UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA

BIOLÓGICA
REGIÓN XALAPA

LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA
ACADÉMICO: JOEL JAHAZIEL DIAZ VALLEJO

PRÁCTICA 7 DETECCIÓN DE ANTICUERPOS

Y DETRMINACION DEL
ANTI-VIH ANTIGENO DE
HEPATITIS B
SUPERFICCIE DE LA

INTEGRANTES EQUIPO 2

MIRELI SOFÍA RODRÍGUEZ SOSA

DIANA GISSELLE CALDERÓN MEJÍAS
ELIZABETH SÁNCHEZ RODRÍGUEZ
HEIDY RAMOS GARCIA
RAFAEL VAZQUEZ RIVERA

15 DE OCTUBRE DE 2022
 Universidad Veracruzana
Facultad de Química Farmacéutica Biológica
Región Xalapa
Laboratorio de Inmunología

Práctica #7
“DETECCION DE ANTICUERPOS ANTI-VIH”
“DETERMINACIÓN DEL ANTIGENO DE SUPERFICIE DE LA HEPATITIS B (HbsAg)”

OBJETIVO: Realizar la detección de anticuerpos anti-VIH y antígenos de la Hepatitis B mediante la aplicación

de pruebas rápidas

FUNDAMENTO:
Las pruebas rápidas son inmunoensayos cromatográficos que utilizan anticuerpos recombinantes para la detección
de anticuerpos contra el antígeno, ya sea en tira reactiva o en casete se puede realizar utilizando la sangre total,
suero o plasma del paciente. Se trata de un procedimiento corto y sencillo que no requiere de mucha técnica y los
resultados se obtienen en cuestión de minutos.

El fundamento de este tipo de pruebas consiste en un proceso inmunocromatográficos que ocurre cuando se dispensa
una cantidad adecuada de muestra en la almohadilla de absorción del casete o se sumerge la tira reactiva en la
preparación de la muestra, esta migra por acción capilar a través de la membrana de celulosa. Si se presentan
anticuerpos IgG, IgM o IgA contra el antígeno en la muestra, éstos se unirán a los conjugados. Luego el
inmunocomplejo es capturado en la membrana por los antígenos recubiertos, formando así una línea T de color
borgoña, indicando un resultado positivo para la enfermedad. La ausencia de la línea T sugiere un resultado
negativo. La prueba contiene un control interno (línea C) que debe exhibir una línea de del mismo color
correspondiente al inmunocomplejo de anticuerpos de control independientemente de la presencia de cualquier
anticuerpo. De lo contrario, el resultado de la prueba no será válido y la muestra debe ser realizada de nuevo con
otro dispositivo (Advin Biotech, Inc, 2021).

1.1 VIH

El VIH es un virus RNA clasificado en la familia Retroviridae; existen dos tipos de VIH: VIH- 1 y VIH-2, siendo
el VIH-1 el de mayor potencial patogénico y de mayor diseminación en el mundo. (ISPC, 2022). Este virus es el
agente etiológico del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). El SIDA corresponde a la etapa final
de la infección por VIH. El virión está rodeado por una envoltura lipídica que se deriva de la membrana de la
célula huésped. Varias glicoproteínas virales están en la envoltura. Cada virus contiene dos copias de ARN
genómicos de sentido positivo 2 Tanto la variante 1 como la 2 son capaces de desencadenar una respuesta
inmunitaria. La detección de anticuerpos contra el VIH en suero, el plasma es la forma más eficaz y común de
determinar si una persona ha estado expuesta al VIH y de detectar el VIH en sangre y productos sanguíneos. (Advin
Biotech, Inc, 2021).
La transmisión del VIH puede ocurrir a través de vía sexual, sanguínea (transfusional, por órganos o tejidos
infectados y por cortes o pinchazos con sangre contaminada), vertical de madre a hijo (durante el embarazo, al
momento del parto) y durante la lactancia.

Las pruebas de anticuerpos examinan si hay presencia de estos contra el VIH en la sangre, los anticuerpos son
proteínas que combaten la enfermedad y que el cuerpo produce en respuesta a la infección por el VIH. La mayoría
de las pruebas rápidas y las pruebas domiciliarias son pruebas de anticuerpos. Por otra parte también existen las
pruebas de antígeno-anticuerpo, como su nombre lo indica, pueden detectar antígenos (una parte del virus) y
anticuerpos contra el VIH en la sangre (National Institutes of Health, 2021). Este tipo de pruebas igual que las
pruebas tradicionales de ELISA miden anticuerpos contra el VIH; es importante considerar que un resultado
positivo en una prueba rápida debe confirmarse siempre mediante un estudio confirmatorio de Western Blot para
poder certificar un diagnóstico positivo (Hernández et al., 2006).

1.2 HEPATITIS B

La hepatitis viral es una enfermedad sistémica que afecta principalmente al hígado. La mayoría de los casos de
hepatitis viral aguda son causados ya sea por el virus tipo A, B (VHB) o tipo C. El antígeno complejo que se
encuentra en la superficie del VHB se llama HBsAg (Advin Biotech, Inc, 2021). El antígeno de superficie de la
hepatitis B (HBsAg) se sitúa en la superficie del virus que está presente en la sangre de la persona infectada. Un
resultado positivo significa que la hepatitis B está presente en el organismo. Por otra parte si se presenta el
"anticuerpo de superficie" (HbsAb o Anti-HB) significa que hubo una respuesta al virus de la hepatitis B. El
organismo lo produce cuando se recibe la vacuna o en caso de recuperación de hepatitis B. mientras que el
anticuerpo del núcleo del virus de la hepatitis B (HBcAb o Anti-HBc) es un anticuerpo que no proporciona
protección ni inmunidad contra la hepatitis B. Por lo que solo indica que la persona pudo haber contraído hepatitis
B en algún momento de su vida, esta prueba se utiliza particularmente en bancos de sangre (Hepatitis B Fundation,
2018).

MATERIAL Y REACTIVOS:

• Inserto VIH (proporcionado en el aula)

• Inserto Hepatitis B (proporcionado en el aula)
• Solución salina
• Sangre, suero o plasma humano

MÉTODO:
 Coloqcar el casete sobre una superficie limpia y nivelada.

SUERO O PLASMA: Sostenga el gotero verticalmente y transfiera 3 gotas de

suero o plasma (aproximadamente 75 L) al pocillo de la muestra del casete
de prueba e inicie el temporizador.

SANGRTE TORAL POR PUNCION VENOSA: Sostenga el gotero en posición

vertical y transfiera 2 gotas de sangre total (aproximadamente 50 L) al área
de la muestra, luego agregue 1 gota de solución salina (aproximadamente 40
L e inicie el temporizador.

SANGRE TOTAL POR PUNCION DIGITAL: Llene el tubo capilar y transfiera

aproximadamente 50L de muestra de sangre completa por punción digital al
área de la muestra del casete de prueba, luego agregue 1 gota de solución
salina (aproximadamente 40 L) e inicie el temporizador.

Espere a que aparezcan las líneas de color. Lea los resultados a los 15 ~ 20
minutos.

RESULTADOS:
Posterior al tiempo de espera se leyeron los resultados de cada una de las pruebas, en todas se marcó
únicamente la línea de control por lo que el resultado cualitativo fue negativo.

Fig. 1. Resultado negativo en pruebas rápidas de detección de

anticuerpos Anti-VIH y antígeno (HbsAg)

Fig. 2. Fig. 3. Pruebas rápidas para detección de anticuerpos Anti-VIH

DISCUSIÓN:

Durante este proceso se aspiraba a la identificación mediante pruebas rápidas de flujo lateral, cromatográficas de
inmunoensayo cualitativas la detección de anticuerpos Anti-VIH así como de antígenos de superficie del virus de
la Hepatitis B. Ambas enfermedades conllevan a un potencial riesgo de mortalidad, cada año se registran porcentajes
mayores de infección, tanto en México como en el mundo, lo cual implica un problema de salud a nivel global. Tan
solo durante 2020 en México fallecieron 4 573 personas debido al virus de inmunodeficiencia humana (VIH); 3 815
hombres y 758 mujeres (INEGI, 2021); mientras que durante el mismo año se registraron 369 casos de Hepatitis B
en México (Secretaría de Salud, 2020). A partir de ello se puede inferir que ambas infecciones tienen gran
prevalencia en nuestro país; por lo mismo se requieren métodos rápidos y eficientes para detectar la presencia de
estos agentes patógenos y las pruebas rápidas representan una oportunidad para dar paso a un diagnóstico oportuno
y con ello brindar un tratamiento que reduzca la probabilidad de muerte a causa de estos agentes infecciosos.
Como se mencionó anteriormente estas pruebas son únicamente una puerta de entrada a la detección tanto de VIH
como de Hepatitis B ya que en ambos casos un resultado positivo debe confirmarse con otro tipo de pruebas mas
especificas para poder diagnosticarse concretamente, aunado a ello nos encontramos con el hecho de que dos de las
pruebas aplicadas estaban caducadas, lo cual se calificaría como un motivo para considerar la prueba como invalida
ya que un falso negativo por la descomposición química de la prueba, ya que al tratarse, en el caso de hepatitis B,
de una prueba de antígenos (proteína derivada de una bacteria), se ve propensa a procesos como la desnaturalización,
los factores que incrementan la posibilidad son la alteración en su concentración, exceso de temperatura,
modificación de su pH que pudo haber ocasionado una variación en su solubilidad y por lo tanto afectaciones en su
actividad biológica. A pesar de ello en ambos casos se marcó la línea de control indicando que el mecanismo
cromatográfico sigue en funcionamiento.

CONCLUSION:

La realización de las pruebas rápidas de VIH y Hepatitis B constituye uno de los métodos más comunes para detectar
la presencia de estas enfermedades que cada vez representan mayores porcentajes de contagio a nivel mundial.
Conocer el fundamento de la prueba es tan importante como conocer a los agentes patógenos ya que su resultado
nos ayuda a tener un mejor panorama del estado de la infección y con ello contribuir a la proporción de un
diagnóstico adecuado. Posterior a la realización de la prueba se enfatizó la importancia de diferenciar entre los
mecanismos bajo los que funcionan ambas pruebas (ya sea con antígenos o con anticuerpos) y su influencia directa
con el resultado del diagnóstico; en este caso debido al inconveniente de la caducidad el resultado obtenido de esas
dos pruebas resultaría invalido tomando en cuenta únicamente el resultado (negativo) de la tercera.

REFERENCIAS:

• Advin Biotech, Inc. (2021). Casete de prueba rápida de VIH 1.2 (sangre total / suero / plasma) Ficha técnica. Recuperado el 10 de
octubre de 2022 de https://reactlab.com.ec/wp-content/uploads/2021/03/Inserto-Advin-VIH-1.2-IHIV-C41.pdf

• National Institutes of Health (NIH). (2021). Visión general de la infección por el VIH: pruebas de detección del VIH. Recuperado
el 10 de octubre de 2022 de https://hivinfo.nih.gov/es/understanding-hiv/fact-sheets/pruebas-de-deteccion-del-vih

• ISPC (instituto de salud publica de Chile). (2022). Vigilancia VIH/SIDA. Recuperado el 10 de octubre de 2022 de
https://www.ispch.gob.cl/biomedico/vigilancia-de-laboratorio/ambitos-de-vigilancia/vigilancia-vih-
sida/#:~:text=Detecci%C3%B3n%20de%20antigenemia%20viral%3A%20Este%20m%C3%A9todo%20consiste%20en,evaluad
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• Hernández-Tepichín, G.; Fernández-Cotaya, I.; León-Juárez, E.; Morales-Carcaño, A. & Varela-Trejo, C. (2006). Guía para la
aplicación de la prueba rápida. Secretaría de Salud; Centro Nacional para la
• Prevención y el Control del VIH/SIDACENSIDA. Recuperado el 10 de octubre de 2022 de
https://www.gob.mx/cms/uploads/attachment/file/27271/guia_prueba_rapida.pdf

• Advin Biotech, Inc. (2021). Casete de prueba rápida HBsAb (sangre total / suero / plasma) Ficha técnica. Recuperado el 10 de
octubre de 2022 de https://reactlab.com.ec/wp-content/uploads/2021/03/Inserto-Advin-HBsAb-IHBSB-C41.pdf

• Hepatitis B Fundation. (2018). Interpretación de las pruebas de sangre para descartar la hepatitis B. Recuperado el 10 de octubre
de 2022 de https://www.hepb.org/assets/Uploads/Understanding-Your-Hepatitis-B-Blood-Tests-Fact-Sheet-updated-October-
2018-Spanish-
Final.u.pdf#:~:text=ADN%20del%20virus%20de%20la%20hepatitis%20B%20%3A,Normalmente%20hay%20cinco%20copias
 %20en%20una%20unidad%20internacional

• INEGI. (2021). ESTADÍSTICAS A PROPÓSITO DEL DÍA MUNDIAL DE LA LUCHA CONTRA EL VIH/SIDA (1 DE
DICIEMBRE). Recuperado el 11 de octubre de 2022 de
https://www.inegi.org.mx/contenidos/saladeprensa/aproposito/2021/EAP_LUCHAVSSIDA_21.pdf#:~:text=Seg%C3%BAn%20l
a%20entidad%20federativa%20de%20residencia,fallecidas%20por%20cada%20100%20mil%20habitantes.&text=Seg%C3%BA
n%20la%20entidad%20federativa,cada%20100%20mil%20habitantes.&text=entidad%20federativa%20de%20residencia,fallecid
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• Secretaria de Salud. (2020). Informe Anual de Vigilancia Epidemiológica de Hepatitis Virales, México 2020. Recuperado el 12 de octubre de
2022 de https://www.gob.mx/cms/uploads/attachment/file/615926/HepatitisViralesInformeAnual2020.pdf