TEMA 0 - INTRODUCCIÓN A LA CITOLOGÍA E HISTOLOGÍA

MICROSCOPIO ÓPTICO:
En un microscopio óptico tenemos como
fuente luminosa la luz del campo visible
(una bombilla), situada debajo de la
muestra, y la atraviesa. Se proyecta la
imagen de esa muestra en un sistema de
lentes que la amplifican. Para poder ver la
muestra hay que prepararla de una manera
determinada. La muestra está colocada en un
suporte.Hay lentes de aumento también .Antes de la preparación tenemos que
obtener la muestra. Pasos de preparación de la muestra (tejidos) para poder
ser observados : FICT
1. Fijación: introducir la muestra en un producto químico (formaldehído)
para matar las células, detiene todos los procesos celulares, eliminar
los hongos y las bacterias de ese tejido y fijar las estructuras.(este paso
es para evitar la degradación del tejido cuando lo obtenemos .llevamos la
muestra en vaso de formol y lo dejo 5 min o 2 días para que se observe)
2. Inclusión:darle solidez y consistencia al tejido para permitir que se
corte sin que se rompa (ya que es necesario cortarlo de manera muy fina
para que la luz pueda atravesarlo). Se cubre el tejido de parafina líquida
(solo es líquida a 60 ºC) y cuando se deja a temperatura ambiente se
solidifica, y se forma un bloque de parafina en el cual está el tejido.
3. Cortar: hacer un corte en el bloque de parafina de 5 micras (5μm) con
unos aparatos especiales, los micrótomos (máquinas semiautomáticas),
los ponemos en agua para estirarlos(baño) y las lonchas que hemos
cortado las colocamos sobre un portaobjetos de cristal. Después de
cortar se elimina la parafina que rodea el tejido, ya que no la necesitamos
.Usaremos disolventes(desparafinar)
4. Tinción: hay que darles color a las muestras para poder diferenciar las
estructuras. Se utilizan combinaciones de colorantes histológicos ácidos
y básicos.
el colorante básico teñirá las estructuras ácidas (basófilas) y el colorante
ácido tiñe las estructuras básicas (acidófilas /eosinofilas).

 Hematoxilina (básico – tiñe en color morado o azul, reaccionará

con las zonas ácidas del tejido ) Los núcleos de las células son
muy ácidos (porque tiene ADN que es muy ácido) y por eso se los
ve colorados con la hemotoxilina.. EL NÚCLEO ES BASÓFILO
  Eosina (ácido – tiñe en color rosa o rojo). El citoplasma de las
células será colorado con la eosina porque es básico.EL
CITOPLASMA ES ACIDÓFILO
con la combinación de Hematoxicilina/Eosina. No se ven los límites de la célula
, no veo la membrana . Despúes de teñirlo, le pongo encima el cubreobjetos
para observarlo .
 Zonas del tejido que se tinen con colorante básico Así que es una
estructura basófila. Ejemplo= núcleo
 Zonas del tejido que se tiñen con colorante ácido  Estructura
acidófilo o eosinofila. Ejemplo =citoplasma

(ARTEFACTO: error )

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO . 2 TIPOS

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN (MET):

Estos microscopios utilizan como fuente luminosa un haz de
electrones. Son útiles para ver la ultraestructura celular
(orgánulos, núcleos..) gracias a su mayor resolución. Se
hace incidir el haz de “luz”(=haz de electrones) sobre la
muestra: algunos electrones atraviesan la muestra y en otras
ocasiones la muestra absorbe los electrones.Los electrones
tiene que estar en vacío , (todo lo que les rodee ). Los e-
tienen poco poder de penetración en los tejidos , para MET
necesito muestras muy muy finas . Para teñirlos utilizaremos
metales

Tenemos que preparar la muestra con una metodología más mejor que con el
microscopio óptico para no tener errores.
Los pasos para la preparación de la muestra son parecidos al óptico, pero hay
diferencias :
1. Fijación:hay que fijar la muestra con el glutaraldehído que fija muy
bien las estructuras. Dejamos el glutaraldehido actuar durante cerca de
48h.

2. Inclusión: incluir la muestra en una sustancia para cortar sin que el

tejido se rompa. Da consistencia a la muestra. Los cortes van ser muy
más delgados que en la microscopia óptica y por eso necesitamos que
el tejido tenga una elevada consistencia por eso la parafina no sirve
porque es muy blanda. Así que utilizamos resinas epoxi. Colocamos el
tejido en la resina y hacemos un bloque (tal como ocurría con la
microscopia óptica).
 3. Cortar: utilizamos el ultramicrotomo, para hacer cortes ultra finos de 9
nanómetros, y utiliza cuchillas de diamante o de cristal. Se coloca el
bloque de resina en un suporte y las cuchillas van cortando. Después se
coloca la muestra en una rejilla utilizando algo como un bigote de un
gato.

4. Tinción: se realiza con sales de metales pesados (elevado nr atómico

en la tabla periódica) (plomo, osmio, acetato de uranio, acetato de
cromo…) . Nos permite obtener imágenes en blanco y negro.

 Las zonas negras se denominan electrodensas

 .las zonas blancas se denominan electrolúcidas.

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO:

También emplea un haz de electrones. Lo que se busca es solamente ver la
superficie de la muestra,(tenemos menos pasos) su forma, la célula por
fuera.Las imágenes son tridimensionales (no se mira la célula por dentro).
Los electrones no tienen que atravesar la muestra, por lo que el paso de cortar
en finas lonchas la muestra, no es necesario.
1. Fijar: fijamos la muestra con glutaraldehído. Matar las células, fijar
estructuras y detener procesos celulares.
2. Metalización/Recubrimiento/Sputtering:se recubre la muestra con
metal pesado (Au, Pd, Pt); se esparce sobre
la superficie del tejido un material altamente
Las células son
conductor, normalmente se hace con oro,
redondas cuando
plata, paladio o con una aleación de metales. circulan por
3. Bombardear electrones:disparamos medio líquido y
electrones por la zona donde hemos echado están a disgusto
el metal. Esos electrones al chocar con la
Las células son
muestra salen rebotados por un determinado
planas
ángulo (no puede atravesarlo porque no
hemos hecho corte). El ángulo depende de
la morfología que tenga ese tejido. Todos los
electrones rebotados son recogidos por un detector que genera una
imagen en un ordenador y ya podemos ver el tejido. La imagen que
obtenemos también es en blanco y negro.