Practica-de-Neurohistologia.

pdf

Anónimo

Fundamentos de Psicobiología Ii

1º Doble Grado en Psicología y Logopedia

Facultad de Psicología
Universidad Complutense de Madrid

Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
 Práctica 1: Neurohistología
CLASIFICACIÓN DE LAS TÉCNICAS
1. Cirugía estereotáxica: Técnica que permite localizar exactamente
un punto dentro de la cavidad craneal.
2. Técnicas de lesión
3. Técnicas neuroanatómicas
a. Técnicas neurohistológicas (“post mortem”)
b. Técnicas de neuroimagen (“in vivo”)
i. TAC: técnica de diagnóstico por imagen no invasiva
que permite ver distintos planos tridimensionales de
huesos o tejidos.
ii. RMN: técnica que proporciona imágenes más claras
que el TAC, ya que permite una mejor observación de
las zonas blandas, por ello permite el estudio de lesiones
en la médula espinal, proporciona una imagen más
clara que el TAC, se observan mejor las zonas blandas
como los ligamentos.
4. Técnicas de registro y de estimulación: se emplean reproducir
la función de una región determinada estimulando esa región
5. Técnicas neuroquímicas: funcionan igual que las de
estimulación, pero se llevan a cabo mediante fármacos.
6. Métodos genéticos: técnicas que estudian la anomalía en el
funcionamiento de determinadas proteínas. Se emplea, por ejemplo,
en las embarazadas para saber las probabilidades de que el feto
padezca una malformación.
7. Estudios comportamentales: se emplean, por ejemplo, para
estudiar el comportamiento de una camada en un laberinto en cruz.

Técnicas neurohistológicas (requiere de

varias fases necesarias para procesar la muestra
para poder realizar una observación de ese tejido en
el microscopio):
1. Selección del tejido
2. Fijación:
• Objetivo: mantener el tejido en
condiciones óptimas para que no se
degrade.
1. Fijación química. Se puede realizar
de dos formas, empleando líquidos
fijadores: aldehídos (formaldehído,
paraformaldehído, glutaraldehído):

Página | 1

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-7419926

Reservados todos los derechos. No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
 o Perfusión vascular, empleando un formaldehído
mediante la bomba de perfusión (introduciendo el
fijador con el objetivo de mantener las mismas
condiciones en las que se encontraba dentro del
organismo y sedando al animal mediante una

Reservados todos los derechos. No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
solución fijadora en forma de aldehído a través de,
por ejemplo, un pinchazo en el ventrículo cardiaco
para intentar que se queden los tejidos como se
quieren observar).
o Inmersión (la cual no asegura que se llegue a las
partes más profundas del tejido).
2. Métodos criogénicos (congelación): nitrógeno
líquido, nieve carbónica (métodos criogénicos)
o Cuando se fijan los tejidos se quedan más duros de
lo que están al natural, pero necesita congelarse la
muestra para que se endurezca.
3. Obtención de secciones
1. Secciones micrómetros (microscopio óptico) o
nanómetros (microscopio electrónico).
2. Endurecimiento: congelación, parafina.
o En ocasiones, para realizar un mayor
endurecimiento se vuelve a congelar el tejido o se
introducen las muestras en tubos de parafinas o
resinas para así poder realizar las secciones
correctamente.
3. Aparatos:
o Microtomo rotativo (muestras fijadas
químicamente): se realiza la sección a temperatura
ambiente.
o Criostato (muestras congeladas): se realiza la
sección entre -20 y -30ºC para mantener el proceso
de congelación.
Cuanto más delgada se quiere hacer la sección, más
endurecida es necesario que se encuentre la muestra.
4. Montaje en portaobjetos

Página | 2

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-7419926

Plan Turbo - Eliminar los vídeos + 10 descargas sin publicidad por sólo 0,99€ / mes - Oferta limitada
Fundamentos de Psicobiología Ii
Banco de apuntes de la
 4. Tinción
• Tinción de Golgi
o Sales de Plata
o Se tiñen todas las estructuras de la
neurona y células de glía.

Reservados todos los derechos. No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
o No se tiñen todas las neuronas
de la preparación.
o Estudio de la morfología
neuronal, por ejemplo:
▪ Estructura neural
▪ Neuronas piramidales de la corteza
▪ Neuronas de Purkinje (cerebelo)
• Tinción de Nissl
o Afinidad por ácidos nucleicos (ARN), por tanto se
teñirán zonas donde hay ribosomas
(retículo endoplasmático), por ello se
emplea para el tejido nervioso de la
zona del encéfalo y la médula espinal.
o Azul de Metileno, violeta de
cresilo (tinción de los somas).
o No es selectiva, se tiñen todas las
Laminación cortical neuronas de la preparación (resalta las
características importantes de la neurona).
• Tinciones de mielina
o Se emplea para teñir la mielina del SNC, pero no del
SNP.
o Se utiliza en estudios de alteraciones de los tractos
nerviosos.

5. Microscopio: óptico, electrónico

• Diferencias entre microscopio antiguo y moderno:

Página | 3

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-7419926

Plan Turbo - Eliminar los vídeos + 10 descargas sin publicidad por sólo 0,99€ / mes - Oferta limitada
 o En el antiguo la fuente de luz era externa (sol, bombilla)
mientras que en el moderno es interna y se encuentra
conectado a ordenadores con programas específicos.
• Diferencias entre microscopio óptico y electrónico:
o La microscopía electrónica permite ampliar la imagen
unos 50 millones de veces respecto a la microscopía óptica
(mejor resolución).
o La imagen en el microscopio electrónico es en blanco y
negro mientras que en el óptico es en color debido a la
tinción.
o La microscopía electrónica emplea haces de electrones,
mientras que la óptica emplea luz sin electrones.
o La lente del microscopio óptico es de vidrio y la del
microscopio electrónico es electromagnética.
Técnicas inmunohistoquímicas: utilizan
anticuerpos para localizar determinadas moléculas del
Sistema Nervioso, empleando el anticuerpo de la
neurona que se desea observar.

Neuronas dopaminérgicas

Ultraestructura de la sinapsis
• Tipos de vesículas sinápticas: se observan diferencias entre
sinapsis excitatorias (en la que se observan vesículas redondas) e
inhibitorias (se observan vesículas aplanadas y ovaladas).
Ultraestructura de un nervio

Página | 4

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-7419926

Reservados todos los derechos. No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
 ¿QUÉ RESULTADOS OFRECE LA NEUROHISTOLOGÍA?
• Morfología neuronal: Se visualizan las partes de la
neurona.
o Células de glía
▪ Astrocitos: Intervienen en el paso de sustancias

Reservados todos los derechos. No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
químicas desde la sangre al SN. En ciertas imágenes
se puede observar que los pies terminales
perivasculares de los astrocitos se encuentran en
contacto con un vaso sanguíneo, lo cual evidencia
ese intercambio. También se pueden observar
astrogliosis cerebrales en respuesta a un daño
tisular.
▪ Oligodendrocitos: forman vainas de mielina de
las fibras nerviosas de las neuronas en el SNC. Con
un microscopio electrónico de barrido se ven los
pies de los oligodendrocitos en la superficie del
cuerpo calloso.
▪ Microglía: Función inmunológica, eliminan las
células dañadas (más ramificaciones que un
oligodendrocito).
▪ Células de Schwann: Mielinizan las neuronas del
SNP.
▪ Nódulo de Ranvier: es la parte del axón donde
hay una interrupción de mielina. Su principal
función es que el impulso nervioso sea más rápido y
eficiente, ya que el potencial de acción va saltando
de un nódulo a otro.
o Corteza cerebral: se divide en 6 capas. Cada una es una
unidad de procesamiento de información.
▪ Las piramidales tienen función motora y están en
las capas 3 y 5. Los axones viajan a través del
cerebro a la médula y son las que permiten el
movimiento voluntario.
o Cerebelo: se organiza en 3 capas y está formado por
células de Purkinje, células granulares y
una capa molecular. Su función es sincronizar la
secuencia del programa motor. Estas células pueden verse
afectadas por el alcohol.
▪ Células de Purkinje: tienen un soma redondo o
en forma de pera y muchas ramificaciones. Debido
Página | 5

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-7419926

Plan Turbo - Eliminar los vídeos + 10 descargas sin publicidad por sólo 0,99€ / mes - Oferta limitada
 a sus ramificaciones, pueden recibir un gran
número de sinapsis.
PREGUNTAS
1- Enumera y explica brevemente cuáles son los pasos

Reservados todos los derechos. No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
para preparar una muestra para su evaluación en el
microscopio óptico
1. Selección de la muestra
2. Fijación para mantener el tejido en las
condiciones óptimas. Puede ser por perfusión
química o por inmersión (no asegura que se
llegue a las partes más profundas del tejido).
Finalmente congelas la muestra.
3. Obtención de secciones mediante el
endurecimiento de las muestras, o bien por
congelación o bien empleando tubos de
parafina. Puede realizarse con un criostato o
con un microtomo.
4. Tinción de los somas según lo que se desee
observar.
5. Observación con el microscopio.
2- ¿Qué se pretende con la fijación del tejido?
Interrupción de la degradación natural del tejido.
3- ¿Cuáles son las diferencias entre la microscopía óptica
y electrónica?
b. La microscopía electrónica permite ampliar la imagen
unos 50 millones de veces respecto a la microscopía óptica
(mejor resolución).
c. La imagen en el microscopio electrónico es en blanco y
negro mientras que en el óptico es en color.
d. La microscopía electrónica emplea haces de electrones,
mientras que la óptica emplea luz sin electrones.
e. La lente del microscopio óptico es de vidrio y la del
microscopio electrónico es electromagnética.
4- Hay un detalle estructural de un tipo de célula de glía
que facilita el intercambio de sustancias con las
neuronas y con los vasos cerebrales. ¿de qué se trata?
Los pies de los astrocitos hacen contacto con capilares y
transportan moléculas como la glucosa. Los astrocitos actúan

Página | 6

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-7419926

Plan Turbo - Eliminar los vídeos + 10 descargas sin publicidad por sólo 0,99€ / mes - Oferta limitada
 como intermediarios que facilitan el transporte de sustancias y
participan en la barrera hematoencefálica.
5- ¿Qué técnica de tinción tengo que usar si quiero
realizar un contaje de neuronas de una estructura?
Tinción de Nissl, ya que la de Golgi no tiñe todas las neuronas
de la preparación.
6- ¿Qué técnica de tinción debo utilizar si quiero estudiar
la morfología completa de una neurona?
La tinción de Golgi.
7- ¿Cuál es la diferencia entre las neuronas y células de
glía en una preparación con tinción de Nissl?
Las neuronas tienen ARN y las células de glía no. Siendo la
técnica de tinción de Nissl afín al ARN, en las neuronas se van a
teñir el citoplasma el nucleolo y los ribosomas, y en las células
de glía la tinción será más difuminada, ya que carece de ARN.
8- ¿Qué técnica tengo que usar si quiero observar si mi
tratamiento ha tenido efectos en las neuronas de
dopamina en el núcleo accumbens?
La técnica inmunohistoquímica, porque permite estudiar
determinadas estructuras del sistema nervioso (selección de las
neuronas que se pretenden estudiar).

Página | 7

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-7419926

Reservados todos los derechos. No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.