 mm de profundidad con la lanceta,
en el borde inferior del lóbulo de la oreja.
3. Ala vez, poner a funcionar su reloj con segundero o
cronómetro.
4. Dejar que la sangre salga libremente. No exprimir el lóbulo de la
oreja.
5. Recoger la primera gota en una esquina del papel del filtro o
papel secante. No tocar la piel con el papel.
6. Esperar 30 segundos y recoger la segunda gota de sangre en el
papel secante, pero un poco más adelante de la primera gota.
7. Recoger las siguientes gotas de sangre una cada 30 segundos.
Las gotas serán cada vez más pequeñas. Cuando las gotas
dejen de salir y el papel secante ya no absorba sangre,
detener el funcionamiento del reloj o del cronómetro.
8. Anotar el tiempo transcurrido, según el reloj o el cronómetro.
9. Cálculos:
Tiempo de sangría = número de gota recurridas en el papel * 30
segundos.
32
III.Tiempo de coagulación
MÉTODO DE LEE Y WRITE: 5’ – 12’

1. Obtener sangre venosa por punción.
2. Poner a funcionar el cronómetro tan pronto como la sangre
empiece a entrar en la jeringa. Extraer 2,5 ml.
3. Llenar con esta sangre cada uno de los dos tubos de ensayo
hasta la marca de 1 mL. Taponar ambos tubos con algodón no
absorbente.
4. Colocar los tubos en baño maría a 37°C.

5. Después de 3 minutos sacar el primer tubo del baño maría.
Inclinar el tubo hasta un plano de 45° para observar si la sangre
se ha coagulado. Repetir el paso 5 para el segundo tubo.
6. Si la sangre no ha coagulado, colocar los tubos otra vez en el

baño maría y examinarlos cada 30 segundos hasta que se
observe la formación del coágulo. La formación del coágulo
corresponde al momento en que resulta posible invertir cada tubo
sin que se derrame su contenido.
7. Cálculos:
Tiempo de coagulación: (El primer tubo + segundo tuno) / 2 =
minutos.
33
IV. Retracción del Coagulo.

La retracción del coagulo es la contracción espontánea de la sangre
total, obteniéndose una masa sólida con todo los componentes
sanguíneos y la exudación de suero; dicha actividad es función
retráctil de las plaquetas y del Fibrinógeno para formar fibrina.
METODO DE MAC FARLAND: 44 - 67%

1. En un tubo graduado depositar 5 mL de sangre venosa recién
extraída.
2. Colocar una varilla de alambre de modo que quede el
ensanchamiento dentro de la sangre.
3. Llevar el tubo a Baño Maria 37C° y observar de tiempo la
coagulación de la sangre.
4. Permanecer el tubo dentro del agua a 37C°, próximamente una
hora después de la formación del coagulo.
5. Con cuidado retirar el alambre con el coagulo hacia arriba, dejar
escurrir el suero dentro del tubo por 1 ó 2 minutos.
6. Leer el volumen del suero que ha quedado en el tubo sobre la
escala graduada.
7. Cálculos:
retracción del coagulo = volumen sangre inicial * 100
volumen de sangre final
34
7. RESULTADOS
práctica.
8. CONCLUSIONES
ésta práctica.
9. CUESTIONARIO
 ¿Cuál es el fundamento del tiempo de coagulación?
 ¿Cuál es el fundamento del tiempo de sangría?
 ¿Cuál es el fundamento bioquímico del proceso de retracción del
coagulo?
 ¿Cuál es el fundamento para la determinación del fibrinógeno?
 A través de un mapa conceptual, explique la Teoría de Morawitz.

panamericana; 1999.
2a ed. Barcelona: Masson;2005.
 Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier;
2007.
D.F.: Edit. Manual moderno,2006.
hematología. 3a ed. Madrid: ElsevierMasson; 2006.
35

PRÁCTICA N° 8: DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS: SISTEMA

ABO Y FACTOR Rh.
1. OBJETIVOS
 Identificar los diversos grupos sanguíneos del sistema ABO.
 Diferencia el Rh (Rhesus) o antígeno D, positivo del negativo.
2. INTRODUCCIÓN
Los grupos sanguíneos se heredan según la ley genética. Son cuatro
tipos y reciben el nombre de sistema de grupos sanguíneos ABO.
El polimorfismo más significativo de los eritrocitos depende de las
características inmunológicas, basándose en la presencia o ausencia de
las propiedades químicas en la superficie de los hematíes que permiten
diferenciarlos y clasificarlos en un gran número de grupos sanguíneos
bien definidos por sus reacciones con las hemaglutininas específicas (Es
una sustancia que causa la aglutinación de los hematíes o glóbulos rojos
de la sangre). En toda transfusión sanguínea se deberá determinar con
mucho cuidado los grupos sanguíneos de cada donador y cada receptor,
el paciente solo recibirá sangre de su propio grupo.
Para la determinación del grupo Rhesus (Rh), se hace una prueba que
permite detectar el antígeno D, empleando el suero anti D.
- Se dice que los individuos son Rh positivos, cuando son portadores
del antígeno D.
- Son Rh negativos, los individuos que carecen del antígeno D.
El paciente que tenga:

 Grupo sanguíneo A: Deberá recibir sangre del grupo A; si no se
dispone de ella, usar sangre del grupo O.
 Grupo sanguíneo B: Deberá recibir sangre del grupo B; si no se
dispone de ella, usar sangre del grupo O.
36
 Grupo sanguíneo AB: Deberá recibir sangre del grupo AB; si no se

dispone de ella, usar sangre del grupo A, del grupo B o del grupo O
(en este orden).
 Grupo sanguíneo O: Sólo podrá recibir del grupo O.
 Algodón
 Alcohol 70°
 Papel toalla
 Láminas de porcelana.
 Tubo con anticoagulante EDTA
 Cloruro de sodio
 Palito de diente
 Porta objeto y cubre objeto
 Lancetas
 Tubos de ensayo
 Centrifuga
4. MUESTRAS
37
 Sangre total.
5. MÉTODO
 Indirecto de Beth-Vincent.
6. REACTIVOS
 Antisueros: anti A, anti B, anti AB y anti D.
7. PROCEDIMIENTO
I. Toma de muestra.
Sangre venosa:
alcohol 70°.
II. Clasificación Grupo A. B. y O.

1. Lavado del sedimento de eritrocitos: suspensión de glóbulos
rojos al 10%
- Centrifugar la sangre total por 5 minutos a 2500 RPM.
- Aspirar el plasma con una pipeta (Conservar este plasma para
clasificar grupos sanguíneos por medio de eritrocitos
estandarizados).
- Mezclar cinco gotas del sedimento de eritrocitos y 2 mL de
solución de cloruro de sodio.
- Centrifugar. Aspirar y eliminar el líquido sobrenadante.
- Añadir nuevamente 2 mL de solución de cloruro de sodio.
- Agitar el tubo suavemente. De este modo se ha obtenido una
suspensión de glóbulos rojos al 10%
38
2. Preparar y numerar tres portaobjetos:

- Portaobjetos 1: Agregar una gota de anti A.
- Portaobjetos 2: Agregar una gota de anti B.
- Portaobjetos 3: Agregar una gota de anti AB.
3. Agregar a cada portaobjetos una gota de la suspensión preparada

de glóbulos rojos al 10%.
4. Mezclar la preparación de cada portaobjetos con un aplicador de

madera (o un palito de dientes). Usar un aplicador nuevo en cada
portaobjetos.
5. Hacer oscilar el portaobjetos hacia delante y hacia atrás para

terminar de hacer la mezcla.
39
III.Clasificación del grupo RHESUS (Rh).

1. Depositar en el portaobjeto una gota de sangre total que se va a
examinar, más una gota de suero anti D.
2. Mezclar empleando un aplicador, un palito de dientes o el extremo

redondo de un tubo de ensayo pequeño.
3. Continuar la mezcla haciendo oscilar el calentador hacia delante y

hacia atrás.
40
IV. Lectura:
La lectura se debe realizar antes de que transcurran 2 minutos, para
evitar una falsa aglutinación.
- Aglutinación positiva (+) Se forman

pequeños conglomerados de glóbulos rojos
que flotan en un líquido claro. Esta
aglutinación deberá ocurrir en menos de 2
minutos.
- Reacción negativa (-) Los glóbulos rojos no
se aglutinan.
- Rh positivo: En el centro y la periferia de la
mezcla se observa claramente un gran
número de pequeñas aglutinaciones de
eritrocitos. Estas aglutinaciones se deberán
formar en menos de 3 minutos.
- Rh negativo: No se observa aglutinaciones.
8. RESULTADOS
El resultado final se identifica haciendo la lectura de los tres
portaobjetos.
9. CONCLUSIONES
ésta práctica.
10. CUESTIONARIO
 ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de los grupos
sanguíneos?
 ¿Qué aplicación Ud. le daría a la determinación de los sistemas MN y
P?
 ¿Porque es importante la determinación de la Variante Du?
41
 ¿Qué diferencias encuentra entre la prueba de Coombs Directa y la

prueba de Coombs indirecta?

panamericana; 1999.
 Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier;
2007.
42

PRÁCTICA N° 9: COMPATIBILIDAD SANGUÍNEA O PRUEBA CRUZADA.
1. OBJETIVOS
 Identificar la compatibilidad sanguínea y explicar el fundamento
inmunológico de sus resultados.
2. INTRODUCCIÓN
Se define la compatibilidad en transfusión como la falta de reacción
inmune entre antígenos (Ag) y anticuerpos (Ac) de donante y receptor.
La compatibilidad no garantiza identidad entre ambos, solamente indica
que, en ese momento, no habrá disminución de rendimiento
transfusional por causa inmune. Las células sanguíneas, hematíes,
leucocitos y plaquetas, poseen en su membrana proteínas o
polisacáridos que pueden actuar como Ag y provocar la formación de Ac
en las personas que carecen de ellos. A este fenómeno se le denomina
aloinmunización: antieritrocitaria en caso de Ac contra Ag eritrocitarios, o
antiplaquetaria en caso de Ac contra Ag de las plaquetas. Los Ac
pueden aparecer de forma natural (los Ac contra Ag del sistema AB0,
que aparecen en todos los individuos), o provocados por transfusión o
embarazo. Aunque generalmente es la destrucción de las células
transfundidas por los Ac del receptor lo que causa problemas más
graves, en determinadas ocasiones también puede tener importancia la
presencia de Ac del donante. Las consecuencias clínicas de la
aloinmunización dependen del tipo de Ac (IgG o IgM), los Ac
eritrocitarios producen reacción hemolítica inmediata grave (Ac AB0),
menos grave o retardada (Ac frente a otra Ag) y la enfermedad
hemolítica del recién nacido.
43
 Algodón
 Alcohol 70°
 Papel toalla
 Marcador
 Tubo con anticoagulante EDTA
 Cloruro de sodio
 Porta objeto
 Tubos de ensayo
 Gotero
 Centrifuga
 Baño Maria
4. MUESTRAS
 Sangre total
5. MÉTODO
 Aglutinación y hemolisis, en tubo de ensayo (Prueba Cruzada,
consiste en determinar si el suero del paciente contiene anticuerpos
que aglutinen los eritrocitos del donador).
6. REACTIVOS
 Albúmina bovina al 20%.
 Antiglobulina humana (IgG)
 Suero control de Coombs (control de calidad)
7. PROCEDIMIENTO
I. Toma de muestra.
Sangre venosa:
44

alcohol 70°.
1. Preparar una suspensión al 5% de eritrocitos lavados del donador
y del paciente. (Conservar el plasma o suero, para realizar prueba
cruzada por medio de eritrocitos estandarizados).
2. Rotular 3 tubos: Cruce mayor, cruce menor y auto testigo o

autocontrol.
3. Primera fase: Temperatura ambiente.

- Colocar y mezclar en cada tubo rotulado:
- Mezclar los eritrocitos y el suero con suavidad, golpeando el

fondo de cada tubo y centrifugar por 1 min. a 3400 rpm.
45
Nota: En esta fase vamos a visualizar, anticuerpos que aglutinan

a temperatura ambiente o en frio, que son los de tipo Ig M y
errores del sistema ABO.
- Sacamos nuestros tubos de la centrifuga con mucho cuidado

sin que se mezcle.
- Observar, hemolisis o aglutinación.
4. Segunda fase: Albuminoide.

- Añadir y mezclar 2 gotas de Albúmina bovina al 2% (sirve de
potenciador, inhibiendo la acción del potencial Z), a cada tubo.
- Centrifugar por 1 min. a 3400 rpm y sacar con mucho cuidado
sin que se mezcle.
- Observar, formación de hemolisis o aglutinación.
5. Tercera fase: Térmica

- Incubar 37° C por 15 minutos.
- Centrifugar por 1 min. a 3400 rpm y sacar con mucho cuidado
sin que se mezcle.
- Observar, formación de hemolisis o aglutinación.
6. Cuarta fase: Antiglobulinica

- Lavar los 3 tubos, tres veces con solución salina hasta ¾.
- Decantar toda la solución salina.
- Secar los bordes del tubo ensayo con gasa o papel toalla.
- Agregar 1 gota de anti-globulina humana.
- Mezclar y Centrifugar por 1 min. a 3400 rpm y sacar con mucho
cuidado sin que se mezcle.
- Observar, la formación de hemolisis o aglutinación.
- Agregar 1 gota Suero control de Coombs (control de calidad).
- Mezclar y Centrifugar por 1 min. a 3400 rpm y sacar con mucho
cuidado sin que se mezcle.
- Observar, presencia de aglutinación en los 3 tubos (Prueba
indicador que se realizó correctamente todos los
procedimientos).
III. Lectura:
La lectura se debe realizar antes de que transcurran 2 minutos, para
evitar una falsa aglutinación.
46
- Incompatibilidad: Presencia de aglutinación o hemolisis.

- Compatible: No se observa aglutinación o hemolisis en el cruce
mayor y menor.
8. RESULTADOS
- Si no hay aglutinación: La sangre es compatible y se puede
administrar sin riesgos al paciente.
- Si hay aglutinación: La sangre es incompatible y no se debe
administrar.
- Se puede usar también, para la observación de los resultados, el
microscopio.
 Examinar con el microscopio empleando el objetivo 10x, para
determinar si existe aglutinación.
 Extender el sedimento en portaobjetos limpios.
- Nota: La prueba cruzada consta de tres partes:

1. Prueba mayor (D) o del donador:
a) Sirve para confirmar si existe compatibilidad ABO entre el
receptor y el donador.
b) Detecta anticuerpos en el suero o plasma del paciente
que no se hayan demostrado en la prueba de tamizaje
(porque el antígeno correspondiente no estaba presente
en las células detectoras o eritrocitos de fenotipo
conocido, PANEL).
2. Prueba menor (R) o del receptor:

a) Detecta anticuerpos irregulares en el suero del donador y
ratifica algún error de clasificación ABO/Rh.
3. Prueba auto testigo (AT):

a) Permite detectar una prueba de antiglobulina directa
positiva, así como la presencia de rouleaux y otras
anormalidades autoinmunes (AHAI).
Detección de anticuerpos libres en suero: se realiza

enfrentando el suero del paciente o receptor con eritrocitos de
fenotipo conocido (PANEL). La investigación de anticuerpos
47
irregulares libres en suero se debe realizar por lo menos con dos

técnicas: la primera siempre será la salina llevada hasta la fase
de Coombs, ya que en la mayoría de los casos permite diferenciar
la IgM en su fase rápida a 22 y 37 °C de la IgG en la fase de
Coombs; y la segunda puede ser un medio hiperproteico como
albúmina, o enzimas como bromelina o LISS, siendo esta última
la más eficaz.
9. CONCLUSIONES
ésta práctica.
10. CUESTIONARIO
 Fundamentar la compatibilidad sanguínea o prueba cruzada.

panamericana; 1999.
48

PRÁCTICA N° 10: EXÁMEN DE ORINA COMPLETA: EXÁMEN FÍSICO,

QUÍMICO Y MICROSCÓPICO.
1. OBJETIVOS
 Aplica el proceso físico-químico para el examen de orina.
 Identifica los diversos elementos en el examen microscópicos de la
orina.
 Explica la interpretación clínica de los resultados del examen de orina.
2. INTRODUCCIÓN
Un análisis de orina completo aporta información fundamental como
parte de la base de datos mínima y juega un papel crucial a la hora de
interpretar adecuadamente los resultados del hemograma completo,
este fluido se considera una biopsia natural, nos permite valorar la salud
renal y los tractos urinarios superiores e inferiores, así como muchos
otros sistemas del organismo, algunos de los cuales son imposibles de
analizar mediante otras pruebas. También es una prueba muy utilizada
en deportes, debido a que la orina es capaz de mostrarnos la absorción
de sustancias psicotrópicas o prohibidas, así también puede determinar
si una mujer se encuentra en estado de embarazo debido a la presencia
de ciertas hormonas en la muestra (HCG: Hormona gonadotropina
Humana).
La utilidad del análisis de orina tiene una doble vertiente: por un lado,
permite la valoración directa del propio aparato urinario, por otra,
valoración indirecta, resulta ser un reflejo de determinadas situaciones
bioquímicas de la sangre. No necesita de asistencia médica para
recoger la muestra, sin embargo, para asegurar sus resultados se deben
49
tomar ciertas medidas durante la extracción del fluido y la conservación

del mismo.
₋ Pruebas físicas: Color, espuma, claridad y densidad.
₋ Bioquímicas: pH, glucosa, proteínas, nitritos, cetonas, pigmentos
biliares (bilirrubina), leucocitos y sangre /hemoglobina.
₋ Microscópicas de sedimento: Leucocitos, hematíes (glóbulos rojos),
cilindros, bacterias, cristales y elementos variados.
 Papel toalla
 Alcohol 96°
 Marcador
 Porta y cubre objeto.
 Tubos de ensayo
 Gotero
 Centrifuga
 Microscopio
4. MUESTRAS
 Orina.
5. MÉTODO
 Físico, químico y microscopio.
6. REACTIVOS
 Tiras reactivas para determinar bioquímicas en orina.
7. PROCEDIMIENTO
I. Recolección de la muestra.
Orina:
1. Lavarse las manos con agua y jabón.
2. Limpiar los genitales y secar de delante hacia atrás.
3. Recoger la primera orina de la mañana. Si no es posible esperar
dos horas después desde la última orina.
4. La mujer debe separar los labios exteriores antes de orinar y los
hombres retraer el prepucio.
5. Comenzar a orinar y solo recoge la orina central. Retirar la inicial y
la final.
6. Emplea siempre un frasco estéril y de boca ancha.
7. Conservar en un ambiente fresco, como para impedir la
descomposición prematura de la orina.

1. Examen físico: Determinación de;
50
 Color
 Olor
 Espuma
 Claridad
 Densidad
2. Examen Bioquímico: Determinación de;

 Proteínas
 Glucosa
 Cuerpos cetónicos
 Urea
 Urobilinógeno
 Pigmentos biliares
 Hemoglobina
Nota: Hoy en día existe en el mercado la utilización de tiras reactivas
para el análisis de orina que facilita la determinación cualitativa y
cuantitativa de los componentes químicos de la orina.
3. Examen Microscópico de sedimento:

3.1 Verter 10 ml de la orina obtenida en el tubo cónico.
3.2 Centrifugar 2500rpm (Revoluciones por minutos) durante 10
minutos.
3.3 Eliminar el sobrenadante de la orina.
3.4 Mezclar el sedimento, que queda en el fondo del tubo, usando
un asa de siembra estéril (flameado), hasta que se forme una
suspensión homogénea (uniforme).
51
3.5 Hacer dos frotis de esta suspensión.
3.6 Teñir el frotis del portaobjeto 1, con tinción Gram.
3.7 Al portaobjeto 2, cubrir con un cubreobjeto.

3.8 Examinar en el microscopio para el portaobjeto 1, con objetivo
100x (Aceite de inversión) y para el portaobjeto 2, usando el
objetivo de 40X.
Nota: Los constituyentes del sedimento urinario pueden

agruparse dentro de 3 grupos:
 Sedimentos no organizados: En la orina normalmente no hay
cristales y su presencia en orina no tiene significado clínico
salvo si se trata de cristales de oxalato, uratos o de cistina.
 Sedimentos organizados:
 Células epiteliales:
₋ Escamosas o pavimentosas
₋ Células redondas o poliédricas
₋ Células de transición
 Cilindros
 Cilindroides
 Leucocitos y Piocitos
 Eritrocitos
 Cuerpos extraños
III. Lectura:
52
Sedimento Urinario
53
54
55
56
8. RESULTADOS
práctica.
9. CONCLUSIONES
ésta práctica.
10. CUESTIONARIO
 ¿Cuáles son las condiciones para una buena toma de muestra de
orina?
 ¿En qué casos se presentan proteínas positivas en un examen de
orina?
 ¿Explique el fundamento de la prueba de Thevenon?
 ¿Cuáles son las pruebas bioquímicas que se utilizan para el examen
de orina?
 ¿Cuál es la importancia clínica al encontrar piocitos en una muestra
de orina?

panamericana; 1999.
57

PRÁCTICA N° 11: ESTUDIO DE LAS HECES: EXÁMEN PARASITOLÓGICO
1. OBJETIVOS
 Identifica los parásitos más frecuentes en muestro medio utilizando
las técnicas de examen directo y concentración.
 Relaciona el parásito hallado con el fármaco a utilizar para el
tratamiento.
2. INTRODUCCIÓN
En la patología parasitaria tiene importancia la investigación de los
parásitos intestinales en las heces, utilizando técnicas del laboratorio
más usadas como las del método directo, método de concentración de
Faust, jarabe fenolado, Willis, método de sedimentación de teleman, etc.
De esta manera se contribuye al mejor conocimiento de la
sintomatología, diagnóstico, tratamiento y prevención de la parasitosis
intestinal.
 Papel toalla
 Alcohol 96°
 Gasa
 Marcador
 Aplicador de madera
 Porta y cubre objeto.
 Tubos de ensayo
 Mordadiente
58
 Gotero
 Embudo
 Centrifuga
 Microscopio
 Agitado de tubos
 Aza de siembra
4. MUESTRAS
 Heces
5. MÉTODO
 Método de Faust.
6. REACTIVOS
 Solución yodura de lugol
 Solución salina o cloruro de sodio
 Sulfato de Zinc: 300 g --------------900 mL agua destilada.
7. PROCEDIMIENTO
I. Recolección de la muestra.
1. Lavarse las manos con agua y jabón.
2. Asegurarse de que la persona defeque en un recipiente aparte
(bacinilla) cuidando que la muestra no se mezcle con orina.
3. Tomar una parte de la muestra en un recipiente estéril de boca
ancha y tapa rosca.
4. Rotular el frasco colocando el nombre del paciente, edad y fecha
de recolección.
5. Introducir la muestra en una funda plástica y cerrarla evitando que
se derrame y se mezcle con otras muestras.
6. Colocarlas en una caja, rodeándolas de papel picado asegurando
que los recipientes no se muevan durante el transporte.
7. Transportar las muestras rápidamente, antes de que transcurran 2
horas de su emisión. Luego de ese tiempo la muestra no será útil.
Nota: Conservadores: Cuando las muestras provienen de lugares
lejanos o no van a ser examinados inmediatamente, se aconseja
conservar la muestra (cadena de frío 2- 8°C).

El estudio debe identificarse en las heces:
 Las formas vegetativas.
 Huevos.
 Larvas.
 Quispe de los parásitos.
1. Examen Físico:
59
Consiste en buscar por simple observación visual y minuciosa:

 La consistencia de las heces.
 Presencia de mucus y sangre.
 Presencia de formas adultas de parásitos tales como:
Enterobius vemincularis, Tenias, Ascaris Lumbricoides,
Ancylostoma duocenales, Trichuris trichiura, etc.
2. Examen Microscópico:
Método directo:
2.1. Dos láminas portaobjetos limpios y secos.
2.2. Colocar en uno de ellos dos gotas de sol. de lugol.
2.3. En la otra lámina 2 gotas de sol. Fisiológica.
2.4. Con la ayuda de un mondadientes colocar una porción de
muestra a ambas láminas preparadas.
2.5. Mezclar homogéneamente, cubrir con un cubreobjeto y
observar al microscopio con objetivo de menor y mayor
aumento.
Lectura: Permite encontrar quiste de protozoarios con núcleos

teñido de amarillo, las vacuolas de color pardo, larvas y huevos de
helmintos.
Método de sedimentación: (MÉTODO FAUST)

II.1. En un recipiente adecuado, se prepara una suspensión de
materia fecal mezclado una parte de heces con 10 partes de
agua tibia.
II.2. Filtrar la mezcla sobre una gasa en 4 dobleces colocado en
un embudo y se recoge 10 ml en un tubo de centrifuga.
II.3. Centrifugar 2000 rpm durante 2 minutos, retirar de la
centrifugadora y decantar el líquido sobrenadante.
II.4. Al sedimento obtenido agregar 3 ml de agua tibia, mezclar
bien.
II.5. Centrifugar y decantar el líquido sobrenadante repitiendo la
operación por 3 veces hasta que el agua del sobrenadante
permanezca límpida.
II.6. Después de la centrifugación se decanta el líquido
sobrenadante.
II.7. Añadir 3 a 4 ml. de solución de sulfato de zinc al 33% agitar
bien durante un minuto y centrifugar al 2500 rpm durante 1 o
2 minutos.
60
II.8. Colocar el tubo centrifugado en una gradilla, llenado con el

sulfato de zinc y colocar encima un cubreobjetos, dejar en
reposo por 15 minutos.
II.9. Con el asa de platino recoger la película superficial donde se
encuentra flotando.
II.10. Colocar sobre un portaobjeto limpio y seco agregar una
pequeña gota de lugol parasitológico y efectuar el examen al
microscopio.
Lectura: Permite encontrar los quistes de protozoario y huevos de

helmintos.
III. Lectura:
 Muestra fresca: Cuando se quiere investigar protozoarios en su
forma vegetativa.
 Muestras formadas: Nos permite encontrar quiste.
 Muestras líquidas: Nos permite identificar trofozoitos. Deben ser
examinadas de inmediato o pueden ser conservadas.
 Ciertos parásitos para ser investigados requieren procedimientos
especiales. Ejemplo: Por el método de Graham (cinta adhesiva)
para Enterobius vermicularis.
61
8. RESULTADOS
62
63
9. CONCLUSIONES
ésta práctica.
10. CUESTIONARIO
 ¿En qué consiste la Técnica de Graham?
 ¿Cuáles son las condiciones para la toma de muestra de heces para
un paciente que se sospecha parasitosis?
 ¿Desde el punto de vista patológico como se adquiere una tricuriasis?
 ¿Cuál es el fundamento del Método del jarabe fenolado?
 Dibuje los quistes y huevos de los parásitos más encontrados en
nuestro medio.

 Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed.
Barcelona: Salvat Editores S.A.; 2001.
 Deska K, Pagana T. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio.
8a ed. Barcelona: Elsevier España SL; 2008.
 Henry J. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Madrid: Marbán libros
s.l.; 2007.
 Platt W. Atlas de hematología en color. 4a ed. Barcelona: JIMS; 1992.
 Talaska F. Manual de pruebas diagnósticas. 7a ed. México D.F.:
McGraw –Hill Interamericana; 2002.
64

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No debe haber diferencia de más de 18 unidades de número de

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Se debe seguir un orden y Esta cuadricula central se