CATEDRA DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

- Laboratorio de Microbiología Molecular y Biotecnología -

CASO 2: MICROSCOPÍA Y COLORACIONES

Blgo. José González Cabeza

A con&nuación, se presenta una situación problemá&ca, la cual deberá ser abordada por el Grupo
de Prác&ca (03 mesas). Para ello; se realizarán sorteos al azar (docente y alumnos) para cada una
de las interrogantes planteadas.

Situación problemá2ca:
Durante la realización de la Prác&ca de “Coloraciones y Microscopía” de la asignatura de
microbiología, Ud. dispone de una serie de colorantes y de un microscopio compuesto.
Consecuencia de lo anterior; su docente desmonto uno de los obje&vo; ante lo cual Ud. se percata
que el cilindro metálico &ene grabados un conjunto de leyendas (ver figura adjunta).

Cues2onario:

1. ¿Cuál es el significado y función de cada una de las leyendas?

Fabricante: Casa comercial (Zeiss, Olympus, Leica, Nikon)
• Corrección del plano de campo: Indican acerca del &po de lentes u&lizados en el obje&vo
para corregir las aberraciones óp&cas
• Aumento: Capacidad de aumento del obje&vo, es decir, la relación entre el tamaño de la
imagen y el objeto real.
• Propiedades óp&cas especiales: En caso de obje&vos que en ciertas condiciones &enen
resultados óp&mos (para luz polarizada, contraste de fase, entre otros)
• Longitud del tubo: Indica la distancia en milímetros que debe haber entre el obje&vo y el
ocular para que la imagen se forme correctamente.
• Espesor del cubreobjetos: Indica el espesor o grosor en milímetros del cubreobjetos que
debe u&lizarse para minimizar las aberraciones óp&cas.
• Corrección de aberraciones: Corrección de imperfecciones que producen imágenes
distorsionadas o defectuosas.

2. ¿Qué Npo de imagen producen los objeNvos? Sustente lo señalado.

 -”Una imagen real” es lo que se forma en el cuerpo del microoscopio
-Los lentes u obje&vos forman “imagenes inver&das”
-Proyectar una imagen real ,inver&da ,aumentada y mezcla sin abenaciones

3. ¿Qué son objeNvos acromáNcos, apocromáNcos y monocromáNcos?

ACROMATICOS:Diseñadas para concentrar dos longitudes de onda
(Tipicamente rojo y azules )en un unico plano focal
APOCROMATICOS:Diseñadas para concentrar 3 longitudes de onda
(rojo, verde y azul) en el mismo plano focal
MONOCROMATICÓ:Es un &po de observación esferica,a&gma&cas,curva&va de
campo,distorsión y como

4. ¿Qué es distancia focal?

Es el espacio libre entre el lente frontal del obje&vo y el objeto,
5. Defina “apertura numérica”, “poder de resolución”, “limite de resolución”
APERTURA NUMÉRICA : Es la relacion con el poder y límite de resolución e influye sobre la
ni&dez de discriminación. PODER DE RESOLUCIÓN: Es la distancia mínima a la que se pueden
discriminar dos puntos. Este límite viene determinado por la longitud de onda de la fuente de
iluminación, en este caso la luz visible. LIMITE DE RESOLUCIÓN: se define como la distancia
mínima a la que se deben encontrar dos puntos para que puedan observarse como dis&ntos
6. ¿Cuántos Npos de preparados microscópicos conoce?
La preparación en fresco o húmeda y la preparación en seco.
7. ¿Cuál es el propósito de emplear aceite de cedro con el objeNvo de inmersión? Sustente su
respuesta.
Su función es concentrar los rayos luminosos que se habrían perdido por refracción en el
vidrio de la preparación. El aceite de la inmersión previene la pérdida de rayos ligeros En
general este aceite &ene un “n” semejante a la del vidrio que cubre la preparación
(cubreobjeto, n = 1,52).
8. Establezca diferencia entre:
Microscopio de Campo Claro Microscopio de Campo Oscuro Microscopio de Fluorescencia
La muestra se ve mediante Se usa un condensador especial que Se u&liza una lampara de vapor de
transiluminación de manera que la luz impide que la luz transmi&da ilumine mercurio,halógeno a presión elevada
procedente del conde condensador directamente lka muestra.Solo la luz que emité una longitud de onda mas
atraviesa la muestra.Después se oblicua y dispersa llega a la muestra y corta.Con ayuda de filtros se bloquea
amplía la imagen primero por el lente atraviesa los sistemas de los el calor generado,y las muestras
del obje&vo y después por la lente del lentes,haciendo que la muestra este teñidas con fluorocromo aparecen
ocular muy iluminada sobre un fondo negro brillantes sobre un fondo oscuro
Asimismo; en esa misma prác&ca, Ud. emplea una serie de colorantes para las observaciones
microscópicas, por lo que es necesario tener el conocimiento previo de lo siguiente:
9. ¿Qué es un colorante, y cuáles son sus componentes?.
Es una sustancia química que permite esta acción, de absorber y eliminar ciertas l; así, si se
absorbe la luz roja, el objeto aparecerá verde y si se absorbe el azul el objeto será
anaranjado. Components: MOLECULA INCOLORA + CROMÓFORO (RADICAL) + AUXOCROMO
10. ¿Proponga al menos dos sistemas de clasificación de los colorantes empleados en
microscopía, señalando ejemplos en cada una de ellos.
11. ¿Qué diferencia establece entre una coloración supruvital e intravital?
 La coloracòn supruvital se realiza sobre cèlulas libres extraìdas del organismo ,como las
cèlulas del raspado de mucosa bucal o tejido car&laginoso que conserva su vitalidad,
mientras que en la coloraciòn intravital los colorantes no toxìcos son introducidos en los
organismos vivos por vìas diges&vas subcutàneas al torrente sanguineo

12. ¿Qué diferencia establece entre froNs y extensión, durante una preparación microscópica?
La diferencia entre ambas técnicas,son que en la extención,se realiza una dispersión
homogénea sobre un portaobjetas con ayuda de otro deslizandolo a 45° con sus sustancias
homogeneas como la sangre, mientras que en el fro&s se realiza una dispersión con ayuda de
una asa de material heterogéneo grumoso, obteniendo una muestra igualmente
heterogénea.

13. Fundamento de la coloración Gram. ¿Para qué sirve?

La &nción de Gram u&lizado para iden&ficar bacterias. Es una de las formas más comune de
diagnos&car rápidamente una infección bacteriana. si la infección es gramposi&va o
gramnega&va.,.