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Guía de Laboratorio 03
BIOLOGIA CELULAR Y DIAGNÓSTICO
MOLECULAR

Fecha de Emisión: Título: FACULTAD DE SALUD – DPTO. DE CIENCIAS FISIOLÓGICAS


Agosto – Diciembre - 2018
Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:
Profesional: Lic. Martha Solórzano

PRÁCTICAS DE LABORATORIO
BIOLOGIA CELULAR Y DIAGNÓSTICO MOLECULAR

JOSÉ M. SATIZÁBAL, JULIO C. MONTOYA,


MILDREY MOSQUERA, ADALBERTO SANCHEZ,
MARTHA SOLÓRZANO

NOMBRE ________________________________________________

CÓDIGO_____________PLAN_______

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NORMAS DE COMPORTAMIENTO EN LABORATORIO

1. Las prácticas propuestas para el desarrollo de este curso han sido seleccionadas para
complementar lo estudiado en la parte teórica del mismo. Adicionalmente, pretenden que el
estudiante adquiera por medio del “aprender haciendo” hábitos de trabajo de acuerdo a las
condiciones específicas de un laboratorio de investigación.

2. Para cumplir hacer un uso efectivo del tiempo dispuesto para las practicas, los estudiantes
necesitan leer y entender el (los) protocolo (s) antes de presentarse a realizar la práctica. Para las
practicas los estudiantes necesitan tener claro:
a. Qué va a hacer. b. Cómo lo va a hacer
c. Por qué lo va a hacer d. Qué espera obtener

3. Por lo anterior, es necesario que cada estudiante esté presente a la hora que comienza la práctica
de laboratorio con la guía de laboratorio, adicionalmente cada estudiante debe preparar
previamente y presentar inicio de la practica un diagrama de flujo donde ha especificado los pasos
que desarrollará durante el laboratorio.

4. Todos los estudiantes deben presentarse a la practica con: zapato cerrados, pantalón o falda que
cubra las piernas por completo, cabello recogido, guantes (para evitar cualquier accidente) y una
bata blanca de laboratorio (preferiblemente de manga larga). El estudiante que no cumpla con
estas normas de bioseguridad no puede ingresar al laboratorio. Así mismo, el comportamiento al
interior de los laboratorios debe ser acorde con las actividades realizadas, por lo que los
estudiantes no pueden jugar, gritar o generar algún tipo de comportamiento que ponga en peligro
su integridad personal o la de sus compañeros. El profesor de laboratorio puede retirar a cualquier
estudiante de la practica cuando éste este incumpliendo las normas de bioseguridad, asi mismo La
Facultad puede sancionar si se considera necesario, a cualquier estudiante que ocasione un
accidente por falta de prevención durante su trabajo.

5. Las prácticas de laboratorios son desarrolladas en equipos de trabajo, estos grupos son
responsables por los materiales y equipos utilizados durante la práctica. Los estudiantes deben
recordar que los laboratorios son de uso de todos los estudiantes de la facultad, por lo que daños
en los materiales o equipos utilizados afectarían a todos. Por este motivo los estudiantes son
responsable del material y del equipo que emplean. En ocasiones en que se presente un daño
accidental del mismo, la (s) persona (s) responsables tendrán la obligación de reemplazarlos.

6. Los datos experimentales van a tener unas fuentes de error como se ha discutido durante la
práctica. En situaciones donde el comportamiento de los datos experimentales no sigue lo
esperado de acuerdo al conocimiento teórico, se recomienda a los estudiantes a buscar
explicaciones al respecto. Bajo ninguna circunstancia se considerará aceptable el inventar, sustraer
o copiar y rendir informes sobre datos que no han sido tomados personalmente como resultado
de una práctica. En las ocasiones que las condiciones de laboratorio lo requieran el PROFESOR
autoriza directamente a los estudiantes para el uso de datos diferentes a los obtenidos por ellos
mismos.

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7. Las prácticas de laboratorio deberán efectuarse en las horas indicadas para las mismas, fuera de
las cuales ningún estudiante podrá hacer uso de los laboratorios sin permiso expreso del
coordinador del curso.

8. Durante el desarrollo de los laboratorios, un trabajo ordenado asegurara una obtención de


resultados confiables. Los estudiantes deben trabajar de manera ordenada y limpia,
adicionalmente deben informar al personal del laboratorio cuando se produzca un derrame
accidental de sustancias químicas.

9. Al finalizar la práctica los reactivos químicos deben ser descartados en las botellas dispuestas para
tal fin y el material de laboratorio debe ser enjuagado y puesto nuevamente en los mesones de
trabajo. Bajo ninguna circunstancia se puede arrojar químicos, papeles, sólidos u otros en los
vertederos del laboratorio.

10. Cualquier accidente que se presente durante el desarrollo de la practica debe ser informado
inmediatamente al profesor.

11. Los resultados de cada práctica deberán anotarse en la guía que será presentada a los profesores
en las fechas acordadas con los estudiantes, para su revisión y calificación.

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PRACTICA 1: MICROSCOPÍA

1. INTRODUCCIÓN
El microscopio es un instrumento óptico que permite observar estructuras que no se pueden percibir
a simple vista. Hay diversas clases de microscopios, como de lupa o simple, el microscopio de luz
ultravioleta, el microscopio electrónico, el microscopio de contraste de fase, microscopio de
polarización, el microscopio confocal entre otros.

Importancia de la Microscopía y del microscopio.


La microscopia satisface las necesidades de captura y procesamiento de imágenes de la comunidad
científica, gracias a un grado de innovación elevado y a una gran experiencia técnica en lo que a
visualización, medición y análisis de microestructuras se refiere. La microscopía ha sido utilizada a
través de la historia para conocer y entender los componentes microscópicos presentes en los objetos
animados e inanimados. La microscopía se utiliza actualmente en múltiples áreas como:

Enseñanza en Ciencias de la vida: su objetivo es reforzar y maximizar la experiencia del alumno cuando
aprende sobre organismos vivos. Adquiere mucha importancia en Biología, Microbiología y Medicina
entre otras.

Microcirugías:
La utilización de equipos de magnificación del campo visual que permiten a los cirujanos de las
diferentes áreas realizar operaciones utilizando cada vez aperturas de menor tamaño han permitido
al paciente una recuperación más rápida y eficaz.

Industrial y materiales:
Puede tener un impacto importante en la velocidad y precisión de la inspección, el análisis, la medición
y la documentación en la industria de la fabricación de elementos microelectrónicos y
semiconductores.

Investigación en Ciencias Físicas:


Ciencias de los materiales, física e ingeniería. Geología, ciencia medioambiental, paleontología y
ciencias de la Tierra: ciencias de la Tierra incluye una variedad de disciplinas como la hidrogeología, la
sedimentología, la ciencia medioambiental.

Conservación del arte: Cuadros, Análisis de Pinturas, Papel, libros, Fotografías, Minerales y Fósiles,
Cristal, Cerámica, Piedra, Metal y Madera.

Ciencias Forenses: En esta área el microscopio debe permitir la observación de las muestras con
exactitud, calidad, precisión y reproducibilidad de los resultados para examinar las pruebas y realizar
con éxito su trabajo.

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1.1. Partes del microscopio


Para el adecuado uso de un microscopio siempre es importante conocer sus componentes y las
funciones de cada una de estos (figura 1). En general, un microscopio de luz se compone de:

• Lente ocular: Presenta una lente en la parte superior a través de la cual se observa la muestra.
Generalmente presentan un aumento de 10X (10 veces)
• Tubo: Conecta el ocular a las lentes del objetivo
• Brazo: Conecta el tubo con la base del microscopio
• Base: Apoyo para la parte inferior del microscopio.
• Iluminador: Es una fuente de luz constante que permite iluminar la muestra
• Platina: Plataforma plana donde se colocan las portaobjetos o muestras y las mantienen en su
sitio. Esta platina puede ser mecánica (mayoría de microscopios) motorizadas para
aplicaciones más exigentes. Esta permite mover la muestra en dos dimensiones. De izquierda
a derecha y de abajo hacia arriba.
• Revólver: Esta es la parte que soporta los objetivos generalmente es móvil para permitir el
cambio de la potencia del aumento.
• Objetivo: Generalmente se encuentran 3 o 4 objetivos en un microscopio. Los objetivos casi
siempre consisten en aumentos de 4X, 10X, 40X y 100X. Teniendo en cuenta que los oculares
tienen usualmente un aumento de 10X, se puede calcular el aumento total que se está
obteniendo en una muestra multiplicando el aumento del ocular (10X) por el aumento del
objetivo que se esté utilizando. Tenemos entonces que en los microscopios de luz usuales
permiten aumentos de 40x, 100X, 400X y 1000X. Para tener una buena resolución en 1000X es
necesario el uso de aceite de inmersión con índice de difracción similar a la del vidrio.
• Lente condensador: enfoca la luz sobre la muestra. las lentes condensadoras son más útiles
en aumentos de 400X y superiores.
• Diafragma o Iris: permite variar la intensidad y el tamaño del cono de luz que se proyecta hacia
arriba en la muestra. No hay una regla fija en cuanto al ajuste a utilizar para una fuente
particular. Más bien, el ajuste es una función de la transparencia de la muestra, el grado de
contraste que se desea y el lente objetivo en uso.

El microscopio usado en la presente práctica es el Leica DM500 cuyas partes se relacionan a


continuación:

1. Oculares
2. Tubo del ocular
3. Revólver
4. Objetivos
5. Retenedores de portaobjetos
6. Platina porta muestras
7. Diafragma
8. Luz
9. Base
10. Brazo
11. Controles de la platina porta muestras
12. Macrómetro (ajuste grueso)
13. Micrómetro (ajuste fino)
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1.2. Especificaciones del microscopio


El Microscopio Leica DM500 cuenta con óptica corregida a infinito, cabezal binocular e iluminación por
LED, mandos de enfoque macro y micrométricos coaxiales, revólver cuádruple de giro interno,
objetivos 4x, 10x, 40x y 100x oil. Platina mecánica de mandos axiales Binocular con corrección dióptrica

Objetivos Plan de 4x, 10x, 40x y 100x oil


Oculares 10x/18
Condensador de Abbe
Iluminación por LED
110V

2. OBJETIVOS
Al finalizar el presente laboratorio el estudiante estará en capacidad de:
• Usar correctamente el microscopio para las observaciones.
• Identificar fácilmente las partes de un microscopio compuesto.
• Manejar adecuadamente la técnica de preparar y observar diferentes materiales al
microscopio. Así como el ajuste y enfoque correctos de sus imágenes.
3. MATERIALES Y REACTIVOS
• Caja de Petri con recortes de letras, papel milimetrado y recortes de revistas
• Laminas o portaobjetos
• Laminillas o cubreobjetos

4. METODOLOGIA

4.1. Enfocar el microscopio.


Los materiales que se van a estudiar se colocan en una lámina de vidrio denominada portaobjeto o
lámina.

Generalmente, se cubre el material que se encuentra sobre la lámina portaobjetos con un vidrio muy
delgado y forma cuadrada, que recibe el nombre de laminilla o cubreobjetos. Tanto éste como el
portaobjetos deben estar limpios.
Para iniciar la práctica usted necesita:
1. Colocar la muestra (recorte de la letra e y recorte de papel milimetrado) en el centro del
portaobjeto, y cubrir con el cubre-objeto.
2. Encender el microscopio y rotar el revólver, hasta poner en posición el objetivo de menor
aumento (4X).
3. Montar una placa o lámina de las preparaciones anteriores sobre la platina de tal forma que
la muestra quede encima de la abertura y luego fije el portaobjetos mediante las pinzas.
4. Mirar a través de los objetivos y enfocar la imagen de la letra e moviendo el tornillo
macrométrico hasta visualizarla, enfoque la imagen moviendo con cuidado el tornillo
micrométrico. Haga los ajustes necesarios con el diafragma y el condensador para obtener una
iluminación adecuada.

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Nota: Nunca baje el tubo del microscopio sin observar su descenso. Si lo hace corre el riesgo de romper
con el objetivo, el portaobjetos y la laminilla, destruyendo la preparación y a su vez causando daños
graves al objetivo.

Es importante tener en cuenta que siempre que se realice una observación al microscopio debe
usarse en primer lugar el objetivo de menor aumento. En este caso el 4X.

PREGUNTAS

• ¿Qué posición tiene la imagen de la letra e con respecto a la posición del objeto en la lamina?
__________________________________._________________________________________
• Mueva la lámina hacia adelante. ¿En qué dirección se mueve la imagen? ________________

• Mueva la lámina hacia la derecha. ¿En qué dirección se mueve la imagen? ______________

Dibuje la imagen de la letra e sin mover la platina utilizando los objetivos 4x 10x y 40x.

4X 10X 40X

• ¿Cambió la posición de la imagen observada con el objetivo de 4X 10X y 40X con respecto a la
observada con el de menor aumento? Justifique su respuesta ___________________
____________________________________________________________________________
• ¿El campo de observación es mayor o menor? __________________
• ¿La iluminación es mayor o menor (más o menos brillante) con el objetivo de menor aumento
comparado con los otros dos? ¿Por qué? __________________________________
____________________________________________________________________________

Retire la letra e cuidadosamente de la platina y guárdela en la caja de petri.

4.2. Medida microscópica.


La unidad de longitud más frecuentemente usada en microscopia es la micra (µm), cuyo símbolo es la
letra griega "mu" (µ) y que equivale a una milésima de milímetro.

En los laboratorios de investigación se utiliza, el micrómetro o retículo micrométrico para determinar


las medidas microscópicas. Si no se dispone de este instrumento es posible estimar el tamaño de los
objetos vistos en el microscopio si se conoce el diámetro de uno de los campos; veamos como:
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a. Coloque un recorte de papel milimetrado sobre el portaobjetos y enfóquelo con el objetivo


de menor aumento. Mida entonces el diámetro del campo correspondiente al objetivo de
menor aumento contando el número de cuadrículas observadas.
b. Dibuje lo observado:

4X

¿Cuánto mide el diámetro del campo del objetivo de menor aumento? En milímetros: __________ En
micras: _____________.

c. Con el dato anterior es posible determinar el diámetro del campo correspondiente a los
objetivos de mayor aumento (40X, 100X); Para lo cual, se divide el diámetro encontrado
por la razón entre las magnificaciones del objetivo de mayor aumento y de menor
aumento.
d. Por ejemplo, si el aumento del objetivo de mayor significación es de 40x y el otro es de 4x
la razón mencionada será 40/4 = 10; ahora si el campo correspondiente al objetivo de
menor aumento (4X) es 500 µm. El diámetro de campo para mayor aumento es
500 µm /10 = 50 µm.
• Calcule los diámetros del campo de los otros objetivos en el microscopio (10X, 40X y 100X). Escriba
sus cálculos:

e. Retire el papel milimetrado y reemplácelo con la letra e. ¿Cuál es el tamaño de dicha letra
en el objetivo de 4X? Compárelo con el dibujo.

En milímetros___________ En micras____________

f. Monte un recorte de papel grabado de revista y enfoque con el objetivo de menor


aumento. La imagen observada debe contener una multitud de puntos dispuestos de tal
forma que la densidad del grabado depende del tamaño y número de puntos en las
distintas áreas. Las distancias entre los puntos dependen del cliché ó de la máquina
impresora.

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Dibuje:

4X
¿Cuántos puntos puede ver en el campo del objetivo de menor aumento? _____________

El ejercicio anterior proporciona un ejemplo de poder de resolución. Así, con el ojo desnudo sólo
podemos ver las variadas densidades del grabado, mientras que con el microscopio es posible
distinguir puntos. Lo anterior significa que hemos resuelto los puntos.

g. Cada imagen tomada de algo que se observó al microscopio debe llevar el respectivo
aumento o veces que fue ampliado con respecto al objeto real. Esto se calcula mediante
la siguiente fórmula:
𝑇𝑎𝑚𝑎ñ𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑖𝑚𝑎𝑔𝑒𝑛 𝑑𝑖𝑏𝑢𝑗𝑎𝑑𝑎
𝐴 =
𝑇𝑎𝑚𝑎ñ𝑜 𝑟𝑒𝑎𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑜𝑏𝑗𝑒𝑡𝑜

El aumento se expresa en X (numero de veces que se aumento la imagen); el tamaño de la imagen se


determina midiendo el diámetro de la imagen dibujada; y el tamaño real del objeto se hace con base
en el tamaño de su imagen con respecto al diámetro del campo.

Ejemplo: El aumento de un dibujo de un objeto hecho con un diámetro de 6 cm, cuya imagen real mide
la mitad de un campo microscópico de 10x de diámetro 1.200 µm:

Tamaño del dibujo real 6 cm = 60.000 µm 45.555 78


𝐴= 455 78
= 𝟏𝟎𝟎𝑿
Tamaño real del objeto = 600 µm

• Calcule el aumento real del dibujo de la letra e hecho con el objetivo de 4X. El tamaño del dibujo se
obtiene midiendo con una regla la longitud de la letra e en el dibujo. Tamaño real del objeto es igual
a la longitud de la letra e determinada en el punto

h. Escriba sus cálculos:

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PRACTICA 2: MORFOLOGIA CELULAR

1. INTRODUCCIÓN

Todos los organismos vivos están formados por células, dependiendo del tipo de organismos y tejidos
las células presentaran o no organelas en su interior. Algunos organismos microscópicos, como
bacterias y protozoos son células únicas, mientras que los animales y plantas están formados por
millones de células organizadas en tejidos y órganos. Aunque los virus y los extractos acelulares
realizan algunas de las funciones propias de la célula viva, carecen de metabolismo, capacidad de
crecimiento y reproducción propios de las células.

Las células son estructuras altamente organizadas en su interior, constituidas o no, por diferentes
organelas con funciones específicas para el crecimiento de la célula y el cumplimiento de sus funciones.
Se han descrito dos tipos celulares principales dependiendo de su estructura y organización:

• Células Eucariotas: son células que contienen diferentes organelas como mitocondrias,
núcleo, aparato de Golgi y sistema endomembranoso, su material genético (DNA) se encuentra
encapsulado dentro del núcleo.

• Células Procariotas: Son células sin núcleo ni organelas, cuentan con membrana celular y en
ocasiones pueden presentar pared celular. Este tipo de células es común en los organismos
unicelulares como las bacterias.

Es posible estudiar los aspectos morfológicos celulares más aparentes con el microscopio de luz. Sin
embargo, el nivel de resolución de un microscopio de luz no es suficiente para detectar detalles
estructurales los cuales requieren métodos de mayor resolución como la microscopía electrónica o
métodos que permitan mejorar el contraste de los componentes celulares como la
inmunohistoquímica o la inmunofluorescencia.

Las estructuras celulares presentan en general muy poco contraste entre sí y es necesario hacerlas
resaltar selectivamente, mediante tinciones específicas que resalten ciertos elementos celulares o
aumenten específicamente la densidad óptica de los mismos, o bien mediante procedimientos de
sombreado que permitan apreciar los relieves de la superficie que se observan.

Previo a la práctica investigue:

a. ¿Cuál es la coloración más comúnmente utilizada para observar células sanguíneas?


______________________________________________________________________________
¿Qué componentes celulares colorea este tipo de tinción? _______________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
b. ¿Qué es lugol y para qué sirve? _____________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Investigue los cuidados que se deben tener para su manipulación.

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c. ¿Qué es azul de metileno y para qué sirve? ___________________________________________


______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Investigue los cuidados que se deben tener para su manipulación.
d. ¿Qué es la coloración de Wright y para qué sirve? ______________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________

2. OBJETIVO:
Al finalizar el presente laboratorio el estudiante estará en capacidad de:
• Observar, las características morfológicas y estructurales generales de células eucariotas y
procariotas en sangre periférica, mucosa bucal, catafilo de cebolla, hojas, algas, protozoarios
y algunas bacterias.
• Conocer la utilidad de diferentes tinciones para el reconocimiento de los componentes
celulares.

3. MATERIALES Y REACTIVOS
• Portaobjetos y cubreobjetos • Cebollas
• Aceite de inmersión • Placas con preparaciones de:
• Palillos extendido de sangre periférica con
• Agua tinción de Wright y de tejido vegetal
• Toallas papel • Lugol
• Agua de charco • Azul de metileno

4. METODOLOGÍA

4.1. Células epiteliales de la mucosa oral


Las mucosas son tejidos que recubren las paredes internas de los órganos que están en comunicación
con el exterior del cuerpo. Suelen estar asociadas a numerosas glándulas secretoras de moco. Tapizan
el interior del sistema digestivo (cavidad oral, faringe, esófago, estómago, intestino delgado, colon y
recto), sistema respiratorio (mucosa nasal, tráquea y bronquios), sistema urinario (uretra, vejiga,
uréteres) y genital. En general, cumplen funciones de protección, transporte, secreción y absorción.
Las mucosas se caracterizan por estar constituidas por células epiteliales que pueden estar dispuestas
en una o múltiples capas (estratificado) y presentan una alta tasa de renovación.

Procedimiento:
a. Con un palillo efectúe un raspado al interior de la mejilla cuidadosamente
b. Realice un extendido sobre un portaobjetos del material obtenido tratando que quede bien
esparcido en mas o menos 1 cm2.
c. Adicione una gota de azul de metileno y coloque encima el cubreobjetos.
d. Observe la preparación al microscopio utilizando objetivos 4X, 10X y 40X.

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En la preparación se puede observar un mosaico formado por células planas, poligonales, más o menos
irregulares; abundan las células aisladas, en cuyas caras se perciben los trazos de inserción de unas
células con otras. Como el material observado procede de la capa superficial, capa de descamación del
epitelio estratificado de la mucosa oral, son en su mayoría células muertas o células que están en
período de degeneración.

El azul de metileno tiñe intensamente el núcleo y con menos color el citoplasma que suele ser
granuloso. También se pueden observar bacterias de la flora oral adheridas a las células epiteliales.

Dibuje las células de la mucosa bucal que observe al microscopio (señale las estructuras observadas).

4X 10X 40X

4.2. Células vegetales

Éstas forman parte de los tejidos y órganos vegetales. La presencia de cloroplastos, vacuolas grandes
y una pared celular que protegen la membrana celular son sus principales características.

Procedimiento:
a. Tome un fragmento de catáfilo y colóquelo en un portaobjetos con una gota de agua de modo
que la superficie que estaba en contacto con el catafilo quede hacia arriba.
b. Coloque sobre él un cubreobjetos.
c. Pase la preparación del microscopio y adicione una gota colorante de Lugol en el borde del
cubreobjetos.
d. Deje que la solución penetre por difusión.
e. Extraiga el líquido en exceso con una toalla papel.
f. Observe la preparación al microscopio utilizando objetivos 4X, 10X y 40X.

Células de Cebolla: Las células de catáfilo de la cebolla, son de forma rectangular y alargada. La
membrana celular se destaca por el colorante (Lugol). Los núcleos son grandes y visibles, en su interior
se puede llegar a observar granulaciones, que corresponden a los nucléolos. El citoplasma tiene
aspecto claro, en el cual se distinguen algunas vacuolas débilmente coloreadas.

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Dibuje las células del catafilo de la cebolla que observe al microscopio (señale las estructuras
observadas).

4X 10X 40X

Usted recibirá una placa preparada con tejido vegetal (corte transversal de hoja de mango), obsérvela
en el microscopio empezando con el objetivo 4X de menor aumento y haga sus dibujos en 10x y 40x.
Observe la organización celular en la hoja.

Dibuje las células de tejido vegetal que observe al microscopio (señale las estructuras observadas).

10X 40X

4.3. Protozoarios y algas


Las algas se encuentran generalmente en el agua, aunque también pueden crecer sobre las rocas y
árboles cuando hay suficiente humedad. Cuando las algas alcanzan un determinado tamaño se dividen:
Las dos células hijas pueden separarse o permanecer en cadenas (filamentos) o masas (colonias). En la
práctica estudiaremos el alga Elodea.

Protozoários: son organismos microscópicos, unicelulares eucariotas, heterótrofos, Fagótrofos,


depredadores, a veces Mixótrofos (parcialmente autótrofos); que viven en ambientes húmedos o
directamente en medios acuáticos, ya sean aguas saladas o aguas dulces.

Coloque una gota de agua con cultivo de microorganismos sobre el portaobjetos, coloque una laminilla
y obsérvela al microscopio.

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Dibuje tres diferentes ejemplares de algas o protozoarios que encuentre en su preparación e investigue
sus nombres, Ejemplo: Paramesium, euglenas, etc.

40X

4.4. Extendido de sangre periférica (ESP)

El estudio de las células sanguíneas por medio de la observación en un microscopio de las


preparaciones coloreadas, conocido como ESP, ha sido uno de los exámenes más antiguos en el
laboratorio clínico para contribuir al diagnóstico de un paciente. La práctica del ESP es de gran utilidad
en hematología ya que permite visualizar la morfología celular, estimar el número de células en sangre
periférica y determinar la eventual presencia de elementos atípicos. Los resultados obtenidos con este
estudio son un reflejo del funcionamiento de la médula ósea y de los factores que influyen en las
diferentes poblaciones celulares. Además, su estudio es de esencial importancia desde el punto de
vista clínico.

La sangre esta compuesta por diferentes tipos celulares, los glóbulos rojos o eritrocitos encargados del
transporte de oxígeno y CO2 en el organismo, glóbulos blancos o leucocitos (que se dividen en varios
tipos) y que son parte del sistema inmune para defender el cuerpo contra las infecciones y las
plaquetas que son realmente fragmentos celulares que participan en el proceso de coagulación de la
sangre.

Glóbulos rojos o eritrocitos: Son células redondas bicóncavas sin ninguna organela en el interior (ni
siquiera núcleo), estás células son las más abundantes en la sangre y se observan como anillos con un
borde más coloreado.

Glóbulos blancos o leucocitos: Estas células se han clasificado de acuerdo a su morfología y funciones
en: leucocitos polinucleares (núcleo polisegmentado lobulado) entre los que se encuentran los
neutrófilos, eosinófilos y basófilos y leucitos mononucleares entre los que se encuentran los linfocitos
y los monocitos.

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Investigue previo al laboratorio:


Describa cuáles son las características de cada una de las células sanguíneas cuando son expuestas a
la tinción de Wright y dibuje un ejemplo de cada una:
Célula Dibujo Características
Eosinófilos:

Basófilos

Neutrófilos

Monocitos

Linfocitos

Plaquetas

Glóbulos rojos

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Guía de Laboratorio 03
BIOLOGIA CELULAR Y DIAGNÓSTICO
MOLECULAR

Fecha de Emisión: Título: FACULTAD DE SALUD – DPTO. DE CIENCIAS FISIOLÓGICAS


Agosto – Diciembre - 2018
Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:
Profesional: Lic. Martha Solórzano

Observación del extendido de sangre periférica


• Usted recibirá una lámina de extendido de sangre periférico teñido con Wright.
• Observe la preparación al microscopio utilizando el objetivo de 40X observe la placa a lo largo
y podrá observar zonas con alta densidad celular donde observan los glóbulos rojos
sobrepuestos (como círculos rosados sobrepuestos entre ellos), continúe desplazándose hasta
que encuentre una zona donde los glóbulos rojos se empiezan a observar más separados entre
ellos.
• En ese punto solicite el aceite de inmersión y añada una gota de este sobre la placa.
• Cuidadosamente gire el revolver y pase al objetivo de 100X (después de adicionar el aceite no
se puede cambiar de objetivos ya que los otros no están diseñados para entrar en contacto con
esa sustancia).
• Con este objetivo trate de ubicar los diferentes tipos de celulares que investigó previo a la
práctica.
• Grafique lo observado (señale las estructuras reconocidas).

100X 100X 100X

Al finalizar la práctica recuerde:


Solicite papel para limpiar el aceite del objetivo de 100X
Después de terminar la práctica, lavarse las manos con agua y jabón.
Los palillos utilizados botarlos en la bolsa roja, es material biológico.
Los portaobjetos utilizados descártelos en los guardianes dispuestos en el mesón

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Profesional: Lic. Martha Solórzano

MITOSIS
1. INTRODUCCIÓN

Las células vivas son capaces de reproducirse con fidelidad casi perfecta, no solamente una o dos veces
sino por centenares de generaciones. La mayoría de las células se reproducen por fisión binaria de tal
manera que una célula progenitora da origen a dos células hijas casi idénticas.

La mitosis es uno proceso de división celular las células eucariotas, el cual se lleva a cabo de una
manera ordenada y donde se realiza una precisa e igual distribución del material genético ya duplicado
para formar así dos núcleos hijos con igual tipo y número de cromosomas. Este proceso asegura la
conservación y transferencia del material genético de la célula madre a las células hijas y por
consiguiente la misma organización estructural y funcional.

La división celular también es necesaria para el mantenimiento las células del individuo que tienen un
ciclo vital variado dependiendo del tipo celular, células como las del epitelio del tubo digestivo, de la
capa externa de la piel, y los glóbulos rojos, son reemplazados con células nuevas producidas en la
mitosis.

La mitosis esta dividida en cuatro fases, llamadas profase, metafase, anafase y telofase: en un sentido
más amplio, la mitosis puede considerarse como una parte de un proceso clínico conocido como ciclo
mitótico. El ciclo mitótico además de la mitosis, incluye el “reposo” o sea la llamada interfase del
núcleo; existen varios estados dentro de la interfase: el estado G1, que es el estado del núcleo sin
división, antes de que se efectué la síntesis del DNA; el estado S, que es cuando se efectúa la síntesis
del DNA y el G2, que se presenta después de la síntesis del DNA, pero antes de iniciarse la profase. El
ciclo mitótico consiste, por consiguiente, de la secuencia continua de interfase y mitosis.

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2. OBJETIVOS
Al finalizar la práctica el estudiante estará en capacidad de:
• Identificar morfológicamente las características de la etapa de interfase y del periodo de
mitosis en el ciclo celular.
• Reconocer los diferentes estados de la mitosis en el meristemo o radical de cebolla (Allium
cepa L. )

3. MATERIALES Y REACTIVOS:
• Microscopio • Agua destilada
• Bisturí -cuchilla • Papel toalla suave
• Raíces de cebolla • Pincel pequeño
• Alcohol 70 % • Vidrio reloj
• Solución Hidrolítica • Mechero
• Solución de Carney • Porta Objeto
• Acetato Carmín • Cubre Objeto

4. PROCEDIMIENTO:
4.1 Observación de raíces de cebolla

• Previo a la práctica las raíces de cebolla se incubarán por al menos 24 horas en una solución
fijadora (1 parte del ácido acético y 3 partes de alcohol de 95 %)
• Colocar las raíces en solución hidrolítica (1 parte de HCl y 1 parte de alcohol de 95% por 5 a
10 minutos.
• Colocar las raíces en solución de Carney (3 partes de Cloroformo, 1 parte de ácido Acético, 2
partes de alcohol de 95 %) por 5 – 10 min.
• Lavar las raíces con agua destilada.
• Colocar las raíces en alcohol de 70% por 5 minutos.
• En un portaobjetos colocar una gota de aceto-carmín para cubrir las raíces (utilice únicamente
la parte terminal de cada una de ellas).
• Haciendo uso de un bisturí macere las raíces.
• Coloque sobre el preparado una laminilla y ejerciendo cierta presión sobre ella aplaste las
raíces maceradas
• Observe al microscopio: recuerde enfocar la imagen con el objetivo de menor aumento,
cuando ya se tenga una imagen clara, cambiar al objetivo de 10X
• Comience a buscar con mucho cuidado algunas de las diferentes fases de la mitosis (el material
nuclear se observa con diferentes grados de condensación), cambie al objetivo de 40X y trate
de reconocer que fase de la mitosis esta observando.
• Grafique lo observado:

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Interfase Profase Metafase

Anafase Telofase Citocinesis

4.2 Obtención de extendidos de células de botones de lirio

• Cuando los botones de lirio alcanzan una longitud de 5 a 7 cm, están en la madurez adecuada
para obtener anteras inmaduras.
• Tome algunos botones con un bisturí, retire los sépalos y pétalos inmaduros, localice los
estambres y córtelos.
• Retire las anteras y transfiéralas a un vidrio reloj. Procese las anteras inmaduras siguiendo el
protocolo utilizado para los meristemos de la cebolla.
• Observe al microscopio primero a 4X, y luego con aumentos mayores (10X y 40X) recorriendo
diversos campos para descubrir en las células observadas las distintas fases de la meiosis
• Realice los dibujos de cada una de las fases de la meiosis a 40X.

Interfase Profase Metafase


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Anafase Telofase Citocinesis

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BIBLIOGRAFIA

1. Karp G. Biología Celular y Molecular, Conceptos y Experimentos. Edit. Mc. Graw Hill. México
2. Cooper, G. M. La Célula. Edit. Marbán
3. Alberts, B y cols. Molecular Biology of the Cell. Edit. Garland Publishing Inc.
4. Lodish H y cols. Molecular Cell Biology. Freeman N.Y.
5. Lewin, B. Genes IX, 2008. Oxford University Press. Ed.9.
6. Watson, J. , Bell, S. et al. Biología Molecular del Gene.2008. Edición 6ª. Edit. Medica
Panamericana.
7. Curtis, Helena. Barnes, Sue. Biología.
8. Ville C. A. Biología. 8a edición. Mc Graw Hill. México.
9. Texto Atlas Histología. Leesun Leesun Paparo. Mc Graw Hill. Interamericana. México.

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