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Artículo breve

El succinato producido por la microbiota mejora la glucosa

Homeostasis mediante gluconeogénesis intestinal
Gráficamente abstracto Autores
Filipe De Vadder,
Petia Kovatcheva­Datchary,
Carine Zitoun, Adeline Duchampt,
Fredrik Ba¨ckhed, Gilles Mithieux

Correspondencia
fredrik.backhed@wlab.gu.se (FB),
gilles.mithieux@inserm.fr (GM)

En breve
El metabolismo microbiano de las fibras dietéticas
mejora la salud metabólica, pero los vínculos con el
metabolismo del huésped no se comprenden
completamente. La gluconeogénesis intestinal
ejerce beneficios metabólicos a través de la
señalización cerebral. De Vadder et al. informan
que el succinato producido por la
fermentación microbiana de fibras dietéticas
induce beneficios metabólicos al funcionar como un
sustrato gluconeogénico intestinal.

Aspectos
destacados d La microbiota produce altas cantidades de succinato
en respuesta a las fibras dietéticas.

d El succinato activa la gluconeogénesis intestinal sirviendo como

un precursor de la glucosa

d La suplementación con succinato contribuye a mejorar la glucosa plasmática y

el peso corporal.

d El succinato es un producto microbiano con propiedades previamente insospechadas.

beneficios metabólicos

De Vadder et al., 2016, Cell Metabolism 24, 151–157

12 de julio de 2016 ª 2016 Elsevier
Inc. http://dx.doi.org/10.1016/j.cmet.2016.06.013
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Metabolismo celular
Artículo breve
El succinato producido por la microbiota mejora
Homeostasis de la glucosa mediante gluconeogénesis intestinal
Filipe De Vadder,1,2,3,4 Petia Kovatcheva­Datchary,4 Carine Zitoun,1,2,3 Adeline Duchampt,1,2,3 Fredrik Ba¨ ckhed,4,5,6, *
y Gilles Mithieux1,2,3,6, * 1Institut
National de la Sante´ et de la Recherche Médicale, U1213, Lyon 69372, Francia 2Université´ de Lyon,
Lyon 69008, Francia 3Université´ Lyon 1,
Villeurbanne 69622, Francia 4Wallenberg Laboratorio y
Departamento de Medicina Molecular y Clínica, Universidad de Gotemburgo, 41345 Gotemburgo, Suecia
5Centro de Investigación Metabólica Básica de la Fundación Novo Nordisk, Sección de Receptología Metabólica y Enteroendocrinología,
Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Copenhague, Copenhague DK­2200, Dinamarca
6Coautor principal
*Correspondencia: fredrik.backhed@wlab.gu.se (FB), gilles.mithieux@inserm.fr (GM)
http://dx.doi.org/10.1016/j.cmet.2016.06.013
RESUMEN
Efectos beneficiosos de la fibra dietética sobre la glucosa y
La homeostasis energética se ha descrito desde hace mucho tiempo.
centrándose principalmente en la producción de cadena corta
ácidos grasos por las bacterias comensales intestinales. Sin embargo,
La fermentación bacteriana de la fibra dietética también produce
grandes cantidades de succinato y, hasta la fecha, ningún estudio
se ha centrado en el papel del succinato en el metabolismo del huésped.
Aquí, alimentamos a ratones con una dieta rica en fibra y encontramos
que el succinato era el carboxílico más abundante
ácido en el ciego. Se identificó el succinato dietético
como sustrato para la gluconeogénesis intestinal (IGN),
un proceso que mejora la homeostasis de la glucosa.
En consecuencia, el succinato dietético mejoró la glucosa.
y tolerancia a la insulina en ratones de tipo salvaje, pero aquellos
Los efectos estuvieron ausentes en ratones deficientes en IGN. Ratones
convencionales colonizados con el productor de succinato
Prevotella copri exhibió beneficios metabólicos, que
podría estar relacionado con la IGN activada por succinato. De este modo,
El succinato producido por la microbiota es un metabolito bacteriano
previamente insospechado que mejora la glucemia.
control mediante activación del IGN.
INTRODUCCIÓN
La diabetes tipo 2 es consecuencia de un desequilibrio en la glucosa
homeostasis que resulta en hiperglucemia en ayunas con efectos deletéreos
sobre la salud. Está bien establecido que mejorar la
La calidad de la dieta es un factor principal para abordar esta enfermedad. El
tratamiento de las enfermedades metabólicas puede facilitarse mediante un
mayor consumo de fibra dietética (Anderson et al., 2009). Varios estudios
han señalado los beneficios de las dietas ricas en fibra tanto en grasas magras
(Robertson et al., 2003) y sujetos diabéticos obesos (Mendeloff,
1977). Si bien la mayoría de estos estudios atribuyen los beneficios de la fibra
dietética a la producción de ácidos grasos de cadena corta (AGCC) por
fermentación bacteriana en el intestino (Flint et al., 2012), ningún estudio ha
analizó el papel de otros ácidos orgánicos (como el succinato o
Metabolismo celular 24, 151–157, 12 de julio de 2016 ª 2016 Elsevier Inc. 151
lactato) producido por la microbiota intestinal durante esta fermentación
proceso.
Se sabe poco sobre la función del succinato en el organismo.
Descrito clásicamente como un intermediario clave en la síntesis de propionato
microbiano (Miller y Wolin, 1979; Reichardt et al., 2014),
El succinato no debe acumularse en el intestino en cantidades sustanciales.
medida (Macfarlane y Macfarlane, 2003). Curiosamente, su concentración en
el ciego aumenta al alimentar con fibras dietéticas.
(Everard et al., 2014; Jakobsdottir et al., 2013), y este aumento
Es aún más significativo cuando la fibra dietética se suministra junto con
con una dieta alta en grasas (Jakobsdottir et al., 2013; Zhong et al., 2015).
En un estudio reciente (De Vadder et al., 2014), especificamos que el
Los AGCC butirato y propionato activan un circuito neuronal intestino­cerebro
que implica la inducción de la gluconeogénesis intestinal (IGN), un proceso
que inicia múltiples beneficios metabólicos (Mithieux, 2014; Mi­thieux y Gautier­
Stein, 2014). En particular, el propionato actúa como
un precursor de la glucosa en el intestino, que conduce a la activación de un
sensor portal de glucosa (Delaere et al., 2012), lo que resulta en una mejora
tolerancia a la glucosa y sensibilidad a la insulina (De Vadder et al., 2014).
El propionato se metaboliza primero a propionil­CoA y luego
carboxilado a metilmalonil­CoA, que finalmente se transforma
a succinil­CoA y se incorpora al ciclo de Krebs en el
vía de la gluconeogénesis. La glutamina, otro sustrato importante para la
gluconeogénesis, se metaboliza a través del glutamato y
alfa­cetoglutarato antes de su incorporación al ciclo de Krebs
(Croset et al., 2001; Mithieux et al., 2004). Como metabolito intermedio integral
del ciclo de Krebs (justo aguas abajo de la succinil­CoA), planteamos la
hipótesis de que el succinato podría convertirse eficientemente en glucosa en
la mucosa intestinal y postulamos que
La producción de succinato por bacterias comensales podría mejorar.
metabolismo de la glucosa a través del aumento de IGN. Curiosamente, en un
Un estudio reciente demostró que el comensal intestinal Prevotella copri,
un conocido productor de succinato, mejora la homeostasis de la glucosa mediante un
Mecanismo de comunicación aún por definir con el anfitrión.
(Kovatcheva­Datchary et al., 2015).
Aquí evaluamos la posibilidad de que el succinato sirva como
un precursor de IGN. Utilizando estudios de intervención dietética, evaluamos
el impacto de una dieta enriquecida en fibra o en succinato sobre
la homeostasis de la glucosa del huésped. Utilizando ratones con una
desactivación intestinal específica de G6pc, la subunidad catalítica de la glucosa­6­
fosfatasa ( ratones I­G6pc/ ) (Penhoat et al., 2011), probamos
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A succinato B SCFA totales C

****
50 250
**** HF­HS 1.0
Otro
40 200 HF­HS + FOS
0,8 * * proteobacterias
Firmicutes
30 150
0,6
deferribacterias

eeiµ
d
g
c
s
eeiµ
dsc
g

/oloogcm
/oloogcm

aicnadnubA
20 100 0,4 * * Bacteroidetes
actinobacterias
10 50 0,2

0 0 0.0
HF­HS HF­HS + FOS HF­HS HF­HS + FOS
peso I­G6pc ­/­ peso I­G6pc ­/­
peso I­G6pc ­/­

D mi F
60
2.0 * * 0,6 R2 = 0,6432
P < 10­4
Bacteroidetes
1.5
0,4 Alistipes 40
HF­HS ** Parabacteroides
1.0
aicnadnubA

HF­HS + FOS
Porfiromonadáceas
* *
ariR
cle
set/esdenitoóuricceiatm B
F

0,2 Odoribacter 20

cscueμS
otan/l)iocom ds(
g
p
0,5
Bacteroides
bacteroides
0.0 0.0
peso I­G6pc ­/­ HF­HS HF­HS + FOS HF­HS HF­HS + FOS 0 0.0 0,2 0,4 0,6 0,8
peso I­G6pc ­/­ Secuencia Bacteroides

Figura 1. La alimentación con FOS aumenta la abundancia de succinato en el ciego independientemente del genotipo (A y B)
Contenido de succinato (A) y SCFA total (B) en el ciego de ratones alimentados con un alto contenido regular de grasa y sacarosa (HF­HS) o dieta suplementada con FOS (HF­HS + FOS).
(C) Gráfico de abundancia de los filos más importantes de cada grupo.
(D y E) Proporción relativa de Firmicutes/Bacteroidetes (D) y abundancia de género en el filo Bacteroidetes (E) en el ciego.
(F) La abundancia de Bacteroides en el ciego se correlaciona positivamente con la cantidad de succinato.
*p < 0,05 (cuando no está indicado, HF­HS versus HF­HS + FOS); **p < 0,01; ****p < 104 , valor de p ajustado, ANOVA de dos factores seguido de la prueba de Tukey corregida para
comparaciones múltiples; x indica un efecto significativo del genotipo (p = 0,0117, ANOVA de dos vías). Los datos son media ± SEM; Los diagramas de caja representan el mínimo, el
máximo, el rango intercuartil y la mediana. n = 5–6 ratones por grupo.

si la IGN tuvo un papel causal en el impacto metabólico de la alimentación con fibra o independientemente del genotipo (De Vadder et al., 2014). Aquí analizamos la composición
succinato. de la microbiota en el ciego, donde se produce la fermentación en masa. De acuerdo con
nuestros hallazgos anteriores, la alimentación con FOS modificó fuertemente la microbiota
RESULTADOS cecal independientemente del genotipo (Figuras 1D y 1E). Como se describió
anteriormente (Murphy et al., 2010), Firmicutes y Bacteroidetes representaron más del
Los fructooligosacáridos dietéticos aumentan la concentración de succinato 80% de las lecturas en la microbiota cecal (Figura 1C). La alimentación con FOS tuvo un
cecal con cambios concomitantes en la composición de la microbiota intestinal, impacto importante en la proporción entre estos dos filos principales en la microbiota cecal,
independientemente del genotipo. La dieta altera fuertemente la composición de la asociado con una disminución significativa en la proporción Firmicutes/Bacteroidetes
microbiota tanto en ratones WT como en I­G6pc/ (Figura 1D). En línea con el aumento de la
intestinal (David et al., 2014; Turnbaugh et al., 2008; Wu et al., 2011). ), posiblemente concentración de succinato después de la alimentación con FOS está el enriquecimiento
alterando así la producción de metabolitos microbianos. En consecuencia, alimentamos a relativo en Bacteroidetes (Figura 1E), un filo que comprende especies que se sabe que
ratones de tipo salvaje (WT) con una dieta rica en grasas y sacarosa (HF­HS) suplementada son los principales productores de propionato y/o succinato en el intestino (Miller y Wolin,
con fructooligosacáridos (FOS), y observamos un marcado aumento en la concentración 1979; Reichardt et al., 2014). Además, entre todos los Bacteroidetes encontramos que
de succinato en el ciego (Figura 1A). . Nuestros resultados anteriores han demostrado que Bacteroides exhibió el mayor aumento de abundancia relativa en respuesta a la
los beneficios metabólicos inducidos por la alimentación con FOS están ausentes en alimentación con FOS (Figura 1E). Además, la concentración de succinato cecal se
ratones que carecen de G6pc, una enzima clave en la gluconeogénesis, específicamente correlacionó significativamente con la abundancia de Bacteroides (Figura 1F), cuyas
en la mucosa intestinal (ratones I­G6pc/ ) (De Vadder et al., 2014) . Cuando estos ratones especies pueden producir tanto succinato como propionato en niveles que dependen de
fueron alimentados con la misma dieta que los ratones WT, observamos el mismo la disponibilidad de nutrientes en el intestino (Fischbach y Sonnenburg, 2011; Miller y
aumento en succinato cecal independientemente del genotipo (ANOVA bidireccional, p = Wolin, 1979). . Es de destacar que no encontramos ninguna secuencia correspondiente a
0,37). Además, entre todos los ácidos carboxílicos que medimos en el ciego, el succinato las especies de Prevotella , que son importantes productores de succinato del filo
mostró el mayor aumento relativo en respuesta a la alimentación con FOS (Figuras 1B y Bacteroidetes que previamente se han relacionado con un mejor control glucémico (Tilg y
S1A­S1D, disponibles en línea). No se produjeron tales cambios en la concentración de Kaser, 2011; Kovatcheva­Datchary et al., 2015). Esto puede deberse al hecho de que el
succinato en el plasma de la vena porta o la vena cava después de la alimentación con crecimiento de Prevotella se promueve con una dieta enriquecida en fibras dietéticas y
FOS (Figuras S1E y S1F), lo que sugiere que la mayor parte del succinato producido en el agotada en presencia de grasa (De Filippo et al., 2010; Wu et al., 2011), mientras que
ciego se metaboliza en el intestino.

En nuestro estudio anterior, observamos que la microbiota colónica se modificó después

de la alimentación con FOS tanto en ratones WT como en I­G6pc/.

152 Metabolismo celular 24, 151–157, 12 de julio de 2016

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ABC

DE F

GRAMO h I j

Figura 2. No hay mejoras mediadas por succinato en la tolerancia a la glucosa y la sensibilidad a la insulina en ratones I­G6pc–/ –
(A – C) La prueba de tolerancia a la glucosa se realizó en ratones WT (A) o I­G6pc/ (B) en ayunas de 16 horas después de 21 días con una dieta rica en grasas y sacarosa enriquecida con succinato. Total
Se calculó el área de glucosa bajo la curva (AUC) (C).
(D – F) La prueba de tolerancia a la insulina se realizó en ratones WT (D) o I­G6pc/ (E) en ayunas de 6 horas después de 25 días con una dieta rica en grasas y sacarosa enriquecida con succinato. Total
Se calculó el área de glucosa bajo la curva (AUC) (F).
(G – I) Evolución del aumento de peso corporal después de 1 (G), 2 (H) y 3 (I) semanas de dieta.
(J) Ingesta media de alimentos durante 2 semanas en ratones alimentados con una dieta alta en grasas/sacarosa (HF­HS) o suplementada con succinato (HF­HS + succinato).
*p < 0,05 (cuando no está indicado, versus HF­HS); **p < 0,01; ***p < 0,001, valor de p ajustado, ANOVA de dos factores seguido de la prueba de Tukey corregida para múltiples
comparaciones. Los datos son media ± SEM de n = 6 ratones por grupo.

La abundancia de Bacteroides en humanos se ha asociado con
dieta enriquecida en proteínas y grasas animales (Wu et al., 2011).
La alimentación con succinato mejora la homeostasis de la glucosa en un
Manera dependiente de IGN
Determinar si la alimentación con succinato promovió efectos beneficiosos similares a
los de los FOS, y si estos efectos fueron
Como consecuencia del IGN inducido, alimentamos WT e I­G6pc/
ratones con una dieta HF­HS suplementada con succinato. La suplementación con
succinato mejoró significativamente la glucosa y
Se comparó la tolerancia a la insulina en ratones WT, pero no en I­G6pc/.
con ratones alimentados con una dieta de control sin suplementos de succinato
(Figuras 2A a 2F). Por lo tanto, la mejora mediada por succinato en
El control de la glucosa requiere IGN. Utilizando ANOVA de dos vías, evaluamos los
efectos relativos de la dieta y el genotipo en la población observada.
fenotipos. Respecto a la tolerancia a la glucosa, observamos interacción significativa
entre dieta y genotipo (p = 0,046, 8,9%
de la varianza total), siendo la dieta el principal impulsor de los beneficios
efectos (p < 104 , 46,9% de la varianza total). La dieta también tuvo un importante
efecto (p = 0,031, 20,3% de la varianza total) sobre la mejora de la insulina
tolerancia.
Los niveles de propionato u otros SCFA no se alteraron en el
ciego, lo que sugiere que el succinato tuvo efectos directos sobre el IGN (Fig.
ures S2A y S2B). Los niveles de succinato cecal no aumentaron (Figura S2C), lo que
sugiere que la mayor parte del succinato dietético se absorbió.
antes del ciego. En conjunto, estos datos sugieren que IGN
Desempeña un papel causal en la mejora de la homeostasis de la glucosa.
asociado con la alimentación con succinato.
Curiosamente, estas modificaciones en el metabolismo de la glucosa fueron
asociado con una resistencia al aumento de peso solo en animales alimentados con succinato
Ratones WT (Figuras 2G­2I). Sin embargo, esta disminución del peso corporal
no se relacionó con una disminución en la ingesta de alimentos (Figura 2J), lo que
sugiere que la alimentación con succinato aumenta el gasto de energía, como se
observó anteriormente con la alimentación con FOS y propionato (De Vadder
et al., 2014).
El intestino convierte el succinato en glucosa y
Disminuye la producción de glucosa hepática
A continuación cuantificamos la producción intestinal de glucosa (IGP) en ratas alimentadas
una dieta chow enriquecida con succinato (composición disponible en la Tabla
S1) durante 3 semanas. Utilizamos un enfoque que combina glucosa
infusión de trazador en estado estacionario y determinación de la diferencia de glucosa
arterio­portal, lo que nos permite cuantificar la IGP y la producción endógena total de
glucosa (EGP) de forma concomitante, como anteriormente
descrito (Croset et al., 2001; De Vadder et al., 2014). Tras la infusión de glucosa [3­3
H], la actividad específica de la glucosa [3­3 H] fue

Metabolismo celular 24, 151–157, 12 de julio de 2016 153

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A
B
C D
mi F
disminuyó significativamente en un 6% en la vena porta en comparación
con la arteria carótida (Figura 3A), lo que destaca que el intestino había
liberado glucosa no marcada (recién sintetizada). De acuerdo con la
dilución del trazador, el IGP calculado representó aproximadamente entre
el 16 % y el 17 % del EGP total (Figura 3A). Por lo tanto, investigamos si
los carbonos del succinato podían detectarse en la glucosa sintetizada de
novo liberada por el intestino. Dejamos a las ratas en ayunas durante 24
horas y luego infundimos una solución de succinato de [U­14C] en la vena
yugular, como se describió anteriormente (De Vadder et al., 2014). Como
se muestra en la Figura 3B, después de la infusión hubo un aumento del
4,9 % en la actividad específica de la [14C]­glucosa en el plasma de la
vena porta. Esto sugiere que el intestino es capaz de convertir eficazmente
el succinato en glucosa. Dado que anteriormente informamos que la IGP
apenas se puede detectar en condiciones normales de alimentación, aquí
se puede estimar que la mayor parte de la glucosa intestinal producida provienealimentación con succinato.
Además, cuantificamos la actividad de G6Pasa en el intestino de ratones
C57Bl/6 alimentados con una dieta HF­HS con o sin succinato. A diferencia
de otros metabolitos producidos por la microbiota, como el propionato y el
butirato (De Vadder et al., 2014), el succinato no indujo la actividad G6Pasa
en el intestino delgado de estos ratones (Figura 3C).
De manera similar, no hubo aumento en la proteína fosfoenolpiruvato
carboxiquinasa (la otra enzima reguladora clave de la gluconeogénesis),
estudiada mediante transferencia Western, en el intestino de ratones
alimentados con succinato (datos no mostrados). Cabe señalar que la
actividad G6Pasa se evalúa a velocidad máxima, por lo que cualquier
variación en la actividad de la enzima depende únicamente de la cantidad
de enzima activa. Esto sugiere que el succinato actúa como precursor de
la glucosa en el intestino, sin afectar la cantidad de enzimas
gluconeogénicas. Sin embargo, dado que el succinato de la dieta no
pareció llegar al ciego (ver arriba), se realizaron análisis de expresión
genética en el yeyuno. Por tanto, no se puede descartar una
154 Metabolismo celular 24, 151–157, 12 de julio de 2016
Figura 3. Efecto del enriquecimiento con succinato sobre la
producción de glucosa en el yeyuno y el hígado (A) Se
determinaron la producción endógena de glucosa (EGP) y
los flujos de glucosa intestinal en ratas alimentadas con una
dieta enriquecida con succinato durante 3 semanas.
(B) Determinación de la incorporación intestinal de [U14C]­succinato
en glucosa en ratas en ayunas de 24 horas.
SA, actividad específica.
**p < 0,01 versus valor en arteria, prueba t de Student de dos colas
para valores pareados.
(C) Efecto del enriquecimiento con succinato sobre la actividad
intestinal de la G6Pasa en ratones WT alimentados con una dieta
rica en grasas y sacarosa.
(D – F) Efecto de la suplementación con succinato sobre la actividad
hepática de G6Pasa (D) y el contenido de G6P (E) y glucógeno (F)
en ratones WT e I­G6pc/ alimentados con una dieta rica en grasas y
sacarosa. *p < 0,05;
****p < 104 , valor de p ajustado, ANOVA de dos factores seguido de
la prueba de Tukey corregida para comparaciones múltiples.
Los datos son media ± SEM de n = 6 animales por grupo.
posible efecto del succinato sobre la expresión
genética en el intestino distal, cuando el
succinato se produce allí mediante la
fermentación de la fibra. Curiosamente,
observamos una disminución significativa en la
capacidad de producción de glucosa hepática en ratones WT.
De hecho, observamos una disminución del 25%
en la actividad de la G6Pasa hepática en ratones WT alimentados con
succinato (Figura 3D). De acuerdo con una disminución en la hidrólisis de
glucosa­6­fosfato en el hígado, observamos aumentos significativos en el
contenido de glucosa­6­fosfato y glucógeno del hígado en estos ratones
(Figuras 3E y 3F). Esta supresión en la producción de glucosa hepática
estuvo ausente en ratones I­G6pc/ alimentados con succinato , lo que
enfatiza aún más el vínculo entre la IGN inducida por succinato y la
supresión de la producción de glucosa hepática (Figuras 3E y 3F). El
análisis estadístico mostró un papel importante del genotipo en las
variaciones observadas en el metabolismo hepático (p. ej., el genotipo
representa el 68% de la variación total en el contenido de glucógeno, p <
104 ), con una fuerte interacción entre la dieta y el genotipo (contenido de
glucógeno, 17% de varianza total, p < 104 ). Estos datos resaltan el papel
clave del IGN a la hora de impulsar las mejoras asociadas con la
del succinato.
La colonización de ratones convencionales con el productor de
succinato Prevotella copri aumenta el succinato cecal e inhibe la
producción de glucosa hepática En poblaciones con
una dieta esencialmente basada en fibra dietética, estudios metagenómicos
han demostrado un aumento en la abundancia de bacterias del género
Prevotella (Schnorr et al. ., 2014). Además, previamente demostramos que
la monocolonización de ratones Swiss­Webster libres de gérmenes (GF)
alimentados con comida con P. copri aumenta significativamente los niveles
de succinato en el ciego, sin aumento de ningún otro ácido carboxílico, y
mejora la tolerancia a la glucosa con un aumento concomitante en el
almacenamiento de glucógeno en el hígado (Kovatcheva­Datchary et al.,
2015). Para evaluar si esta bacteria productora de succinato podría ejercer
sus beneficios metabólicos a través del succinato y el IGN, administramos
por vía oral ratones C57Bl/6 WT e I­G6pc/ criados convencionalmente
(CONV­R)
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diariamente con cultivo vivo de P. copri. Para ambos genotipos, la presencia de
P. copri aumentó la tolerancia a la glucosa (Figuras S3A y
S3B), con cambios similares en la secreción de insulina (Figuras S3C
y S3D). Esto se asoció con una reducción de la presión hepática.
Actividad G6Pasa (Figura S3E), con una contribución muy significativa
tanto del genotipo como del tratamiento (28% y 55% de la varianza total,
respectivamente, p < 104 , ANOVA de dos vías). Es de destacar
que los ratones CONV­R WT que recibieron alimentación forzada oral con P. copri
tenían un aumento de succinato cecal, pero no un aumento de succinato portal,
en comparación con los controles (Figuras S3G y S3H). Este
sugiere que la mucosa intestinal podría utilizar el succinato, presumiblemente
para la síntesis de glucosa. Sin aumento del succinato cecal
se observó en ratones I­G6pc/ colonizados con P. copri. Tomado
En conjunto, esto sugiere que el succinato producido por Prevotella puede
ser un sustrato para IGN, pero Prevotella también tiene efectos adicionales
independientes del succinato que mejoran el metabolismo de la glucosa, en
de acuerdo con nuestras observaciones anteriores (Kovatcheva­Datch­ary et al.,
2015).
DISCUSIÓN
Si bien se ha demostrado que el succinato disminuye la proliferación
tasa en la mucosa colónica de ratas (Inagaki et al., 2007), hasta ahora
ningún estudio ha informado del efecto del succinato sobre el metabolismo
intestinal o el control de la glucosa. Aquí examinamos el efecto de
succinato producido por la microbiota sobre la homeostasis de la glucosa, con
Se centra especialmente en la IGN, una función intestinal que se ha descrito
previamente como un regulador clave de la homeostasis energética (De
Vadder et al., 2014; Troy et al., 2008). Encontramos que succinato
podría ser producido por la microbiota intestinal en respuesta a dietas
enriquecidas con FOS e incorporado como sustrato en IGN, por lo tanto
mejorar el control glucémico y el metabolismo energético a través de efectos
beneficiosos sobre la producción de glucosa hepática y el peso corporal.
Siguiendo nuestros datos relacionados con el propionato (De Vadder et al.,
2014), aquí identificamos otro metabolito producido por bacterias.
que puede modular directamente el metabolismo de la glucosa en el intestino
del huésped e influir en la homeostasis energética sistémica.
Las intervenciones dietéticas, especialmente mediante la suplementación con
fibras solubles, son eficaces para modular la microbiota intestinal y
mejora de la fisiología del huésped (Neyrinck et al., 2012). Sin embargo, la
capacidad del huésped para modificar su metabolismo intestinal de la glucosa
en respuesta a tales cambios en la dieta parece tener la misma influencia.
papel causal en las mejoras metabólicas observadas (De Vadder
et al., 2014). Aquí mostramos que los beneficios inducidos por el succinato
Al igual que el propionato, dependen de la capacidad del huésped.
para inducir IGN. Confirmamos el efecto de IGN utilizando I­G6pc/
ratones (es decir, ratones que no pueden convertir el succinato en glucosa en
el intestino) y demuestran que los efectos antidiabéticos y antiobesidad
Los efectos de la suplementación con succinato están ausentes en estos ratones.
Sin embargo, no podemos excluir que la mejora del metabolismo de la glucosa
mediada por succinato pueda ser causada al menos en parte.
por el receptor Sucnr1 recientemente descrito, que se expresa
tanto en el hígado como en el intestino (He et al., 2004). A pesar de esto,
incluso si IGN no puede explicar únicamente todos los efectos beneficiosos
observado, mostramos claramente que el metabolismo mejorado de la glucosa
derivado del succinato sólo puede ocurrir en presencia
del IGN.
Desafortunadamente, nuestros experimentos de colonización con P. copri
no nos permitió sacar conclusiones sobre el papel del succinato
producción y IGN en los beneficios metabólicos asociados con
esta bacteria (Kovatcheva­Datchary et al., 2015). De hecho, nuestro
Los datos fueron consistentes con los beneficios metabólicos que dependen de
IGN activado por succinato sólo en ratones CONV­R WT. Sin embargo,
en ratones CONV­R I­G6pc/ , los beneficios metabólicos se produjeron en
ausencia de IGN, lo que sugiere que la bacteria per se puede
tienen efectos beneficiosos independientemente del succinato. Es notable que
en ratones I­G6pc/ colonizados con Prevotella, hubo
No hubo aumento en la concentración de succinato en el ciego.
Esto sugiere que, específicamente en estos ratones, el intestino del huésped
El metabolismo del succinato y/o la ecología microbiana podrían ser
alterado en presencia de P. copri. Cómo la deficiencia en IGN
y/o la presencia del probiótico modifica la ecología microbiana en estos ratones
es necesario estudiar más a fondo.
Anteriormente hemos demostrado que la composición alterada de la microbiota
después del tratamiento prebiótico con FOS o granos de cebada mejora el
control de la glucosa y favorece el almacenamiento de glucógeno en el hígado.
(De Vadder et al., 2014; Kovatcheva­Datchary et al., 2015). En
En este estudio ampliamos estos datos descifrando que el IGN es
activado por succinato, un ácido orgánico derivado de FOS.
También mostramos que la suplementación probiótica con bacterias productoras
de succinato como P. copri en un contexto convencional
(ratones CONV­R WT) aumenta la producción de succinato, que
se asocia con la inhibición de la producción hepática de glucosa,
independientemente de cualquier intervención nutricional. Esto enfatiza
la relevancia de la colonización con Prevotella para mejorar
Control de la glucosa en un contexto fisiológico.
En conclusión, a pesar del dogma generalmente aceptado de que una
Es poco probable que el metabolito intermediario ejerza un papel regulador.
aquí descifrar el efecto beneficioso hasta ahora insospechado de un
Metabolito derivado de la microbiota: succinato. Esto actúa como un sub­
estrato de IGN y conduce a una inhibición de la producción de glucosa hepática.
y mejoras dramáticas en el metabolismo de la glucosa y la energía.
Un aumento en la liberación de glucosa por el hígado se considera una causa
factor de resistencia a la insulina y diabetes tipo 2, mientras que su supresión
previene la obesidad y la diabetes (Abdul­Wahed et al.,
2014). Confirmamos que IGN es fundamental para plasmar los cambios
en los metabolitos de la microbiota en respuesta a dietas prebióticas en
beneficios metabólicos, proporcionando conocimientos mecanicistas sobre cómo
La función de la microbiota puede influir en el metabolismo del huésped. Este
enfatiza aún más el interés de un mecanismo que podría ser
dirigido a tratar y/o prevenir la alteración del metabolismo de la glucosa, allanando
el camino para futuros enfoques innovadores de
Intervenciones dietéticas y/o probióticas para tratar enfermedades metabólicas.
como la obesidad y la diabetes.
PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES
animales
Todos los protocolos de este trabajo se realizaron de acuerdo con las recomendaciones.
de nuestros comités locales de ética animal para experimentación animal, que dieron
su autorización (número DR­2013­23 para la Universidad Lyon 1; número 339­
2012 para la Universidad de Gotemburgo).
Se alojaron ratones adultos C57BL/6J, de 12 a 14 semanas de edad al comienzo de los
experimentos, en una habitación con clima controlado (22 °C ± 2 °C) sometidos a
un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas (7:00 a. m. a 7:00 p. m.), con libre acceso al agua y
alimento. Se alojaron en condiciones similares ratas macho Sprague­Dawley (Charles River), de
entre 6 y 8 semanas de edad y que pesaban entre 275 y 300 g en el momento de su llegada.
Se generaron ratones I­G6pc/ como se describió anteriormente (Penhoat et al., 2011),
y los experimentos se realizaron 5 semanas después de la eliminación del gen. Para la colonización
experimentos, se administró alimentación forzada diaria a ratones macho C57Bl6/J durante 7 días con
Metabolismo celular 24, 151–157, 12 de julio de 2016 155
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Cepa de P. copri DSM18205 (DSMZ – Colección alemana de microorganismos y cultivos celulares). Se
incorporaron a la dieta succinato de sodio (Sigma) o FOS (Orafti P95, amablemente donado por Beneo)
al 5% p/p (succinato) o al 10% p/p (FOS). La dieta estándar fue SAFE A04 (Augis), y la dieta HF­HS se
preparó en Unite' de Pre' paration des Aliments Expe'rimentaux (INRA; composición en la Tabla S1).
Antes del cambio de dieta, los animales fueron alimentados con una dieta estándar y se diseñaron
grupos para que coincidieran con la ingesta de alimentos y el peso corporal. Luego, los animales fueron
alimentados con la dieta especial durante 21 días.
Recogida de muestras para análisis microbiano y SCFA Los ratones se
dejaron en ayunas durante 6 horas y se sacrificaron mediante dislocación cervical. Se recogieron
muestras de sangre de la vena porta y de la vena cava. Se tomaron muestras del intestino (incluido el
colon) y del hígado y se colocaron inmediatamente en nitrógeno líquido. Para el análisis de plasma, se
centrifugaron muestras de sangre y se recogió y almacenó plasma a 80 ° C antes del ensayo.
Ensayo de SCFA
Los SCFA se midieron en 50 ml de muestras de plasma después de la acidificación y extracción en éter
dietílico mediante cromatógrafo de gases junto con un detector de espectrómetro de masas (7890A y
5975C, Agilent Technologies). Los detalles del ensayo se dan en Procedimientos experimentales
suplementarios.
Purificación de ADN genómico, amplificación del gen 16S rRNA y análisis de secuencia El
ADN genómico se aisló de
segmentos de colon como lo describen Salonen et al. (2010). La región V1­V2 del gen bacteriano 16S
rRNA se amplificó utilizando los cebadores 27F y 338R fusionados con 454 adaptadores de secuenciación
de titanio. Se realizó una PCR y las muestras se agruparon y secuenciaron utilizando el sistema Roche
454 GD­FLC. Los detalles se dan en Procedimientos experimentales suplementarios.
Pruebas de tolerancia a la glucosa y a la insulina Los
animales se mantuvieron en ayunas durante 16 (prueba de tolerancia a la glucosa) o 6 horas (prueba de
tolerancia a la insulina) y luego recibieron una inyección de glucosa (1 g/kg de peso corporal [pc], por
vía intraperitoneal [ip]) o insulina. (0,5 U/kg de peso corporal, Insulatard, Novo Nordisk). La glucosa en
sangre se controló durante 120 minutos utilizando un glucómetro (Accu­Check, Roche) en muestras
recogidas de la punta de la vena de la cola.
Ensayos bioquímicos La
actividad de G6Pasa y los ensayos de glucógeno y G6P se realizaron según los protocolos descritos por
Baginski et al. (1974) y Pfleiderer (1974).
Determinación de los flujos de glucosa intestinal
Después de un ayuno de 6 horas, las ratas fueron anestesiadas con isoflurano al 2% y se les colocaron
catéteres de polietileno insertados en la vena yugular derecha para la infusión de glucosa [3­3 H]
(Perkin­Elmer) y en la arteria carótida izquierda para tomar muestras de sangre. Para los estudios de
incorporación de succinato, las ratas se dejaron en ayunas durante 24 horas y se les colocaron catéteres
como se describe anteriormente. Se infundió sal sódica del ácido [U­14C] succínico (Hartmann Analytic)
durante 90 minutos. Croset et al. describen en detalle el muestreo y los cálculos . (2001).
Análisis estadísticos Los
datos se presentan como media ± SEM o como diagramas de caja que muestran el rango máximo,
mínimo, mediana y intercuartílico. La prueba apropiada que se utilizó se describe en las leyendas de las
figuras. p < 0,05 se consideró estadísticamente significativo.
INFORMACIÓN SUPLEMENTARIA
La información complementaria incluye procedimientos experimentales complementarios, tres figuras y
una tabla y se puede encontrar en este artículo en línea en http://dx.doi.org/10.1016/j.cmet.2016.06.013.
CONTRIBUCIONES DE AUTOR
FDV, PK­D., FB y GM concibieron los experimentos; FDV, PK­D., CZ y AD realizaron los experimentos;
FDV, PK­D., FB y GM escribieron el manuscrito. Todos los autores leyeron y acordaron la versión final
del manuscrito.
156 Metabolismo celular 24, 151–157, 12 de julio de 2016
EXPRESIONES DE GRATITUD
Los autores agradecen a Margaux Raffin (Universidad Lyon 1), Carina Arvids­son, Sara Nordin­Larsson,
Ulrica Enqvist y Zakarias Gulic (Universidad de Gotemburgo) por su excelente cría de animales. También
desean agradecer a Mattias Bergentall por su ayuda con los estudios con animales. Se agradece a
Rosie Perkins por editar el manuscrito y a Anna Hallen por preparar el resumen gráfico. Este trabajo fue
financiado por el Institut National de la Sante' et de la Recherche Medicale' y la Universidad Lyon 1,
Consejo Sueco de Investigación; la fundación NovoNordisk; la fundación de Torsten So¨ derberg;
Fundación Sueca Corazón y Pulmón; Go¨ dirigió la fundación de Gustafsson; la fundación de IngaBritt y
Arne Lundberg; Fundación Knut y Alice Wallenberg; y la Fundación Sueca para la Investigación
Estratégica. FDV recibió la beca de larga duración EMBO ALTF 1305­2014 (Acciones Marie Curie
LTFCOFUND2013, GA­2013­609409). FB es cofundador y accionista de Metabogen AB y ProPrev AB.
Recibido: 3 de octubre de 2015
Revisado: 12 de mayo de 2016
Aceptado: 21 de junio de 2016
Publicado: 12 de julio de 2016
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