Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

PRÁCTICA 2
Biología celular de Eucariontes
“Microscopía”

Integrantes:
● Hernández León Saúl
● Hernández Sánchez Karen Denise
● Martínez Mireles Luz Angela
● Olivares Puentes Jessica Yazmin
● Sánchez García Gerardo Raúl

Grupo: ​1QV2

Equipo: ​4
 INTRODUCCIÓN
La microscopía es el conjunto de técnicas y métodos destinados a hacer visible los
objetos de estudio que por su pequeño tamaño están fuera del rango de
resolución del ojo humano. En el caso de la microscopía óptica y electrónica, la
técnica en sí misma implica la difracción, reflexión y refracción de una onda
electromagnética que interactúa con el espécimen, y la recolección de la radiación
dispersada o de cualquier otra señal para crear una imagen.

· Microscopía óptica: en este tipo de microscopios el área observada está

​

ampliamente iluminada. Normalmente alcanzan hasta unos 1000 aumentos,

aunque con oculares poderosos esta cifra puede llegar a duplicarse. El límite
útil de este aumento es de 2000 y la razón de este límite se debe al poder de
resolución. Habitualmente los microscopios ópticos constan de una parte
mecánica y una óptica. Ésta última consta de tres sistemas de lentes:

1. El condensador que ilumina el objeto estudiado

2. El objetivo que aumenta la imagen y hace que ésta se pueda observar

desde el ocular

3. Y las lentes oculares que aumentan aún más la imagen y hacen que la
imagen sea visible por el ojo humano

· Microscopía confocal​: el microscopio utiliza como fuente de luz un haz láser

​

monocromático caracterizado por una determinada longitud de onda. La luz

emitida desde la muestra pasa por una abertura muy pequeña, llamada agujero
de alfiler (diafragma-pinhole). Esto permite que el enfoque se realice por capas
de manera que por la superposición de planos es capaz de reconstruir la
superficie de las muestras, obteniendo imágenes con una alta resolución
permitiendo estudiar, entre otros, rugosidades, perfiles, alteraciones
superficiales, etc.
· Microscopía electrónica de barrido​: El método se basa en hacer incidir un
​

haz muy estrecho de electrones, acelerados con energías desde unos cientos
de eV hasta varios keV, sobre una muestra opaca a los electrones. Este haz se
focaliza sobre la superficie de la muestra, realizando un barrido de esta.
 RESULTADOS
Se observó en el microscopio diversas muestras, las cuales fueron analizadas a
diferentes aumentos. Examinamos en el primer apartado preparaciones de letras a
simple vista:

En el microscopio se enfocó la palabra “Oleum” a seco débil, para ser exactos se

enfocó en el campo de visión la letra “u”, obteniendo una imagen invertida y de
mayor tamaño:

Posteriormente se examinó desde un microscopio compuesto una preparación de

un cabello claro y oscuro que se encontraban entrecruzados
Se analizó a seco débil y a seco fuerte una preparación temporal de la ​fina
película superficial que recubre el hueco de cada capa que conforma el bulbo de la
cebolla, ​obteniendo las siguientes imágenes

​SECO DÉBIL​ ​SECO FUERTE

Para observar las muestras a mayor detalle se usó el objetivo de mayor aumento
(objetivo de inmersión), agregando el aceite de inmersión, brindándonos así una
imagen de alta resolución que nos permite observar a detalle la morfología de las
preparaciones, en este caso se observaron dos preparaciones (I y II)

​I) ​PARAMECIO​ ​II)​ ​FROTIS DE SANGRE

Las imágenes obtenidas de los ejemplares de insectos y crustáceos observados
en el microscopio estereoscópico arrojaron una estructura tridimensional ampliada

​ ​INSECTO ​ ​CRUSTÁCEO
 DISCUSIÓN (Análisis de resultados)
I. Observación de preparaciones
Las primeras preparaciones que se observaron fueron las
preparaciones fijas de letras, enfocadas al microscopio con
el objetivo de S.D, en la imagen lateral izquierda se observa
como se ven las preparaciones a simple vista, y así es como
se vieron bajo el microscopio:

Se enfocó directamente en la letra u, y el microscopio nos

proporcionó una imagen real, invertida y de mayor tamaño (100
veces más grande para ser exactos). Como se observa, la
imagen está invertida debido a un prisma de cristal ubicado en el
interior del microscopio, cuya función es concentrar la luz en la
imagen aumentada y dirigirla hacia los oculares.
El propósito de realizar esta
preparación fija de dos tipos de cabello, uno claro y uno
oscuro, es visualizar el cruce entre ambos, así como la
profundidad de campo. El enfoque se realizó con el
objetivo de S.D (10x). La diferencia de colores se debe
a la cantidad de melanina presente en las células, es
importante la observación ya que hace evidente los
componentes a nivel microscópico de la estructura del
pelo.

También se realizó una preparación

temporal de la epidermis de una
cebolla, se colocó sobre un
portaobjetos con una gota de agua y
encima se puso el cubreobjetos,
enfocándose con el objetivo de S.D
(10x) y posteriormente con el objetivo
de S.F.(40x) Y bien, lo que
observamos fueron las células vegetales así como su forma hexaédrica (en
celdas) y alargadas. Realmente no se puede analizar lo que se ve, debido a que la
preparación no utilizó algún colorante, y esto hubiera permitido observar tal vez
algún organelo celular, sin embargo, se observa como ya se mencionó la
morfología celular, así como el espacio entre cada célula.
 II. Paramecio y frotis sanguíneo observado con el objetivo de inmersión
Para este enfoque se utilizó el objetivo de inmersión (100x), por lo que se usó el
aceite de inmersión ya que tiene un alto índice refractivo que brinda la
concentración de la luz cuando esta pasa a través del objetivo, aumentando su
resolución.
El paramecio es un protozoo de forma ovalada que puede
tener una longitud de 50-300 µm en función de la especie,
como se observa, su superficie cuenta con abundantes cilios
sensoriales que le permiten su alimentación
y locomoción.
En el frotis sanguíneo se pueden observar
eritrocitos hipocrómicos, sin embargo esto
se puede deber a dos factores: la tinción o que realmente si
presentan esa condición, si se estuviera analizando el frotis
sería necesario preparar otro frotis para corroborar este dato.
También se observa un neutrófilo y un linfocito B al parecer.
III. Observación de insectos con el estereoscopio
Las dos muestras que se observaron
fueron de un insecto y un crustáceo, la
observación con estereoscopio tiene la
finalidad de observar las características
tridimensionales, brindada por la
arquitectura de las lentes, lo que
observamos en cada lente no es lo
mismo, pero nuestros ojos mezclan
ambas imágenes y nos da como resultado esta imagen
tridimensional ampliada.
Con la observación al estereoscopio se pudo observar ampliamente las
características morfológicas de ambos ejemplares, así como los colores y partes
de su organismo.
 CUESTIONARIO
1. ¿Tienen la misma aplicación el microscopio compuesto y el
estereoscópico? De con lo anterior menciona 5 diferencias

Ambos microscopios sirven para observar estructuras que son difíciles de ver a
simple vista, sin embargo, tienen diferencias que los caracterizan.

Las principales diferencias entre ambos microscopios son:

1. Regularmente los compuestos tienen varios objetivos (Seco débil, seco

fuerte e inmersión), a diferencia del estereoscópico que tiene 1 objetivo o a
veces 2.
2. El aumento que pueden tener estos objetivos, es mucho mayor en el
microscopio compuesto.
3. El microscopio estereoscópico tiene un solo tornillo para poder enfocar la
muestra (Macroscópico), mientras que el compuesto tiene dos tornillos para
esta función. (Macroscópico y microscópico)
4. En el microscopio compuesto se tiene un diafragma, cuya función es
controlar la entrada de luz a la muestra. En el estereoscópico solo se tiene
una luz que no se puede controlar de esa manera.
5. Al momento de observar la muestra, el microscopio compuesto tiene 2
objetivos para poder observar la muestra, mientras que el estereoscópico
tiene un solo objetivo común, con el que se observa la muestra.
2. ¿Cuál es el poder de resolución de un microscopio?

Los microscopios ópticos tienen un límite máximo de resolución de 0,2 µm.

3. Enfocando con el microscopio compuesto ¿Qué nota usted cuando mueve

la preparación hacia adelante, hacia atrás, a la derecha y a la izquierda?

4. ¿Logró enfocar los dos cabellos a la vez, cuando los enfocó a seco débil y
cuando los enfocó a seco fuerte?

Si es posible enfocar ambos cabellos a la vez, logrando ver el entrecruzamiento de

ellos.

5. Si con el microscopio estereoscopio se observa ejemplares de

organismos como insectos, arañas, también objetos como impresiones en
papel, monedas, timbres postales, etc. ¿Con el microscopio compuesto
lograría las mismas observaciones? Explique

No es posible ver las mismas observaciones, ya que los objetos pueden ser muy
gruesos, evitando así que la luz pase a través de ellos y puedan ser observados.
6. ¿Qué es necesario para lograr una buena observación de las bacterias y
de las células sanguíneas a través del microscopio compuesto? Indica
alguna explicación.

Se necesita hacer una tinción que pueda hacer resaltar el citoplasma y el núcleo
de las células observadas.

7. ¿Por qué no se logran más de 2,000 aumentos en el microscopio

compuesto?

La limitación de los microscopios ópticos es de 1500x, ​debido a la difracción de

la luz, esto es consecuencia de la longitud de onda de la luz con la que está
enfocada la muestra.

8. Mencione tres tipos de microscopios ópticos y anote alguna de sus

características

● Microscopio de campo oscuro​. ​Es un ​microscopio que utiliza un haz enfocado

de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre la muestra. El
objeto iluminado dispersa la ​luz y se hace así visible contra el fondo oscuro que tiene
detrás, como las partículas de polvo iluminadas por un ​rayo de ​sol que se cuela en una
habitación cerrada. Por ello las porciones transparentes del espécimen quedan
oscuras, mientras que las superficies y partículas se ven brillantes, por la luz que
reciben y dispersan en todas las direcciones, incluida la del eje óptico que conecta el
espécimen con la pupila del observador.
● Microscopio de contraste de fase. ​El microscopio de contraste de fase
permite observar células sin colorear y resulta especialmente útil para
células vivas. Este aprovecha las pequeñas diferencias de los índices de
refracción en las distintas partes de una célula y en distintas partes de una
muestra de tejido.
● Microscopio de luz polarizada. ​E​s un ​microscopio óptico al que se le han
añadido dos polarizadores (uno entre el condensador y la muestra y el otro
entre la muestra y el observador). El material que se usa para los
polarizadores son ​prismas de Nicol o ​prismas de Glan-Thompson (ambos
de ​calcita​), que dejan pasar únicamente la luz que vibra en un único plano
 (​luz polarizada​). Esta luz produce en el campo del microscopio claridad u
oscuridad, según que los dos nícoles estén paralelos o cruzados.

9. Elabore un pequeño resumen en el que se destaque la utilidad del

microscopio electrónico, tomando en cuenta las limitaciones del
microscopio compuesto y el por qué no se logran más de 2,000 aumentos en
este.

El microscopio electrónico es un instrumento de

gran utilidad en la investigación científica gracias a
su gran poder de ​aumento​. Mediante este tipo de
microscopio es posible aumentar imágenes de
muestras hasta niveles muy superiores a los del
microscopio óptico​.
El principio de funcionamiento de un microscopio
electrónico se basa en utilizar electrones en lugar de luz visible. La ​longitud de
onda con la que se mueve un electrón es inversamente proporcional a su
velocidad. Esto significa que si los electrones son acelerados a altas velocidades
pueden obtenerse longitudes de onda muy cortas.
A un nivel muy básico consiste en una fuente de electrones que son acelerados a
gran velocidad. Estos electrones impactan con la muestra de modo equivalente a
como la luz podría iluminarla. Algunos de estos electrones son reflejados por la
muestra y otros la atraviesan. Mediante la detección de estos electrones es
posible reconstruir una imagen de la muestra.
Gracias a que no utiliza luz, la limitante de la longitud de onda de esta no es
problema, logrando así superar el aumento máximo del microscopio óptico,
logrando incluso aumentos de hasta 1 millónx.
Esto sirve para poder observar muestras con muchísimo mayor aumento, incluso
imágenes en tres dimensiones.
 CONCLUSIÓN
En esta práctica, comprendimos y entendimos el correcto uso del
microscopio, ya que es una pieza fundamental del laboratorio, para observar
la morfología y anatomía de cada uno de los especímenes a estudiar de
manera microscópica, concluyendo y diagnosticando alguna distrofia que
este podría tener, pero para esto se tendría que conocer el correcto uso del
microscopio, para sacar observaciones y diagnósticos precisos.

BIBLIOGRAFÍA

Nin, G. V. (2000). ​Introducción a la microscopía electrónica aplicada a las ciencias biológicas​.

UNAM.

Microscopía | CENIEH. (s. f.). CENIEH. Recuperado 16 de octubre de 2020, de

https://www.cenieh.es/infraestructura/laboratorios/microscopia