INSTITUTO TECNOLOGICO DE TIJUANA

PRÁCTICA 1. ESTERILIZACIÓN
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Y QUIMICA
FECHA DE LA PRÁCTICA: 07 FEBRERO DEL 2023

MICROBIOLOGÍA

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

PRESENTA:

FERNANDEZ VALLEJO ELIZABETH 20210898

GARCIA NEVAREZ ROCÍO 20210899

RAMIREZ DE LA CRUZ ALONDRA ESTEFANIA 20210918

MESA #4 - GRUPO B

ASESOR

PORRAS LANZAGORTA MARTHA MARGARITA

TIJUANA, B.C. 17 FEBRERO DEL 2023

 I. OBJETIVO

Clasificar, preparar y esterilizar el material para trabajar en el laboratorio de

Microbiología.

II. MARCO TEÓRICO

Existen diferentes tipos de esterilización, se encuentra clasificado dependiendo el tipo

de agente, de los cuales se encuentra el físico y el químico. Por agente físico se
encuentra la esterilización por calor seco y calor húmedo (autoclave) y esterilización
mediante radiaciones. Mientras que por agente químico hay de tipo gaseoso, óxido
de etileno y no gaseoso, formaldehído y peróxido de hidrógeno (plasma gas).(María-
Jesús Hernández-Navarrete , 2014).

La esterilización es un mecanismo por el que se consigue la muerte o eliminación de

todos los microorganismos vivos de una muestra, medio, superficie o material de
trabajo. Entre los microorganismos vivos se incluyen bacterias, hongos, protistas,
virus y sus formas de resistencia. (Pérez-Uz, et al., 2010).

Mientras que para el calor seco se utiliza una estufa, también conocida como horno
Pasteur, en donde los materiales son colocados en el interior previamente protegidos
con papel de estraza para evitar la contaminación ambiental una vez finalizado el
proceso. La destrucción microbiana se produce por oxidación de los componentes
celulares y desnaturalización de proteínas. Este es un proceso menos eficaz por la
ausencia de agua y por lo tanto deben incrementarse tanto las temperaturas como los
tiempos de exposición. (Nora Restrepo Restrepo, 2015).

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Ill. MATERIAL Y EQUIPO

Material Reactivos

1 matraz Erlenmeyer de 200 mL Agua destilada

10 tubos con 9 mL de agua

destilada

6 Matraces Erlenmeyer (500 mL) Equipo

6 pipetas de 1 o 2 mL Autoclave

1 pipeta de 5 mL Horno

1 pipeta de 10 mL

10 cajas Petri de vidrio

Papel de estraza o papel

periódico para envolver

Algodón

Gasas

Tape indicador de esterilización

lV. DIAGRAMA DE FLUJO

Esterilización en el horno Tapar matraces y pipetas

con algodón según indique

Colocar el horno y prender.

Envolver el material de
Esteriliar a una temperatura
vidrio en papel.
de 165 °C durante 1 hora y
30 minutos

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 Agregar 9 ml de agua
Esterilización en autoclave destilada a cada uno de los 10
tubos y taparlos.

Esterilizar por 15 minutos a

una temperatura de 121 °C o
15 libras de presión.

V. CUESTIONARIO

1. Anote las ventajas y las desventajas de la esterilización en horno y en

autoclave

Ventajas del método: Es un método efectivo y seguro para esterilizar metales y

espejos, pues no oxida o corroe y los bordes cortantes no pierden filo.(Silvia I. Acosta-
Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).

Desventajas del método: Necesita de un ciclo largo, de tener una penetración pobre
y de destruir los elementos termolábiles.(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade
Stempliuk, (2008).

Calor húmedo (Autoclave):

Ventajas del método:

a. El ciclo necesario para la esterilización es corto

b. Se caracteriza por una buena penetración

c. Da la posibilidad de esterilizar gasas de algodón, campos, gomas y otros

materiales, así como de esterilizar instrumental rotatorio. (Silvia I. Acosta-Gnass
Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).

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Desventajas del método:

a. Los instrumentos cortantes pierden filo

b. Produce corrosión del instrumental.

(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008)

2. Investigue cómo se clasifican los métodos de esterilización?

Los métodos de esterilización se clasifican en Físicos y Químicos.

Físicos:

1. Calor Húmedo.
• Autoclave a vapor saturado.
2- Calor Seco
• Poupinel.
(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).
Químicos:

1- Líquidos.

• Glutaraldehido al 2%
• Peróxido de hidrógeno estabilizado al 6 %
• Ácido Peracético 0.2 al 30 %
.(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).
2- Gas
• Gas de óxido de etileno.
• Gas de formaldehído.
• Vapor de Peróxido de hidrógeno.

(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).

3- Plasma
• Plasma de peróxido de hidrógeno
• Plasma de ácido peracético.

(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).

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3. Mencione otros métodos de esterilización y explique en que se utilizan.

Radiaciones Ionizantes:

• Rayos gamma. Son radiaciones ionizantes que se usan en la industria de artículos

médicos, odontológicos y farmacéuticos. Se caracterizan por una alta energía y gran
penetración. Es un método costoso.

• Rayos beta. Se usan principalmente en la industria. Su poder de penetración es

menor que el de las radiaciones gamma.(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade
Stempliuk, (2008)

• Rayos ultravioleta. Son radiaciones no ionizantes. No tienen efecto esterilizante

sobre algunos microorganismos. Son de baja energía y escasa penetración. Su
acción es superficial y se usan para mantener una baja tasa de microorganismos en
el quirófano y para mantener estéril el instrumental una vez que ha sido esterilizado.

.(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).

Ondas Supersónicas: (microondas odontológico): Este aparato está formado por un

foco emisor de alta frecuencia que causa vibraciones en las moléculas de los
microorganismos. Dichas vibraciones se transforman, por fricción interna, en calor y
de esta forma se altera y se desactiva todo tipo de estructura viva. El instrumental se
coloca en un contenedor cubierto por bolitas de vidrio humedecidas con un líquido
(ortobencil paraclorofenato de sodio). El tiempo de esterilización es de 90
segundos.(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).

Ebullición: se pueden usar 2 tipos de líquidos: agua y aceite.

Agua en ebullición. El agua hierve a 100ºC, este sistema ofrece todas las garantías
de esterilización siempre y cuando se cumpla el tiempo en que el material debe
permanecer en ebullición, para lograr la muerte de las bacterias, no así las de las
esporas que aún siguen resistentes. Aquí por supuesto no se puede esterilizar gasas,
artículos de papel (conos) etc. Tiempo de ebullición establecido: 20 minutos. (Silvia I.
Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).

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Microesferas de vidrio (esterilizadora de bolitas): Este tipo de esterilización se
realiza con un equipo que contiene un recipiente con microesferas de vidrio que son
calentadas eléctricamente y que pueden ser sustituidas por sal común o arena. Se
usa para esterilizar instrumental pequeño de Endodoncia, conos de papel o bolillas
de algodón, que se introducen en el compartimiento durante 15 a 20 segundos a
temperatura de 250 C.(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).

Óxido de etileno: es un poderoso agente esterilizante gaseoso de acción lenta,

inflamable cuando aparece en concentraciones iguales o superiores al 3 %, y
altamente tóxico cuando es ingerido o inhalado (mutágeno y carcinógeno). Se utiliza
en la industria de productos médicos y odontológicos para esterilizar productos
termolábiles como plástico, drogas, equipamiento electrónico, etc. (Silvia I. Acosta-
Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).

Plasma de peróxido de hidrógeno. El plasma es el cuarto estado de la materia no

sólido, ni líquido, ni gaseoso. Consiste en un conjunto de iones, electrones y partículas
atómicas neutras que se produce mediante temperaturas altísimas o fuertes campos
electromagnéticos. Es un método reciente de esterilización rápida, a baja
temperatura, baja humedad y sin residuos tóxicos pues su residuos finales son
oxígeno y agua.(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008)

Soluciones químicas (esterilización en frío): El uso de soluciones salinas para la

esterilización consiste en la inmersión del instrumental en desinfectantes de alto nivel,
los cuales tienen acción bactericida, virucida, fungicida y esporicida.(Silvia I. Acosta-
Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).

4. Diga que es un indicador de esterilización, cuantos tipos existen y explique

el uso y funcionamiento de uno de ellos.

Existen diferentes métodos para la comprobación de la esterilización; siendo estos

una garantía para que los equipos funcionen correctamente y cumplan con su
cometido: esterilizar. En otras palabras tienen el objetivo o permiten realizar el control
de la calidad del proceso de esterilización. Para realizar este control existen
indicadores o controles físicos, químicos y biológicos.(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska
de Andrade Stempliuk, (2008).

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1. Indicadores o controles físicos. El control de la esterilización mediante
indicadores físicos se lleva a cabo mediante su colocación en el interior del paquete
a fin de comprobar la temperatura, el tiempo de esterilización y la presión en un equipo
determinado y para lo cual estos indicadores son calibrados a fin de detectar
cualquier fallo, mediante la incorporación de termómetros, manómetros, sensores de
carga, etc., los cuales son de gran utilidad pero no constituyen un medio eficaz para
comprobar la esterilización y para lo cual se hace necesario usar como complemento
controles biológicos y demás métodos de control.(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de
Andrade Stempliuk, (2008).

2. Indicadores o controles químicos. Son productos comerciales consistentes en

sustancias químicas que cambian de color (indicadores colorimétricos) si se cumple
un elemento clave del proceso de esterilización, como por ejemplo la temperatura
necesaria. Algunos indicadores requieren más de un parámetro, como cierto tiempo
de exposición y humedad, para cambiar de color. Pueden ser fabricados con papel
especial, cintas autoadhesivas, o pueden ser tubos de vidrio con líquidos especiales.
Un ejemplo muy utilizado en nuestro medio son las cintas autoadhesivas (cinta
testigo) que sirve o se usa para atestiguar que un paquete o envase ha pasado por
un ciclo o proceso de esterilización y que la esterilización se realizó con la calidad
requerida.

Por lo que tienen como único fin, distinguir si la calidad de la esterilización es óptima
y además permite identificar los paquetes procesados, de los que aún no han sido
procesados.

Desventaja de los indicadores químicos: pueden reaccionar cambiando de color aun

cuando no se han dado los parámetros necesarios para obtener la esterilización.
Siendo los indicadores químicos diferentes de acuerdo con el proceso de
esterilización utilizado (calor seco, húmedo o gas).

(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).

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3. Indicadores o controles microbiológicos o biológicos: Es el mejor método para
determinar la eficiencia de un proceso de esterilización. Están diseñados para
confirmar la presencia o ausencia de microorganismos viables después de la
esterilización.(Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).

• Son dispositivos inoculados con esporas de microorganismos especialmente

resistentes a los distintos agentes de esterilización, son de presentación variada ya
que pueden presentarse en forma de tubos, tiras o ámpulas como medios de cultivos
incorporados. Una vez que han sido utilizados, se incuban a temperatura de 55 ºC en
los laboratorios de Microbiología. (Nora Restrepo, 2015)

• Siendo su periodicidad de uso semanal, por lo que en cada bulto para esterilización
deberá colocarse un indicador, para poder validar el proceso. Según el resultado de
este indicador se considerará si la esterilización es exitosa o no. En caso de que no
lo sea, toda la carga deberá ser esterilizada nuevamente. (Silvia I. Acosta-Gnass
Valeska de Andrade Stempliuk, (2008).

5. Explique por qué en algunos casos se aplica el término desinfección y no el

de esterilización.

La acción de desinfectar es el segundo nivel de la limpieza. No se trata de una

limpieza completamente exhaustiva, como supondría la esterilización, pero sí reduce
la cantidad de gérmenes presentes a, aproximadamente, una quinta parte. Es un
saneamiento integral que requiere de técnicas y productos específicos. La finalidad
de la desinfección es eliminar la presencia de microorganismos patógenos que
puedan ser origen de enfermedades, especialmente en ambientes sensibles, como
los hospitales. Es por esto que la limpieza debe ser metódica y debe seguir un plan
de actuación que estipule los métodos y las técnicas adecuadas. A la hora de
desinfectar, además, siempre se deben emplear productos químicos recomendados
para cada zona o superficie. Estos deben contar con una función antiséptica que
actúe sobre las zonas a limpiar y al mismo tiempo tienen que ser inocuos para las
personas. Es preciso respetar las indicaciones referentes al uso, concentración,
tiempo de actuación y temperatura de los detergentes.(María-Jesús Hernández-
Navarrete , 2014).

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La esterilización es la completa eliminación de todos los microorganismos presentes
en un objeto o superficie. Mientras que la desinfección destruye parte de la vida
microbiana, la esterilización, al ser el nivel más exhaustivo de la limpieza, la elimina
al completo. En consecuencia, la esterilización lleva más tiempo que la desinfección.
La esterilización es un proceso de limpieza especialmente importante en entornos con
alto riesgo de contagio o alta presencia de patógenos, como los hospitales. Al ser la
aplicación de calor directo uno de los métodos más efectivos de esterilización, la
mayor parte del instrumental médico es resistente al calor. Una vez esterilizado, un
objeto debe guardarse en un lugar limpio, seco y libre de polvo, y debe mantenerse
con el envoltorio íntegro. (Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk,
(2008)

Vl. RESULTADOS

Imagen 1. Matraz Erlenmeyer antes de ser esterilizados con su tapón de algodón y

elaborando el de papel de estraza para colocar la cinta indicadora.

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Imagen 2. Cajas Petri envueltas en papel de estraza antes de ser esterilizadas.

Imagen 3. Tubos previamente llenados con 9 mL de agua destilada y tapados

levemente antes de ser esterilizados.

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Vll. DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS

• Horno de esterilización

La esterilización en laboratorio se realiza mediante un horno de aire

caliente que funciona en calor seco. Para realizar esta técnica, es importante
preparar la configuración experimental adecuada, como se muestra en
las Figuras 1 y 2. La desinfección es un proceso muy importante. Este proceso
es importante porque elimina la presencia de microorganismos.
• Esterilizador de autoclave

La esterilización en autoclave se realiza en recipientes metálicos de paredes

gruesas que permiten el manejo de vapor a altas presiones y temperaturas,
permitiendo la esterilización de equipos de laboratorio. En este caso, los tubos
fueron esterilizados con 10 mL adicionales de agua destilada (Figura

Vlll. CONCLUSIÓN

Existen muchos métodos diferentes de desinfección, en este caso esterilización,

pero uno de los más seguros y comunes es la desinfección con vapor a
alta temperatura y alta presión, también conocida como desinfección por calor
húmedo. Sin embargo, los hornos Pasteur también se utilizan para
esterilizar materiales de porcelana y vidrio que pueden corroerse. Después de
realizar cada operación y utilizando los métodos conocidos descritos
anteriormente, el propósito es clasificar, preparar y esterilizar el material a procesar
en el laboratorio de microbiología.

lX. SUGERENCIAS Y RECOMENDACIONES

Se debe tener en cuenta que para realizar estos procedimientos es importante seguir
todas las indicaciones, como el uso de la cinta indicadora, la correcta envoltura del
material, el tiempo y temperatura correcta dentro de los equipos de esterilización.

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X. BIBLIOGRAFÍA

María-Jesús Hernández-Navarrete , 2014. Principles of antisepsis, disinfection and

sterilization Disponible en: https://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-
infecciosas-microbiologia-clinica-28-articulo-fundamentos-antisepsia-desinfeccion-
esterilizacion-S0213005X14001839

(Consultado: el 13 de febrero de 2023).

Pérez-Uz, B., de Silóniz, M. I., Torralba, B. & Vázquez, C., 2010. Metodología de
esterilización en el laboratorio microbiológico. Reduca , 3(5), pp. 1-14.

Serra Zamora, M. d. M., 2013. GUÍA PARA EL MANEJO DEL AUTOCLAVE EN LA

CENTRAL DE ESTERILIZACIÓN DEL HOSPITAL UNIVERSITARIO DE CEUTA. [En
línea] Disponible en:
https://ingesa.sanidad.gob.es/ca/bibliotecaPublicaciones/publicaciones/internet/docs
/Autoclave.pdf

[Consultado el 12 de febrero de 2023].

Silvia I. Acosta-Gnass Valeska de Andrade Stempliuk, (2008). Manual de

esterilización para centros de salud. PANAMÁ: Copyright 2008 Organización
Panamericana de la Salud. Disponible en línea en el siguiente enlace: AMR-
Manual_Esterilizacion_Centros_Salud_2008.pdf (paho.org)

[Consultado el 12 de febrero de 2023].

Nora Restrepo Restrepo, 2015. Esterilización por calor seco usando el horno casero.
Disponible en línea: https://revistas.udea.edu.co/index.php/iee/article/view/22120

[Consultado el 13 de febrero de 2023].

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