Articulo original

MENINGOE CEFALITIS POR HERPESVIRUS E

BOVINOS Y SU COMP OBACION MEDIANTE EL
P OCEDIMIENTO DE HIBRIDIZACION DEN
ACIDOS NUCLEICOS (DOT-BLOT) ri' .:
Ri ero,R.(')· del CCl111po,R.(-)· Saizar·J.('); Gif,J.(')· Gianl1e hini,E.('); Mendaro A.(3); Weft 'tei~z, R (2).

RE U E UMM RY

°
Ell a to del ano 1995 'e desarro1l6 un joco de
IJ1eningoencefaliti linjopLa 'l1locitaria pOl" herpe' iru' en
bovino ell un e tabl ~ciJl1iento del DepartclI71ento de
Pa allda. Lo allinlale') afe tado '.fuerollnovillos de HIlO a
dos allO de edad de diver a razas ternera Holando}
Charo/ai nlenore de un. ario. La ta 'a de I1lorbilidad file de
5 70/<., fa l110rtalidad de 3 60/<., Lz leta/idad lel6 ~. Los
aninzaLe presentaban bdsicCl17lellte sintonlatologfa de tipo
ner io 0: deanlbull ion en cfrculo, 'en 'orio d ~pri171ido,
tenlblore opi 'totOIlO ill 0 rdill lion, ata i l.' tenlpera-
tura ef vada. Al e alnen hi topatoiogi 0 se aract?riz6 pOl'
ulZa 17zenin itis lilljopla Ino itaria, encefalitis dijusa areas
COil necro 'i . ell fa corte7,a cerebral en z1gul1o' a trocito'
e b er arol1 corpLl cuLo' de in iLl ion illtral1u feare '.
La cOllfirl11Cl ion del agente etiol6 Ji 0 se reali.6
Inediant La te Ilica de hibridi .acion de ci ido' nuclei '0 '
(DOT-BLOT) on sond l espe ifi a de Helpe 'virus bovino
tipo-i.1 I partir de Inlle tra' de erebros de los allin/ale'
11 rop 'iado "
La ell 'ibilidad obtellida pOl" e 'ta tecllica fue de 1 pg,
Se denIo 'tro que fa nzue t/ a puedell 'er pI 0 e.' lei IS
de pue de vario Ine ,de 0/1 'er ada' a -80 a C sin que 'e
afi te La dete' ion viral.
In AllgUf)t 1995 an outbreak oj ( 111phopla I1Z0 itar'
IJlenin goen 'e/ haliti ' in cattle due to herpe viru' t ok place
ill afann ofPa 'lndLt count, Affected anlJ17al ltvere 'teer
ofdifferent breed' betltv ~en one to two. ea~ old. andfenzale
Hol,tein alld Charo/ai' calve' under one ear old. The
I7lorbilit' rea hed 5 7%, l1lortalit 3,60/0 and a lethalit of
6 ~. The . ntol1zatolog ltvas ba icaL nervou' including
'i,. ling de lInbulation, depre ed en oriunl trelTzbling,
opi fofOI1U in oordinatioll, ataxia and h perthernlia. The
hi'topathologi al exanl.in aion vas char lcteri ed b)
f I7lphopla '111ocitClf~ Ineningitis, difu e encephalitis, necro i'
ill th:J erebelar orte~, an I intranuclear inclu ion hodie in
'0111? a 'fro te', Conjirnl tion of the eth 010 i 1gent \tva
Ina le throll h th? nu feic acids hibridization (DOT-BLOT)
jrOl1l brain 'an/pie' oj'necrop iated ani/nals l'vith a pecijic
probe oj' bovin heflJe. virus t pe-l.l.
The 'en 'ibilit) obtained l'vith thi 'techniqu \tva 1 p ,
The sanlples nz llltained at -80 a C can be proces ed after
several 171onths,

Palabra clave: Herpe viru, 1I1enin oell efcLliti " Key words: Bovine Herpe 'viru I1zeningoencephalitis
bovino' DOT-BLOT. cattle DOT-BLOT.

I RODUCCIO Rin tr quefti' B Yin Inr c i EI HVB-l e' uno de 1 patog n

I R) P rl n cc ala familiaH RP - Ina' imp rtant d 1 b Yin ,qu
IH rp viru Bovin tip -I (HVB- V RIDAE 'Ubrall1ilia Iph h r- provocaunaenf rm dad nta()o d
t n1 i"'n c n cid c el viru . de la p 'virina en r v ric II viru '. an1pli di tribuci'" n mundial (3 1 ,14)

VETERINARIA
Vol. 33 a 134 Abril/Junio de 997
 hi t P tolo ico y virolooico fu ron
rcalizad n la DILAVE «MIGU L
C. RUBINO».

B) HI TOP TOLOGIA.

1) 'erolo fa

2) i lanzie III 0 viraL.

3) Dia no tico por tecnica

d biotecllo16 icas.

bL t ri Iocric .' utiIiz" pr c dill1i nt d

VETERINARIA
01. 3 0 134 Abril/Junio d 1997
hibridiz ci6n de acid nucl ico
(DOT-BLOT), con la mu tr de
uatro cerebro y una onda de DNA
del HVB-l producida en el Departa-
mento d Biologfa Molecular d I
In tituto de Inve tigacione Biol6gi-
ca «Clem nte E table» (IIBCE) (23).
Marcado de La sonda con P 2
Fue I c i nado para u u com
onda un fraarnento BamH 1 de 206 pb
dIAD d HVB-l.E t fuemarcad
n dATP alf P32 pOl' R nd TIl
Prim I' d acu rd al pr toe I del kit
u ado (Multiprim de Anl r ham).
Lu go d m I' d la onda fu
purificad p rcolumnad S phadexG
50 para xtra r 10 nucl "tid no
incorporad .
E traceion del DN de Las nlLte tra
proce aron lllue tra de cerebro
de cu tro nim Ie aC ctado .
Dada mu tra e xtraj, pOl'
eparad y a t mp ratura a111bi nt d
4° C. 1 gramo d c r bro. Se
mac raron pOl' parad n un
horoo a n izad I' de vidri teri I con 2
mI. d ED 10mM n PBS ph 7,2.
Lu g tIllar n alicu t de 400 ul y
in ubaron 56°C dur nt una I h ra
n D ( dium d d yl 'ulfate) a una
n tra i'" n d 2 ~ Y pr t· ina K ,
100 ug/ml. EI ADN fu purificado p I'
extrac i6n c n f nol una v , do v c
on "t r y pr cipitado con ac tato de
odio 0 3 M ph 5,2 en tanol 90 ~ a-
20°C durant tod Ia n ch . Lu go 1
P 11 tfu I v doc n tano170~ c do
al vacfo y r u p ndido n AOH 0 2
in ubad a !OO°C durant 5 minut y
rapidam nt nfriad.
Mue tra sel1zbradas
d greoar 50 ul de
TIl ni 2M cada mu stra
tr v" de un m mbrana
Se 'embr I' n tre dilucione
(IOOpg, 10pg.y Ipo.deADN)decad
mue tra de c rebr enr rmo.
Se utiliz6 c m control negativo
una mu tra dc ADN de
normalenla mi rna dilucione queel
ant ri r.
u . . c 1n contI' I po itivo I
mi mofr gIn nt B mHI d IADNd
HVB-I u ado c m nda n la
ioui ntc c ntid dc (lng 100pg
lOpg.).
Hibridiza ion
-n estura d
a
_ 0°
4) Diagllostico de Rabia.
m de ago to d 1995, n novillo d
1 a 2 ana d edad, de diver a raza
(Hereford, Charolai, A. Angu,
H land ,cebufna y cruza ), d 10
rebro que enferm ron 25 y murieron 20' y n
ternera , Holando y Ch rolai , m no-
re de un ano, de la cuale e vi r n
afectada 22 y murieron 10. L
m rbilidad gen ral fue d 5 7%, n
una mortalidad d I 3 6~ y un
letalidad del 63 8~ (CUADRO I).
L indicadore d alud de cad
cat borfa fectada e d tallan n I
CUADRO 1. E ta do categorfa d
nimal no e tuvieron en cont cto
ntr f no xi tiendo vino n el
pI' di .
L mi mo perten cfan un
tablecimiento agrfc la- b nad ro-I -
cher del Departam nto de Pay andu
de 1450 hectarea ,con rna del 90% d
u up rficie mejorad (prad r
onv ncionale yaori ultur cer al r -
forrajera).
S d te t ron factore
predi ponente n la p bl ci "n d
rie otale COlllo:cambioded ntici"n
n t rnera, I vada ta a de para iti -
m y tra I ci6n p t re n bloqu
con alta caroa in t nt"n (7.6
39.3 anim Ie pOl' h ctar a)
"p c del n y nivel f rr jero.
L animale enD rm pr en a-
ban d mbulaci6n n cfrcul n ori
d primido temperatura de 41°C
42°C, di n a, mu 0 a p "lida d hi-
drat ci6n, frecuencia cardfaca aum n-
tada miocl nia facial pi 6tono
nla ~ticaci6n y alivaci6n, dificultad n
I inoc ti" n de agua, de hidr taci" n y
diarr en algun enfermo. Una v z
in t ur do 10 fntoma, la ev luci" n
iou un cur agudo muriend n 72
a 96 h ra .
Tambi "n encontraron nimaI
qu pre ntaban intorn tolo fa d
decaimient e hipert nlf 'in ~ian
n rvio 0 , que en ben ral n muri ron.

de R ULT D

ripcion d I foco.

L' en f rnl d' d ' pI' . n t " n I

VETERINARIA
Vol. 33 N° 134 Abril/Junio de 1997
 CATEGORIA STOK EXPUESTO ENFERMOS MUERTOS MORBILIDAD MORTALIDAD LETALIDAD

NOVILLOS 590 25 20 4,2 0/0 3,2 0/0 80 0/0

TERNERAS 230 22 10 9,5 0/0 4,3 0/0 454 0/0

HASTA I ANO

TOTAL 820 47 30 5,7 0/0 3,6 0/0 63,8 0/0

cefalo-raqufd 0 y ed rna menfng

Tre animaIe (un novillo y d
tern fa ) pr entaron neum ni en 10
lobulo craneal d ]0 pulmone .

La Ie ione hi tologica rna im-

portante e localizaron n cl item
nervio 0 central (S.N .C., iendo imi-
lare en todo 10' ca 0 .

ob ervo una rn ningiti

linfopla mocitari " qu en ci rta area (t rn ra d UJ ana)
con i tfan n una den a capa d linf cito . H.E. 50 X En 0' lre' anim con Ie i n
elemento mononuclvare (Fig. N° J). pulm nare' e ob rv; n urn ni d I
tip iot r ,tici I con di t n ion d 1
tabiqu int ralv olare por 1 ment
ITIonucleare , edema y conge tion c n
e ca 0 exudado inflamatorio a niv 1d
bronquiolo '.

c) Bacteriologia.

Se f ctuar n cuI ti v d material

d 1 i terna Nervio Central ( .N.C.) Y
lfquid cef loraqufdc (5 n vill ) no
Fig.l. Cort za c rebral d ~ un novillo d un ano. ai land e Listeria nzonoc togene u
e ob rva infillraci6n d meninge tra bact ria d ignificacion patol6gi-
1 nlento rnononucl are (I infocito
pia mocito ) (n cha) conge ti6n d 10 va ca.
angufneo e infiltraci6n p riva cui r linfocitaria.
H. E., 100 X. d) Virologia.

1)La once roue tr parea-

La encefaliti e car cteri 0 por un da fueron po itiv ,in variaClon en
difu a infiltr ei; n periva cular de 10 titulo d anti uerpo entre la 1ra.
1 mento m nonuel are (linfocit y 2da. mue tra.
macr6fago y pIa In cito ), formad
ha ta por i capa d eel ula 2)Ai lamiento del viru de la
inflam tria fe tando tanto la u tan- Rinotraqu iti In~ ccio a Bovina:
cia blanca eOOlO la ,ri (Fig. N°2). Lo tr pa aj ci go 0 eulti YO
c lulare re ultar n n g tiv .

VETERINARIA
Vo . 33 N° 134 AbrillJunio de 1997
3)Diagn6 tico bi tecnol" gico me- ne d hi brid izaei "n u d fueron una ubica ion xacta a la 1 ione
diant nda d DNA. aju tada para que nlent inflamatoria (3, 12).
(Cuadro N° 2) (Fig.4). hibridizar n con la ond' aquella La iguiente nf rmed d fu-
ecuenci 'altamente h m "loba a la r n d cartada n b e a 10
Ini'ma. resultado de laboratorio y dato
epidemio10gico obtenido: fiebre
4) Diagno tico de Rabia. catarral maligna, rabia paralftica
b vina, lengua azul Ii trio i, Y
Mue tra Cantidade deADN La cuatr J11U 'tr remitida al polioenecefalomalacia por car ncia
IOOpg. IOpg lpg. D part mento de Z no i' y V ctore - de tiamina.
C rebro 515 T2 + + + M P, re 'ultar n negativ . La primera y egunda mue tra de
Cerebro 515 T3 + + u ro proce ado por ELISA fueron
Cerebra 5] 5 T4 + + DI CUSION po itiva , in variaeion n 10 tftulo de
Cerebra 515 T5 + + +
anticuerpo entre amba .
C r br Normal
L pre encia de anticuerp nti-
IBR indica qu 10 animal e tuvi -
SOllda de 206pb (+) (+) (+)
ron n eontacto con 1 viru . L n
lng 100pg 10pg
variacion en 10 tftulo ntre amba
mue tra podria exp1iear p rque 1
primera extrajo reci "n a I 15 dfa
de la aparicion d 10 primer
Po iblernente al mom nto
OOpg lOpg Ipg
primeraextraccion 10 animal h bri n
erebro 5151T2 pr ducido anticuerpo anti-IBR cuyo
titulo habrfan alcanzado 1a me et de
cerebro 515fT la curva. Por 't motivo no
erebro 515fT4
regi tra un alza d 10 tftu1 n la
"'egunda mue tra obt nida 20 dia
cerebro 15fT5 pue.
Dada la condieione d e tre en
c r bro normal
que e ncontraban 10 animale y la
D deHVB-l car cterf tica de 10 herpe viru de
( onda u ada) de rr Har lateneia, e podrfa pen r
cn una reactivaeion y/o r excr cion
del virus.
Fig4.Hibridizacioll DOT-BL01: Muestras de Lo re ultado n gativo de 10' tr
'erebro con HVB-l," 512fT2, T. T4, T5; pa aje ci go n cultivo ce1u1ar
cOlltrol negativo positivo," ADN de HVB-l. para ai I mi nt viral podria d er e
la perdida de infectividad d la
partfcul s virale por la con i i n
EI DN del HVB-l fu d t ctado
d xtraccion, almac n mient y
n Ia cuatro mue tra d c r br
arribo de la mue tra .
omad d animale que pre entaron
Sin embargo, pudo identificar la
intomatologfa nervio a yean diag-
pre neia del viru rnedi nte tecnica
no tico hi t P tologic de
biotecno16gica"' (DOT-BLOT) qu no
m ningo ne faliti n upurada. EI
requier n la can ervacion d la
nali i par DOT-BLOT on sanda
cap cidad infectiva de la artfcula
e p cffica de HVB-l . I de e, ta
viral.
u tra de pue d can ervada a-
0° C dur nt In edIna tra la Lo re ul tado obtenido por
pr ncia de ADN d HVB-l en toda ' hibridizaci "n d acido nueleico
Ja mu tra. (DOT-BLOT), can nda p cffica
de HVB-I.I marcada radioactivam nt
d tectar n cu n con P32 no con irman la etiolo fa de
o-enOlnlC no e p cffica cn fa Ia cnferrn dad. L mue tr d ADN
rnu tra de rebro n lmal utilizada ' ex trafda de cer bro de cuatro
rna c ntrol n gativ . L ndi io- animal ' d I tableeimiento, con

VETERINARIA
Vol. 33 N° 134 Abril/Junio de 1997
diagn6 ti 0 hi topatol6gic de VAZQUEZ. M.: OAf/ME. E.: POSPI Cf/IL,
A.( 1 83). Meningoellcephalilis 'aLlsed!Jr IBR
m nio<Yo ocef liti 0 supur da y
Vims in alw's ill Ar~ 'lIIina. 1. Vet. Med. '30: p.
embr d . n dilucion decr ci ote .27-3.L.
obr memb ~anad nyl n, hibridizaron DIAS. L. ".: MAISONNAVE, J.: PAULLIER, c.:
PERD MO. E.: FI ARE. A.: DE IZAGUIRRE.
con la nd d ADN ( HVB-l. I . No R.( 19/'L). Rillolraqueitis il{Fe . 'iosa Bm illa(lBR).
hibridizar n la mue~;tra de erebro Deseril citJn de lill cLlllllro 'fflli'o ell lel"/Leros ell
normal, 10 que indica la p cifi idad ((Im!Jo. III Cmlp". 'so Na 'iOl/(/1 de Veterinaria, p.
521- 30.
de la c'cnica. La en ibilidad de 6, EDWARD,.: WHITE. H.; NIXON, P.A. ( 1990).
det cci6n evalu da p r la diferente A tudy (~llhe predominanl genolypes (~r Bovid
Herpes irus-I found inlhe U.K. Vel. Mi To!>io/..
dilucion fue d 1 pg. 22: p. _/3-223.
En e te en ayo 10 p dem 7. ENGEL. M.; LOEPF '. E.: WILD. P.:
confirmar la etiologfa (HVB-]) de la HRANER. E..: WYLER, R.( /987). The genome
(~l 'aprine h'rpes\'irus I: gellome structure alld
enfj rmedad pero no 1 u tipo del relatedlless to !Jo\'in' herpesvirus I. J. Gell.
viru actuant . Virol., 1987. 6R:p. 2019-2023.
8. ENGELS, M.: . T· K. F.: WYLER. R. (/9R6).
omparisol1 (~l geno/ll 'S (~r iI~le 'Iirms hovine
Agradecimiento I
rhinolracheitis and infectious pltslular
wtL\'()\'agillitis \ irliS slraills 1J\' restri ·tion
elldonLl 'Iease analysis. AI' '11. viroi., 67: p. 169-
A la Dra. Stella Quintana, por u 174.
contribuci6n n la evaluaci6n d 10 9. EUG TER, .K.: ANGULO, A.B.: JONES. L.P.
dato epidemiol6gic, d 1 f c . (1974). Hell)esl'irus en 'eplwlitis in rmlge Cllllle.
Ahslra ·Is. 17th. AnJlulll Meeting (~lthe Ame"; 'aIL
A 10 Sr . B triz abrega y Asso'illtioll of VeTerinary Lllhoratory
Marcelo Bottino por I proce amient Diagllosli 'ians, Virginia. p. 267-28/.
10. FREN H. E.L. (/962). A spe '~fl' Virus
del mat rial. encephalitis ill 'al\ es: isolalion and
c/1{(f([cteriZllfion (~llhe causal ag 'llf. AUSI. Vel. J..
38: p. 2/6-22/.
II. GUARINO. II.: MAl ONNAVE. J.: I\PANO. F.;
BIBLIOGRAFIA PEREIRA 1. (191L). Primer aislamienlo e
idelltiji 'I 'irJIl del irllS de la Rinolraqueifis
I. BECK. B.E. (1975).lnfecliolls hovine rillotl'll 'heitis Infe ' 'iosa Bm ina en Uruguay. Re\ iSla Veterilla-
encephalomyelitis in 'alfle and its dUfere1'lltial ria: 8.: p. I. /-/34.
diu nosis. Call. Vet. J. 16:269-271. 12. IIILL. B.D.: I/ILL. M. W.M.: CHUNG. Y. .;
2. BROWN. W.; CHOW, 1 L.: JEN EN, R. (1957). WIIIT ,R.1. ( /984). Mellinp,oen 'efatilis ill 'ah'es
Symposium on the mucosal disease ·o11lplex. I. dlte to !>O\ ill' he/pe\'ints type / illfection. Aust.
infectiolls bo ille rl1illolracheitis ill feedlots of Vel. J. 6/: p. _42-243.
Colorado. 1. A. Vet.Asso '. 130:p. 379-381. /3. KAIIRS. R.F.. (1977). Infe'tiolls Bm ille
3. CARRILLO. B.J.; POSPfSCI-IIL, A.; DAHME, E. Rhinol raqueilis: Re\ iel and Update. JA VMA
(198 ). Pathology ofa h >vine viral encephalitis in Vol.171.N°10. p. /0 -1064.
Argentina. Zhl. Vel. !vIer/. B30: p. 161-16H. 14. LUDWIG. II. (1984). lIe1l)es\iruses (~r!Jm'idae:
4. CARRILLO, B.1.; AMBROGI. A.; I/UDEL. A.; Ih' camet 'riz,{I/io/l. ~roLlpin 'alld role (~rdUTerent
types. ineludill!!. latellt iruses. In: Wittmann, G. ;
Gaskell. RM. : R7,illll, 1-1.1. ede., Lalent
h'rpesvirus inFe 'Iions in \'eterinur\' 1Il't.fi ·ille.
BOSlo/llThe . Hllgue/Dordre ·htiLa/lca.·ler;
Marlillus Ntjho./IPuhlishers,p.17/-189.
15. MC CLAIN. D.; LEE. W.H. (/9 9). F.S.I..
Method for the l.lislafioll alld idellt{/t atioll (~I
Listeria I7LOllocylogelles. Laboratory
'()I1lI1lLmicatioll N° 57. Revised Ma\' 24./9 9.
U.S.D.A. - FS.I.S. - Microbiolo '\' Divi. ·ion.
16. MILLER. N.J. (J 995. ) Illfe~tiollS Necrotic
Rhinotra 'heitis of Cattle. JA VMA, f26,p. 463-
467.
17. OFFAY D', 1.M.: MOCK. R.E: FULTON. W.M.
(1993). Isolation and c/wracteri ation of
en 'ephalitic hoville herpesvirus t,\1Je I isolales
from caffle in North America. Am. J. Vet. Res..
Vol 54, Nt> 4 :p. 534-539.
/8. PASTORET. P.O.: THIRY, E.; BROCHER, B.:
DERBOVEN. G. (1982). Bovine hefl)eS irus /
il{l'eclioJl (~l cattle: pathogenesis, Ill/ell 'y.
COllsequen 'es of latell 'y. Ann.Rech. Vel. /3:.p.
22/-235.
19. RIET CORREA, F.: VIDOR, T.: S HfLD, A.L.:
MENDEZ. M.D.C. (/989). Meningoen 'efalile e
ne 'ro, e do cortex cerebral en bovino,\' 'aLl.Wldas
pOl' hell) 'S virus ho ino-I. Pesq. Vet. Bra... 9
(1/2): p.13-/6.
20. ROIZMAN. R.: DESROSIERS, R.C.;
FLECKENSTEIN. B.: LOPEZ, C: MIN ON.
A.C alLd STUDDET. M.1. (1992). Tlte famiLy
lIelpes iridae: ([II update. Ar·1t. Viml. 12 :
p.425-440.
21. AIZAR, 1. (1995). Delermillaci6f! de La
prevalen 'ia de IBR elL bm inos de Leche y carne
en Uruguay. XXIII Jornadas Umguayas de
Buiatria. .C.2.1.
22. SAIZAR, J.; GUARINO, 11.: CAPANO, F (19 8).
Puesta (/ PUllto de la tecnica inl1LL1noellzil1Lalica
(ELI A) para eL diaglUJstico de la Ril/otraqueitis
h~le 'ciosa Bovina (IBR) y SLl COl1Lpliraci<JIl 'on la
seroneutruliza 'irJIl. XVI Jomadas Urttguayas de
Blliatria. CC.7.1.
23. AMBROOK. 1.: FRIT. CH, EF; MANIATI . T
(19R9). Molecularc!oniJlg. A laboratory nUlJlLutl.
Cold pring Harbor. N. Y. Cold pring Harhor
UI !Jo I'll lory.

>< ; '~'r T{"~'i 11tH< \:

, $~\"" .L~ J \} .i>~:· ,~J L
(
r~ ~§*r'i~''''
:".'s
~ ~.

El complemento efectivo n \a
., de las enfeflnedades
prevenclOn . f)
::;

\ ..
respiratorias, reproductl as Y
nerviosas. as g ra alto

VETERINARIA
Vol. 33 N° 134 Abril/Junio d 1997