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Asignatura: Biocatálisis Página 1 de 6
BC-CI
Código:
Dra. Lilia Sánchez Minutti, Dra. Raquel García
Elaboró:
Barrientos
Revisó: Jefes de Laboratorio.
FORMATO DE PRÁCTICA DE
LABORATORIO
Mtro. Cruz Corona Mendoza
PROGRAMA ACADÉMICO DE
Aprobó: Director del Programa Académico
INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
Práctica 3: "Obtención de enzimas de diversas fuentes”
1. Objetivo
1.1 Objetivo general
Identificar la estructura química y los factores que afectan la actividad enzimática
1.2 Objetivos particulares

Fraccionar enzimas de diversas fuentes para posteriormente determinar el efecto de la
concentración del sustrato sobre la actividad enzimática
2. Alcance
“Esta práctica aplica para su realización en los laboratorios del Programa Académico de
Ingeniería en Biotecnología de la Universidad Politécnica de Tlaxcala”
3. Seguridad
3.1. Indicaciones de seguridad
1 Las especificadas en el reglamento de laboratorios de Biotecnología
2 Manejo de reactivos y residuos de acuerdo al SGA
3 Uso de bata, cofia, googles, botas de seguridad.
4 Manejo correcto de reactivos
4. Declaraciones
Los docentes y alumnos aceptan llevar a cabo la práctica de laboratorio observando las Buenas
Prácticas de Laboratorio y respetar lo establecido en el Reglamento Interno del Laboratorio.
5. Vigencia
La práctica de laboratorio será válida para el periodo del 4 de enero al 22 de abril de 2024.
6. Fundamento teórico.
La papaína es una cisteína endopeptidasa, de la Carica papaya, estable a 4 ºC, pero
cuya actividad disminuye aproximadamente un 20% a los 6 meses. El pH sugerido para su
uso va-ría entre 6.0 y 7.019. Esta enzima presenta una amplia actividad proteolítica hacia
proteínas, péptidos de cadena corta, enlaces amida y ésteres de aminoácido, y se utiliza
ampliamente en alimentación y medicina.
Por otro lado, la piña es el nombre común de Ananas comosus Merr (syns. A. sativus, Ananassa
sativa, Bromelia ananas, B. comosa) y de la cual podemos obtener la enzima llamada bromelina.
Documento Controlado.
Elaboró: Jefes de Laboratorio del Programa Académico de Ingeniería en Biotecnología.
BC-CI
Código:
Elaboró:
Barrientos
LABORATORIO
Esta enzima tiene acción proteolítica perteneciente a la familia de las peptidasas. Con aplicaciones
en el área de los alimentos y medicina.
6.1 Glosario o Términos clave
Enzima: molécula de naturaleza proteíca que cataliza la transformación de un sustrato.
Purificación: Separación de los componentes de una muestra.
Papaina: enzima peptidasa, de la categoría de las hidrolasas.
Bromelina: enzima peptidasa, de la categoría de las hidrolasas.
7. Procedimiento experimental
Estudiante:
Durante la práctica
Esta práctica se llevará a cabo en dos sesiones. El objetivo de la sesión 1 (etapa 1 y 2) es lograr el
aislamiento de una enzima obtenida de la papaya y piña respectivamente. Estas enzimas serán
utilizadas posteriormente en la sesión 2.
Sesión 1
Etapa 1: Preparación del extracto enzimático de papaya.
Extracción de la enzima papaína del fruto: papaya
En el látex que se extrae de la superficie de las papayas se encuentra la enzima papaína, que tiene
la capacidad de digerir las proteínas de los alimentos. La papaína, se caracteriza por ser un polvo
amorfo, granuloso de color blanco, grisáceo o parduzco; ligeramente higroscópico e insoluble en
agua.
Para hacer la extracción de la enzima:
 Lleve al laboratorio 3 – 4 papayas

 Lave perfectamente los frutos
 Seque perfectamente los frutos
 Coloque la papaya en una posición vertical
BC-CI
Código:
Elaboró:
Barrientos
LABORATORIO
 Realice máximo 6 cortes longitudinales de 2 mm de profundidad en el fruto

 Deje caer el látex de la papaya sobre un recipiente de porcelana
 Una vez que la papaya haya dejado de escurrir el látex retire el fruto
 Coloque la cápsula de porcelana en un horno a 40 C por 3-4 horas hasta obtener un látex
no pegajoso y que este de forma granulada
 Moler en un mortero los gránulos del látex
 Almacenar los gránulos en oscuridad en un recipiente de vidrio sellado a -4 C
BC-CI
Código:
Elaboró:
Barrientos
LABORATORIO
Etapa 2: Preparación del extracto enzimático de piña.
 Llevar al laboratorio 1 piña previamente separada en pulpa, cáscara y corazón y molida.

 Estas fracciones son molidas por separado en un extractor de jugos en casa. Se trae al
laboratorio ya molida.
 El volumen resultante se multiplica por 1,5 y esa es la cantidad añadida de etanol.
 Las mezclas extracto-etanol son distribuidas en 1 tubos falcón de 50 mL y colocados a -10
°C durante 7 días
 A continuación las muestras se centrifugan a 8 500 rev/min durante 10 min.
 El sobrenadante se elimina y las pastillas de cada muestra fueron recolectadas en un
volumen final de 1 mL de solución tampón Tris-HCl 50 mM pH 8.
8. Equipos, materiales y reactivos necesarios
8.1. Equipos
Cantidad Descripción Cantidad Descripción
1 Balanza analitica 1 Congelador
1 Horno de secado 1 Licuadora industrial
1 Parrilla 1 Potenciometro
1 Centrifuga
8.2. Materiales de laboratorio

1 Espátula 1 Micropipeta de 1000 uL
1 Vaso de precipitado de 50 ml 1 Piceta
1 Pipeta de 10 mL 1 Probeta de 25 ml
3 Arillo para soporte universal 1 Perilla para pipeta
3 Soporte universal 1 Agitador magnético
1 Vidrio reloj 1 Matraz aforado de 50 ml
6 Tubos falcon de 50 mL 2 Puntas azules
3 Vasos de precipitado de 500 ml
8.3. Reactivos y/o sustancias químicas

1 TRIS 1 Soluciones para calibrar el
potenciometro
1 HCl
BC-CI
Código:
Elaboró:
Barrientos
LABORATORIO
8.4.
Otros materiales necesarios
1 Cuchillo 3 Papayas
1 Piña
9. Bibliografía de referencia.
Halvor N. Christensen y Graham A. Palmer. Cinética enzimática. Reverté, 2000
Wolfgang Aehle. Enzymes in Industry

Production and Applications. Alemania. Wiley. 2012.
Robert A, Copeland. Enzymes: A Practical Introduction to Structure, Mechanism, and Data
Analysis. USA. Wiley, 2013.
Andres Illanes. Enzyme Biocatalysis. USA. Springer. 2012.
Alejandro G. Marangoni. Enzyme kinetics. A Modern Approach. USA. Wiley, 2014.
10. Anexos
Fichas Internacionales se Seguridad Quimica (FISQ).
Disponible en: https://www.insst.es/documentacion/colecciones-tecnicas/fisq?

p_p_id=es_insst_buscadores_web_BuscadoresMVCPortlet&p_p_lifecycle=1&p_p_state=
normal&p_p_mode=view&_es_insst_buscadores_web_BuscadoresMVCPortlet_javax.por
tlet.action=search&p_auth=KvU3GzP3
ACUSE DE RECEPCIÓN DE PRÁCTICA

Firma del Docente titular
de la asignatura
Fecha 4 de enero de 2024
Observaciones
Revisión y Autorización. Aprobación.
(Nombre y firma) (Nombre y firma)

BC-CI
Código:
Elaboró:
Barrientos
LABORATORIO
Jefe de Laboratorio Director del P.A.

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Asignatura: Biocatálisis Página 1 de 6

Práctica 3: "Obtención de enzimas de diversas fuentes”

1.2 Objetivos particulares

6.1 Glosario o Términos clave

Enzima: molécula de naturaleza proteíca que cataliza la transformación de un sustrato.

Purificación: Separación de los componentes de una muestra.

Papaina: enzima peptidasa, de la categoría de las hidrolasas.

Bromelina: enzima peptidasa, de la categoría de las hidrolasas.

Etapa 1: Preparación del extracto enzimático de papaya.

Extracción de la enzima papaína del fruto: papaya

Para hacer la extracción de la enzima:

 Lleve al laboratorio 3 – 4 papayas

 Realice máximo 6 cortes longitudinales de 2 mm de profundidad en el fruto

Etapa 2: Preparación del extracto enzimático de piña.

 Llevar al laboratorio 1 piña previamente separada en pulpa, cáscara y corazón y molida.

8. Equipos, materiales y reactivos necesarios

8.2. Materiales de laboratorio

8.3. Reactivos y/o sustancias químicas

Halvor N. Christensen y Graham A. Palmer. Cinética enzimática. Reverté, 2000

Wolfgang Aehle. Enzymes in Industry

Andres Illanes. Enzyme Biocatalysis. USA. Springer. 2012.

Alejandro G. Marangoni. Enzyme kinetics. A Modern Approach. USA. Wiley, 2014.

Disponible en: https://www.insst.es/documentacion/colecciones-tecnicas/fisq?

ACUSE DE RECEPCIÓN DE PRÁCTICA

Revisión y Autorización. Aprobación.

(Nombre y firma) (Nombre y firma)

Jefe de Laboratorio Director del P.A.

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