Practica III: Fagocitosis

Levaduras Solución de NBT Colorante

safranina
Preparar una suspensión con
Preparar una suspensión
1.0g de levaduras en 100mL
de NBT al 0.1% en
de agua destilada solución salina
fisiológica
Pesar 0.5 g de
safranina y
Centrifugar a 1000 rpm
Disolver10 mg de NBT en disolver en 100
durante 5 min.
10 ml de agua y luego mL de agua

adicionar 85 mg de NaCl destilada

sólido (solución al 0.5%)

Descartar el sedimento y
centrifugar el sobrenadante a
1000 rpm por 5 min.

Método A
Descartar el sedimento y
recuperar el sobrenadante.
Tomar 2 portaobjetos y colocar en cada
uno una gota grande de sangre total.
Contiene
levaduras
“finas”. Colocar en cámara húmeda (caja Petri
con papel húmedo y un triángulo)

Incubar por 30 min a 37°C, con 5-7% Determinar el porcentaje que redujo el
de CO2 NBT.

Lavar muy suavemente las células no Examinar 100 células al microscopio

adheridas, con solución salina

Lavar con agua destilada y secar alaire.

Colocar de nuevo en la cámara húmeda y
cubrir cada portaobjeto con la solución de
Teñir con safranina al 1% en agua por 2
levaduras en solución de NBT.
min

Incubar por 30 min a 37°C. Lavar muy suavemente con PBS y secar al
aire.
 Practica III: Fagocitosis
Método B

Mezclar 100 μL de sangre anti coagulada

con y 100 μL de la solución de levadura.

Incubar por 20 min a temperatura

ambiente

Agregar 100 μL de solución de NBT

Incubar por 15 min a 37°C, en la oscuridad

Preparar una extensión gruesa de cada

tubo y teñir con colorante de Wright

1min en colorante y 3 min cubierto con

agua

Examinar 100 células al

microscopio

Determinar el porcentaje que redujo el

NBT