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MOTIVACIÓN
¿Sabías que para poder visualizar mejor al microscopio las células sanguíneas
pueden emplearse diferentes tipos de tinciones?
Fuente:
https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/b/bf/Paul_Ehrlich_3.jpg/658px-
Paul_Ehrlich_3.jpg
PROPÓSITOS
1 EL MICROSCÓPIO
Fuente: https://cdn.pixabay.com/photo/2014/04/03/11/08/microscope-
311859_960_720.png
1.1 TIPOS DE MICROSCOPIOS
Simple Lupa
Óptico normal
Óptico
Campo oscuro
MICROSCOPIO Compuesto
Contraste de fases
Transmisión
Electrónico Fluorescencia
Barrido
Lupa
Microscopio electrónico de
transmisión
Microscopio electrónico de
barrido (MEB)
Fuente:
https://upload.wikimedia.org/wikipedia/com
mons/thumb/9/95/JEOL_JSM-
6340F.jpg/447px-JEOL_JSM-6340F.jpg
Sistema de iluminación
Lentes de amplificación
Sistema de enfoque
Fuente:
https://upload.wikimedia.org/wikipedia/com
mons/6/63/EL_MICROSCOPIO.png
Fuente luminosa
Situada generalmente en la base del microscopio.
Condensador
Recoge la luz sobre la preparación. Puede usarse a diferentes distancias con
respecto a la fuente luminosa. En las muestras teñidas el condensador se
coloca alto. En las muestras frescas se sitúa bajo.
Diafragma
Puede abrirse o cerrarse en función de la intensidad de la luz y la lente.
Cuando se observan preparaciones con el objetivo de inmersión, el diafragma
se utiliza generalmente abierto.
Fuente:
https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/2/26/Kondenzor.jpg/
220px-Kondenzor.jpg
Oculares
En los microscopios binoculares hay 2.
Objetivos
Normalmente hay 4 objetivos. El de 100 aumentos se denomina objetivo de
inmersión. Están montados sobre una pieza llamada revólver. El aumento
final se calcula multiplicando el aumento individual del objetivo por el aumento
individual del ocular.
Fuente: https://cdn.pixabay.com/photo/2014/02/27/16/09/microscope-
275984_960_720.jpg
Tornillo macrométrico
Fuente:
https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/2/25/Peripheral_blood_smear_-
_stained_and_unstained.jpg/175px-Peripheral_blood_smear_-_stained_and_unstained.jpg
Pasos a seguir:
1. Tomar un portaobjetos y colocarlo en posición horizontal.
2. Depositar una gota de sangre sobre el portaobjetos de aproximadamente
3 mm de diámetro.
3. Colocar otro portaobjetos (extensor) formando un ángulo apropiado (30–
45º) con el primero en función del volumen de sangre que se ha
depositado en su superficie.
4. Deslizar el extensor hacia la gota.
5. Dejar que la gota de sangre entre en contacto con el borde del extensor
y deslizarlo con la gota sobre el portaobjetos con velocidad y ángulo
constantes.
6. Secar al aire.
7. Rotular la muestra.
Cómo realizar una extensión sanguínea.
(Fuente: https://practicasdehematologiaycitologia.wordpress.com/2014/11/12/practica-no9-
realizacion-de-una-extension-sanguinea/)
Cabeza
Es la zona inicial de la extensión. Es la región más gruesa y en ella se
encuentran en mayor proporción los linfocitos y los hematíes, estos últimos
formando aglomerados similares a una pila de monedas.
Cuerpo
Se corresponde con la zona media del frotis. El espesor que presenta es el más
apropiado, ya que los distintos tipos de leucocitos se encuentran en una
proporción adecuada. La zona situada en el límite con la cola es la ideal para
la observación.
Cola
Se corresponde con la zona final de la extensión y presenta un aspecto más
redondeado. Es la región más fina y en ella se encuentra una mayor proporción
de leucocitos grandes, los hematíes aparecen habitualmente deformados y
con una tonalidad uniforme donde se puede apreciar una zona central clara.
También se pueden visualizar las plaquetas ya que en esta porción terminal
suelen ser más abundantes, sobre todo si son grandes.
Fuente: http://www.marienfeld-
superior.com/tl_files/images/Produktfo
tos/1_Mikroskopie_und_Zubehoer/2_o
bjektraeger/0_allg_infos/Ot_ubk_mr_
ez.jpg
Para que la extensión que hemos realizado sea de buena calidad y nos permita
hacer una correcta observación al microscopio de las células sanguíneas debe
cumplir las siguientes características:
La cabeza debe estar situada en uno de los extremos del portaobjetos y
la cola en el opuesto pero sin llegar a él.
Una buena extensión debe ser fina y homogénea con barbas y una longitud
equivalente a tres cuartas partes del portaobjetos
Realizar una presión desigual durante la extensión o sobre los lados del
portaobjetos extensor.
Las tinciones hematológicas son una serie de métodos empleados para colorear
las estructuras que componen las células de la sangre y la médula ósea. La
mayoría se basan en la técnica desarrollada por Romanowsky, que utiliza
colorantes básicos y ácidos que se fijaran a las estructuras celulares en
función de su afinidad. Otras técnicas se basan en reacciones enzimáticas
Existen distintos tipos de tinciones en función de las células sobre las que se
realizan:
Fuente:
https://c1.staticflickr.com/8/7298/162
43819197_d352eeb173_b.jpg
Fundamento:
Los colorantes aniónicos se unirán a las estructuras básicas, mientras los
catiónicos se fijarán a las estructuras ácidas formando sales insolubles de
diferentes matices de coloración.
En la siguiente tabla se describen los colores con los que se tiñen las
principales estructuras:
Estructura Coloración
Núcleo Azul oscuro-violeta
Citoplasma Violeta pálido
Hematíes Rosa-salmón
Neutrófilos Rojo-violeta
Gránulos
Eosinófilos Rojo-naranja
citoplasmáticos
Basófilos Azul-negro
Reactivos
Fuente: http://www.stories-for-children.ca/resources/eyedropper.gif
Existen dos procesos de tinción, el clásico y la técnica rápida. El proceso
clásico consta de las siguientes etapas:
Protocolo:
1. Se realiza la extensión sanguínea y se espera a que esté seca.
2. Se colocan varias gotas de la primera solución (May–Grünwald)
cubriendo todo la extensión y se deja actuar 2 minutos.
3. Se lava con abundante agua destilada para eliminar la solución
anterior y se deja la extensión recubierta de agua durante 1 minuto.
4. Se añaden doce gotas de la segunda solución (Giemsa) sobre la
extensión y se deja actuar 10-15 minutos.
5. Se lava con agua para eliminar el colorante remanente y se deja
secar.
https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/0/0d/LMC-
1.JPG/800px-LMC-1.JPG
Fuente: http://3.bp.blogspot.com/-
ltNbipYX9rc/T-
Fa3srlXNI/AAAAAAAAAVM/vHOfyrxQBe
I/s320/leucocitos.jpg
Reactivo
Se emplea una solución de azul brillante de cresilo
Protocolo
1. Se colocan dos gotas de sangre en un tubo de ensayo y se añaden dos
gotas de la solución colorante. Se mezcla bien.
2. Se incuba a 37ºC la mezcla con el tubo tapado durante 15-30 min.
3. Se realiza la extensión.
4. Se seca al aire.
5. Se coloca una gota de resina sintética y un cubreobjetos.
Recuento
El recuento se realiza en 10 campos de 100x de aumento (aproximadamente
hay 100 hematíes / campo) y se realizará la siguiente fórmula:
ú
𝑃𝑜𝑟𝑐𝑒𝑛𝑡𝑎𝑗𝑒 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑡𝑖𝑐𝑢𝑙𝑜𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠
º ó
Reactivos
Protocolo
http://www.hermanos-alamo.com/sites/hermanos-
alamo.com/files/imagecache/product_full/cubeta%20coplin%206155.jpg
Se basa en la presencia de la
mieloperoxidasa en neutrófilos,
eosinófilos y monocitos.
Fuente:
https://upload.wikimedia.org/wikipedi
a/commons/3/33/ALL%2C_PAS.jpg
3.8 TINCIÓN DE LA ΑLFA NAFTIL ESTERASA
Fuente:https://cdn.pixabay.com/photo/2016/11/11/20/03/microscope-
1817641_960_720.jpg
Cantidad de
Proporción de los
Características de la plaquetas en
diferentes tipos
tinción relación con la
celulares
de hematíes
Presencia de Presencia de
Evaluación de la
inclusiones en el precursores en
uniformidad
interior de los sangre periférica
hematíes
Presencia de
Presencia de
parásitos en el
zonas grises o
interior de los
poco compactas
hematíes
5 MIELOGRAMA
Fuente:
https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/2/2f/Bone_marrow_
WBC.JPG/800px-Bone_marrow_WBC.JPG
Pasos a seguir:
1. Recorrido de la extensión con un objetivo de bajo aumento para una
primera impresión panorámica. Así se puede evaluar la relación entre el
contenido graso y el contenido celular hematopoyético (celularidad) lo
que permite encontrar alteraciones puntuales.
2. Posteriormente se pasa al estudio celular a mayor aumento.
La observación es subjetiva.
Progenie megacariocítica Se informa normal, disminuida
o aumentada
Monocitos Hasta un 3 %
Plasmocitos Hasta un 3 %
Celularidad de la
Proporción de los
extensión: Proporción de los
diferentes
abundante, diferentes estadios Número de
estadios
escasa, aplásica o madurativos de los megacariocitos
madurativos de
uniformemente hematíes
los leucocitos
distribuida
Presencia de
Presencia de Observación de
alteraciones
células formas
displásicas en la
fragmentadas inmaduras
maduración
Observación de
eosinofilia o
basofilia
Existencia de
mastocitos o
plasmocitos
Presencia de
parásitos
CONCLUSIONES
Las técnicas hematológicas son los protocolos que se siguen para procesar las
muestras de sangre y médula con el fin detectar posibles patologías. Las más
importantes son las técnicas de tinción.
RECAPITULACIÓN
BIBLIOGRAFÍA