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letras en Microbiología Aplicada 1999, 29, 1–6

Identificación por un ensayo multiplex basado en PCR de Salmonella

Cepas de Typhimurium y Salmonella Enteritidis a partir de
hisopos ambientales de galpones avícolas
C. Soumet1, G. Ermel1, V. rosa1 , n. rosa2 , P. Drouin2, G. Salvat1 y P. Colin1
1Unir´ de Investigación Higiene y Calidad de productos avícolas y Porcinos, and de
2Unite´ Buscar en fr
Epidemiología y Calidad´ en Avicultura, CNEVA Ploufragan, Zoopoˆle Beaucemaine­Les Cruz, Ploufragan,
Francia

2029/98: recibido y aceptado el 16 de marzo de 1999

C. SOUMET, G. ERMEL, V. ROSE, N. ROSE, P. DROUIN, G. SALVAT Y P. COLIN. 1999.

Se desarrolló un ensayo basado en PCR multiplex (m­PCR) para la detección de Salmonella y para la
identificación de los dos serotipos Enteritidis y Typhimurium. Tres conjuntos de cebadores
seleccionados de diferentes secuencias genómicas amplificaron un fragmento de 429 pb
específico para el género Salmonella dentro de una secuencia clonada aleatoriamente, un
objetivo de 559 pb específico para Salmonella Typhimurium dentro del gen fliC y un
fragmento de 312 pb específico para Salmonella Enteritidis dentro del gen sefA . El ensayo
basado en m­PCR se utilizó para detectar Salmonella a partir de 1078 hisopos ambientales de gallineros.
Antes de la PCR, estos hisopos se preenriquecieron en agua de peptona tamponada con fosfato
durante 18 a 20 h y luego se subcultivaron en un medio semisólido modificado de Rappaport
Vassiliadis (MSRV) durante 18 a 20 h. La m­PCR combinada con MSRV tuvo una mejor sensibilidad
(95%) que el método bacteriológico (92,5%). El ensayo MSRV­m­PCR y el método bacteriológico
tuvieron una tasa de concordancia del 95,6%.

INTRODUCCIÓN aplicado para la detección de Salmonella utilizando una serie de secuencias

diana como oriC, que codifica la replicación cromosómica de origen
La salmonella es el agente más importante implicado en los brotes de
(Widjojoatmodjo etal.1991), sefA, que codifica el antígeno fimbrial SEF14
enfermedades transmitidas por los alimentos en todo el mundo (Lacey 1993).
(Woodward y Kirwan 1996), el plásmido de virulencia específico para
Los serotipos más comunes aislados de humanos son Salmonella
Salmonella Enter itidis (Doran et al. 1996), o secuencias aleatorias (Aabo
Typhimurium y Salmonella Enteritidis. Estas enfermedades transmitidas
et al. 1993).
por los alimentos se deben generalmente al consumo de huevos o
ovoproductos. Para prevenir y controlar la Salmonella en las primeras
El principal obstáculo para el uso de PCR para la detección de
etapas de la producción avícola, se analizan Salmonella Typhi murium y
microorganismos en muestras ambientales, clínicas o de alimentos es la
Salmonella Enteritidis a partir de muestras ambientales tomadas de los
presencia de compuestos que inhiben la PCR (Rossen et al. 1992 ). Por
gallineros. Las parvadas positivas para uno de estos dos serotipos deben
lo tanto, los procedimientos de extracción de ADN suelen ser necesarios
ser destruidas (directiva de zoonosis, 92/117/Comunidad Europea).
para eliminarlos. Estos se aplican generalmente después de un paso de

Los métodos tradicionales de detección de Salmonella se basan en preenriquecimiento durante la noche y usan proteinasa K (Soumet et al.
1994), isotiocianato de guanidina (Giesendorf et al. 1992), matrices de
cultivos en medios selectivos y caracterización de colonias sospechosas
unión a ADN (Chevrier et al. 1995), fenol­cloroformo (Tsen et al. 1994 ). ),
mediante pruebas bioquímicas y serológicas.
centrifugación y filtración (Oyofo y Rollins 1993), perlas magnéticas
Estos métodos generalmente consumen mucho tiempo. Para superar este
recubiertas con anticuerpos contra Salmonella sp. (Coleman et al. 1995),
inconveniente, se han desarrollado métodos inmunológicos y genéticos.
o sistemas acuosos de dos fases (Lantz et al. 1996). La mayoría de ellos
Entre estos, el PCR ha sido exitosamente
suelen requerir muchas manipulaciones antes de la PCR y, por lo tanto,
son propensos a la contaminación cruzada entre muestras.
Correspondencia a: Dr. C. Soumet, CNEVA Fouge`res Unidad Técnica
de Innovación en Drogas Contaminantes y Desinfectantes Javene´,
35133 Fouge`res, Francia (e­mail: c.soumet@fougeres.cneva.fr). También se ha realizado una PCR específica utilizando Modified

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2 C. PRESENTACIONES ET AL.

Medio semisólido Rappaport Vassiliadis (MSRV) como medio selectivo Tabla 1 Evaluación de la especificidad de la m­PCR utilizando tres pares de cebadores en diferentes

y diferencial tras un paso de preenriquecimiento. cepas bacterianas

—–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––
Entre cinco medios de enriquecimiento, se encontró que era el medio
más sensible probado (Dusch y Altwegg 1995) para el aislamiento de Número de cepas que muestran

Salmonella no tifoidea a partir de muestras de heces. Este paso Resultados PCR positivos
por m­PCR
selectivo para el cultivo en MSRV es económico, requiere poca
Cepas bacterianas N 429 bpa 550 bpb 312 bpc
manipulación y diluye las sustancias inhibidoras de la PCR. —–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––

Aunque el método MSRV es simple de usar, necesita un manejo Salmonella enteritidis 12 12 0 Salm. 12
cuidadoso debido a su composición semisólida.
typhimurium 36 36 36 Salm. indiana 44 0 sal. 0
El objeto de este estudio fue desarrollar un ensayo basado en PCR hadar 66 0 Salm. infantes 33 0 Salm. 0

capaz de detectar Salmonella sp. simultáneamente e identificar Heidelberg 22 0 Salm. Senftenberg 33 0 Salm. 0

rápidamente Salmonella Enteritidis y Salmonella Typhimurium. derbi 11 0 Salm. agona Salm. virchow 22 0 0

Este ensayo tenía que ser sensible y específico e incluir un procedimiento 0

9
muy simple y rápido para extraer ADN de hisopos ambientales. Para
0
lograr este objetivo, se agregaron tres conjuntos de cebadores
11 0 0
seleccionados de diferentes secuencias de genes (Joys 1985; Aabo et
0
al. 1993; Turcotte y Woodward 1993) a una Multiplex­PCR (m­PCR). En
Salmón. bredeney 33 0 Salmón. Panamá 11 0 0
condiciones óptimas, la m­PCR se combinó con el medio MSRV y este
Salmón. Newport 22 0 Salmón. Montevideo 22 0
método se comparó con un método bacteriológico para el análisis de
0 0
hisopos ambientales de gallineros. 0

Escherichia coli 60 0 0
Proteo vulgar 20 0 0
MATERIALES Y MÉTODOS
Proteo mirabilis 20 0 0
Providencia stuarti 10 0 0
Cepas bacterianas y medio de cultivo 0
Citrobacter freundii 30 0
Avenida Hafnia 20 0 0
Para este estudio se utilizaron diferentes cepas de laboratorio de
Pseudomonas putida 10 0 0
Salmonella y otras bacterias estrechamente relacionadas con Salmonella
Serratia odorifera 10 0 0
(Tabla 1). Se cultivaron aeróbicamente durante la noche a 37°C en
Enterobacter cloacae 30 0 0
caldo Luria Bertani (Sambrook et al. 1989) con agitación suave (200 Enterobacter sakazaki 20 0 0
rev min­1 ). —–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––

a El fragmento de 429 pb se amplificó con los cebadores ST11 y

Hisopos ambientales de galpones de pollos de engorde
Se estudiaron treinta y cinco gallineros de pollos de engorde. Para cada
uno, se tomaron 22 hisopados (bases de paredes, sistemas de aire,
alimento para animales, cajas de revestimiento de pollitos, polvo, puerta
de entrada, suelo de entrada, tanto áreas limpias como sucias) antes
de que los pollitos de 1 día ingresaran al gallinero. , y nueve hisopados
(alimento animal, polvo de cama, puerta de entrada, entrada de pollitos
de 1 día, suelo de entrada, tanto áreas limpias como sucias) después
de 42d de crianza.
Aislamiento e identificación de Salmonella por método
bacteriológico
La detección de Salmonella se realizó en muestras ambientales
tomadas con torundas de gasa estériles (Le Goff Confort, Rospor den,
Francia) impregnadas con 150 ml de agua de peptona tamponada con
fosfato (AES Laboratoires) como caldo de preenriquecimiento.
Después de la incubación a 37 °C durante 18–20 h, se inoculó una
placa de agar MSRV (Merck, Nogent sur Marne, Francia) con tres gotas
del medio preenriquecido y se incubó a
ST15.
b
El fragmento de 559 pb se obtuvo con los cebadores Fli15 y
Tym.
c El fragmento de 312 pb por los cebadores Sef167 y Sef478.
41∙5°C durante 18–20h. En una placa de agar MSRV, las cepas de
Salmonella migraron alrededor del punto de inoculación. Del margen
de esta zona migratoria (mayor de 20 mm de diámetro se consideró
positivo) se sembró un asa en placa de agar Rambach (propilenglicol y
mezcla cromogénica con rojo neutro e indicador de galactosidasa). Si
no se observó migración después de 48 h de incubación, el resultado
de MSRV se calificó como negativo, al igual que el resultado de la PCR.
El caldo de preenriquecimiento (1 ml) se inoculó en 10 ml de caldo de
tetrationato de Muller Kauffmann (AES Laboratoires) a 37 °C durante 18
a 20 h. Luego, este medio selectivo se sembró en una placa de agar
XLT4 (Xylose Lysine Tergitol 4, AES Laboratoires), se incubó a 37 °C
durante 18–20 h. Tres presuntas colonias de Salmonella identificadas
de cada Rambach y XLT4

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SALMONELA CEPAS DE GALPONES 3

Las placas de agar se sometieron a ensayos bioquímicos en medio mmol l−1 Tris­HCl pH7,5, 50 mmol l−1 KCl, 1,5 mmol l−1 MgCl2, 0,1
Kligler Hajna y luego se serotipificaron mediante pruebas de aglutinación % de gelatina y 5 ml de ADN, utilizando un termociclador GeneAmp
en portaobjetos utilizando antisueros polivalentes O y H de Salmonella 9600 (Perkin Elmer Instruments, Norwalk, CT , EE.UU). Las reacciones
(Sanofi Diagnostics Pasteur, París, Francia). se llevaron a cabo durante 35 ciclos de 30 s para la desnaturalización
a 94 °C, 1 min 30 s para el recocido a 56 °C y 30 s para la extensión
del cebador a 72 °C, seguido de una extensión terminal a 72 °C durante
Preparación de muestras para PCR
10 min. Las muestras se mantuvieron a ¦4°C y se procesaron en 24h.
Para determinar la especificidad de la PCR, se calentaron a 100 °C
durante 10 min 500 ml de un cultivo puro de bacterias durante la noche;
Se usaron 5 ml como plantilla para los experimentos de PCR.
Análisis de gel de agarosa
A partir de un resultado positivo en una placa de agar MSRV, se
añadió un asa del medio a 1 ml de agua ultrapura estéril y se calentó a Los productos amplificados (10 ml) se separaron por electroforesis en
100 °C durante 20 min; Se usaron 5 ml como plantilla para los un gel de agarosa al 1,5 % (Eurobio, Les Ulis, Francia) en tampón TBE
experimentos de PCR. (89 mmol l­1 Tris pH 8,3, 89 mmol l­1 de borato y 2 mmol l−1 EDTA).
A continuación, este gel se tiñó con solución de bromuro de etidio (0,5
mg ml­1 ) y se fotografió bajo luz ultravioleta. Las imágenes se
Experimentos de PCR
analizaron con el software Molec ular Analyst®/PC (Bio­rad SA, Vitry
Para la PCR multiplex, se probaron tres pares de cebadores. Los sur Seine, Francia) del sistema de generación de imágenes Bio­rad Gel
cebadores ST11­ST15 se seleccionaron de un fragmento cromosómico Doc 1000.
clonado aleatoriamente y se ha demostrado que son específicos para
Salmonella sp. (Aabo et al. 1993). Los cebadores Sef167­Sef478 se
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
eligieron del antígeno fimbrial SEF14 codificado por el gen sefA
(Turcotte y Woodward 1993) y son específicos para Salmonella
Especificidad de la PCR para la detección de Salmonella
Enteritidis. La aparición de esta secuencia génica entre otros serotipos
Typhimurium y Salmonella Enteritidis
de Salmonella está restringida a los serotipos Enteritidis, Blegdam,
Dublin, Gallinarum, Pullorum, Rostock, Seremban y Typhi (Turcotte y Se evaluaron conjuntos de cebadores elegidos del gen fliC para detectar
Woodward 1993). Para Salmonella Typhimurium, los cebadores Fli15­ específicamente Salmonella Typhimurium. El cebador Tym se usó en
Tym se seleccionaron de la secuencia del gen fliC (Joys 1985) que combinación con el cebador Fli15 para el análisis de cultivos puros de
codifica la flagelina H1. Las secuencias del gen fliC obtenidas del (i) serotipos de Salmonella a menudo aislados del entorno de las naves
banco de datos Gene/EMBL se alinearon y compararon para varios avícolas y (ii) bacterias distintas de Salmonella (Tabla 1). Los resultados
serotipos de Salmonella con el software MacDnasis (Hitachi Software obtenidos con Fli15­Tym se muestran en la Fig. 1 (A). En las condiciones
Engineering, San Bruno, CA, EE. UU.). Los cebadores Fli15 y Tym se utilizadas, 36 de 36 cepas de Salmonella Typhimurium dieron un
eligieron dentro de regiones variables del gen fliC con el software fragmento amplificado de 559 pb con el conjunto de cebadores Fli15­
Oligo. Todas las secuencias de cebadores utilizadas en este estudio se Tym (carril 1). No se encontró ningún producto amplificado del tamaño
dan en la Tabla 2. esperado para otros serotipos de Salmonella (carriles 2 y 3) y bacterias
relacionadas (carril 4). La longitud del cebador Tym (n22) y las
Las amplificaciones se realizaron en un volumen total de 50 ml, que temperaturas de fusión cercanas para todos los cebadores usados
contenía 1U Taq Polimerasa (Boehringer Mannheim), 0,6 mmol l­1 de parecían apropiadas para la m­PCR (Meng et al. 1997).
cada cebador, 100 mmol l­1 de cada dNTP, 10

Tabla 2 Cebadores utilizados en este estudio para la detección de Salmonella por MSRV­Multiplex PCR
—–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––––––––––––

Primer secuencia Región de

Secuencia objetivo Juegos de imprimación Longitud 5? : 3? amplificación (bp) Referencias
—–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––––––––––––

secuencia aleatoria ST11 24 GCCAACCATTGCTAAATTGGCGCA

ST15 24 GGTAGAAATTCCCAGCGGGTACTGG 429
gen fliC 15 de julio 22 CGGTGTTGCCCAGGTTGGTAAT Este trabajo
22 ACTCTTGCTGGCGGTGCGACTT 559 Este trabajo
gen sefA incluyendo sef167 20 AGGTTCAGGCAGCGGTTACT Este trabajo
sef478 20 GGGACATTTAGCGTTTCTTG 312 Este trabajo
—–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––––––––––––

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4 C. PRESENTACIONES ET AL.

Fig. 1 Análisis de cultivos puros de Salmonella con los tres conjuntos de cebadores Sef167­Sef478 (A), Tym­Fli15 (B) y ST11­ST15 (C), y todos
los conjuntos de cebadores (D). Carril 1: Salmonella Typhimurium; Carril 2: Salmonella Enteritidis; Carril 3: Salmonella Infantis; Carril 4: resultado
positivo en medio MSRV pero no confirmado por el método bacteriológico; Carril 5: agua estéril utilizada como control de PCR negativo;
Carril 6: Marcadores de peso molecular (fX174­HaeIII, Eurobio)

La especificidad de la PCR para la detección de Salmonella
Enter itidis se estimó con los cebadores Sef167­Sef478 de cultivos
puros de Salmonella y bacterias relacionadas (Fig. 1B). Bajo las
condiciones de PCR utilizadas aquí, se encontró que el conjunto
de cebadores Sef167­Sef478 amplificó solo las cepas de
Salmonella Enteritidis que produjeron el fragmento esperado de
312 pb. Estos resultados confirman que el gen sefA del que se
derivó este conjunto de cebadores es un buen candidato para la
detección específica de Salmonella Enteritidis (Woodward y Kirwan 1996).amplificación de 105 Salmonella añadida a cada una de las 10
Especificidad de la PCR multiplex
Para evaluar la especificidad de la m­PCR, se utilizaron los
conjuntos de cebadores previamente demostrados como
específicos para Salmonella Enteritidis (Sef167­Sef478) y
Salmonella Typhimurium (Fli15­Tym), junto con los cebadores
ST11­ST15 específicos para el género Salmonella, en un tubo de
reacción (Tabla 1, Fig. 1D). En la m­PCR se obtuvieron cuatro
resultados distintos: para Sal monella Typhimurium, dos productos
amplificados de 429 y 559 pb; para Salmonella Enteritidis,
productos amplificados de 429 y 312 pb; se observó un producto
detección de Salmonella sp. (Tabla 3). De estos, 330 resultados
positivos y 701 negativos fueron obtenidos por ambos ensayos,
dando una tasa de concordancia del 95,6%. Diecinueve hisopados
resultaron positivos solo por el método bacteriológico. Entre los 19
resultados considerados falsos negativos por PCR, nueve se
explicaron por la no migración de Salmonella en una placa de agar
MSRV. Los resultados PCR negativos no pueden explicarse por la
inhibición de la PCR para las otras 10 muestras, ya que la
muestras anteriores dio, en todos los casos, un producto
amplificado del tamaño esperado (datos no mostrados). A partir
de estas consideraciones y de las condiciones experimentales
para el análisis de muestras fecales, no fue importante el desarrollo
de un control interno para la reacción. La presencia de un bajo número de Salm
Tabla 3 Resultados comparativos de la recuperación de Salmonella
a partir del análisis de 1078 hisopos ambientales de galpones
avícolas por el MSRV m­PCR y por el método bacteriológico
—–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––

amplificado de 429 pb para todos los serotipos de Salmonella; y Método bacteriológico ¦

ningún producto amplificado para cepas bacterianas relacionadas − Total
con Salmonella. La PCR multiplex dio un resultado positivo para —–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––

todas las cepas de Salmonella y produjo un fragmento específico Ensayo basado en PCR ¦ 330 28 358
de 429 pb y un producto amplificado distinto adicional que permitió − 19 701 720

la identificación de Salmonella Enteritidis y Salmonella Typhimurium.

Análisis de hisopos ambientales de galpones avícolas
mediante un método que combina MSRV y m­PCR
Un total de 1078 hisopos de 35 gallineros fueron analizados por
los métodos bacteriológico y MSRV­PCR para
Total 349 729 1078
—–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––
Sensibilidad relativa del método bacteriológico 92,5%.
Sensibilidad relativa del ensayo basado en PCR 95%.
Especificidad relativa del método bacteriológico 97,5%.
Especificidad relativa del ensayo basado en PCR 96,2%.

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SALMONELA CEPAS DE GALPONES 5

el tubo de reacción por debajo del límite de detección, o la mala encontradas en hisopos ambientales de gallineros.
recuperación de Salmonella de un asa llena de medio MSRV, podrían Se han desarrollado dos conjuntos de cebadores, uno específico para
explicar los resultados negativos. El bajo número de Salmonella Salmonella Typhimurium y otro específico para Salmonella Enteritidis.
podría ocurrir si un crecimiento excesivo de Citrobacter freundii y Estos dos conjuntos de cebadores se usaron ambos con un conjunto
Enterobacter cloacae migrara a una placa de agar MSRV (Dusch y de cebadores específicos para el género Salmonella en una PCR m.
Altwegg 1995), por lo tanto, enmascararía el crecimiento de Salmonella . Para el análisis de hisopos ambientales de gallineros, esta m­PCR fue
precedida por un paso de preenriquecimiento y un paso selectivo y
Con respecto a los 28 resultados falsos positivos, 21 de los 28 solo diferencial en un medio MSRV.
se detectaron por PCR porque la Salmonella aislada de estos hisopos Este paso de enriquecimiento permitió inhibir o disminuir el crecimiento
en placas de agar Rambach y XLT4 no se identificó como colonias de la flora competitiva y requería menos mano de obra que los
típicas de Salmonella . Estas 21 cepas eran Salmonella Senftenberg tratamientos clásicos de extracción de ADN a partir de caldos de
con actividad b­galactosidasa y sin producción de sulfito de hidrógeno. preenriquecimiento. El método que utilizaba el enriquecimiento en un
Las siete muestras restantes solo fueron identificadas por m­PCR. medio MSRV antes de la PCR era más fiable que los probados
Para verificar que estas muestras fueran realmente positivas para anteriormente (Soumet et al. 1999) y se basaba en una separación
Salmonella, se analizaron mediante PCR con un nuevo conjunto de selectiva mediante perlas inmunomagnéticas o la eliminación de los
cebadores (datos no mostrados) inhibidores de la PCR mediante matrices de unión al ADN. A partir del
(Baumler et al. 1997) que demostraron ser altamente específicos para análisis de 1078 muestras, el ensayo MSRV m­PCR mostró una buena
Salmonella sp. Las siete muestras dieron positivo en esta PCR. Por lo sensibilidad (95 %) y especificidad (96,2 %) en comparación con el
tanto, estos resultados deben considerarse como verdaderos positivos. método bacteriológico. Además, la detección de Salmonella Typhi
La sensibilidad relativa de nuestro ensayo basado en PCR fue mejor murium y Salmonella Enteritidis por este ensayo se llevó a cabo dentro
(95%) que la del método bacteriológico utilizado (92,5%). de los 2 días en lugar de 5­6 días por los métodos bacteriológicos y
serológicos.
Del análisis de 1078 muestras, se aislaron cepas de Salmonella Se llevarán a cabo más experimentos para disminuir el tiempo de
Enteritidis de 42 muestras por el método bacteriológico (Cuadro 4). detección mediante un breve paso de enriquecimiento en un caldo
Dos de los cuatro resultados negativos de la m­PCR se explican por suplementado con ferrioxamina­E (Reissbrodt et al. 1996), o mediante
el hecho de que las muestras se puntuaron como negativas en las un paso de concentración de la muestra preenriquecida antes de la PCR.
placas de agar MSRV, mientras que las cepas de Salmonella Enteritidis
solo se aislaron del caldo de tetrationato de Muller Kauffmann.
AGRADECIMIENTOS
De las 39 muestras en las que se aisló Salmonella Typhimurium Los autores agradecen al Consejo Regional de Bretaña por la
por el método bacteriológico, 31 resultaron positivas por m­PCR para asistencia financiera.
este serotipo. Estos resultados pueden explicarse por el crecimiento
excesivo de otros serotipos de Salmonella de estas muestras que
enmascararon el crecimiento de Salmonella Typhi murium. REFERENCIAS

Aabo, S., Rasmussen, OF, Rossen, L., Sorensen, PD y Olsen, JE (1993)

Estos resultados destacan la utilidad de la PCR Multiplex para la Identificación de Salmonella por la reacción en cadena de la polimerasa.
detección rápida de los dos serotipos de Salmonella Sondas moleculares y celulares 7, 171–178.

Tabla 4 Comparación del ensayo basado en PCR Multiplex y el método bacteriológico para la detección de diferentes Salmonella
serotipos
—–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––––––––––––

Número de muestras con fragmento amplificado específico para

—–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––

Número de Salmonela Salmonela Salmonela

Resultado cultivo bacteriológico muestras positivas sp. de integridad Typhimurium
—–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––––––––––––

Salmonella enteritidis 42 40 38 0
Salmonella typhimurium 39 36 0 31
Salmonella hadar 102 95 0 0
Salmonella heidelberg 100 100 0 0
Otro (n 16) 141 135 0 0
—–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– ––––––––––––––

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6 C. PRESENTACIONES ET AL.
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35, 1224–1230.
Chevrier, D., Popoff, MY, Dion, MP, Hermant, D. y Guesdon, JL (1995) Detección
rápida de Salmonella subespecie I por PCR combinada con hibridación no
radiactiva usando oligonucleótido inmovilizado covalentemente en una
microplaca. FEMS Inmunología y Microbiología Médica 10, 245–251.
Coleman, DJ, Chick, KE y Nye, KJ (1995) Evaluación de la separación
inmunomagnética para la detección de salmonelas en canales de pollo crudo.
Letras en Microbiología Aplicada 21, 152– 154.
Doran, JL, Collinson, SK, Clouthier, SC et al. (1996) Potencial de diagnóstico de las
sondas de ADN sefA para Salmonella Enteritidis y ciertas otras serovariedades
de Salmonella del serogrupo D1 O. Sondas moleculares y celulares 10, 233–246.
Dusch, H. y Altwegg, M. (1995) Evaluación de cinco nuevos medios de cultivo para
el aislamiento de especies de Salmonella . Revista de Microbiología Clínica 33,
802–804.
Giesendorf, BAJ, Quint, WGV, Henkens, MHC, Stegeman, H., Huf, FA y Niesters,
HGM (1992) Detección rápida y sensible de Campylobacter spp. en productos de
pollo usando la reacción en cadena de la polimerasa. Microbiología aplicada y
ambiental 58, 3804–3808.
Joys, TM (1985) La estructura covalente de la proteína de filamento flagelar de fase
1 de Salmonella Typhimurium y su comparación con otras flagelinas. Revista de
Química Biológica 260, 15758– 15761.
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Parasitología 107, S75–S93.
Lantz PG, Tjerneld F, Hahnhagerdal B y Radstrom P.
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Revista de cromatografía y aplicaciones biomédicas 680, 165– 170.
Meng, J., Zhao, S., Doyle, MP, Mitchell, SE y Kresovich, S. (1997) A m­PCR para
identificar Escherichia coli O157: H7 productora de toxina similar a shiga. Cartas
en Microbiología Aplicada 24, 172– 176.
© 1999 La Sociedad de Microbiología Aplicada, letras en Microbiología Aplicada 29, 1–6
Oyofo, BA y Rollins, DM (1993) Eficacia de los tipos de filtros para detectar
Campylobacter jejuni y Campylobacter coli en muestras ambientales mediante
la reacción en cadena de la polimerasa. Microbiología aplicada y ambiental 59,
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Reissbrodt, R., Vielitz, E., Kormann, E., Rabsch, W. y Kühn, H.
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Revista Internacional de Microbiología Alimentaria 29, 81–91.
Rossen, L., Norskov, P., Holmstrom, K. y Rasmussen, OF
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de Microbiología Alimentaria 17, 37–45.
Sambrook, J., Fritsch, EF y Maniatis, T. (1989) Molecular Cloning: a Laboratory
Manual, 2ª ed. Cold Spring Harbor, Nueva York: Prensa de laboratorio de Cold
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Soumet, C., Ermel, G., Fach, P. y Colin, P. (1994) Evaluación de diferentes
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productos de pollo mediante la reacción en cadena de la polimerasa.
Cartas en microbiología aplicada 19, 294–298.
Soumet, C., Ermel, G., Rose, V. et al. (1999) Evaluación de un ensayo de PCR
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