Reacción interespecie entre leucocito humano y anticuerpo de ratón como principal causa de falsos

positivos en inmunoensayos en muestras clínicas

Desde hace más de 30 años se vienen usando los inmunoensayos como herramienta diagnóstica, aún a
pesar de que los datos de sensibilidad y especificidad dados por las casas comerciales no concuerdan
con los obtenidos en muestras clínicas, muy especialmente en aquellas muestras que pueden ser
inflamatorias y tener presencia de leucocitos, como: heces, exudado faringeo, orina o sangre. Aunque
se puede encontrar en literatura casos demostrados de interferencia por una reacción interespecie
leucocito humano (Lh) y anticuerpo de raton (rIg), no se ha estudiado en profundidad en inmuensayos
diagnosticos empleados en microbiología, como por ejemplo en la determinación de GDH en heces.

En el diagnóstico de infección por Clostridium difficile (ICD), esta situación se ve agravada por el uso
de algoritmos que consideran los falsos positivos (FP) de las inmunocromatografías de GDH y Toxina
como errores independientes entre si, cuando a causa de esta reacción interespecie no lo son, dando
lugar a un sobrediagnóstico de ICD.

Para demostrar esta hipótesis hemos empleado muestras clínicas falsas positivo (FP) en
inmunocromatografías (ic) como grupo problema y verdaderos positivos ic (VP), como grupo control,
todas verificadas por técnicas de biología molecular. Todas estas muestras se trataron con una solución
de leucocidinas y Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM) según la patente P202330734,
con objeto de eliminar la supuesta interferencia por leucocitos humanos y tras el tratamiento de la
muestra se repitió la ic.

Resultados:

-64 FP ic: 61 en muestras de heces y 3 en exudados nasofaringeos. Por tipo de ic: 37 GDH, 10 Toxina
Clostridium difficile, 3 Rotavirus, 3 Adenovirus, 3 Astrovirus, 3 Norovirus I y II, 2 Giardia lamblia, 1
VRS, 1 FluA y 1 SARSCov2. Solo 3 muestras de heces siguieron siendo positivas a ic GDH tras el
tratamiento, el resto negativizaron todas al repetir sus ic.

-57 VP ic: 54 en muestras de heces y 3 en exudados nasofaringeos. Por tipo de ic: 40 GDH, 3
Rotavirus, 3 Adenovirus, 3 Astrovirus, 3 Norovirus I y II, 2 Giardia lamblia, 1 VRS, 1 FluA y 1
SARSCov2. Todas estas muestras permanecieron con ic positiva tras el tratamiento.

Totales: 64 FP a distintas ic, 59 negativizaron tras el tratamiento con leucocidinas. Como control
positivo, del total de 57 VP, todos seguían positivos tras el tratamiento con leucocidinas+SARM.

Discusión: Se puede observar que la principal causa de FP en las ic es la presencia de Lh que

reacciónan con rIg, un 95% de los FP. Por tanto, el 95% de los FP en ic son a causa de errores
dependientes de método, y solo un 5% de estos FP errores independientes de método. Tambien
demostramos que este problema se puede evitar de forma sencilla usando un nuevo procedimiento
recogido en la patente P202330734: tratamiento de muestras con una solución de leucocidinas y
SAMR (Diagnosis of Clostridium difficile: a wrong algorithm and an improvement in immunoassays,
peer review).