A.

Transformación bacteriana con un vector plasmídico de expresión

Transformación de dilución 1/100 en (medio Colocar 1 ml de cultivo Resuspender en 100 µl de

bacterias en condiciones LB) a partir de un cultivo bacteriano en microtubos solución 1 y colocarlas
de recombinante saturado de E. Coli crecido estériles y centrifugar por inmediatamente en hielo.
esterilidad microbiológica durante toda la noche a 5 minutos a 5000rpm
37°C

Resuspender las bacterias Luego de la incubación, Agregar 900µl de solución Agregar la mezcla de
con el medio restante y centrifugar las células a 2 (solución 1 + glucosa ligación y resuspender
mediante un rastrillo, 5000 rpm por 5 minutos y 20mM) e incubar a 37°C Incubar durante 20
sembrar en placas de descartar el sobrenadante con agitación durante 1,5 minutos sobre hielo.
cultivo con LB agar horas

Una vez secas, colocar las

placas en la estufa a 37°C
hasta el día siguiente

B. Electroforesis horizontal en gel de agarosa como metodología para separar fragmentos de DNA

Hervir la agarosa y agitar Agregar 12.5 μl de Sumergir en la cuba de Mezclar 5 μl del DNA
hasta que no queden Bromuro de Etidio a la electroforesis que obtenido en PCR+ 1 μl de
grumos, luego dejar solución de agarosa y contiene el buffer de buffer de siembra 10x +
enfriar. Preparar el molde volcar en el molde, corrida TBE 1X. Sacar el 4μl de agua. Sembrar en
del gel y colocar el peine esperar que solidifique peine. una de las calles del gel
 La visualización de los Conectar los cables de la Sembrar, y en otra calle Mezclar 2 μl del DNA
fragmentos de DNA y cuba a la fuente de poder, sembrar una mezcla de 3 plasmídico en colonia de
estimar el tamaño de la el peine debe colocarse μl de un marcador de + 1 bacterias transformadas+
muestra incógnita de DNA cerca del polo catódico. μl de buffer de siembra 1 μl de buffer de siembra
10x + 6 μl de agua. 10x + 7μl de agua.