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Ecología del desove oceánico de anguilas de agua dulce en el Pacífico norte occidental

ArtículoenComunicaciones de la Naturaleza · Febrero 2011

DOI: 10.1038/ncomms1174 · Fuente: PubMed

CITAS LECTURAS

332 5.824

19 autores, incluido:

Katsumi Tsukamoto S. Chow

Agencia de Investigación Pesquera
619PUBLICACIONES19.683CITAS
201PUBLICACIONES4,141CITAS
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Hiroaki Kurogi Michael J. Miller

Instituto Nacional de Investigación en Ciencias Pesqueras, Agencia de Investigación Pesquera La Universidad de Tokio

80PUBLICACIONES1.283CITAS 218PUBLICACIONES6.839CITAS

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ARTÍCULO
Recibido el 18 de junio de 2010|Aceptado el 22 de diciembre de 2010|Publicado el 1 de febrero de 2011 DOI: 10.1038/ncomms1174

Ecología del desove oceánico de las anguilas de agua dulce

en el Pacífico norte occidental
Katsumi Tsukamoto1, Seinen Chow2, Tsuguo otake3, Hiroaki Kurogi2, noritaka mochioka4, Michael J. Miller1, Jun
Aoyama1shingo kimura5, evita a Watanabe1, Tatsuki Yoshinaga6, Akira Shinoda1,7, Mari Kuroki1,8, machiko oya1,
Tomowo Watanabe9, Kazuhiro-Hata10, shigeho jiri11, Yukinori Kazeto12, Kazuharu nomura13y Hideki Tanaka13

La ecología reproductiva natural de las anguilas de agua dulce siguió siendo un misterio incluso después de que algunas

de sus áreas de desove en alta mar fueran descubiertas hace aproximadamente 100 años. En este estudio, investigamos

por primera vez la ecología del desove de las anguilas de agua dulce utilizando colecciones de huevos, larvas y adultos en

condiciones de desove de dos especies en su área de desove compartida en el Pacífico. Los ovarios de las hembras de

anguila japonesa y de los adultos de anguila moteada gigante eran policíclicos, lo que sugiere que las anguilas de agua

dulce pueden desovar más de una vez durante una temporada de desove. La primera colección de huevos de anguila

japonesa cerca de West Mariana Ridge, donde también se capturaron adultos y larvas recién nacidas, muestra que el

desove ocurre durante los períodos de luna nueva durante toda la temporada de desove. Las profundidades donde se

capturaron los adultos y las larvas recién nacidas indican que el desove ocurre en capas menos profundas de 150 a 200

m y no a grandes profundidades. Este tipo de desove puede reducir la depredación y facilitar el éxito reproductivo.

1Departamento de Biociencia Marina, Instituto de Investigación de la Atmósfera y el Océano, Universidad de Tokio, 5-1-5 Kashiwanoha, Kashiwa, Chiba 277-8564, Japón.2División de
Pesca Costera y Acuicultura, Instituto Nacional de Investigación en Ciencias Pesqueras, Agencia de Investigación Pesquera, Yokosuka, Kanagawa 238-0316, Japón.3Centro
Internacional de Investigaciones Costeras, Instituto de Investigaciones de la Atmósfera y los Océanos, Universidad de Tokio, Otsuchi, Iwate 028-1102, Japón.4Ciencias de los
Biorrecursos, Facultad de Agricultura, Universidad de Kyushu, Ciudad de Fukuoka, Fukuoka 812-8581, Japón.5Departamento de Estudios del Medio Ambiente Natural/Departamento
de Investigación Colaborativa, Escuela de Graduados en Ciencias Fronterizas/Instituto de Investigación de la Atmósfera y los Océanos, Universidad de Tokio, Kashiwa, Chiba
277-8564, Japón.6Departamento de Biociencias Marinas, Escuela de Biociencias Marinas, Universidad de Kitasato, Ofunato, Iwate 022-0101, Japón.7
Departamento de Biología, Universidad Médica de Tokio, Shinjuku, Tokio 160-8402, Japón.8Departamento de Investigación, Museo Universitario, Universidad de Tokio, Hongo,
Bunkyo, Tokio 113-0033, Japón.9Centro de Análisis Integrado de Datos Ambientales Marinos, Instituto Nacional de Investigación de Ciencias Pesqueras, Agencia de Investigación
Pesquera, Yokohama, Kanagawa 236-8648, Japón.10Centro de Capacitación y Educación, Universidad Nacional de Pesca, Shimonoseki, Yamaguchi 759-6595, Japón.11División de
Ciencias de la Vida Marina, Escuela de Graduados en Ciencias Pesqueras, Universidad de Hokkaido, Hakodate, Hokkaido 041-8611, Japón.12División de Biología de la Acuicultura,
Estación Tamaki, Instituto Nacional de Investigación de Acuicultura, Agencia de Investigación Pesquera, Tamaki, Mie 519-0423, Japón.
13 División de Biología de la Acuicultura, Instituto Nacional de Investigación de Acuicultura, Agencia de Investigación Pesquera, Minami-Ise, Mie 516-0193, Japón. La correspondencia
y las solicitudes de materiales deben dirigirse a KT (correo electrónico: ktpc@aori.u-tokyo.ac.jp ).

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ARTÍCULO
t
a ecología reproductiva de las anguilas anguiladas en alta mar en los
océanos sigue siendo enigmática a pesar de que se sabe que deben
agregarse y desovar dentro de las áreas de desove estimadas. Estas
zonas de desove se han localizado históricamente mediante la captura de sus
pequeñas larvas con forma de hojas llamadas leptocéfalos, primero en el Mar de
los Sargazos del Atlántico Norte.1y luego, más recientemente, en el Pacífico norte
occidental2. El desove en el Pacífico Norte occidental fue corroborado
recientemente mediante la captura de anguilas adultas.3, pero no se recolectaron
huevos en estas áreas de desove4. Sus largas migraciones a estas zonas de
desove han fascinado a los científicos porque cada anguila debe nadar miles de
kilómetros hasta la misma zona donde nació y luego encontrar una pareja con
quien desovar.4.
Se han capturado incidentalmente anguilas migratorias de algunas especies a lo
largo de los márgenes continentales en los océanos Atlántico y Pacífico, pero nunca
cerca de sus áreas de desove.4,5. Se ha obtenido información sobre su comportamiento
migratorio utilizando etiquetas satelitales de alta tecnología, que han demostrado que
las anguilas migratorias suelen nadar a profundidades de entre 500 y 900 m durante el
día y a profundidades menores de 100 a 300 m durante la noche.6,7. Nadar a
profundidades diurnas tan profundas durante la migración puede estar relacionado con
evitar a los depredadores o con la regulación del proceso de maduración utilizando
diferentes temperaturas del agua.6–8. Sin embargo, ninguno de estos estudios de
marcado ha documentado el comportamiento de las anguilas que llegaron claramente a
sus zonas de desove. Hasta hace poco3,Varios intentos, publicados e inéditos, en los
últimos 30 años de capturar u observar anguilas adultas dentro de sus zonas de desove
han fracasado tanto en el Mar de los Sargazos como en el Mar de los Sargazos.9y Pacífico
Norte occidental10.
El éxito en la inducción artificial de la maduración de las anguilas ha permitido
observar en el laboratorio algunos comportamientos de desove11,12y sus
leptocéfalos cultivados han sido estudiados en los últimos años13,14. Las
observaciones de laboratorio de los adultos en desove han sugerido la posibilidad
de que las anguilas anguiladas desoven en grupo.11,12, pero estas observaciones
proporcionan una comprensión limitada de la ecología reproductiva natural de
las anguilas. Las preguntas sobre las características biológicas de las anguilas en
desove, cuándo y a qué profundidad desovan en el océano, o cómo se encuentran
entre sí y forman agregaciones de desove, han quedado sin respuesta debido a la
imposibilidad de capturar u observar anguilas adultas en sus áreas de desove.
En el Pacífico Norte occidental, la zona de desove de la anguila japonesa,
Anguila japonica, se descubrió que estaba ubicado en la corriente ecuatorial
norte que fluye hacia el oeste al oeste de Guam, al capturar sus pequeñas
larvas.2. Capturas de todos los tamaños de larvas de la especie tropical
anguila moteada gigante,anguila marmorata, junto con las larvas de la
especie de zonas templadas, la anguila japonesa, también han indicado que
ambas especies utilizan la misma zona de desove en la corriente ecuatorial
del norte.15, aunque sus larvas eventualmente se reclutan en diferentes
regiones, desde Japón hasta Indonesia.
Facilitar los esfuerzos de conservación de estas anguilas, y de las anguilas de
agua dulce en general, que están cada vez más amenazadas a nivel mundial.16,17,
la zona de desove en el Pacífico norte occidental ha sido estudiada intensamente
recientemente. En este estudio, nuestro objetivo fue comprender la ecología
reproductiva de las anguilas de agua dulce utilizando censos de muestreo de
larvas de 2005 a 2009 y censos de arrastre en 2008 y 2009 para capturar anguilas
adultas en esta área de desove estimada. Se utilizaron grandes redes de arrastre
entre aguas para recolectar anguilas adultas y grandes redes de plancton para
recolectar sus huevos y larvas, junto con estudios hidrográficos de la estructura
del océano. Se utilizaron secuencias de ADN para identificar las especies de los
especímenes recolectados y se realizaron diversas observaciones morfológicas o
fisiológicas en los adultos capturados. Los patrones espaciales y temporales de
estas capturas de adultos, huevos y larvas mostraron que ambas especies
parecían desovar en los cientos de metros superiores del océano durante los
períodos de luna nueva al oeste de la cadena de montes submarinos, y las
características reproductivas de los adultos indicó que podrían desovar más de
una vez durante la temporada de desove.
Sugerimos que el desove superficial en las noches oscuras de luna nueva cerca de la
cadena de montes submarinos probablemente facilita la sincronización de las
agregaciones de desove y reduce la depredación de adultos y huevos.
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COMUNICACIONES DE LA NATURALEZA | DoI: 10.1038/ncomms1174
Resultados
Capturas de anguilas adultas. Durante los censos de anguilas adultas, se
realizaron un total de 62 arrastres horizontales de 900 a 3000 m de largo.2Los
arrastres científicos que abrieron la boca se realizaron principalmente de noche a
profundidades de 132 a 766 m de junio a agosto de 2008 y de mayo a junio de
2009. Nueve de estos arrastres desplegados en capas de 163 a 303 m de
profundidad capturaron un total de 15 anguilas adultas de agua dulce (Tabla 1,
figura 1).A. japonica(Se recolectaron seis machos y seis hembras, Fig. 1a, b, e, f) y
anguilas moteadas gigantes (dos machos y una hembra, Fig. 1c-e, g) en tres
latitudes diferentes a lo largo de la parte sur de West Mariana Ridge. cadena de
monte submarino (Fig. 2) en junio3y agosto de 2008 (ref. 18), y en junio de 2009.
Estas anguilas fueron capturadas alrededor de los períodos de luna nueva de
cada mes (4 días antes a 2 días después de la luna nueva, Fig. 3a) a pesar del
considerable esfuerzo de muestreo antes (- 10 días). ) y después (+ 6 días) de la
luna nueva (Tabla complementaria S1). El momento de estas colecciones de
adultos también se superpuso con las colecciones de huevos y preleptocéfalos
recién nacidos (larvas en etapa previa a la alimentación; Fig. 3b, c).
Cada uno de los tresmarmorata(dos machos y una hembra) fue capturado con
un machoA. japonicaen los mismos arrastres, mientras que otras capturas
múltiples incluyeron sólo hembrasA. japonica(dos y tres hembras). Todos los
machos fueron capturados en el copo de las redes de arrastre y sufrieron menos
daños, mientras que todas las hembras menos una (A. japonica) fueron
capturados al enredarse en la malla de gran diámetro de la red lateral, lo que
marcó o apretó sus cuerpos (Fig. 1a,c). Esto puede sugerir que los anguilidos
forman agregaciones de un solo sexo antes y después del desove, o que los dos
sexos tienen un comportamiento de natación diferente para evitar la captura
dentro de la red de arrastre, pero se necesitan observaciones más detalladas.
Los exámenes de la morfología de estas anguilas adultas proporcionaron la
primera información sobre el estado de los anguilidos en desove (Fig. 1). Todas
las anguilas eran de color negro plateado (especialmenteA. japonica) con ojos
muy agrandados (especialmentemarmorata, Fig. 1e) y tenía dientes degenerados
debido a la descalcificación (Fig. 1g). Color del cuerpo delmarmorataEl macho de
la Figura 1d,e era gris metálico, pero tenía muchos rasguños causados por la
red. Sus cuerpos eran bastante delgados excepto en el área del abdomen, pero
tenían aletas caudales y pectorales bien desarrolladas para nadar (Fig. 1f). Todas
las anguilas tenían tractos digestivos significativamente degenerados sin
contenido visible del estómago/intestino ni evidencia de alimentación. Además,
los perfiles isotópicos estables muy similares entre estas anguilas y las anguilas
plateadas que recién iniciaban su migración de desove desde el este de Asia eran
distintos de los de los peces mesopelágicos capturados en el área de desove.19.
Esto sugiere que las anguilas japonesas no asimilaron los nutrientes del ambiente
marino durante su larga migración de desove (~6 meses) y que conservaron sus
valores isotópicos iniciales antes de la migración.19. Algunas de las anguilas
capturadas después del desove eran muy delgadas y débiles, como las dos
hembras capturadas en agosto de 2008 (ref. 18) que sólo pesaron 91 y 117 g
(Tabla 1), lo que comprobó que todas estas anguilas mueren después del desove,
así como Lo hace el salmón después de desovar en los ríos.
A. japonicalas hembras eran significativamente más grandes en longitud (media±s.
d.: 674±93 mm, rango 555–767 mm) que los hombres (524±74 mm, 447–639
mm;PAG=0,025), pero no en el peso corporal (218±130 g, 91– 406 g para
mujeres, 144±44 g, 84–200 g para los hombres;PAG>0,05; Tabla 1). Estas
longitudes eran similares a las de las anguilas migratorias de esta especie
capturadas en varias zonas de la costa de Japón, que tenían longitudes
medias de 661±88–748±90 mm para hembras y 475±44–590±112 mm para
machos20,21. Sin embargo, las anguilas en condiciones de desove pesaban
mucho menos, ya que las hembras de la costa de Japón tenían un peso
medio de 445±196–739±229 g y los machos 144±41-239±74 g (referencias
20, 21). la hembramarmorata(1.223 mm, 2.496 g) también era más grande
que los machos de esa especie (457 y 623 mm, 190 y 314 g).
Las edades medias de las condiciones de desove.A. japonicaque se estimaron
mediante anillos anuales de otolitos fueron 7,0 (hembras, rango 5-10,norte=4) y 6,8
(hombres, rango 5-10,norte=4) años, y son similares a las edades de las anguilas
plateadas recolectadas cuando salen de la costa de Japón.20. las edades de
marmoratacolectados en el área de desove fueron 12 (hembra,norte=1)
COMUNICACIONES DE LA NATURALEZA | DoI: 10.1038/ncomms1174 ARTÍCULO

t capaz 1 | Capturas y características biológicas de dos especies de anguilas adultas de agua dulce.

Anguila Especies Sexo Total Cuerpo Gónada GSI Condición Buque Muestreo Localidad punto medio de Remolcar Máximo
No. longitud peso (gramo) factor fecha línea de arrastre duración profundidad neta

(mm) (gramo) (h) (metro)

Latitud Longitud
(°N) (°E)
1 A. japonica metro 485 112 11 — 0,98 Kaiyo 3 de junio de 2008 Punto Kaiyo 13-00.70 142-17,57 4.21 229
3 A. japonica metro 515 151 28 18.8 1.11 Kaiyo 4 de junio de 2008 Punto Kaiyo 13-02.62 142-13.27 4.16 —
6 A. japonica metro 639 187 42 22,5 0,72 Kaiyo 19 de junio de 2009 Cola oeste 12-21.82 141-22.84 5,99 —
8 A. japonica metro 471 84 dieciséis 19.3 0,80 Kaiyo 20 de junio de 2009 Cola este 12-23.27 141-16.01 7.9 284
10 A. japonica metro 585 200 59 29,5 1.00 Hokko 21 de junio de 2009 Cola este 12-19.95 141-13.10 9.63 163
11 A. japonica metro 447 129 52 40.3 1.44 Kaiyo 22 de junio de 2009 Cola este 12-18.85 141-33.47 8.44 303
4 A. japonica F 555 90,5 Vestigial — 0,53 Kaiyo 31 de agosto de 2008 suruga sm 14-06.69 142-44.04 5.08 —
5 A. japonica F 662 117 Vestigial — 0,41 Kaiyo 31 de agosto de 2008 suruga sm 14-06.69 142-44.04 5.08 —
12 A. japonica F 749 406 194 47,8 0,97 Kaiyo 23 de junio de 2009 Cola este 12-16.84 141-54.38 7.91 275
(244) (32) (13.1) (0,58)
13 A. japonica F 767 244 22 9.0 0,54 Kaiyo 23 de junio de 2009 Cola este 12-16.84 141-54.38 7.91 275
14 A. japonica F 739 330 37 11.2 0,82 Kaiyo 23 de junio de 2009 Cola este 12-16.84 141-54.38 7.91 275
15 A. japonica F 574 120 dieciséis 13.3 0,63 Kaiyo 25 de junio de 2009 Cola este 12-15.89 142-03.93 6,85 194
2 marmorata metro 623 313 42 13.4 1.30 Kaiyo 3 de junio de 2008 Punto Kaiyo 13-00.70 142-17,57 4.21 229
7 marmorata F 1.223 2,496 284 11.4 1.36 Kaiyo 20 de junio de 2009 Cola este 12-23.27 141-16.01 7.9 284
9 marmorata metro 457 190 48 25.3 1,99 Hokko 21 de junio de 2009 Cola este 12-19.95 141-13.10 9.63 163
Promedio=
243m
Las localidades de captura en diferentes latitudes fueron el sur (cola este y oeste), el medio (punta Kaiyo) y el norte (suruga sm). Los valores del índice somático de las gónadas (GsI) y otras características entre paréntesis excluyen
los óvulos ovulados que brotaron de la anguila núm. 12.

140°E 141°E 142°E 143°E 144°E 145°E

occidental
14°N Norte
Pacífico

13°N

12°N

11°N

10.000 8.000 6.000 4.000 2.000 0

Profundidad (m)

Figura 2 | Lugares donde se recolectaron anguilas adultas dentro de su área de desove.

Figura 1 | Anguilas adultas de agua dulce en condiciones de desove.(a) Anguila japonesa Adultos de la anguila japonesa,Anguila japonica, se muestran con círculos rojos, los de la

hembra,Anguila japonica, 749 mm de longitud con óvulos no fertilizados que salieron del poro anguila moteada gigante,anguila marmorata, con círculos amarillos y remolques que no

genital después de la recolección (plato en la foto). barra de escala, 50 mm. (b) masculinoA. recogieron anguilas adultas con círculos blancos. Las anguilas se recolectaron en junio y

japonica(447 mm). barra de escala, 50 mm. (C) Anguila moteada gigante hembraanguila agosto de 2008, y en junio de 2009. Cada arrastre de una red de arrastre se representa con

marmorata(1.223 mm). barra de escala, 100 mm. (d) masculino un círculo trazado en el punto medio de cada despliegue. Barra de escala negra, 50 km.

marmorata(457 mm). barra de escala, 50 mm. (mi) Comparación de la parte anterior de

los cuerpos de los machos.A. japonica(arriba: 585 mm) y elmarmorata en (d) (abajo)
que fueron atrapados juntos en la misma red, mostrando un mayor agrandamiento de
los ojos enmarmorataque enA. japonica. (F) Parte de la cola de un machoA. japonica(
471 mm) que todavía estaba en buenas condiciones para nadar a pesar de su cuerpo
muy delgado. (gramo) Dientes degenerados de la mandíbula superior de la hembra.
marmorataen (C).
y 6 (masculino,norte=1) años. Aunque es bien sabido que las anguilas machos son más
pequeños y más jóvenes que las hembras cuando comienzan a migrar mar adentro,
estos datos confirmaron que los machos capturados en la zona de desove también eran
más pequeños y más jóvenes que las hembras, y demostraron que incluso los machos
pequeños (<450 mm) pueden lograr llegar a la zona de desove.
Análisis microquímicos preliminares de las proporciones de otolitos
estroncio:calcio (Sr:Ca) de dos hembras y dos machos en condición de desove.A.
japonicamostraron que un macho había vivido en un río, dos (un macho y una
hembra) habían habitado un estuario de agua salobre y una hembra había vivido
en hábitats marinos costeros durante su fase de crecimiento de la anguila
amarilla en aguas continentales del este de Asia. Esto se podría inferir porque la
concentración de Sr es mucho mayor en agua de mar que en agua dulce, y la
concentración de Sr en el agua en la que vivía cada anguila quedó registrada en
sus otolitos.22. Estas anguilas con diversas historias de uso de hábitat que fueron
recolectadas en el área de desove eran similares a las anguilas capturadas en
aguas costeras japonesas que se encontró que

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ARTÍCULO COMUNICACIONES DE LA NATURALEZA | DoI: 10.1038/ncomms1174

o energía para la locomoción durante la migración. Tenía un hígado grande, sano y de

8
2008, 2009 color rojo brillante y una vejiga natatoria aparentemente funcional, pero el tracto
6
No. de adultos

digestivo estaba degenerado (Figura complementaria S1a). Aproximadamente el 90% de

4 los ovocitos en los ovarios de anguila en condiciones de desove se encontraban en la
etapa vitelogénica media con diámetros de ovocitos de 350 a 600µm, mientras que las
2
de las anguilas que migraron fuera de aguas costeras se encontraban en las etapas
0 previas a vitelogénicas tempranas con diámetros de huevos de ~150–300µm (ref.24). El
–5 –3 –1 +1 +3 +5 espesor del corion de los ovocitos en la mujer.
30
A. japonicarecolectada en el área de desove (media±SD: 4.4±0,9µm, rango: 3,2–6,3µ
No. de huevos

2009
metro,norte=28) era ligeramente, pero significativamente, más delgada que las de las
15
anguilas maduradas artificialmente (5,1±0,6µmetros, 4,0–6,6µmetro,norte=35) que

0 fueron inducidos al crecimiento vitelogénico en las etapas vitelogénicas media y tardía (

PAG<0,05). Las etapas de maduración relativamente avanzadas y los tamaños más
–5 –3 –1 +1 +3 +5
450 grandes de los ovocitos restantes en las hembras después del desove sugirieron que sus
2009
300 ovarios eran policíclicos, similares a los de muchas especies de anguilas marinas.25, y que
tenían el potencial de desovar repetidamente 1 o 2 meses después del primer desove
150
del lote primario de huevos.
0 una mujerA. japonicacapturadas el 23 de junio de 2009, el día de la luna
180 nueva (749 mm, 244 g, anguila número 12, tabla 1), tenían huevos ovulados
2008
120 demasiado maduros (diámetro medio del huevo±SD, 904±117µmetro,norte
No. de preleptocéfalos

60 =117) en el abdomen, y salieron 162 g de óvulos de su poro genital después

0
24
2007
dieciséis
8 nueva cuando fue capturado, debido a las características degeneradas de
0
90
2005
60
30
0 regresión.18, lo que indica que habían desovado casi todos sus huevos.
–5 –3 –1 +1 +3 +5
Días desde luna nueva
Figura 3 | Cronograma de capturas de cada etapa de la historia de vida en relación con la
luna nueva.(a) Capturas de anguilas adultas en junio y agosto de 2008, y junio de 2009 (norte=
15). Las barras rojas muestran anguilas japonesas,Anguila japonica, y barras amarillas las
anguilas gigantes moteadas,anguila marmorata, con barras sombreadas que indican hembras
y barras continuas que indican machos. (b) Huevos recolectados en mayo de 2009 (norte= 31). (
C)A. japonicapreleptocephali recolectados en 2009 (mayo, norte=753), 2008 (junio,norte=249),
2007 (agosto,norte=38) y 2005 (mayo, norte=110) de arriba a abajo. Todas las capturas se
representan en relación con la fecha de luna nueva de cada mes, excepto dosA. japonica
preleptocephali de una encuesta diferente en julio de 2008 recolectada a los + 5 y + 7 días, y 31
marmoratapreleptocephali recolectados entre − 3 y + 5 días desde la luna
nueva en julio y agosto de 2006, y agosto de 2007.
han vivido en hábitats tanto de agua dulce como salinos23. Esto sugiere la
importancia de la conservación de todos los hábitats de las anguilas, desde el
agua dulce hasta el estuario y las aguas costeras.
Características reproductivas de las anguilas.. Todas las hembras de ambas especies
recolectadas en junio de 2009 tenían gónadas en condiciones posteriores al desove con
folículos degenerados después de la ovulación (Figura complementaria S1). Sin
embargo, mostraron valores de índice somático-gónada relativamente altos de 9,0 a
13,4% (GSI: peso relativo de la gónada al peso corporal; Tabla 1) en comparación con los
de las anguilas japonesas hembras migratorias (sólo alrededor del 1 al 4% (referencias 5,
20). , 21, 24)) apenas abandonan las aguas costeras del este de Asia, mientras que los
valores de GSI de las anguilas maduradas artificialmente pueden alcanzar entre el 40% y
el 70% en el momento de su desove.4. La hembra en condición post-desove de 739 mm.
A. japonicaen la Figura complementaria S1a mostró un valor de GSI moderadamente
más alto del 11,2%, en comparación con las anguilas migratorias que abandonan las
aguas costeras; sin embargo, parte de este alto valor de GSI probablemente se deba a
una pérdida de peso corporal y reservas de grasa que se convierten en gónadas.
de la recolección (Fig. 1a). Incluyendo todos los óvulos ovulados, su GSI
habría sido del 47,8% (Tabla 1), mientras que el valor excluyendo los óvulos
ovulados fue del 13,1%. Este espécimen parecía no haber desovado
normalmente en el último evento de desove durante el período de luna
los huevos, como las gotas de aceite demasiado fusionadas y la
fragmentación de los perfiles de electroforesis del ARN. extraído de los
huevos. Por el contrario, otras dos hembras recolectadas al final de la
temporada de desove a finales de agosto de 2008 parecían estar muy
agotadas y tenían ovarios vestigiales con sólo unos pocos ovocitos en
Aunque los machos que migran desde el este de Asia tienen valores de GSI <1% (refs
20, 21), todos los machos de ambas especies recolectados en el área de desove tenían
testículos bien desarrollados con valores de GSI de 13,4 a 40,3% (Tabla 1). un machoA.
japonica(447 mm, 129 g) recolectados el 22 de junio de 2009 (Fig. 1b) tenían testículos
bien desarrollados (Fig. Suplementaria S1b), con el GSI masculino más alto de 40,3%, y
semen excretado libremente cuando se retiraban de la red. Unmarmoratael macho
también tenía testículos agrandados con un GSI del 25,3% (Fig. 1d). Estos valores de GSI
también fueron más altos que los valores de adultos madurados artificialmente.26
(~10-15%). La morfología de los testículos de estas anguilas maduradas de forma natural
era comparable a la de los testículos de anguilas maduradas artificialmente cuando se
examinaban con un microscopio óptico. Los testículos contenían una gran cantidad de
espermatozoides, mientras que ocasionalmente se observaron quistes compuestos de
espermátidas y espermatogonias tardías de tipo B (Figura complementaria S1f), lo cual
fue similar a las observaciones histológicas de testículos madurados artificialmente con
espermiación activa. También se confirmó la presencia de una característica única de un
núcleo en forma de media luna de esperma de anguila en los machos recolectados en el
área de desove, que también se informó que estaba presente en anguilas macho
maduradas artificialmente.27.
Cinco de los especímenes masculinos recolectados excretaron semen del poro
genital en el momento de la recolección, y las observaciones histológicas mostraron que
el conducto espermático de los testículos estaba lleno de esperma en todos los machos
examinados. La motilidad de los espermatozoides de uno.A. japonicay uno
marmoratase confirmó a bordo después de la captura, lo que indica que estas
anguilas estaban en condiciones de desovar. No se observaron diferencias obvias
en las condiciones del semen, como la viscosidad, el color y la morfología de los
espermatozoides, entre los machos en el área de desove y las anguilas
maduradas artificialmente. Estas observaciones pueden sugerir que los machos
en este estudio estaban completamente maduros y habían participado en el
desove durante el período de luna nueva cuando fueron capturados.
La captura de anguilas en estado de desove también brindó la primera oportunidad
de examinar algunos de sus parámetros fisiológicos. Análisis de los niveles séricos de
hormonas esteroides enA. japonicaLas hembras recolectadas en la noche de luna nueva
(23 de junio de 2009) encontraron que 17α, 20β-dihidroxi-4-pregnen-3-ona (DHP), que se
cree que es un agente de maduración de ovocitos.

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Figura 4 | Huevos de anguila japonesa desovados naturalmenteAnguila japonica. (a) Huevo
en etapa embrionaria temprana-media recolectada el 22 de mayo de 2009 cerca de West
Mariana Ridge en el Pacífico norte occidental. (b) Huevo en etapa embrionaria tardía, justo antes
de la eclosión, recolectado el 23 de mayo de 2009 en el mismo
área (Figura complementaria s2). barras de escala, 0,5 mm.
hormona esteroide inductora de la ovulación en esta especie28, se detectó en
niveles considerables en el suero, aproximadamente 1 ngml− 1concentración
(rango: 0,7–1,5,norte=3), mientras que no se detectó DHP en anguilas maduradas
artificialmente29. Esta concentración en adultos silvestres es aproximadamente
equivalente al nivel unos días después de los picos de DHP que se han observado
durante la maduración final, justo antes de la ovulación y el desove de adultos
artificialmente maduros.29. También se detectó estradiol (hormona esteroide
femenina) en dosis de 2 a 3 ngml.− 1en el suero (rango: 1,6–3,9,norte=3), que era
un nivel incluido en el rango encontrado en anguilas maduradas artificialmente
en las etapas vitelogénicas media a tardía30(rango: 0,5–6,4,norte=43). El nivel de
11-cetotestosterona (esteroide inductor de la espermatogénesis) era alto (2-5
ngml− 1) en anguilas macho capturadas en este estudio, similar a la de machos
madurados artificialmente27. Este tipo de información sobre la dinámica hormonal
de la maduración final en anguilas silvestres ayudará a mejorar la calidad de los
óvulos y el esperma de las anguilas maduradas artificialmente y contribuirá a la
producción de angulas artificiales, lo que facilitará los esfuerzos de conservación
de especies de anguilas en peligro de extinción en todo el mundo.
Colecciones de huevos y larvas eclosionadas.. La evidencia más incuestionable
de un evento de desove porA. japonicacerca de West Mariana Ridge durante la
luna nueva se encontró en mayo de 2009, cuando se encontraron los primeros
huevos de anguila anguilada de cualquier especie (Fig. 4). Treinta y un huevos de
A. japonicase recolectaron en cinco remolques en tres estaciones en una
cuadrícula de 25 estaciones centradas alrededor del primer sitio de recolección de
huevos (Fig. 5, Fig. Suplementaria S2). Los huevos se recolectaron justo al sur del
frente de salinidad que, según la hipótesis, afectaba la latitud de desove.2,31,32, y
en mayo de 2009 el frente cruzó la cadena de montes submarinos alrededor de
13°N (Fig. 5). Los óvulos que habían sido fertilizados y se estaban desarrollando
(denominados "embriones"; Fig. 4) fueron identificados por su morfología como
posiblementeA. japonicahuevos debido a su similitud con los huevos fertilizados
artificialmente33, y se confirmó genéticamente que eranA. japonicaa bordo del R/V
Hakuho Marua las pocas horas de la primera recolección de óvulos utilizando un
sistema de PCR en tiempo real34que está diseñado para distinguir muestras de
anguilas japonesas de aquellas de otras especies similares de anguilas a bordo.
Los huevos se recolectaron en un período de tiempo estrecho (Fig. 3b) y se
obtuvieron etapas de desarrollo similares durante dos días consecutivos (22-23 de
mayo). Todos estaban en la etapa embrionaria, pero iban desde la etapa embrionaria
temprana (Fig. 4a) hasta la etapa embrionaria tardía justo antes de la eclosión (Fig. 4b).
Tenían yema de huevo y una gota grande de aceite, y los diámetros de las cápsulas de
huevo eran de 1,49 a 1,71 mm (1,61±0,07 mm, media±Dakota del Sur). Estos huevos eran
más grandes que los obtenidos de huevos desovados artificialmente.A. japonicahembras
33 (1,3–1,6 mm, Instituto IRAGO, comunicación personal). Basado en estudios de óvulos
fertilizados artificialmente que se desarrollaron a diferentes temperaturas en el
laboratorio.33,35y las temperaturas justo debajo de la parte superior de la termoclina en el
presente estudio (Fig. 6), los huevos recolectados probablemente fueron desovados
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ARTÍCULO
140°E 142°E 144°E
16°N
14°N
12°N
Figura 5 | Sitios de recolección de anguila.Preleptocephalus lugares de captura de la
anguila japonesa,Anguila japonica, en cinco años diferentes (círculos más grandes) y de
la anguila moteada gigante,anguila marmorata, en 2 años (círculos rosados de tamaño
mediano) se muestran en relación con el lugar donde se recolectaron las anguilas
adultas (tres óvalos amarillos, Fig. 2), y la ubicación de la cuadrícula de estaciones
(rectángulo azul) donde 31A. japonicaSe recolectaron huevos (cuadrado rojo) justo al
sur del frente de salinidad (línea roja punteada) que cruzó el extremo sur de la cadena
de montes submarinos en mayo de 2009. El frente de salinidad se forma a partir de
mayores precipitaciones tropicales en el sur, y su posición parece afectar la latitud de
desove de anguilas adultas2,31,32.A. japonicapreleptocephalus se muestran para 2005
(ref. 36; círculos rojos), 2007 (círculos azules), 2008 (círculos verdes Etapa 1, círculos
amarillos Etapa 2) y 2009 (KH-09-02, círculos blancos) con círculos grandes que
contienen número de preleptocéfalos recolectados y pequeños círculos del mismo color
que muestran las estaciones sin captura durante cada uno de esos cruceros. pequeños
círculos de otros colores eran estaciones de otros cruceros en diferentes meses o años
que no recolectaron preleptocéfalos (2005-Etapa 4: naranja, 2006-Etapa 3: violeta, 2006-
Etapa 5: violeta claro, 2007-Etapa 3: azul claro , 2009-KH-09-1: gris). estaciones en las
que 29 preleptocéfalos de
marmorata, fueron recolectados en 2006 (rosa más oscuro) y 2007 (rosa más claro), y también se
muestran otros dosmarmoratapreleptocephali se recolectaron a 13,5 ° n, 137 ° E en agosto de
2006 (ref. 15). La profundidad batimétrica se muestra por color, con profundidades menores <
4.000 m en amarillo y marrón y profundidades más profundas en azul. Tres montes submarinos
poco profundos10se muestran con triángulos negros. Barra de escala negra, 50 km.
en la noche del 20 al 21 de mayo, aproximadamente 3,5 días antes de la luna
nueva (Fig. 3b).
De 2005 (ref. 36) a 2009, ~1.152A. japonicapreleptocephali también se
recolectaron cerca de la cadena de montes submarinos (Tabla complementaria
S1, Fig. 5). El momento de las recolecciones (Fig. 3c) y los datos de envejecimiento
de los otolitos a partir de incrementos diarios (aproximadamente 2 a 7 días
después de la eclosión)36indicó que el desove ocurrió solo durante un período de
3 días (2 a 4 días antes de la luna nueva) dentro del período de luna nueva de
cada año. Las capturas se produjeron al oeste del monte submarino Suruga en
2005 y 2007, y más al sur en 2008 y 2009, cuando el frente de salinidad (línea roja
punteada en la Fig. 5 correspondiente a mayo de 2009) se había movido hacia el
sur, lo que indica que el lugar de desove varía entre años. e incluso meses.
ARTÍCULO COMUNICACIONES DE LA NATURALEZA | DoI: 10.1038/ncomms1174

oportunidad de realizar arrastres horizontales dirigidos a estratos de profundidad

Clorofila-a (µgl–1)
específicos para evaluar su distribución de profundidad inmediata después de la
0.00 0,05 0,10 0,15 0,20
eclosión y así determinar la posible profundidad de desove de las anguilas adultas. Seis
remolques horizontales replicados de una gran red de arrastre de plancton de media
Sigma-t (kg·m–3)
agua que pescó a diferentes profundidades en pistas idénticas mostraron un patrón
20 22 24 26 28 30
claro de capturas, con preleptocéfalos distribuidos en un estrato de profundidad
Temperatura (°C) verticalmente estrecho a ~160 m y ligeramente más profundo (Fig. 6), mientras que no
5 10 15 20 25 30 se recolectó ninguno. a 65 y 135m.
0 La capa de 150 m de profundidad estaba en el límite superior de la termoclina, y
debido a que recientes investigaciones de laboratorio sobre la flotabilidad de los huevos
0 y preleptocéfalos de las anguilas japonesas engendradas artificialmente han indicado
100 que estas primeras etapas de la historia de vida son positivamente flotantes.13, los
huevos y las larvas probablemente habrían flotado hasta la parte superior de la
0
termoclina desde profundidades ligeramente más profundas. La distribución vertical
15 171 concentrada de las larvas recién nacidas dentro de un estrato de profundidad limitada
200
Profundidad (m)

(Fig. 6) puede sugerir un rango limitado de movimiento ascendente de los huevos

4 durante un corto tiempo de incubación de los huevos (38 h después de la fertilización a

23 °C).33después del desove, pero se desconoce la velocidad del movimiento ascendente
300
de los huevos desovados naturalmente.
La recolección de un gran número de preleptocéfalos a 160 m proporcionó la
primera evidencia clara de que el desove ocurre debajo de la parte superior de la
400
termoclina, y la captura de anguilas adultas a profundidades entre 160 y 300 m lo
4
confirma. Las observaciones del comportamiento de desove de las anguilas en el
laboratorio sugieren que las temperaturas de 18 a 22 °C son óptimas para el
500 desove exitoso de las anguilas.A. japonica11, correspondiente a profundidades de
34.0 34,5 35.0 35,5
~200–260 m en la Figura 6. Las tasas de supervivencia de sus larvas a diferentes
Salinidad (ups)
temperaturas35También indican que el desove no es mucho más profundo que la
capa justo debajo de la parte superior de la termoclina (25–27 °C, Fig. 6), porque
0 50 100 150 200 250
las larvas recién eclosionadas artificialmente mostraron la tasa de crecimiento
Número de preleptocéfalos
más alta y la tasa de deformidad más baja a 25–28 ° C (ref. 35).

Figura 6 | Distribución de profundidad deAnguila japonicapreleptocephali en relación con

las condiciones ambientales.Los cambios de cada parámetro ambiental se trazan por
profundidad desde la superficie del océano, y el número de preleptocéfalos que se recolectaron
en cada estrato de profundidad (65, 135, 163, 188, 265 y 425 m) se muestra mediante barras
moradas (no se muestran arrastres de captura). mostrado por ceros). La presencia de la
termoclina (área sombreada entre líneas de puntos) puede verse como el cambio repentino en la
temperatura del agua (línea azul oscuro) con la profundidad. El gran aumento en la
concentración de clorofila (línea negra) a alrededor de 150 m también ocurrió justo por encima
de la parte superior de la termoclina.sigma-t (línea naranja) es una medida de la densidad del
agua que se calcula a partir de la salinidad (línea azul claro) y la temperatura. Estos datos se
recopilaron el 23 de mayo de 2009 en el círculo verde de la Figura s2 complementaria en la
cuadrícula de 25 estaciones en la parte sur de West Mariana Ridge, donde se realizó el estudio
intensivo de huevos de anguila y preleptocéfalos del 22 al 25 de mayo de 2009.
También hubo 29marmoratapreleptocephali recolectados en la
parte norte de esta misma área (Fig. 5) durante los períodos de luna
nueva de julio y agosto en 2006 y 2007 (Tabla complementaria S1), y 15
recolectados en cuatro de las mismas estaciones donde
A. japonicapreleptocephali se recolectaron en 2007 (ref. 15; Fig. 5). Esta especie
parece tener un rango estacional más amplio de épocas de desove que
A. japonica, y dos preleptocéfalos demarmoratafueron recolectados más al oeste
a lo largo de 137°E en agosto de 2006, lo que indica que este anguilido tropical a
veces también puede desovar dentro de una región más amplia.15.
Otro hallazgo interesante fue que las secuencias de la región de control del
ADN mitocondrial (ADNmt) de 86A. japonicapreleptocephali recolectados en junio
de 2005 incluían 77 haplotipos diferentes, lo que mostró que había al menos 77
hembras que habían estado desovando en el área donde se recolectaron los
preleptocephali. Este hallazgo sugiere que muchas anguilas desovan
aproximadamente en la misma área, como en grandes concentraciones, o que las
corrientes oceánicas y los remolinos pueden mezclar rápidamente los huevos y
las larvas después del desove.
Distribución en profundidad de las larvas eclosionadas.. La presencia de muchos
preleptocéfalos dentro de la rejilla de huevos muestreada en mayo de 2009 proporcionó la
Discusión
Muchos años después de la zona de desove simpátrica de la anguila atlántica37fue
descubierto1, este estudio proporciona la primera información detallada sobre la
biología reproductiva de las anguilas anguiladas en el océano. Las capturas de adultos
en condiciones de desove en los 300 m superiores del océano, y las colecciones de
huevos y larvas recién nacidas a profundidades similares, indican que la profundidad de
desove de las anguilas anguiladas probablemente se produce en las aguas más cálidas
de la capa superficial del océano. Las observaciones de la condición morfológica de los
adultos en desove sugieren que las anguilas de agua dulce tienen la capacidad de
realizar múltiples desoves durante una temporada de desove. Sin embargo, sus cuerpos
altamente modificados y su condición degenerada confirman que solo tienen una
temporada de desove en su vida y mueren después de desovar varias veces. Las
colecciones de adultos, huevos y preleptocéfalos deA. japonicamuestran un patrón
consistente de desove durante las noches de luna nueva de cada mes durante su
temporada de desove.
La cadena de montes submarinos y el frente de salinidad también parecen
proporcionar señales longitudinales y latitudinales para que estas anguilas se agreguen
y desoven. Los montes submarinos pueden tener anomalías geomagnéticas que
proporcionan puntos de referencia para los adultos migratorios, porque se sabe que las
anguilas y otros animales migratorios tienen un sentido magnético.38,39que podría usarse
para localizar el área de desove4. El olor del agua de las profundidades marinas
generada por los montes submarinos también puede facilitar la agregación de adultos
en desove utilizando señales olfativas. La ubicación móvil del frente de salinidad.31,32
Luego proporcionaría señales latitudinales para que los adultos detuvieran su migración
y buscaran parejas reproductoras.2.
Parece que estas anguilas utilizan un conjunto notable de señales
oceanográficas, geológicas y lunares para sincronizar su lugar y hora de
desove en lugares específicos a lo largo de la cadena de montes
submarinos cada mes durante su temporada de desove. El desove
sincronizado mejoraría la tasa de fertilización, y el desove durante la
oscuridad de las noches de luna nueva reduciría las posibilidades de
depredación tanto de los adultos como de los huevos.
También es notable que dos especies de anguilidos con tamaños corporales
adultos y estructuras de población significativamente diferentes40–42y agua dulce

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Los tipos de hábitat en las regiones tropicales y templadas han evolucionado en
comportamientos migratorios para utilizar la misma zona para el desove.15.
Investigaciones filogenéticas recientes han descubierto que las anguilas anguilidas se
originaron a partir de especies anguiliformes marinas de aguas profundas.43, como
anguilas devoradoras, anguilas agachadizas y anguilas dientes de sierra, después de lo
cual los anguilidos ancestrales invadieron aguas dulces durante su período de
crecimiento juvenil.23. Sin embargo, a pesar de este notable cambio en los hábitats
utilizados, las anguilas todavía migran de regreso a sus antiguas áreas de desove en alta
mar.44, sin obtener nutrición adicional durante sus largas migraciones19.
Estos nuevos hallazgos sobre las condiciones de desove de las anguilas de
agua dulce, la aparición de sus huevos y larvas y sus aparentes profundidades de
desove en este estudio se pueden combinar con otra información valiosa
obtenida de estudios de marcado.6–8, investigación utilizando adultos madurados
artificialmente y sus larvas11-14, y de estudios sobre las capacidades migratorias de
estas anguilas en el laboratorio45,46. La información que se obtiene de estos
nuevos tipos de investigación puede proporcionar una mejor comprensión de la
biología y la historia de vida de los anguilidos, lo que se espera pueda facilitar los
esfuerzos para prevenir mayores disminuciones en las poblaciones de estos
notables peces que utilizan ambientes tanto marinos como de agua dulce.
Métodos
Muestreo de anguilas adultas. El R/V realizó estudios de muestreo de anguilas adultasKaiyo
Maru(Agencia de Pesca) y el R/VHokko Maru(Fisheries Research Agency) utilizando grandes
redes de arrastre pelágico (Nichimo) a lo largo de la parte sur de West Mariana Ridge (Fig. 2) de
mayo a agosto de 2008 y de mayo a junio de 2009 para aprender sobre la ecología reproductiva
y el lugar de desove de la anguila japonesa y para facilitar la conservación de esta especie. La
apertura máxima de la boca de la red era de 60 m de ancho y 50 m de alto con un copo de
malla de 7 mm para elKaiyo Maru3, y 30m de ancho y 30m de alto con copo de malla de 17 mm
para el Hokko Maru. Se llevaron a cabo un total de 62 remolques en pasos horizontales,
principalmente de noche, mientras se remolcaban a 3 a 5 nudos durante 0,3 a 9,6 h durante
cada despliegue entre profundidades de 132 a 766 m. Los arrastres se llevaron a cabo
principalmente a profundidades de 160 a 300 m, donde la temperatura del agua oscilaba entre
13 y 23 °C. La duración del remolque a cada profundidad osciló entre 0,3 y 3,0 h
(principalmente entre 1,5 y 2,0 h), que se monitoreó acústicamente mediante una sonda de red
acoplada a la red de arrastre.
Identificación genética de anguilas adultas.. La identidad de especie de cada anguila adulta
capturada en el área de desove se determinó primero a bordo utilizando caracteres
morfológicos, y se confirmó genéticamente más tarde en el laboratorio mediante análisis de
secuencia de nucleótidos de genes mitocondriales 16S rRNA (números de acceso de GenBank
AB445230 a AB445232, AB516443 y AB516444 para cinco especímenes de 2008) utilizando dos
cebadores (Tabla complementaria S2).
Examen de las características de la anguila adulta.. Una vez recolectadas las anguilas, fueron
fotografiadas a bordo de los barcos de investigación y se midieron parámetros biológicos, como
longitud total, longitud de la cabeza, longitud preanal, longitud predorsal, peso corporal,
diámetro del ojo, longitud de la aleta pectoral. Se compararon las longitudes totales y los pesos
corporales entre machos y hembras deA. japonicausando Mann-WhitneyUd.-pruebas. Después
de fotografiar y medir la biometría general, se diseccionaron las anguilas adultas a bordo.
Primero se examinaron y fotografiaron las gónadas de las anguilas. El peso total de la gónada se
midió al gramo más cercano. Se calculó el GSI (porcentaje relativo del peso de las gónadas al
peso corporal). El factor de condición21
de cada anguila adulta se calculó como peso corporal (g)/longitud total (cm)3×1.000.
Se aislaron los folículos ováricos con fórceps y se midieron los diámetros de los ovocitos.
Se midieron los diámetros de más de 100 ovocitos seleccionados al azar de cada anguila
hembra bajo un estereomicroscopio utilizando el software LEICA Image Manager (LEICA) e
Image J (NIH). Los diámetros de los huevos ovulados encontrados en la Anguila No. 12 (Cuadro
1) se midieron con el mismo método.
Trozos de gónadas y óvulos ovulados fueron fijados en solución de Bouin durante 1 día a 4
°C y almacenados en etanol al 70% a bordo, y posteriormente en el laboratorio fueron
embebidos en parafina, seccionados a 4µm y teñido con hematoxilina y eosina para
observaciones histológicas. Estas secciones también se utilizaron para medir el espesor del
corion de los ovocitos. Para garantizar una medición precisa, sólo se utilizaron ovocitos con el
núcleo exactamente en el centro. Se utilizó el mismo procedimiento para medir el espesor del
corion de ovocitos de anguilas maduradas artificialmente conservados en el laboratorio. Un
Mann-WhitneyUd.-Se utilizó una prueba para determinar si había diferencias significativas en el
espesor del corion entre las anguilas maduradas de forma natural y artificial. También se
conservaron trozos de gónada enARNmás tardesolución y paraformaldehído para futuros
análisis de microscopía molecular y electrónica, respectivamente. Las etapas de desarrollo de
los ovocitos fueron asignadas según Yamamoto.et al.33. Además de las gónadas, también
conservamos tejidos como la pituitaria, el cerebro, el hígado, el tracto digestivo y la vejiga
natatoria para exámenes futuros.
También se extrajeron otolitos sagitales para estudios de envejecimiento y microquímica, y
posteriormente se determinaron las edades de las anguilas adultas en el laboratorio. la sección frontal
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ARTÍCULO
de los otolitos se molió y pulió al plano con el núcleo del otolito y se contó el número de anillos
anuales bajo un microscopio polarizado.47. Las concentraciones de Sr y Ca en los otolitos de
cuatroA. japonicase midieron en una línea a lo largo del eje más largo de cada otolito desde el
centro hasta el borde utilizando una microsonda electrónica de rayos X de longitud de onda
dispersiva (JEOL, JXA-8900R) según estudios previos48. Luego se calcularon las proporciones
medias de Sr:Ca para cada otolito y se pudo estimar que el tipo general de hábitat utilizado por
cada anguila era de agua dulce, estuarino o marino.48.
Medición de hormonas de anguila.. Niveles hormonales en la sangre del macho y la hembra
en condiciones de desove.A. japonicase midieron. Inmediatamente después de sacarlas de la
red de arrastre y llevarlas al laboratorio a bordo del barco de investigación, se utilizó una jeringa
para obtener muestras de sangre de la vasculatura caudal de cada anguila. El suero se separó
por centrifugación a 2.000gramodurante 5 minutos y luego se almacenó a -80 ° C hasta el
análisis. En el laboratorio en tierra, los niveles de DHP y estradiol en las hembras, y de 11-
cetotestosterona en los machos, se midieron mediante fluoroinmunoensayos de resolución
temporal, como se describe en otra parte.49.
Muestreo de huevos y leptocéfalos.. Históricamente, el muestreo de larvas de anguila japonesa se ha
realizado en muchas regiones del Pacífico norte occidental.2,36,50,51, pero los esfuerzos recientes se han
realizado principalmente al oeste de West Mariana Ridge. Desde 2005, el muestreo se realizó con
arrastres simples oblicuos (de 0 a 300 m de profundidad) de la gran red de anillos ORI-BF (Instituto de
Investigación Oceánica, Big Fish) (3 m de diámetro) con malla de 0,5 mm, desplegada desde el R/V.Hakuho
Maru(JAMSTEC, Instituto de Investigaciones de la Atmósfera y los Océanos). En 2005, se tomaron muestras
de 178 estaciones y se recolectaron preleptocéfalos en cinco estaciones (Fig. 5, Tabla complementaria S1)
al oeste del monte submarino Suruga.36. En 2007, de 167 estaciones, se capturaron preleptocéfalos en
nueve estaciones y, en 2008, fueron capturados en 16 de 308 estaciones (14 en la etapa 1, 2 en la etapa 2).
En 2009, el esfuerzo principal para recolectar huevos y larvas de anguila japonesa utilizando la red de
anillos grandes se realizó durante dosHakuho Marucruceros en abril y mayo. En el primer crucero KH-09-1,
se tomaron muestras de 90 estaciones del 18 al 30 de abril de 2009, pero no se recolectaron huevos ni
preleptocéfalos. Durante el segundo crucero KH-09-2, se tomaron muestras de 86 estaciones cerca de la
cadena de montes submarinos del 17 al 27 de mayo de 2009 y se recolectaron huevos por primera vez el
22 de mayo durante el muestreo a lo largo de la cresta (12,5°N–16,5°N). lo cual fue seguido por
colecciones de muchos preleptocéfalos del mismo evento de desove. Luego se realizó un estudio intensivo
en una cuadrícula de 25 estaciones y en otras áreas cercanas, con 753 preleptocéfalos recolectados en 27
estaciones en KH-09-2 (Fig. 5, Fig. Suplementaria S2). Luego se realizaron muestreos adicionales más al
oeste a lo largo de 137°E hasta el 31 de mayo, pero no se recolectaron huevos ni preleptocéfalos
adicionales.
Después de cada arrastre de la red, se separaron leptocéfalos o huevos frescos de las muestras de
plancton y se examinaron morfológicamente. Los leptocéfalos más grandes se identificaron
morfológicamente contando el número de sus miómeros (segmentos musculares), mientras que algunos
huevos y preleptocéfalos pequeños se identificaron genéticamente a bordo.34. En 2009, se fotografiaron
huevos utilizando un microscopio de disección Nikon SMZ1500 y un sistema de imágenes digitales Nikon
DMX1200F (Nikon). Las muestras se conservaron en etanol al 99% o se congelaron para permitir análisis
posteriores de ADN u otolitos.
Distribución en profundidad de los preleptocéfalos.. Para evaluar la distribución en profundidad de los
preleptocéfalos recién nacidos, se llevaron a cabo seis arrastres en seis capas de profundidad diferentes
el 23 de mayo de 2009 (10:34–17:32) en el mismo lugar dentro de la estrecha red de estaciones alrededor
del área de captura de huevos (Suplementario Figura S2). La red ORI-BF se desplegó hasta la profundidad
objetivo y se remolcó horizontalmente a esa profundidad durante 20 minutos y luego se recuperó a la
superficie. Como la red estaba abierta mientras se movía hacia y desde la profundidad de pesca objetivo,
era posible cierta contaminación desde capas de menor profundidad; sin embargo, en este caso, no se
recolectaron larvas en los dos arrastres en los 135 m superiores, lo que estableció que las larvas se
distribuyeron a más de 135 m (Fig. 6).
Perfiles hidrográficos. Los perfiles hidrográficos de conductividad, temperatura y profundidad (CTD) se
obtuvieron utilizando un sistema CTD (Sea-Bird Electronics, EE. UU.) durante cada crucero. En mayo de
2009, elTenyou Maru(Universidad Nacional de Pesca) hizo un transecto de estaciones CTD al este de la
cadena de montes submarinos a lo largo de 143,5°E. La posición del frente de salinidad se distinguió por
la ubicación de 34,5 psu de salinidad en la superficie del mar.31,32en este transecto (12.5°N) y en unHakuho
Marutransectar a lo largo de 140°E (13,5°N; Fig. 5). El frente de salinidad se utilizó como referencia para
determinar el área probable para el muestreo intensivo de larvas medianteHakuho Marujusto antes de la
luna nueva cuando el frente de salinidad cruzó la cadena de montes submarinos. También se obtuvieron
perfiles CTD en la estación donde se realizó el estudio de distribución en profundidad de las larvas.
Además, dentro de la estrecha red de estaciones donde se recolectaron los huevos, se desplegaron seis X-
CTD (sondas CTD desechables, Tsurumi Seiki) para obtener datos hidrográficos adicionales.
Identificación genética integrada de huevos y larvas.. Para determinar si se recolectaron
preleptocéfalos o huevos de anguila japonesa, se analizaron algunos especímenes a bordo.
Hakuho Maruutilizando una PCR en tiempo realA. japonicaSistema de detección de secuencias
establecido para esta especie.34. En mayo de 2009, se realizó una PCR en tiempo real en los dos
primeros huevos recolectados, antes de decidir realizar un muestreo intensivo en una
cuadrícula alrededor del lugar de captura original. Brevemente, los métodos de este tipo de
análisis consisten en que se extrajo ADN de cada huevo o larva y se utilizó para PCR con un
A. japonica-par de cebadores específicos y una oligosonda marcada con fluorescencia34(Tabla complementaria S2). Las
reacciones se llevaron a cabo en un sistema térmico de monitoreo en tiempo real.
ARTÍCULO
ciclador (Sistema de PCR en tiempo real ABI 7300) y la amplificación se cuantificó en
cada ciclo de reacción. Un positivo (A. japonica) o negativo (otra especie) de la PCR se
determinó según si la eficiencia de amplificación alcanzó el nivel esperado34. Sin
embargo, los resultados se confirmaron más tarde en el laboratorio terrestre
determinando las secuencias de nucleótidos del gen 16S rRNA del ADNmt. Se confirmó
que los 28 huevos restantes y la mayoría de los preleptocéfalos de cada año eranA.
japonicautilizando sus secuencias de ADN.
Análisis de genotipo de preleptocéfalos.. Se examinó la región de control del ADNmt de 86
preleptocéfalos recolectados en junio de 2005 para determinar su historial de parentesco. Este
análisis encontró 77 haplotipos diferentes.40que tenía diferencias de 1 a 16 sitios entre 511
pares de bases de secuencias de ADNmt alineadas. Las muestras de ADN total se extrajeron de
preleptocéfalos y se usaron para PCR para amplificar una parte de la región de control con los
cebadores de PCR L15774 (ref. 52) y H16498 (ref. 53; Tabla complementaria S2). Las reacciones
de secuenciación se llevaron a cabo con los mismos cebadores que los utilizados para la PCR.
Todas las secuencias se alinearon automáticamente usando Clustal X54
y comparado manualmente usando DNASIS ver. 3.7 (Ingeniería de software de Hitachi).
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Expresiones de gratitud
Agradecemos a los capitanes de los barcos, sus tripulaciones y las instituciones y agencias de financiación que
apoyan las operaciones de los numerosos buques de investigación que hicieron posible este estudio. También
apreciamos enormemente la inestimable ayuda proporcionada por muchos otros científicos y
COMUNICACIONES DE LA NATURALEZA | DoI: 10.1038/ncomms1174 ARTÍCULO

a los técnicos que ayudaron a desplegar los equipos para recolectar los adultos y las larvas de anguila,
Información adicional
y por la ayuda incansable brindada en la clasificación de muestras de plancton en busca de huevos y
Códigos de adhesión:Las secuencias de ARNr 16S mitocondrial se han depositado en la base de datos
larvas de anguila. El Instituto IRAGO tuvo la amabilidad de proporcionar valiosa información sobre la
central de nucleótidos de GenBank con los números de acceso AB445230 a AB445232, AB516443 y
maduración artificial de la producción de anguila japonesa y angula. D. Ambe y muchos investigadores
AB516444.
principales de los cruceros JAMSTEC amablemente nos permitieron usar la carta batimétrica para las
cifras. Información suplementariaacompaña este documento en http://www.nature.com/
naturecommunications

Intereses financieros en competencia:Los autores no declaran tener intereses financieros en competencia.

Contribuciones de autor
KT, TO, SK, SC, HK, TW fueron los científicos jefes de los cruceros de investigación, y todos los
autores, incluidos SW, AS, MK, MO y KH, participaron en la investigación durante los cruceros.
HT, SI, KN, YK realizaron observaciones histológicas de gónadas adultas y midieron el diámetro
del óvulo, el espesor del corion y la concentración de hormonas en el suero sanguíneo. Los
adultos fueron identificados genéticamente mediante SC y sus edades se determinaron
mediante NM utilizando otolitos. TY y JA realizaron la identificación genética de huevos y larvas, y
JA analizó el haplotipo de ADNmt de preleptocéfalos. KT y MJM escribieron el artículo.
Reimpresiones y permisoLa información está disponible en línea en http://npg.nature.com/
reprintsandpermissions/
Cómo citar este artículo:Tsukamoto, K.et al.Ecología del desove oceánico de anguilas de agua dulce en
el Pacífico norte occidental.Nat. Comunitario.2:179 doi: 10.1038/ncomms1174 (2011).
Licencia:Este trabajo tiene una licencia Creative Commons Atribución-No Comercial-Compartir
Igual 3.0 Unported. Para ver una copia de esta licencia, visite http:// creativecommons.org/
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