UNIVERSIDAD DE INVESTIGACIÓN DE TECNOLOGÍA EXPERIMENTAL YACHAY

ESCUELA DE CIENCIAS AGRÍCOLAS Y AGROINDUSTRIALES

CARRERA PLAN DE ESTUDIO NOMBRE DEL NOMBRE Nro.
MÓDULO ASIGNATURA Práctica
Agroindustria Material de Laboratorio Preparación y Microbiología 2
Alimentaria de Microbiología esterilización de General
material

PROTOCOLO

1. MATERIALES Y MÉTODOS

Toallas de papel Algodón y gasa para Bajalenguas

absorbente tapones Agua destilada
Atomizadores con alcohol Pipetas de varios Frasco de autoclave
Micropipeta volúmenes Pinza
Cajas Petri de plástico Cilindros de autoclave Papel aluminio
3 cajas Petri de vidrio Mechero de alcohol Vaso precipitado 25 ó 50
Papel periódico Autoclave mL
Gradilla Cinta de autoclave Gafas de seguridad
2 tubos de ensayo con tapa Asa de loop, asa micológica Lámpara UV/Cabina
rosca Pipeta de vidrio para Fundas de autoclave
2 tubos de ensayo sin tapa digralsky Cloro+tubos con desecho
Hisopos Filtro + jeringa

Metodología de preparación y esterilización de material previo a la ejecución de un experimento

A) Método químico - soluciones líquidas
Se emplean químicos como: cloro, amonio cuaternario o etanol para desinfectar superficies
amplias o como una alternativa a los métodos físicos.
Así por ejemplo, usted puede desinfectar su área de trabajo, la cabina de bioseguridad y la
micropipeta con etanol al 70%.

B) Método físico – calor seco

Coloque el asa de inoculación metálica directamente a la llama de un mechero hasta que el
filamento más fino se torne de color rojo vivo. El calor seco desnaturaliza las enzimas y destruye
los microorganismos por oxidación, por lo que, con este método, el asa estará estéril.

C) Método físico – calor húmedo

Selle adecuadamente el siguiente material para introducirlo a la autoclave. Coloque cinta de
autoclave como control de calidad del proceso.
 Cajas Petri de vidrio en papel kraft
 2 tubos de ensayo con tapa rosca con 1 mL de agua destilada
 Tubos con tapón
 Pipetas de vidrio en cilindro
  Hisopos
 Frasco boeco con 2,3 g de agar nutritivo y 100 mL de agua destilada
 Pinzas de metal y vaso de precipitación (papel aluminio)
El calor húmedo se utiliza para esterilizar soluciones, medios de cultivo y material resistente al
calor. La autoclave llega a 121 oC para producir vapor de agua, dentro del equipo se genera una
presión de 15 PSI (libra por pulgada cuadrada) y estas condiciones deben mantenerse durante 15
minutos para garantizar la eliminación de microorganismos.

D) Método físico – radiación ultravioleta

Las superficies que son sensibles al calor se esterilizan generalmente con radiación UV. Alrededor
del 85% de las células son inactivadas a una la longitud de onda de 253.7 nm por un mínimo de 15
minutos.

Para su ensayo, coloque cajas petri de plástico en radiación UV.

E) Método físico – filtración

La filtración por membranas se utiliza para esterilizar material acuoso sensible al calor como:
medicinas, vitaminas, aminoácidos, caldo de urea. En este sentido, se coloca el líquido a esterilizar
en una jeringa. SE RETIRA LA AGUJA, se coloca el filtro en la rosca de la jeringa y se ejerce la
presión necesaria para permitir el paso del líquido a través de la membrana del filtro. El tamaño de
poro puede ser de 0.2 a 0.45 micras, por lo que los microorganismos que posean un mayor
tamaño al poro se quedarán retenidos en la membrana y permitirán el paso de un líquido filtrado
estéril.

2. RESULTADOS ESPERADOS
El/la estudiante debe comprender la utilidad de los métodos aplicados.