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ANÁLISIS DE PROCESOS MICROBIOLOGICOS

CULTIVO INDUSTRIAL DE MICROORGANISMOS: SISTEMAS

DE CULTIVO
OCTUBRE 31, 2012 DEJA UN COMENTARIO

- Cultivo industrial de microorganismos: sistemas de cultivo

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%C3%A9todo%20de%20cultivo%20m%C3%A1s,por%20una%20serie%20de%20fases

1. Cultivo discontinuo (batch culture)

Un cultivo solo crecerá en un medio de cultivo si contiene todos los nutrientes

necesarios en una forma disponible y si son adecuados el resto de los factores
ambientales.

El método de cultivo más simple es el cultivo discontinuo.

El microorganismo crece a partir de una limitada cantidad de medio hasta que

se agota un nutriente esencial o se acumulan productos tóxicos hasta niveles
que inhiben el crecimiento.

El crecimiento no comienza inmediatamente después de la inoculación del

medio de cultivo. El cultivo pasará por una serie de fases. El periodo previo al
crecimiento activo se denomina fase de latencia que puede considerarse como
un período de adaptación.

Curva de crecimiento

En los procesos comerciales es conveniente reducir la fase de latencia para evitar la

pérdida de tiempo y porque se consumen nutrientes para mantener el cultivo viable. El
tiempo de la fase de latencia puede reducirse usando un inóculo relativamente grande
(3-10 %) en fase exponencial preparado en el mismo medio (o similar) utilizado para la
fermentación.

2. Cultivo discontinuo alimentado;

batch alimentado (BA) o Fed Batch

Es un cultivo discontinuo o cultivo en batch al que se le añade o alimenta, continua o

secuencialmente medio nutritivo fresco o alguno de sus componentes. sin la eliminación
del cultivo crecido.

Por lo tanto, el volumen de un cultivo discontinuo alimentado aumenta con el tiempo.

Si el nutriente que se alimenta es el limitante del crecimiento, esta técnica permite

controlar la velocidad de crecimiento (m) del microorganismo.
El BA es particularmente útil en procesos en los que el crecimiento celular y/o la
formación de producto son sensibles a la concentración del sustrato limitante, es decir
cuando el rendimiento celular o la productividad de la biomasa o del metabolito
buscado se ven afectados.

Así, este método se emplea cuando se quieren evitar fenómenos de inhibición por
sustrato y se requiere alcanzar una alta concentración de biomasa.

ESQUEMA CULTIVO DISCONTINUO ALIMENTADO

El cultivo BA se inicia a partir de un cultivo en batch, por lo que V o, Xo y So son las

condiciones finales de dicho batch.

Es posible elegir distintas condiciones de alimentación, ya sea mediante el empleo de

caudales variables (F = F(t)), o bien mediante la variación de la concentración de
sustrato limitante (Sr=Sr(t)).

En el caso del Trabajo Práctico se utilizará el sistema más simple, es decir F=cte y
Sr=cte.

3. Cultivo continuo

De los tres métodos usuales para el cultivo de microorganismos, batch, batch

alimentado y continuo, es este último el que ofrece mayores posibilidades de control.

Por sus características especiales permite controlar el proceso a un valor de velocidad

específica de crecimiento (m) prefijado de manera muy simple. Este punto es de suma
importancia ya que el comportamiento de la mayoría de los microorganismos se ve
afectado por el valor de m al que están creciendo. Por ejemplo, es común que a altos
valores (cercanos a mm) formen diversos productos, siendo la naturaleza de estos
dependientes del microorganismo, mientras que a bajos valores de m no los formen.

Mediante el cultivo continuo es posible estudiar el efecto sobre el proceso de variables

como PH, temperatura, concentración de nutrientes, etc., manteniendo constante el valor
de m, o bien, fijadas las anteriores, analizar el efecto de m sobre el proceso. De este
modo es posible separar los distintos efectos y obtener información valiosa para la
mejora del proceso.

Para poner en marcha un cultivo continuo, se realiza previamente un cultivo batch y en

un momento dado, normalmente cuando se agota el substrato limitante, se comienza a
alimentar el biorreactor con medio de cultivo fresco a un caudal F (Fig. 1).

ESQUEMA CULTIVO CONTINUO

Mediante un rebalse se logra que el volumen del cultivo permanezca constante. El

caudal de salida contendrá células, mientras que la concentración de nutrientes será
menor que en el caudal de entrada debido a que en parte fueron consumidos por los
microorganismos. Eventualmente se encontrará también algún producto(s) proveniente
de la actividad metabólica de los microorganismos.
Una de las variables de operación fundamental en este tipo de cultivos es la velocidad
de dilución, D, la que se define como la relación entre el caudal de alimentación, F, y
el volumen de cultivo, V.

D= F/V (1)

Teniendo en cuenta las unidades usuales de F (L. h-1) y de V (L), las de D serán de h-1.
El valor de D corresponde a las veces que se renueva el volumen del biorreactor por
unidad de tiempo, así un valor de D= 0.25 h -1 indica que en una hora se renovó un 25 %
del volumen de cultivo, o bien que al cabo de 16 hs. se habrá renovado cuatro veces el
volumen de cultivo. Podría pensarse que a estas alturas prácticamente ya no quedan
microorganismos dentro del biorreactor, pero no es así; debe tenerse en cuenta que estos
se están multiplicando activamente lo cual compensa las “perdidas” debidas a los
microorganismos que son arrastrados fuera del biorreactor por el caudal de salida. Bajo
ciertas condiciones, que analizaremos más adelante, ambos procesos se compensan de
modo tal que la concentración de microorganismos se mantiene constante en el tiempo,
es decir que se habrá alcanzado un estado estacionario. En estas condiciones también se
mantendrán constantes en el tiempo las concentraciones de nutrientes, en particular la
del substrato limitante del crecimiento, y la de producto(s).

4. Diferencias entre cultivo discontinuo y continuo

Las principales diferencias entre estos dos tipos de cultivo pueden resumirse de la forma
siguiente:

 El cultivo continuo opera bajo condiciones de un estado de equilibrio ya que las

concentraciones de todos los componentes del cultivo son constantes.
 El cultivo continuo opera bajo condiciones limitantes de sustratos, mientras que
el cultivo discontinuo, en la fase exponencial, funciona en presencia de
exceso de sustrato.
 La velocidad de crecimiento en el cultivo continuo está controlada por la
velocidad de dilución (y por bajo el control del operario) y su valor es siempre
menor que el de la velocidad especifica de crecimiento máxima, (µ max). Por el
contrario la velocidad específica de crecimiento en la fase exponencial de un
cultivo discontinuo alcanzará la µ max correspondiente a las condiciones que
prevalezcan en el cultivo.

4 Cultivo superficial.

La fermentación en cultivo superficial, se caracteriza porque las bacterias se

encuentran en contacto directo con oxígeno gaseoso, o situadas en la interfase
líquido-gas, como es el caso del método Orleans o bien, fijadas a soportes de
materiales tales como virutas de madera.

Este sistema constituye el primer paso hacia la industrialización del proceso de

fabricación de vinagre y es también precursor de las bacterias inmovilizadas.

A pesar del avance tecnológico, este método presenta desventajas, como:

  la pérdida de sustancias volátiles por evaporación;
 el material de soporte, como las virutas de madera, se contamina
fácilmente y es preciso reemplazarlo cada año; además
 es un proceso lento, por lo que se ha optado por el proceso de
fermentación sumergida (WEISER, 1962 y LLAGUNO y POLO, 1991).

5. Cultivo sumergido.

La fermentación en cultivo sumergido ha sido descrita por EBNER et al. (1993

y 1999) los cuales sugieren una fermentación semicontinua y continua.

En los cultivos sumergidos los nutrientes se encuentran forma líquida y los

microorganismos se desarrollan flotando libremente en el volumen de medio de
cultivo o formando agregados más o menos esféricos (pellets) en el caso de los
cultivos de hongos.