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Reseñas

herramientas y tecnologías

Organoides de riñón humano: avances y desafíos pendientes

Ryuichi Nishinakamura

Resumen | Los organoides renales se consideran herramientas importantes para estudiar el desarrollo del riñón humano normal y
enfermo. Desde los primeros informes sobre organoides renales derivados de células madre pluripotentes humanas hace
cinco años, los organoides renales se han utilizado con éxito para modelar enfermedades glomerulares y tubulares.
Paralelamente, los avances en la secuenciación del ARN unicelular han llevado a la identificación de una variedad de tipos de
células en los organoides y han demostrado que son similares, pero más inmaduras, a las células del riñón humano in vivo.
También se han informado protocolos para la expansión in vitro de células progenitoras de nefrona (NPC) derivadas de
células madre, así como aquellos para la inducción selectiva de linajes específicos, especialmente podocitos glomerulares.
Aunque la mayoría de los organoides actuales se basan en la inducción de NPC, también se ha desarrollado un protocolo de
inducción para yemas ureterales (precursores de los conductos colectores), y pronto serán posibles enfoques para generar
estructuras renales más complejas. La maduración de los organoides es un desafío importante y se necesita un análisis más
detallado del riñón en desarrollo a nivel de una sola célula. Con el tiempo, se requieren estructuras renales organotípicas
equipadas con nefronas, conductos colectores, uréteres, estroma y flujo vascular para generar riñones trasplantables; tales
intentos están en marcha.

Células madre pluripotentes
inducidas
(iPSC). Generado por la
expresión forzada de varios
factores de transcripción en células
somáticas y puede diferenciarse
en una variedad de tipos de células.
Célula progenitora de nefrona
Población del riñón embrionario
que puede diferenciarse en
podocitos glomerulares,
cápsula de Bowman, túbulo
renal y asa de Henle.
mesénquima metanéfrico
Una población de células
se acumuló alrededor de las
puntas de las yemas ureterales.
Contiene progenitores de
nefrona y progenitores del estroma.
Instituto de Embriología
y Genética Molecular,
Universidad de
Kumamoto, Kumamoto, Japón.
correo
electrónico: ryuichi@kumamoto­u.ac.jp
https://doi.org/10.1038/
s41581­019­0176­x
Los organoides son agregaciones 3D de células autoorganizadas
que representan la estructura y función de los órganos.
Pueden derivarse de células madre embrionarias (ESC) o de
células madre pluripotentes inducidas (iPSC). Desde los primeros
informes de organoides renales derivados de iPSC humanas
hace 5 años, se han descrito muchos protocolos para la inducción estructura de orden superior, y cómo se han utilizado los
de organoides renales a partir de iPSC, que difieren en términos
de la duración del cultivo y los factores de crecimiento utilizados.
El desarrollo de protocolos para la generación de organoides
ha sido impulsado por los avances en nuestra comprensión de
los procesos y señales subyacentes al desarrollo renal. La
disponibilidad de tecnologías como la secuenciación de ARN
unicelular (scRNA­seq) ha proporcionado información sobre la
relevancia de los organoides renales para el proceso de
desarrollo renal in vivo y tiene el potencial de identificar otros
enfoques con los que mejorar la maduración de los organoides.
Los organoides renales tienen el potencial de avanzar en el
campo de la nefrología al proporcionar una herramienta para el
estudio del desarrollo y la enfermedad del riñón humano, al
proporcionar una herramienta para la detección de fármacos in
vitro y, en última instancia, para la terapia regenerativa; sin
embargo, siguen existiendo barreras importantes para el uso de
organoides para cualquiera de estos fines. En esta revisión
analizo el progreso en el desarrollo de organoides renales y
describo los desafíos restantes para el uso de estos cultivos
para el estudio de la fisiología y la enfermedad renal. Describo
sobre su receptor. , RET, en los epitelios de la UB5–9 (Fig. 1). Sucesivamente,
los componentes principales de los protocolos más utilizados para generar
organoides renales, resaltando las principales diferencias
conceptuales entre ellos. Luego describo cómo ha avanzado el
campo en los últimos 5 años, en términos de conocimientos
adquiridos a partir de scRNA­seq, enfoques para expandir la
población de células progenitoras de nefrona (NPC) y lograr una
organoides para modelar nefropatía. Finalmente, la revisión
analiza las limitaciones de los protocolos actuales sobre
organoides, con énfasis en cuestiones relacionadas con su
inmadurez, falta de vascularización y formación de uréter.
Desarrollo renal
Los organoides renales son un conjunto de células que se
diferencian y se autoensamblan en respuesta a señales
ambientales similares a las que están presentes en el riñón en
desarrollo. Por lo tanto, comprender el desarrollo del riñón es
esencial para comprender los principios que subyacen a la
inducción de organoides renales.
El riñón embrionario se divide en mesénquima metanéfrico
(MM) y yema ureteral (UB). Los NPC en el MM producen
podocitos glomerulares, cápsula de Bowman
y túbulos renales1–4 , mientras que la UB produce los
conductos colectores y el uréter. Aproximadamente en el día
embrionario (E) 10,5 en ratones, se produce un crecimiento de
UB desde el epitelio del conducto nefrítico posterior con invasión
de UB en el MM, como resultado del factor neurotrófico derivado
de la línea celular glial (GDNF) secretado por MM que actúa

Reseñas de NATuRe | NEFROLOGÍA volumen 15 | OCTUBRE 2019 | 613

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Reseñas

Protocolos de inducción de organoides renales.

Puntos clave
• Los organoides renales son útiles para modelar enfermedades de aparición temprana que afectan a los glomérulos.
y túbulos renales.
• Es necesaria una mejor comprensión de los cambios en la expresión genética que ocurren a nivel unicelular
durante el desarrollo del riñón embrionario humano para guiar una mayor maduración de los organoides
renales; Tecnologías como la secuenciación de ARN unicelular representan herramientas
poderosas para este propósito.
• La inducción de yemas ureterales ramificadas se puede lograr utilizando un protocolo diferente al utilizado para la
inducción de células progenitoras de nefronas.
• Aún persisten desafíos notables para el uso de organoides para la medicina regenerativa, incluidos
enfoques para la generación de estructuras de orden superior, maduración de organoides, vascularización
y formación de un solo uréter.
la UB secreta WNT9B, que estimula a algunos NPC dentro del
MM a diferenciarse en componentes de nefrona10. Por el
contrario, otros NPC permanecen indiferenciados, al menos en
parte debido a la acción del factor de crecimiento de fibroblastos
9 (FGF9) derivado de UB y NPC y del FGF20 derivado de NPC11.
Los NPC indiferenciados expresan un subconjunto de
factores de transcripción, como SIX2, PAX2 y SALL1, que son
esenciales para el mantenimiento y la diferenciación de los
progenitores12­15. El MM también contiene otro tipo de célula
precursora: la célula progenitora del estroma. Las células
progenitoras del estroma dan lugar a células intersticiales, que
llenan los espacios entre los epitelios de la nefrona y las células
mesangiales glomerulares; Además, las células estromales
regulan el desarrollo de los NPC y la UB. Por ejemplo, tanto las
células del estroma cortical como las NPC en el MM secretan
GDNF para estimular la ramificación de UB16. Las células del
estroma cortical también expresan Aldh1a2, que codifica la
retinal deshidrogenasa 2, una enzima que produce ácido retinoico
y regula positivamente la expresión de RET en la UB, contribuyendo Bowman y túbulos renales. Este protocolo, al que nos referimos
así a la ramificación de la UB17. La protocadherina FAT4 también
se expresa en células del estroma cortical y actúa sobre la
proteína DCHS1 relacionada con la cadherina en los NPC para
restringir su expansión excesiva18,19. Las células estromales
medulares participan en el control de la osmolalidad, que es
fundamental para la concentración de la orina, y su desarrollo
requiere la señalización WNT7B del UB20. Por lo tanto, las NPC
yema ureteral
y las células progenitoras del estroma dentro del MM, junto con
Población de células en el riñón
embrionario que sufre una las células de la UB, son los componentes precursores esenciales
ramificación extensa y se diferencia del riñón metanéfrico; además, las interacciones entre estos
en conductos colectores y
tipos de células son fundamentales para el desarrollo adecuado
uréteres.
del riñón.
Basándonos en el hallazgo de que UB y MM tienen orígenes
distintos, establecimos un protocolo de varios pasos para derivar
MM de ESC de ratón e iPSC humanas cultivadas como esferas
3D22. Este protocolo, que denominamos protocolo Taguchi,
requiere un tratamiento prolongado con una alta concentración
del agonista WNT, CHIR99021 (CHIR), para promover el
desarrollo del mesodermo naciente posterior (Fig. 2). Luego
aplicamos una combinación de ácido retinoico, activina, BMP4 y
una concentración intermedia de CHIR para inducir que el
mesodermo naciente posterior forme IM posterior; el tratamiento
posterior con FGF9 y una baja concentración de CHIR genera
NPC que podrían dar lugar a podocitos, células de la cápsula de
Bowman y células epiteliales tubulares22.
Takasato et al. también informaron sobre la generación de
células renales en esferas 3D a partir de ESC humanas. en 2014
(ref. 24). En este estudio, los investigadores utilizaron un paso de
inducción 2D seguido de un cultivo 3D de las células progenitoras
agregadas; sin embargo, el protocolo inicial no se basó en el
concepto de inducción IM posterior. En 2015, Takasato et al.25
publicaron un protocolo revisado que utilizaba tratamiento CHIR
de duración variable para inducir la especificación anterior o
posterior del IM. Con una duración óptima del tratamiento CHIR,
este protocolo revisado, al que nos referimos como protocolo de
Takasato, generó organoides renales derivados de iPSC humanas
que contenían podocitos derivados de progenitores de nefronas,
cápsulas de Bowman y túbulos renales, así como células
similares a UB. , células estromales y células endoteliales.
En un tercer protocolo, Morizane et al.26 también utilizaron el
tratamiento CHIR para especificar el linaje IM posterior e inducir
a las ESC y iPSC humanas a formar podocitos, cápsulas de
como protocolo Morizane, al igual que el protocolo Takasato,
también implicó la inducción de cultivos progenitores 2D, seguidos
de cultivos 3D, pero la duración de todo el proceso fue más corta
que la del protocolo Takasato.
Morizane et al.26 también informaron que su protocolo permitió
una inducción altamente eficiente de NPC, aunque esta afirmación
aún debe examinarse formalmente mediante una comparación
directa y paralela de los diferentes protocolos utilizando un clon
de iPSC que expresa un informador específico de NPC. Es
importante destacar que los organoides renales inducidos por los
protocolos de Takasato y Morizane exhibieron cierta función
inherente de los túbulos renales, incluida la capacidad de

la cápsula de Bowman
Un saco epitelial que rodea el
glomérulo. Una estructura que
consta de la cápsula de Bowman y un
glomérulo se denomina corpúsculo
renal.
mesonefros
El riñón embrionario que se
desarrolla antes y más
anteriormente que el metanefros.
Después de formar los conductos
de Wolff, la mayor parte de los
temporalmente.
mesonefros degeneran durante el desarrollo.
metanefros
El riñón embrionario que aparece
al final y se convierte en el riñón
permanente.
En el embrión de ratón en desarrollo, tanto MM como UB se
derivan del mesodermo intermedio (IM), que expresa el factor de
transcripción OSR1 (ref. 21). Sin embargo, nuestro grupo
demostró que la MI anterior y posterior son poblaciones
distintas22,23.
El IM anterior de los ratones se establece en E8.5 y posteriormente
se diferencia en el linaje UB. Por el contrario, el mesodermo
naciente en el extremo posterior de los embriones de ratón E8.5
(el mesodermo naciente posterior) se diferencia en el IM posterior
en E9.5 y posteriormente forma NPC (Fig. 2). Por lo tanto, los
orígenes de la UB y MM son distintos, tanto espacialmente como
Sería razonable proponer que este hallazgo
probablemente también sea válido en humanos, aunque no se
pueden realizar experimentos de rastreo de linaje celular utilizando
embriones humanos.
absorción de dextrano y la sensibilidad a sustancias nefrotóxicas25,26.
Aunque los tres protocolos anteriores, así como otros
protocolos publicados27,28, utilizan CHIR para activar WNT, por
lo demás los protocolos son distintos (Tabla 1, así como otras
revisiones29,30). Por ejemplo, la duración del tratamiento CHIR
oscila entre 1,5 días y 6 días. CHIR es fundamental para la
posteriorización (es decir, el desarrollo del mesodermo naciente
posterior y la IM posterior); por lo tanto, una exposición de corta
duración a CHIR podría conducir a una posteriorización
insuficiente y una eventual inducción de los mesonefros, en lugar
de los metanefros. El protocolo de Takasato tiene sólo un paso
simple de tratamiento con FGF9 después del paso CHIR para
inducir NPC, mientras que el protocolo Morizane tiene dos pasos
después del tratamiento CHIR: tratamiento con activina seguido
de FGF9. El protocolo Taguchi también tiene dos pasos después
del tratamiento CHIR, pero

614 | OCTUBRE 2019 | volumen 15 www.nature.com/nrneph

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Reseñas

Mantenimiento Restringir la expansión estroma

estromal
progenitores
(FOXD1+ )

UB

sucursal UB PNJ (SEIS2+ )

Naciente
nefrona
Diferenciación

Wolffiano
conducto Coleccionando
conducto

Nefronas
DCHS1 FAT4 FGF9 FGF20 GDNF REAL ACADEMIA DE BELLAS ARTES RETIRADO WNT7B WNT9B Uréter

Figura 1 | Interacciones entre el progenitor de la nefrona, la yema ureteral y los linajes estromales durante el desarrollo del riñón.
El panel izquierdo corresponde a los riñones del día embrionario (E) 11.5 en ratones, mientras que el panel derecho corresponde a E15.5.
Las células progenitoras de nefrona (NPC) SIX2+ en el mesénquima metanéfrico (MM) secretan factor neurotrófico derivado de la línea celular
glial (GDNF), que actúa sobre su receptor RET en el epitelio de la yema ureteral (UB) para desencadenar la invasión y ramificación de la UB.
La UB secreta WNT9B, que estimula a algunos NPC a diferenciarse en células de nefronas nacientes, incluidos podocitos glomerulares, células
epiteliales de la cápsula de Bowman y túbulos renales (no se muestran en detalle en el panel de la derecha). Otros NPC permanecen
indiferenciados por la acción del factor de crecimiento de fibroblastos 9 (FGF9) derivado de UB y NPC y FGF20 de NPC. El MM también
contiene las células progenitoras del estroma FOXD1+. Al igual que los NPC, las células del estroma cortical también secretan GDNF para
estimular la ramificación de UB. También producen ácido retinoico (RA), que regula positivamente la expresión de RET en las UB. FAT4, que
se expresa en las células del estroma cortical, actúa sobre DCHS1 en los NPC para restringir su expansión excesiva. El desarrollo de las
células del estroma medular requiere la señalización WNT7B de las UB.

utiliza factores además de activina y FGF9 como se describió
anteriormente. La complejidad del protocolo Taguchi refleja el
hecho de que este protocolo se estableció originalmente para imitar
los niveles de expresión genética en los riñones embrionarios de
ratón en desarrollo. Descubrimos que la adición de cada factor
conduce a mayores niveles de expresión de genes clave como
Six2, Pax2, Wt1 y Hox expresado posteriormente.
genes, lo que sugiere que la eficiencia de la inducción o la calidad
de los NPC aumentan en respuesta a estos factores. Por lo tanto,
es probable que diferentes protocolos produzcan nefronas de
diferente calidad y con diferentes proporciones de tipos de células;
Se deben elegir protocolos adecuados de acuerdo con el propósito
de cada experimento en particular.
Problemas de reproducibilidad y variabilidad. Sin embargo, es de
destacar que se han observado variaciones considerables entre
experimentos en organoides, particularmente en genes asociados
con su maduración, incluso en casos en los que se ha utilizado un
solo protocolo con una sola línea iPSC31.
También es probable que los patrones de nefronas y las
proporciones de las células fluctúen entre experimentos. Las
razones subyacentes de estas diferencias podrían incluir diferencias
entre lotes de reactivos, fluctuaciones en el estado de pluripotencia
de las células progenitoras en la inducción de la diferenciación (es
decir, variaciones entre pases), variabilidad en la solidez de
protocolos de diferenciación particulares y variaciones en el manejo
específico. técnicas de investigadores individuales. Aunque las
diferencias clonales en las iPSC utilizadas para generar cultivos
organoides son supuestamente más pequeñas que las diferencias
interexperimentales31, especulamos que la señal de la proteína
morfogenética ósea (BMP) endógena podría variar de un clon a
otro. Aunque no tenemos ninguna evidencia directa que respalde
esta hipótesis,
el protocolo Morizane utiliza el inhibidor de BMP, noggin,
dependiendo del clon ESC/iPSC26. Además, hemos descubierto
que la optimización de la activina y/o la señalización de BMP en
los pasos de inducción iniciales antes de la administración de CHIR
en el protocolo Taguchi puede ajustar la variación clonal, lo que
sugiere que las variaciones en la señalización de BMP endógena
podrían contribuir a la variabilidad interclonal32.
Es de destacar que se ha informado de una reproducibilidad
deficiente entre laboratorios para las neuronas derivadas de
iPSC33, y es probable que también sea aplicable a los organoides
renales. Por lo tanto, se deben identificar los factores que afectan
cada paso de cada protocolo para permitir que investigadores de
diferentes laboratorios generen los organoides de manera
reproducible, así como para la producción industrializada de organoides renales.
Oportunidades y desafíos
Los organoides renales tienen posibles aplicaciones inmediatas,
por ejemplo, como modelos para imitar y estudiar el desarrollo
renal in vivo y para estudiar la enfermedad renal humana.
Sin embargo, más allá de las cuestiones relacionadas con la
reproducibilidad y la variación clonal descritas anteriormente, es
necesario abordar muchos otros desafíos. Estos incluyen enfoques
para aumentar la escalabilidad de los cultivos de organoides,
generar tipos de células específicos y mejorar la vascularización
de los organoides renales.
Modelado del desarrollo renal. scRNA­seq permite un análisis
detallado de la expresión de genes de células individuales. Esta
tecnología es particularmente útil para el estudio de órganos
complejos que contienen muchos tipos de células, como el riñón34.
Un estudio que utilizó scRNA­seq para comparar la expresión
genética de células entre organoides generados mediante los
protocolos de Takasato y Morizane mostró que

Reseñas de NATuRe | NEFROLOGÍA volumen 15 | OCTUBRE 2019 | 615

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E5.5 E7.5 E8.5 E8.75 E9.5 E11.5

Intermedio posterior Progenitor
epiblasto mesodermo naciente Mesodermo naciente posterior mesodermo de nefrona

Mantenimiento del estado inmaduro, posteriorización. Especificación Compromiso y maduración

• Glomérulo
• Túbulo
Activina: WNT+++ WNT+++ • AR • FGF renal
bajo • Activina • WNT+ • Bucle de
• BMP (RA: apagado)
Henle
• WNT++
Blastocisto
o ESC

Especificación Compromiso MET y Maduración

elongación y brotación

• Conducto
colector
WNT+++ RA, FGF • AR
Activina: alta • Uréter
+ BMP • FGF
y TGFβ
inhibición • GNDF
• WNT++
mesodermo naciente Mesodermo conducto de Wolff conducto de Wolff yema ureteral
epiblasto
intermedio
progenitor
anterior

Figura 2 | Distintas vías de desarrollo de las células progenitoras de nefrona y la yema ureteral durante el desarrollo del riñón
de ratón in vivo e in vitro. Los orígenes de las células progenitoras de la nefrona (NPC) y las células de la yema ureteral (UB)
son distintos espacial y temporalmente. Los NPC se derivan del mesodermo naciente posterior (formado en el día embrionario (E) 8.5)
y del mesodermo intermedio posterior (formado en E9.5) in vivo, mientras que las células del linaje UB se derivan del mesodermo
intermedio anterior (formado en E8.5). )22. Se muestran los pasos de señalización necesarios para la inducción, especificación y
compromiso de estos dos linajes, según lo determinado por los hallazgos de experimentos in vitro32. Algunos pasos en los dos
linajes parecen superponerse (se muestran en los mismos colores), pero los dos caminos son claramente distintos. Nuestro protocolo
para la inducción de UB difirió del protocolo de inducción de NPC desde los pasos iniciales, lo que sugiere que estos dos
linajes pueden segregarse en etapas muy tempranas de desarrollo in vivo. +, ++ y +++, intensidad de la señalización WNT;
BMP, proteína morfogenética ósea; ESC, células madre embrionarias; FGF, factor de crecimiento de fibroblastos; GDNF, factor
neurotrófico derivado de línea celular glial; MET: transición mesenquimal a epitelial; RA, ácido retinoico; TGFβ, factor de crecimiento transformante­β.

los organoides generados usando este último contenían más
células diferenciadas (incluidos los podocitos) que los generados
usando el primero35. Sin embargo, estos hallazgos deben
interpretarse con cautela porque las variaciones
interexperimentales, clonales e interlaboratorios podrían afectar
el resultado, como se describe anteriormente. Espero que sea
apropiado suponer que ambos protocolos organoides generan
una gama diversa de células renales. El estudio también demostró
que ambos protocolos generaban células no renales fuera del
objetivo, incluidas células neuronales y musculares. El análisis
pseudotemporal de los datos de scRNA­seq reveló que la
inhibición de la señal entre el factor neurotrófico derivado del
cerebro y su receptor, el receptor neurotrófico de tirosina quinasa,
tipo 2, redujo significativamente el número de células neurales
en los organoides renales y dio como resultado una inducción
más eficiente de células renales35.
Es importante destacar que los estudios de scRNA­seq y
perfiles transcripcionales también han demostrado que las células
renales dentro de los organoides son mucho más inmaduras que
las del riñón adulto. De hecho, los organoides renales actuales
parecen ser similares a los tipos de células presentes durante el
primer o segundo trimestre de la gestación in vivo, lo que indica
que se necesita más trabajo para generar organoides maduros25,36.celular tras la disociación celular, el número de células
La disponibilidad de datos de scRNA­seq para riñones
embrionarios humanos proporciona información sobre los perfiles
de expresión génica de diferentes tipos de células durante el
proceso de desarrollo y servirá como referencias importantes
para el análisis de la madurez de los organoides renales. Estos estudios
del estudio y, por lo tanto, lograr mejoras adicionales.
También es probable que ayuden a identificar otros factores de
señalización que impulsan el desarrollo de las células renales,
con la expectativa de que dichos hallazgos puedan aplicarse al
desarrollo de protocolos que generen organoides más maduros.
De hecho, actualmente se sabe poco sobre los factores que
gobiernan la maduración renal durante la gestación y después
del nacimiento, incluso en ratones, ya que la mayoría de los
estudios se han centrado en las primeras fases de la morfogénesis
renal. Aunque se espera que scRNA­seq facilite el estudio del
desarrollo renal, es importante considerar las limitaciones de esta
técnica41. Hay muchos métodos scRNA­seq disponibles, cada
uno con sus propias ventajas y desventajas. Una desventaja
importante de scRNA­seq es que el proceso de disociación del
tejido puede causar estrés celular y, como consecuencia, las
células pueden cambiar sus patrones de expresión genética en
respuesta al proceso de disociación. Un enfoque para mitigar
los efectos de tales artefactos de disociación es secuenciar el
ARN nuclear de células individuales. La validez de la
secuenciación de ARN nuclear único se ha demostrado para el
tejido renal adulto, pero aún no se ha aplicado a los
organoides42. La calidad de los datos obtenidos mediante scRNA­
seq depende de muchos factores, como la tasa de supervivencia
analizadas, el número de genes detectados por célula y los
umbrales establecidos para minimizar el ruido técnico y las
exhibiciones. considerable variación entre los estudios. Las
diferencias en estos parámetros pueden confundir los resultados

616 | OCTUBRE 2019 | volumen 15 www.nature.com/nrneph

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Reseñas

son necesarios con respecto a los enfoques tanto para la adquisición
de datos como para el análisis bioinformático.
Modelado de enfermedades humanas. Un área clave de interés en la
investigación de organoides es su uso como modelos de enfermedad,
diferencias en las consecuencias de estas mutaciones de nefrina.
También muestran que los organoides derivados de pacientes se
pueden utilizar para recapitular los procesos implicados en las anomalías
de la enfermedad glomerular y proporcionar información sobre los
mecanismos de la enfermedad.

ya sea mediante la introducción de mutaciones específicas de la
enfermedad o mediante el uso de iPSC derivadas de pacientes.
Hemos demostrado que las anomalías de los podocitos glomerulares
se pueden recapitular en organoides renales generados mediante el
protocolo Taguchi a partir de iPSC derivadas de un paciente con
síndrome nefrótico congénito de tipo finlandés43. Esta enfermedad es
causada por mutaciones en NPHS1, que codifica la nefrina, un
componente importante del diafragma hendido en los podocitos
glomerulares. El diafragma hendido funciona como un tamiz molecular
que evita la fuga de proteínas séricas a la orina; los defectos en el
diafragma en hendidura provocan proteinuria grave (es decir, síndrome
nefrótico). Demostramos que los organoides renales derivados de iPSC
humanas sanas forman precursores de diafragma hendido (estructuras
similares a varillas positivas para nefrina) en los dominios basolaterales
de los podocitos in vitro. Después del trasplante de los organoides en
ratones inmunodeficientes, formaron diafragmas en hendidura en los
dominios basales de los podocitos adyacentes a la vasculatura. Sin
embargo, los organoides renales derivados de pacientes no lograron
formar ni siquiera precursores de diafragma en hendidura, ya que la
nefrina mutante permaneció en el citoplasma y no fue transportada a la
superficie celular (Fig. 3; Tabla 1). Además, la corrección genética de la
mutación puntual mediante la edición de genes corrigió estas anomalías,
lo que demuestra claramente que la mutación puntual en NPHS1
causaba la enfermedad. Otro estudio utilizó el protocolo de Takasato
para generar organoides renales de un paciente con una mutación
diferente de NPHS1 (ref. 44). Al igual que nuestros organoides derivados
de pacientes, estos organoides también mostraron niveles reducidos de
nefrina, pero a diferencia de nuestras observaciones, también mostraron
una expresión reducida de otro componente del diafragma hendido, la
podocina. Aunque la razón de la reducción en la expresión de podocina
no está clara, estos hallazgos sugieren la presencia de factores
dependientes de alelos.
El protocolo de Takasato también se ha utilizado para establecer
organoides utilizando iPSC de un paciente con nefronofthisis
causada por mutaciones en la proteína de transporte intraflagelar
140 (ref. 45). Los organoides derivados de pacientes exhibieron
cilios primarios acortados y polaridad apicobasal alterada en el
epitelio de los túbulos renales, lo que coincide con las consecuencias
in vivo de esta mutación, lo que demuestra la capacidad de los
organoides renales para modelar enfermedades relacionadas con
los túbulos renales, así como enfermedades glomerulares. Es
importante destacar que la corrección del defecto genético mediante
la edición de genes rescató estos fenotipos (Fig. 3; Tabla 1).
Una alternativa al uso de iPSC derivadas de pacientes es introducir
mutaciones que causan enfermedades mediante tecnología de edición
de genes, como CRISPR­Cas9. El uso de CRISPR­Cas9 para generar
organoides renales derivados de iPSC humanas que contienen
mutaciones en PODXL, que codifica la proteína podocalixina, demostró
que esta proteína es esencial para el ensamblaje de microvellosidades
en las membranas apicales de los podocitos, así como para la formación
de espacios intercelulares entre las membranas laterales de los
podocitos27,46. Estos hallazgos son consistentes con observaciones
en ratones knockout para Podxl, lo que demuestra que la podocalixina
tiene un papel conservado en el desarrollo de los podocitos46. Otro
estudio utilizó la edición de genes para introducir mutaciones en PKD1
y PKD2, que codifican las proteínas asociadas a la enfermedad renal
poliquística autosómica dominante (PQRAD), policistina 1 (PC) y PC2,
respectivamente, en organoides humanos derivados de iPSC. Los
túbulos renales dentro de los organoides que contenían mutaciones en
PC2 desarrollaron quistes de hasta 1 cm de diámetro47
(Figura 3; Tabla 1). El desprendimiento de los organoides de las
placas adhesivas promovió el agrandamiento del quiste, lo que
sugiere que el microambiente (o el estroma circundante) contribuye
a la formación del quiste. Organoides con PKD1

Tabla 1 | Métodos para la inducción de organoides renales.

Protocolo Duración del Paso previo Duración de Duración entre Tipos de células en los organoides. Modelado
tiempo en a CHIR paso CHIR Paso CHIR y de
Glomérulo y/o Estroma Célula endotelial yema
cultivo hasta la formación de NPC. enfermedades o knockout
túbulo renal ureteral
formación
de NPC

•+ + − NPHS1
Taguchi 13 a 14 días 6 días 2 pasos Dakota del Norte Dakota del Norte

(2014)22 • Activina baja (nefrina) y

PAX2

Morizane − + + + −
9 días 4 días 2 pasos Dakota del Norte

(2015)26 (cabeza+/–)
Liberto + + + + − PODXL y
Dakota del Norte
1,5 días Dakota del Norte

(2015)27 PKD1/PKD2
(PC1/PC2)
Takasato − + + + +/­ NPHS1
10 días 4 dias 1 paso
(2015)25 (nefrina) y
IFT140

•+ − + PAX2
Taguchi 12,5 díasa 1,5 días 5 pasosb Dakota del Norte Dakota del Norte

(2017)32 • Activina alta

más BMP
+, − y +/−, presencia o ausencia de escalones o estructuras; BMP, proteína morfogenética ósea; CHIR, CHIR99021; nd, no determinado; NPC, células progenitoras de
nefronas; PAX2, gen 2 de caja emparejada; PC, policistina; PODXL, PODOCALIXINA. a Duración del tiempo en cultivo hasta la formación del brote ureteral (UB). b Duración
del tiempo entre la etapa CHIR y la formación de la UB.

Reseñas de NATuRe | NEFROLOGÍA volumen 15 | OCTUBRE 2019 | 617

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Reseñas

a
Podocito glomerular Nefrina
Paciente con
congénito
nefrótico iPSC PNJ
síndrome
(NPHS1
• Localización errónea de nefrina Mutaciones corregidas
mutaciones)
• Deterioro de la formación de SD

Túbulo renal Cilios

b

Paciente
con NPHP
iPSC PNJ
(IFT140
mutaciones)

Cilios primarios acortados en forma de maza Mutaciones corregidas

PC1 o PC2 Formación de quistes

Saludable mutaciones
PNJ
individual introducido
en iPSC

Figura 3 | Modelado de enfermedades utilizando células madre pluripotentes inducidas por humanos. Las anomalías de los podocitos glomerulares
se pueden recapitular en organoides renales mediante el uso de células madre pluripotentes inducidas (iPSC) derivadas del paciente para generar
células progenitoras de nefrona (NPC) o mediante el uso de edición genética para introducir mutaciones en los organoides. un | Se han generado
organoides renales a partir de iPSC de un paciente con síndrome nefrótico congénito de tipo finlandés43, una enfermedad causada por mutaciones
en NPHS1, que codifica la proteína nefrina del diafragma hendido (SD). Estos organoides renales derivados de pacientes no lograron formar
precursores de SD y demostraron retención de nefrina mutante dentro del citoplasma de los podocitos. La corrección genética de la mutación
puntual mediante la edición de genes restableció la localización de la nefrina en los dominios basolaterales de los podocitos. segundo | Los
organoides renales establecidos a partir de iPSC de un paciente con nefronoptisis (NPHP) causada por mutaciones en la proteína de transporte
intraflagelar 140 exhibieron epitelios de los túbulos renales con cilios primarios acortados y polaridad apicobasal alterada45. El uso de la edición de
genes para corregir la mutación rescató estos fenotipos. c | El uso de la tecnología CRISPR­Cas9 se ha utilizado para generar organoides
renales derivados de iPSC que contienen mutaciones en los genes que codifican la policistina 1 (PC1) o PC2, como modelo de enfermedad renal
poliquística autosómica dominante. Las células del túbulo proximal dentro de los organoides que carecían de PC2 funcional formaron grandes
quistes47.

Las mutaciones también formaron quistes, pero el tamaño de estos no se
comparó con el de los quistes mutantes PKD2. Sin embargo, es de
destacar que los organoides renales utilizados en ese estudio tenían
mutaciones homocigotas de PKD2 o PKD1, mientras que los pacientes
con ADPKD suelen tener mutaciones heterocigotas, lo que sugiere que
estos organoides podrían no representar verdaderos modelos de la
enfermedad. Además, se detectaron quistes en los organoides en los
túbulos proximales, mientras que los quistes en pacientes con PQRAD
están presentes principalmente en los túbulos distales y los conductos
colectores. Por lo tanto, se necesita la reproducción de quistes a partir de
iPSC derivadas de pacientes para modelar con precisión esta enfermedad.
Según los investigadores que desarrollaron los modelos organoides de
PQRAD47, los organoides renales generados a partir de iPSC derivadas
de pacientes exhibieron marcadas variaciones de línea a línea en su
capacidad para formar quistes y organoides renales. Si estas diferencias
se relacionan con deficiencias en el protocolo de inducción de organoides
o con el requisito de un "segundo golpe" además del PKD1
y se desconocen las mutaciones de PKD2 para el desarrollo de quistes48.
Además de su uso como modelo para estudiar procesos patológicos,
los organoides renales obtenidos de pacientes también son prometedores
como herramienta para la detección de posibles agentes terapéuticos.
Sin embargo, el uso eficaz de organoides para este propósito requiere
una producción a gran escala para una detección de alto rendimiento.
Para ello se ha creado un sistema de cultivo semiautomático de alto
Se ha desarrollado con el fin de optimizar y ampliar los protocolos de
inducción de organoides49. Sin embargo, los organoides generados con
este sistema estaban adheridos a la superficie de la placa y eran más
planos que los producidos mediante cultivo en suspensión convencional o
los producidos en la interfaz aire­líquido; esta diferencia puede afectar la
estructura precisa de las nefronas dentro de los organoides, así como la
madurez de las nefronas inducidas. Por lo tanto, se necesitan
comparaciones y un diseño experimental cuidadoso para garantizar que
los sistemas de alto rendimiento generen organoides de alta calidad de
manera reproducible.
Como se mencionó anteriormente, los protocolos actualmente
disponibles solo pueden producir organoides renales inmaduros.
Por lo tanto, sólo las enfermedades que manifiestan anomalías durante
las primeras etapas de la embriogénesis pueden reproducirse mediante
tecnología de organoides. Es necesario el desarrollo de organoides más
maduros para permitir el modelado y el estudio de enfermedades de
aparición tardía.
Expansión de NPC inducidos. Los procesos de propagación y diferenciación
de los NPC continúan durante el desarrollo. El equilibrio entre propagación
y diferenciación es un determinante crítico del número de nefronas y
podría afectar la función renal en la vida adulta50. En los humanos, toda
la diferenciación de NPC ocurre antes del nacimiento, mientras que en los
ratones este proceso se detiene poco después del nacimiento.

rendimiento.

618 | OCTUBRE 2019 | volumen 15 www.nature.com/nrneph

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La expansión in vitro de las NPC ha sido un desafío, ya que estas
células dejan de proliferar y pierden su capacidad de diferenciarse en
condiciones de cultivo estándar. La mayoría de los protocolos de
inducción de organoides renales generan NPC dentro de los 9 a 14
días posteriores al cultivo. La capacidad de expandir y congelar NPC
derivados de iPSC permitiría a los investigadores evitar el complicado
proceso de inducción y proporcionaría a más investigadores acceso a
la tecnología de organoides. Además, la expansión de los NPC sería
beneficiosa en entornos en los que se requieren grandes cantidades
de NPC, como la terapia celular regenerativa, el modelado de
enfermedades y la detección de fármacos. Varios grupos, incluido el
nuestro, han informado protocolos para la expansión de NPC; Todos
estos protocolos implican la administración de factores de señalización
FGF, WNT y BMP, consistentes con el papel de estos factores en la
propagación de NPC en el riñón en desarrollo in vivo. Por ejemplo,
FGF9 y FGF20 mantienen los NPC, mientras que WNT9B y la
señalización de BMP dependiente de Smad induce la diferenciación
de NPC10,11,51–53. Un estudio utilizó FGF9, BMP7 y un agonista
WNT para expandir los NPC derivados de ESC humanos54; sin
embargo, este protocolo condujo a la formación de estructuras
similares a túbulos renales solas, sin podocitos glomerulares. Nuestro
grupo utilizó factor inhibidor de la leucemia (LIF), además de los
reactivos descritos anteriormente para expandir los NPC derivados
de iPSC humanas55. Aunque el papel in vivo de LIF en la nefrogénesis
sigue siendo oscuro, este protocolo condujo a la generación exitosa
de podocitos con la cápsula de Bowman, así como de túbulos renales.
Sin embargo, el período de expansión fue limitado (1 a 2 semanas) y
los NPC que se expandieron más allá de este período perdieron la
capacidad de formar nefronas. En otro estudio se utilizaron reactivos
similares, incluido LIF, para propagar NPC derivados de embriones
humanos durante hasta 7 meses56. Los investigadores también
afirmaron que los NPC humanos derivados de iPSC respondían al
menos parcialmente al mismo protocolo. Sin embargo, ningún estudio
ha evaluado cuantitativamente la proporción de NPC entre las células
expandidas, ni ha logrado establecer métodos para congelar
progenitores de nefronas derivados de iPSC humanas. También se
desconoce si los NPC dejan de expandirse en una determinada edad
o etapa, o si cambian sus características durante la expansión cultural.
La expresión genética de los NPC de ratón cambia según la etapa de
desarrollo57; Los cambios que ocurren durante el desarrollo de la
nefrona humana probablemente se aclararán mediante el análisis
scRNA­seq de riñones embrionarios humanos.
Esta información será útil para identificar si el "envejecimiento" de los
progenitores se produce in vitro.
Generando tipos específicos de células de nefrona. La mayoría de los
protocolos disponibles actualmente permiten la transición de iPSC a
NPC; sin embargo, el paso posterior, que implica la transición de los
NPC a uno de los múltiples tipos de células de nefrona (particularmente
podocitos glomerulares), es un área de investigación interesante, no
sólo para comprender los procesos de desarrollo de la especificación
del linaje, sino también para el uso práctico de células inducidas para
la detección de fármacos y una terapia potencialmente reparadora.
Las líneas celulares de podocitos inmortalizados se han utilizado
durante mucho tiempo para estudios in vitro de la función de los
podocitos; sin embargo, las células cultivadas de esta manera no
conservan las características originales de los podocitos, como las
apófisis del pie y los diafragmas hendidos, y, a diferencia de los podocitos están
Reseñas de NATuRe | NEFROLOGÍA
Reseñas
expresan niveles muy bajos de proteínas relacionadas con el
diafragma hendido, como nefrina y podocina58–60. Aunque varios
estudios han informado sobre métodos para la inducción de células
similares a los podocitos a partir de iPSC humanas61–63, la regulación
positiva de los genes asociados a los podocitos no se ha observado
de manera uniforme durante la diferenciación celular, y algunos
estudios informan una expresión aún menor de NPHS1 (que codifica
la nefrina). ) en las células diferenciadas que en las iPSC
indiferenciadas61,63. Hemos demostrado que el tratamiento transitorio
de NPC con WNT seguido de la inhibición del factor de crecimiento
tumoral β (TGFβ) da como resultado una inducción altamente
eficiente de podocitos a partir de embriones de ratón y iPSC
humanas64. Los podocitos resultantes exhibieron firmas de expresión
genética comparables con las de los podocitos humanos adultos;
además, expresaron abundantes proteínas asociadas al diafragma
hendido, como nefrina y podocina, y mostraron capacidad de respuesta
funcional a la lesión inducida por fármacos. Por lo tanto, estos
podocitos derivados de iPSC ofrecen un nuevo recurso para el
modelado de enfermedades y las pruebas de nefrotoxicidad. Nuestro
protocolo es consistente con un modelo de reclutamiento de
progenitores de nefronas y patrón de nefronas, que propone que los
progenitores de nefronas expuestos a WNT9B derivado de UB durante
un corto período de tiempo se diferenciarán en podocitos38. Sin
embargo, se desconoce si la señalización de TGFβ está involucrada
en la especificación de podocitos in vivo. Es de destacar que la nefrina
permaneció ubicada en los dominios laterales, además de los dominios
basales, de nuestros podocitos inducidos, lo que indica que los
diafragmas hendidos de nuestro sistema son inmaduros. El análisis
de la expresión genética también reveló una baja expresión de los
genes que codifican las cadenas α3 y α4 del colágeno tipo IV (COL4A3
y COL4A4, respectivamente) en los podocitos inducidos, en
comparación con los niveles en podocitos humanos adultos64. Estos
hallazgos resaltan la naturaleza inmadura de la membrana basal sobre
la que normalmente se asientan los podocitos, lo que parece ser una
limitación constante de los organoides renales in vitro en general. Por
ejemplo, también se observó una baja expresión de las isoformas de
COL4A en un análisis exhaustivo de la matriz extracelular en
glomérulos que habían sido tamizados para eliminar los otros linajes
de células de los organoides inducidos mediante el protocolo de
Takasato44.
En contraste con nuestros hallazgos in vitro, el trasplante de NPC
derivados de iPSC en ratones resultó en la maduración de la SD,
acompañada de una integración vascular del huésped a los glomérulos
trasplantados65. Aunque no se pudo confirmar la formación de
células mesangiales debido a la disponibilidad insuficiente de
marcadores específicos del mesangio, estos hallazgos sugieren que
las interacciones entre podocitos, células endoteliales y posiblemente
células mesangiales podrían ser importantes para la maduración de
los podocitos. El análisis detallado de scRNA­seq de los cor púsculos
renales en desarrollo humano será útil para la identificación de
moléculas candidatas que son importantes para la maduración de los
podocitos y otros componentes del riñón. El estiramiento físico
provocado por la vascularización también puede contribuir a este
proceso de maduración, como se analiza más adelante.
Estructura organoide del riñón de orden superior. La mayoría de los
protocolos descritos anteriormente generan organoides renales con
linajes derivados de NPC, como podocitos, cápsulas de Bowman y
túbulos renales; sin embargo, las nefronas que contienen estos linajes
in vivo,separadas
no
volumen 15 | OCTUBRE 2019 | 619
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Reseñas

Progenitor de nefrona inducción de precursores del conducto de Wolff y, finalmente,

ESC del ratón iPSC humanas
yema ureteral
embrión de ratón Progenitor estromal
Estructura de orden Aún no establecido para
organoides humanos
superior del riñón de ratón in vitro
SIX2 (NPC) Citoqueratina 8 (UB)
E­cadherina (túbulos)
Figura 4 | Un enfoque para generar una estructura de orden superior del riñón in vitro.
La mayoría de los protocolos disponibles para la generación de organoides renales generan
células del linaje de células progenitoras de nefrona (NPC) (es decir, podocitos, células de la
cápsula de Bowman y epitelios del túbulo renal), pero no generan adecuadamente células del linaje
de yema ureteral (UB). (es decir, conductos colectores y uréteres). Hemos establecido un
protocolo que permite la generación exitosa de UB a partir de células madre embrionarias de
ratón (ESC) y células madre pluripotentes inducidas por humanos (iPSC). Al combinar NPC y UB
generados a partir de ESC de ratón con células estromales derivadas de embriones de ratón,
podemos generar organoides renales que muestran una ramificación UB robusta y nefronas
diferenciadas ubicadas en la periferia. Por tanto, la inducción diferencial de cada linaje, seguida
de un cultivo combinado, es una estrategia eficaz para construir una estructura de orden superior
del riñón dentro de un organoide. Un inconveniente de esta estrategia es que requiere células
estromales derivadas de embriones de ratón32. Todavía no contamos con un protocolo
adecuado para la inducción de células estromales a partir de iPSC humanas, que serían
necesarias para generar una estructura similar de orden superior del riñón humano. Además,
todavía se requiere la formación de un único uréter y la integración de la vasculatura para generar
un riñón artificial funcional. También se muestra una sección de un organoide de riñón de ratón
generado utilizando este protocolo y teñido con SIX2 (magenta, para identificar NPC),
knockout
citoqueratina 8 (roja, para identificar la UB) y E­cadherina (verde, para identificar los túbulos renales y la UB). ). para Pax2 (es decir, integridad deteriorada de las uniones
estrechas y adherentes de los epitelios del conducto de Wolff)69,
conducto de Wolff Se encuentran dentro de los organoides y su organización no imita
También conocido como conducto
la de los riñones de los mamíferos, en los que las nefronas están
mesonéfrico. El conducto epitelial del
mesonefros que se alarga en dirección
conectadas por conductos colectores que convergen en el uréter.
anteroposterior. Una porción Como se mencionó anteriormente, los conductos colectores y el
cercana al extremo posterior brota uréter derivan de la UB.
para formar la yema ureteral.
Aunque inicialmente se informó que el protocolo de Takasato25
generaba células derivadas de MM y células derivadas de UB, el
inducción de UB caracterizados por su firma genética típica (Fig. 2).
Curiosamente, el protocolo de inducción de UB difiere del protocolo
de inducción de NPC desde los primeros pasos, lo que sugiere que
estos dos linajes podrían segregarse en etapas muy tempranas de
desarrollo in vivo (por ejemplo, durante el epiblasto temprano y el
mesodermo naciente (racha primitiva ) etapas). La ventana dentro
de la cual administrar CHIR para inducir la especificación UB es muy
estrecha (la eficiencia máxima se observó a las 36 h y se redujo
drásticamente a las 24 o 48 h), en marcado contraste con el
tratamiento CHIR prolongado (6 días) utilizado para inducir NPC.
(Tabla 1). Además, a pesar de cierta superposición en los pasos
tomados para inducir la especificación, el compromiso y la maduración
de los linajes UB y MM, los procesos de señalización necesarios para
la diferenciación de estos dos linajes son claramente distintos (Fig.
2). Finalmente, aplicamos métodos de ensamblaje previamente
publicados para la disociación y reagregación de células renales
embrionarias de ratón66,67 combinando UB y NPC derivados de
ESC de ratón con células estromales derivadas de embriones de
ratón para generar organoides renales que mostraron una ramificación
UB robusta, junto con nefronas diferenciadas. ubicado en la periferia
de las puntas UB (Fig. 4). Así, hemos demostrado que este tipo de
estructura renal de "orden superior" se puede lograr mediante la
inducción diferencial de cada linaje, seguida de su combinación con
células estromales en cultivo. También adaptamos con éxito este
protocolo para generar UB humanos a partir de iPSC humanas; sin
embargo, todavía no contamos con un protocolo adecuado para la
inducción de células estromales a partir de iPSC humanas35.
Además, estos organoides UB eran inmaduros y, por lo tanto, se
necesita más trabajo para generar sistemas más maduros para el
modelado de enfermedades, por ejemplo, de mutaciones de PKD en
los conductos colectores.
Además, hemos demostrado que el gen 2 de la caja emparejada
del factor de transcripción (PAX2), que es un gen causante del
síndrome de coloboma renal, es prescindible para la inducción y
diferenciación de NPC68, pero es necesario para el proceso de
transición mesenquimal a epitelial durante el proceso. Inducción
UB32. Este último hallazgo es consistente con el fenotipo de ratón
mientras que el primero no lo es, como lo hacen Pax2­
los ratones knockout tienen un mantenimiento y diferenciación de
NPC deteriorados70. En la actualidad, es difícil determinar si las
discrepancias observadas entre los organoides de riñón humano y
los ratones knockout se deben a diferencias entre especies o a un
modelado in vitro incompleto del estado in vivo.

Rasgo primitivo
Se forma un surco alargado a lo largo
del eje de los embriones en etapa de
gastrulación. Las células mesodérmicas
y endodérmicas se generan a
análisis scRNA­seq de estos organoides mostró que las células Células estromales en los organoides. En nuestro protocolo, las
similares a UB no expresan genes típicos de UB, como RET, WNT9b células estromales derivadas de embriones de ratón fueron esenciales
y WNT11. lo que sugiere que estas células podrían parecerse a los para la generación de estructuras renales de orden superior a partir
túbulos renales distales derivados de NPC en lugar de a los conductos de ESC de ratón32. La simple combinación de progenitores de

partir de la línea primitiva.

Síndrome de coloboma renal
Una condición que se manifiesta como
anomalías renales y oculares.
Está causada principalmente por
mutaciones PAX2.
colectores35.
Nuestra comprensión de los distintos orígenes de los linajes MM
y UB durante el desarrollo del ratón22 (Fig. 2)
nos ha permitido establecer un método de varios pasos para inducir
UB a partir de ESC de ratón e iPSC humanas32. Siguiendo sus
respectivas vías de desarrollo, primero inducimos la especificación
del IM anterior, seguido de
nefrona derivados de ESC de ratón o de iPSC humanos y UB dio
lugar a una ramificación deficiente. Aunque las células estromales
derivadas de embriones se pueden obtener con bastante facilidad a
partir de ratones, es difícil obtenerlas de forma rutinaria a partir de embriones human
En nuestros experimentos preliminares, la adición de células madre
mesenquimales o células similares al estroma a los organoides
renales tampoco fue suficiente para inducir la ramificación.

620 | OCTUBRE 2019 | volumen 15 www.nature.com/nrneph

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Por lo tanto, es probable que se necesite la inducción de un linaje
de células estromales genuinas a partir de iPSC humanas para
generar una estructura similar de orden superior para la
reconstrucción del riñón humano (Fig. 4). Esta propuesta es
consistente con el conjunto acumulado de evidencia que muestra
que las células estromales desempeñan funciones importantes en
la organogénesis renal16­20. La mayoría de las células estromales
del riñón se derivan de progenitores estromales positivos para
Forkhead box D1 (FOXD1) que se encuentran en la periferia del riñón en
tipodesarrollo71,72 .
El protocolo de Takasato induce el desarrollo de células
estromales, algunas de las cuales expresan FOXD1, al mismo
tiempo que el desarrollo de NPC25. Las células estromales en los
organoides generados mediante el protocolo de Morizane
proliferan en respuesta a la IL­1β, posiblemente imitando la fibrosis
renal73. La importancia de las células estromales para el
desarrollo de otras células renales sugiere que deberíamos probar
la capacidad de estas células similares al estroma para apoyar la
generación de estructuras de orden superior en organoides del
riñón humano, agregándolas con NPC derivadas de iPSC. y UB.
Al mismo tiempo, los estudios deberían examinar las similitudes
y diferencias entre las células organoides del estroma y las
encontradas in vivo. Los análisis de scRNA­seq han demostrado
que las células estromales encontradas en el riñón de ratón y
humano in vivo no son homogéneas37,74. Por tanto, se deben
identificar las subpoblaciones de células estromales que contribuyen
a la formación de estructuras renales complejas con el fin de
establecer protocolos para la inducción de dichas subpoblaciones
in vitro.
Asegurar la vía de salida urinaria. Además de su uso para el
estudio del desarrollo y la enfermedad, los organoides también
podrían usarse para reemplazar la función renal en pacientes con
enfermedad renal terminal. Una barrera clave para el uso de
organoides renales para la terapia regenerativa es la necesidad de
generar un tracto de salida urinario después del trasplante de
organoides. Ninguno de los protocolos de organoides renales
disponibles es capaz de generar un uréter que se alargue fuera
de los organoides. Si, después del trasplante, el flujo sanguíneo
del huésped llega a los organoides renales y los glomérulos
comienzan a producir orina, la ausencia de un uréter acabaría
provocando hidronefrosis. Por lo tanto, los organoides renales
requieren un uréter como salida unidireccional, que debe estar
conectado al uréter o a la vejiga urinaria del huésped para permitir
que la orina fluya sin obstrucciones, un enfoque que también
promovería la maduración de los organoides in vivo. Sin embargo,
los uréteres generados dentro de los organoides renales podrían
no ser lo suficientemente grandes como para suturarlos a los
tejidos del huésped y, por lo tanto, se necesitan mejoras técnicas
para resolver estas limitaciones. Por ejemplo, un estudio logró un
sistema de drenaje trasplantando un metanephros embrionario
de rata junto con la cloaca, como tejido precursor de la vejiga
urinaria, en ratas huésped75. Varias semanas después del
trasplante, los investigadores extirparon el riñón nativo izquierdo y
conectaron el uréter huésped a la vejiga del injerto recién formada
y formada por cloaca, lo que permitió que el injerto creciera sin
hidronefrosis. Sin embargo, se necesita la inducción de una vejiga
urinaria para aplicar este sistema a los organoides renales, un
proceso que requiere un protocolo separado, ya que la vejiga se
deriva del endodermo y se forma en una vía de desarrollo que
difiere de la del riñón derivado del mesodermo. .
Reseñas de NATuRe | NEFROLOGÍA
Reseñas
Vascularización de organoides renales. Los glomérulos del riñón
filtran la sangre para generar orina; por tanto, una vasculatura
adecuada es esencial para la función renal. Aunque algunas
células endoteliales vasculares están presentes dentro de los
organoides renales25, la mayoría de los glomérulos dentro de los
organoides permanecen avasculares in vitro. Anteriormente hemos
informado que los glomérulos derivados de iPSC humanos se
vascularizan eficientemente cuando se trasplantan organoides de
NPC (que no poseen UB) debajo de las cápsulas renales de
ratones inmunodeficientes65. Aún se desconoce la razón por la
cual los organoides están tan pobremente vascularizados in vitro
pero se vascularizan fácilmente después del trasplante in vivo; sin
embargo, el flujo mecánico dentro de la vasculatura del huésped
podría desempeñar un papel. La importancia del flujo sanguíneo
para una vascularización renal adecuada queda ilustrada por un
estudio que muestra que la parada del latido del corazón inducida
químicamente en el pez cebra perjudica la integración de la
vasculatura en los glomérulos76. Un estudio que demuestra que el
cultivo de organoides renales en condiciones de flujo en un
dispositivo de microfluidos induce la formación de redes vasculares
dentro de los organoides77 respalda aún más el papel del flujo
vascular en la inducción de la vascularización.
Los epitelios de nefrona, incluidos los podocitos y los túbulos
renales, cultivados en este sistema expresaron niveles más altos
de marcadores de linaje que los epitelios de nefrona cultivados en
condiciones estáticas convencionales, probablemente como
resultado del estrés de corte fluídico y la regulación positiva de la
expresión de VEGF en los organoides. Los investigadores
demostraron que la vasculatura podía perfundirse; sin embargo,
no está claro hasta qué punto el líquido fluye a través de los
glomérulos y túbulos renales dentro de estos organoides y el grado
en que las células de estos dispositivos se parecen a las células
renales adultas o fetales humanas in vivo.
En nuestro sistema de trasplante, encontramos que la mayoría
de las células endoteliales dentro de los glomérulos de nuestros
organoides trasplantados derivaban de los animales huéspedes,
en lugar del injerto65,78. Por el contrario, otros dos informes
detectaron una integración parcial de células endoteliales derivadas
de iPSC humanas tras el trasplante43,79. Por lo tanto, se
necesitan más estudios para determinar las contribuciones
relativas de las vasculaturas derivadas del donante y del huésped
dentro de los organoides renales trasplantados, si es necesario
inducir células endoteliales a partir de las iPSC humanas y si las
células endoteliales deben integrarse en los organoides renales
antes de que sean trasplantado. Si se requiere una fuente externa
de células endoteliales, es importante determinar si estas deben
ser específicas del riñón o si las células endoteliales generales son
suficientes. Estos problemas deben abordarse para generar
organoides renales funcionales.
Un problema adicional es que los vasos que invaden los
organoides renales utilizando los métodos de trasplante actuales65
son mucho más pequeñas que las arterias renales observadas in
vivo, que transportan entre el 20% y el 25% del gasto cardíaco.
Por tanto, es necesario generar arterias de mayor tamaño, tanto
dentro como fuera de los organoides renales, que permitan el
volumen de flujo sanguíneo necesario una vez trasplantados.
Sin embargo, actualmente se sabe poco sobre los mecanismos
de desarrollo de las arterias extra e intrarrenales.
En E 11.5 en ratones, el riñón está ubicado en los lados ventrales
de la arteria ilíaca común. Un día después, de la aorta brotan tallos
cortos que se ramifican hacia el riñón,
volumen 15 | OCTUBRE 2019 | 621
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Reseñas

pero el riñón también está conectado con la arteria ilíaca común80.
Angiogénesis
La ramificación de buques En E15.5, los tallos de las arterias se unifican en una única arteria
existentes. renal. Se informa que los vasos sanguíneos dentro del riñón en
desarrollo se forman principalmente por angiogénesis.
vasculogénesis
La formación de novo de
más que por vasculogénesis81,82. En E11.5, la UB invade el MM,
vasos mesodérmicos. momento en el que los vasos rodean la UB y se diseminan hacia
precursores. el riñón en los siguientes 1 a 2 días. La mayoría de estos vasos
sanguíneos parecen conectarse a vasos extrínsecos, lo que
sugiere que podría estar implicado un proceso mediado por la
angiogénesis. Si este es el caso, una estrategia de conectar los
organoides renales con vasos sanguíneos extrínsecos sería más
beneficiosa que intentar acelerar la vasculogénesis en los
organoides; sin embargo, se necesitan más investigaciones para
dilucidar el proceso de formación de vasos renales y recapitular la
compleja arquitectura de la vasculatura renal.
Reconstrucción de riñones humanos en animales. Se han hecho
varios intentos de generar órganos en animales para su uso en
trasplantes. Una estrategia implica la generación de quimeras entre
especies mediante complementación de blastocistos (Fig. 5). Esta
técnica implica la inyección de iPSC en los blastocistos que han
sido manipulados para que carezcan de un órgano en particular,
de modo que las iPSC hagan una contribución dominante al órgano
en desarrollo in vivo.
Como se mencionó anteriormente, el factor de transcripción SALL1
lo expresan los NPC; la eliminación de Sall1 en ratones conduce a
Agenesia o hipoplasia renal14. Un estudio demostró que la
inyección de ESC de ratón indiferenciadas en Sall1­
Los blastocistos de rata deficientes condujeron a la generación
exitosa de epitelios de nefrona derivados de ESC de ratón en
riñones de rata recién nacida83. Las UB, el estroma y la vasculatura
en los riñones eran una mezcla de células de ratón y rata, porque
Sall1 es un requisito celular autónomo para la formación de NPC,
pero no para los otros linajes. Esta estrategia podría ser útil para
la generación de riñones humanos para trasplantes en animales
grandes, como los cerdos. Sin embargo, para que tal enfoque sea
viable se deben considerar al menos tres aspectos. En primer
lugar, las células residuales de cerdo, especialmente las células
endoteliales, provocarán un rechazo hiperagudo tras el trasplante;
por lo tanto, además de las NPC, todas las UB, las células
estromales y las células endoteliales deben reemplazarse con células humanas.
La eliminación de Sall1 o Six2 en los cerdos hospedadores no es
suficiente para evitar el rechazo inmunomediado, porque el
agotamiento de estos factores sólo agotará los linajes derivados
de NPC. Todos los demás linajes renales deberán agotarse en los
animales huéspedes, garantizando al mismo tiempo que los
órganos no renales permanezcan intactos. En segundo lugar,
aunque se han descrito quimeras rata­ratón, en las que se ha
cultivado un órgano de ratón en una rata huésped83,84,
actualmente se desconoce si es posible generar quimeras entre humanos y cerdo
Un estudio que inyectó iPSC humanas en blastocistos de cerdo de
tipo salvaje y los implantó en el útero de un cerdo, informó la
integración de células humanas en

a Cerdo
con deficiencia renal

Interespecies
animal quimérico

Útero
implantación • Nefronas: ¿humanas?
iPSC
• UB, estroma, CE: ¿cerdo?

Blastocisto
complementación

b
Deficiencia renal
riñón quimérico
embrión de cerdo

nefrona • Nefronas: ¿humanas?

iPSC
progenitores • UB, estroma, CE: ¿cerdo?

Inyección en el
nicho del riñón.

Figura 5 | Estrategias para la reconstrucción de riñones en animales grandes. un | La complementación de blastocistos implica la inyección de
células madre pluripotentes (PSC) en blastocistos que han sido manipulados para que carezcan de riñón, de modo que las PSC contribuyan
de manera dominante al riñón en desarrollo in vivo. Sin embargo, cabe señalar que las células residuales de cerdo provocarán un rechazo
hiperagudo; por lo tanto, todas las células progenitoras de nefrona (NPC), las células del linaje de la yema ureteral (UB), las células estromales
y las células endoteliales deben reemplazarse con células humanas. También se desconoce si es posible la generación de quimeras interespecies
humano­cerdo. Finalmente, la inducción de PSC humanas en blastocistos podría dar como resultado la distribución de células humanas no sólo al
riñón sino también a otros órganos, con posibles efectos no deseados. segundo | El problema de los efectos no deseados se puede minimizar
inyectando células del donante directamente en el riñón en desarrollo, en lugar de hacerlo en el blastocisto. Sin embargo, la inyección de NPC
derivadas de PSC inducidas por humanos (iPSC) daría como resultado la generación de riñones quiméricos que contienen algunos tejidos derivados
de cerdos (por ejemplo, UB, células estromales y células endoteliales (CE)). Tampoco está claro si la inyección de una población de células
de donantes mixtas que comprende muchos linajes (es decir, NPC, UB, células estromales y EC) en un nicho completamente vacante podría dar
como resultado la construcción de todo el riñón complejo en animales.

622 | OCTUBRE 2019 | volumen 15 www.nature.com/nrneph

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Reseñas

los embriones de cerdo85. Sin embargo, la eficiencia y el nivel
de quimerismo entre especies fueron bajos. Además, muchos
embriones mostraron un crecimiento retardado, lo que sugiere
que la contribución de las iPSC humanas podría haber interferido
con el desarrollo normal de los cerdos. En tercer lugar,
actualmente no es posible regular las proporciones de células
quiméricas dentro de los animales huéspedes. Después de la
inyección en el blastocisto, las células humanas pueden
distribuirse al riñón, pero también a otros órganos no objetivo,
Los avances en los organoides renales derivados de iPSC se
incluidos el cerebro y las células germinales, con consecuencias desconocidas.
Es importante destacar que el problema de los efectos no
deseados podría evitarse inyectando células del donante en la
etapa de formación del riñón (Fig. 5), en lugar de en la etapa de
blastocisto. En un paso inicial hacia tal enfoque, un estudio
inyectó NPC de ratón en riñones embrionarios ex vivo de ratones
transgénicos que expresaban el receptor de la toxina diftérica
en NPC positivos para Six2; La administración de difteria eliminó
las NPC derivadas del huésped sin afectar la población de
células del donante86. Los tejidos resultantes se trasplantaron
a otros ratones junto con la cloaca, lo que condujo al desarrollo
de nefronas de ratón donante. Los investigadores también
inyectaron NPC de rata en riñones ónicos de embriones de
ratón ex vivo y observaron su diferenciación en glomérulos y
túbulos renales después del agotamiento de los NPC derivados
del huésped, aunque los investigadores no trasplantaron estos
órganos a otro huésped ni examinaron las funciones de los
riñones quiméricos resultantes. . El siguiente paso sería inyectar
NPC derivados de iPSC humanas en los riñones en desarrollo
de ratas y cerdos. Sin embargo, dado que otras células derivadas
del huésped (por ejemplo, las derivadas de las UB, así como las
células estromales y las células endoteliales) no se eliminarán,
incluso si los NPC del huésped se eliminan con éxito87, las
posibles interacciones entre especies entre los NPC derivados
de donantes y se deben evaluar las células derivadas del
huésped. Si se producen interacciones, podría ser posible
intentar la generación de tejidos renales quiméricos entre
humanos y cerdos más maduros. De manera realista, el
trasplante seguro de riñón humano probablemente requerirá
eliminación completa de los tejidos derivados del huésped. Esta
eliminación podría llegar a ser posible gracias a los avances
tecnológicos en las tecnologías de edición de genes, como CRISPR.
Cas9. Sin embargo, aún no está claro si la simple inyección de
células de donantes mixtos de muchos linajes en un nicho
vacante será suficiente para generar una estructura renal
compleja completa en animales huéspedes.
Conclusiones
han desarrollado rápidamente durante los últimos cinco años.
Los organoides renales, que hasta la fecha estaban compuestos
principalmente por células del linaje MM, se han utilizado con
éxito para modelar enfermedades glomerulares y tubulares.
También se ha desarrollado un protocolo para los organoides de
la UB. Sin embargo, persisten obstáculos importantes para el
uso de estos sistemas como modelos experimentales y en
trasplantes. En particular, los estudios de perfiles de transcripción
y scRNA­seq han demostrado que los organoides representan
un sistema renal muy inmaduro. Los protocolos actuales para la
inducción de organoides renales tampoco generan el
complemento completo de células renales, particularmente con
respecto a poblaciones heterogéneas de células estromales, y
aún no se han establecido estructuras renales de orden superior
con vasculatura. Para superar estos obstáculos, se necesita
una mejor comprensión de los perfiles de expresión genética de
los riñones embrionarios humanos y de ratón a nivel unicelular
en diferentes etapas de desarrollo. Una mejor comprensión de
los mecanismos moleculares del desarrollo y la maduración de
los órganos se puede aplicar para impulsar el desarrollo de
órganos más maduros que contengan un complemento completo
de tipos de células renales. Estos esfuerzos, combinados con
otras técnicas emergentes como la edición genética y la
generación de quimeras interespecies, acelerarán los avances
científicos hacia la generación de órganos trasplantables, en
contraposición a los "organoides", en el futuro.
Publicado en línea el 5 de agosto de 2019

1. Grobstein, C. Interacción inductiva en el desarrollo de los metanefros del
ratón. J. Exp. Zoológico. 130, 319–339 (1955).
2. Auerbach, R. & Grobstein, C. Interacción inductiva de
Tejidos embrionarios después de la disociación y reagregación.
Exp. Resolución celular. 15, 384–397 (1958).
3. Kobayashi, A. et al. Six2 define y regula una población progenitora
de nefronas multipotente y autorrenovadora durante todo el
desarrollo del riñón de los mamíferos. Células madre
celulares 3, 169–181 (2008).
4. Osafune, K., Takasato, M., Kispert, A., Asashima, M.
& Nishinakamura, R. Identificación de progenitores multipotentes
en el riñón embrionario de ratón mediante un nuevo ensayo de
formación de colonias. Desarrollo 133, 151­161 (2006).
5. Pichel, JG y cols. Defectos en la inervación entérica y el desarrollo
renal en ratones que carecen de GDNF. Naturaleza
382, 73–76 (1996).
6. Moore, MW y cols. Anomalías renales y neuronales.
en ratones que carecen de GDNF. Naturaleza 382, 76–79 (1996).
7. Sánchez, MP et al. Agenesia renal y ausencia de neuronas entéricas en
ratones carentes de GDNF. Naturaleza 382, 70–73 (1996).
8. Schuchardt, A., D'Agati, V., Larsson­Blomberg, L., Costantini, F. y
Pachnis, V. Defectos en el riñón y el sistema nervioso
entérico de ratones que carecen del receptor de tirosina quinasa Ret.
Naturaleza 367, 380–383 (1994).
9. Costantini, F. y Kopan, R. Modelado de un órgano complejo: morfogénesis
ramificada y segmentación de nefronas en el desarrollo del riñón.
Desarrollo. Celda 18, 698–712 (2010).
10. Carroll, TJ, Park, J.­S., Hayashi, S., Majumdar, A.
& McMahon, AP Wnt9b juega un papel central en la
regulación de las transiciones mesenquimales a epiteliales que
subyacen a la organogénesis del sistema urogenital de
los mamíferos. Desarrollo. Celda 9, 283–292 (2005).
11. Barak, H., Huh, S., Chen, S. y Jeanpierre, C. FGF9 y FGF20
mantienen la potencia de los progenitores de nefronas en
ratones y hombres. Desarrollo. Celda 22, 1191­1207
(2012).
12. Auto, M. et al. Se requiere Six2 para la supresión
de nefrogénesis y renovación de progenitores en el riñón en
desarrollo. EMBO J. 25, 5214–5228 (2006).
13. Torres, M., Gómez­Pardo, E., Dressler, GR & Gruss, P.
Pax­2 controla múltiples pasos del desarrollo
urogenital. Desarrollo 121, 4057–4065 (1995).
14. Nishinakamura, R. et al. El homólogo murino de SALL1 es esencial
para la invasión de yemas ureterales en el desarrollo del
riñón. Desarrollo 128, 3105–3015 (2001).
15. Kanda, S. y otros. Sall1 mantiene los progenitores de nefronas y las
nefronas nacientes actuando como activador y represor. Mermelada.
Soc. Nefrol. 25, 2584–2595 (2014).
16. Magella, B. et al. El análisis multiplataforma de células individuales del
desarrollo renal muestra que las células estromales expresan Gdnf.
Desarrollo. Biol. 434, 36–47 (2017).
17. Rosselot, C. et al. La señalización de retinoides no autónomos
es crucial para el desarrollo renal.
Desarrollo 137, 283–292 (2010).
18. Bagherie­Lachidan, M. et al. Stromal Fat4 actúa de forma no
autónoma con Dachsous1/2 para restringir el grupo de
progenitores de nefronas. Desarrollo 142, 2564–2573 (2015).
19. Mao, Y., Francis­West, P. & Irvine, KDA Señal Fat4­Dchs1 entre las
células del estroma y del mesénquima de la tapa
Influye en la nefrogénesis y la ramificación de las yemas ureterales.
Desarrollo 142, 2574–2585 (2015).
20. Yu, J. et al. Una vía dependiente de Wnt7b regula
la orientación de la división de las células epiteliales y establece el eje
cortico­medular del riñón de los mamíferos.
Desarrollo 136, 161­171 (2009).
21. Mugford, JW, Sipilä, P., McMahon, Ja
& McMahon, AP La expresión de Osr1 demarca una población
multipotente de mesodermo intermedio que sufre una restricción
progresiva a un Osr1­
Compartimento progenitor de nefronas dependiente dentro del
riñón de los mamíferos. Desarrollo. Biol. 324, 88–98 (2008).
22. Taguchi, A. et al. Redefiniendo el origen in vivo de
Los progenitores de nefronas metanéfricas permiten la generación
de estructuras renales complejas a partir de células madre
pluripotentes. Célula madre celular 14, 53–67 (2014).
23. Taguchi, A. y Nishinakamura, R. Nephron
reconstitución a partir de células madre pluripotentes. Riñón Int.
87, 894–900 (2015).
24. Takasato, M. et al. Dirigir la diferenciación de células madre
embrionarias humanas hacia un linaje renal genera un riñón
autoorganizado. Nat. Biol celular. 16, 118­126 (2014).
25. Takasato, M. et al. Los organoides renales de células iPS humanas
contienen múltiples linajes y modelan la nefrogénesis humana.
Naturaleza 526, 564–568 (2015).
26. Morizane, R. et al. Los organoides de nefrona derivados de células
madre pluripotentes humanas modelan el desarrollo y
la lesión renal. Nat. Biotecnología. 33, 1193­1200 (2015).
27. Freedman, BS y cols. Modelado de la enfermedad renal con
Organoides renales mutantes CRISPR derivados de humanos

Reseñas de NATuRe | NEFROLOGÍA volumen 15 | OCTUBRE 2019 | 623

Machine Translated by Google
Reseñas
Esferoides de epiblastos pluripotentes. Nat. Comunitario. 6, 8715
(2015).
28. Przepiorski, A. et al. Un simple biorreactor basado
Método para generar organoides renales a partir de células madre
pluripotentes. Informes de células madre 11, 470–484 (2018).
29. Morizane, R. & Bonventre, JV Organoides renales:
un viaje traslacional. Tendencias Mol. Medicina. 23, 246–263 (2017).
30. Little, MH, Kumar, SV y Forbes, T. Recapitulando el desarrollo renal:
avances y desafíos.
Semín. Desarrollo celular. Biol. 91, 153­168 (2018).
31. Phipson, B. et al. Evaluación de la variabilidad en organoides del
riñón humano. Nat. Métodos 16, 79–87 (2019).
32. Taguchi, A. y Nishinakamura, R. Organogénesis renal de orden
superior a partir de células madre pluripotentes. Célula madre
celular 21, 730–746 (2017).
33. Volpato, V. et al. Reproducibilidad de moléculas.
fenotipos después de la diferenciación a largo plazo en neuronas
derivadas de iPSC humanas: un estudio ómico multisitio.
Informes de células madre 11, 897–911 (2018).
34. Potter, SS Secuenciación de ARN unicelular para el estudio del
desarrollo, la fisiología y la enfermedad. Nat. Rdo.
Nefrol. 14, 479–492 (2018).
35. Wu, H. et al. Análisis comparativo y refinamiento.
de la diferenciación de organoides renales derivados de PSC
humana con transcriptómica unicelular. Célula madre celular
23, 869–881 (2018).
36. Combes, AN, Zappia, L., Er, PX, Oshlack, A.
& Little, MH El análisis unicelular revela congruencia entre los
organoides renales y el riñón fetal humano.
Genoma Med. 11, 3 (2019).
37. Lindström, NO et al. Conservado y divergente
características de los tipos de células progenitoras mesenquimales
dentro del nicho nefrogénico cortical del riñón humano y de ratón.
Mermelada. Soc. Nefrol. 29, 806–824 (2018).
38. Lindström, NO et al. Reclutamiento progresivo de
progenitores mesenquimales revela un proceso dependiente del
tiempo de adquisición del destino celular en la nefrogénesis
humana y de ratón. Desarrollo. Celda 45, 651–660 (2018).
39. Wang, P. et al. Analizando la dinámica global
Perfiles moleculares del desarrollo del riñón fetal humano mediante
secuenciación de ARN unicelular. Representante celular
24, 3554–3567 (2018).
40. Menon, R. et al. Análisis unicelular de la dinámica de las células
progenitoras y la especificación del linaje en el riñón fetal humano.
Desarrollo 145, dev164038 (2018).
41. Miyoshi, T., Hiratsuka, K., García Saiz, E. y Morizane, R.
Organoides renales en medicina traslacional: modelado de
enfermedades y medicina regenerativa. Desarrollo. Din. https://
doi.org/10.1002/dvdy.22 (2019).
42. Wu, H., Kirita, Y., Donnelly, EL y Humphreys, BD
Ventajas de la secuenciación de ARN de un solo núcleo sobre
unicelular de riñón adulto: tipos de células raras y nuevos estados
celulares revelados en la fibrosis. Mermelada. Soc. Nefrol.
30, 23­32 (2018).
43. Tanigawa, S. et al. Organoides de nefrótico.
Las iPSC derivadas de la enfermedad identifican una localización
alterada de NEPHRIN y la formación de un diafragma en hendidura
en los podocitos renales. Informes de células madre 11, 727–740 (2018).
44. Hale, LJ y cols. Glomérulos humanos derivados de organoides en 3D
para el modelado personalizado de enfermedades de podocitos y la
detección de fármacos. Nat. Comunitario. 9, 5167 (2018).
45. Forbes, TA et al. Riñón derivado de iPSC del paciente
Los organoides muestran la validación funcional de un fenotipo
renal ciliopático y revelan mecanismos patogénicos subyacentes.
Soy. J. hum. Gineta. 102, 816–831 (2018).
46. Kim, YK y cols. Organoides de riñón humano editados genéticamente
Revelar mecanismos de enfermedad en el desarrollo
de podocitos. Células madre 35, 2366–2378 (2017).
47. Cruz, NM et al. La cistogénesis organoide revela una
Papel crítico del microambiente en la enfermedad renal poliquística
humana. Nat. Madre. 16, 1112­1119 (2017).
48. Pei, YA ¿modelo de cistogénesis de 'dos resultados' en la poliquistosis
renal autosómica dominante? Tendencias Mol. Medicina.
7, 151­156 (2001).
49. Czerniecki, SM et al. Proyección de alto impacto
mejora la diferenciación de organoides renales de las células madre
pluripotentes humanas y permite el fenotipado
multidimensional automatizado. Célula madre celular 22, 929–
940 (2018).
624 | OCTUBRE 2019 | volumen 15
50. Lackland, DT, Bendall, HE, Osmond, C., Egan, BM
& Barker, DJP El bajo peso al nacer contribuye a las altas
tasas de insuficiencia renal crónica de aparición temprana en el
sureste de los Estados Unidos. Arco. Interno. Medicina. 160, 1472
(2000).
51. Karner, CM et al. Señalización canónica Wnt9b
Equilibra la expansión y diferenciación de las células progenitoras
durante el desarrollo del riñón. Desarrollo 138, 1247­1257
(2011).
52. Blank, U., Brown, A., Adams, DC, Karolak, MJ
& Oxburgh, L. BMP7 promueve la proliferación de células
progenitoras de nefronas mediante un mecanismo
dependiente de JNK. Desarrollo 136, 3557–3566 (2009).
53. Brown, A. y otros. Papel de la compartimentación en
Diferenciación de progenitores de nefronas. Proc. Acad. Nacional.
Ciencia. Estados Unidos 110, 4641–4645 (2013).
54. Brown, AC, Muthukrishnan, SD y Oxburgh, L. Un nicho sintético para
células progenitoras de nefronas. Desarrollo. Celúla
34, 229–241 (2015).
55. Tanigawa, S., Taguchi, A., Sharma, N., Perantoni, AO
& Nishinakamura, R. Propagación selectiva in vitro de
progenitores de nefronas derivados de embriones y células
madre pluripotentes. Representante celular 15, 801–813 (2016).
56. Li, Z. et al. El cultivo 3D respalda la expansión a largo plazo de
progenitores nefrogénicos humanos y de ratón.
Célula madre celular 19, 516–529 (2016).
57. Chen, S. et al. Cambios intrínsecos dependientes de la edad y
Los contactos célula­célula regulan la vida útil del progenitor de nefrona.
Desarrollo. Celda 35, 49–62 (2015).
58. Mundel, P. et al. Los reordenamientos del citoesqueleto y los contactos
celulares inducen la formación de procesos durante la
diferenciación de líneas celulares de podocitos de ratón
inmortalizadas condicionalmente. Exp. Resolución celular. 236,
248–258 (1997).
59. Saleem, MA y cols. Un inmortalizado condicionalmente
Línea celular de podocitos humanos que demuestra la expresión
de nefrina y podocina. Mermelada. Soc. Nefrol. 13, 630–
638 (2002).
60. Chittiprol, S., Chen, P., Petrovic­Djergovic, D., Eichler, T.
& Ransom, la expresión, los comportamientos y las respuestas
del marcador RF varían en diferentes líneas de podocitos
cultivados condicionalmente inmortalizados. Soy. J. Physiol. Ren.
Fisiol. 301, F660–F671 (2011).
61. Canción, B. et al. La diferenciación dirigida del ser humano.
células iPS en podocitos renales. MÁS UNO 7, e46453 (2012).
62. Ciampi, O. et al. Generación de podocitos funcionales.
a partir de células madre pluripotentes inducidas por humanos. Res.
de células madre. 17, 130­139 (2016).
63. Musah, S. et al. Los podocitos humanos maduros derivados de células
madre pluripotentes inducidas reconstituyen la función de
la pared capilar glomerular del riñón en un chip.
Nat. Biomédica. Ing. 1, 0069 (2017).
64. Yoshimura, Y. et al. La manipulación de señales de patrones de nefronas
permite la inducción selectiva de podocitos a partir de células
madre pluripotentes humanas. Mermelada. Soc. Nefrol. 30, 304–321
(2019).
65. Sharmin, S. y otros. Los podocitos derivados de células madre
pluripotentes inducidas por humanos maduran hasta convertirse
en glomérulos vascularizados tras un trasplante experimental. Mermelada.
Soc. Nefrol. 27, 1778­1791 (2016).
66. Unbekandt, M. & Davies, JA Disociación de
Los riñones embrionarios seguidos de una reagregación permiten
la formación de tejidos renales. Riñón Int. 77, 407–416
(2010).
67. Ganeva, V., Unbekandt, M. & Davies, JA Un sistema mejorado de cultivo
de disociación y reagregación renal da como resultado nefronas
dispuestas organotípicamente alrededor de un único sistema de
conducto colector. Organogénesis 7, 83–87 (2011).
68. Kaku, Y. et al. PAX2 es prescindible para la formación de nefronas in
vitro a partir de células madre pluripotentes inducidas por humanos.
Ciencia. Rep. 7, 4554 (2017).
69. Soofi, A., Levitan, I. y Dressler, GR Dos nuevos alelos de inserción de
EGFP revelan aspectos únicos de la función Pax2 en
riñones embrionarios y adultos. Desarrollo. Biol.
365, 241–250 (2012).
70. Naiman, N. et al. La represión de la identidad intersticial en las
células progenitoras de la nefrona por parte de Pax2 establece
el límite nefrona­intersticio durante el desarrollo del riñón.
Desarrollo. Celda 41, 349–365 (2017).
71. Humphreys, BD y cols. El rastreo del destino revela el
Origen pericítico y no epitelial de los miofibroblastos en la fibrosis
renal. Soy. J. Pathol. 176, 85–97 (2010).
72. Kobayashi, A. et al. Identificación de un multipotente.
Población progenitora estromal autorrenovadora durante la
organogénesis del riñón de mamíferos. Informes de células madre
3, 650–662 (2014).
73. Lemos, DR et al. La interleucina­1 β activa una
Cambio metabólico dependiente de MYC en las células del
estroma renal necesario para la fibrosis tubulointersticial
progresiva. Mermelada. Soc. Nefrol. 29, 1690­1705 (2018).
74. Combes, AN et al. Análisis unicelular de la
El desarrollo de un riñón de ratón proporciona una visión más
profunda de la expresión del gen marcador y la diafonía ligando­receptor.
Desarrollo 146, desarrollo 178673 (2019).
75. Yokote, S. et al. Estrategia de excreción de orina para el tallo.
Riñones embrionarios generados por células. Proc. Acad. Nacional.
Ciencia. Estados Unidos 112, 12980–12985 (2015).
76. Serluca, FC, Drummond, IA y Fishman, MC
Señalización endotelial en la morfogénesis renal.
actual. Biol. 12, 492–497 (2002).
77. Homan, KA et al. Vascularización mejorada por flujo y maduración de
organoides renales in vitro. Nat. Métodos
16, 255–262 (2019).
78. van den Berg, CW et al. subcapsular renal
El trasplante de organoides renales derivados de PSC induce
neovasculogénesis y maduración glomerular y tubular significativa in
vivo. Informes de células madre 10, 751–765 (2018).
79. Bantounas, I. et al. Generación de nefronas funcionales mediante la
implantación de progenitores renales derivados de células madre
pluripotentes humanas. Informes de células madre 10, 766–779
(2018).
80. Murakami, Y. et al. Reconstitución del embrión
El riñón identifica la contribución de una célula donada a la
vasculatura renal tras el trasplante. Ciencia. Rep. 9, 1172 (2019).
81. Munro, DAD, Hohenstein, P. y Davies, JA Ciclos de formación del plexo
vascular dentro de la zona nefrogénica del riñón de ratón en
desarrollo. Ciencia. Rep. 7, 3273 (2017).
82. Munro, DAD y Davies, JA Vascularización del riñón en el embrión
y organoide: cuestionar las suposiciones sobre la
vasculogénesis renal. Mermelada. Soc.
Nefrol. 29, 1593­1595 (2018).
83. Goto, T. et al. Generación de tallo pluripotente.
Riñones de ratón derivados de células en ratas anéfricas dirigidas a
Sall1. Nat. Comunitario. 10, 451 (2019).
84. Yamaguchi, T. et al. Organogénesis entre especies
genera islotes funcionales autólogos. Naturaleza 542, 191­196
(2017).
85. Wu, J. et al. Quimerismo entre especies con células madre pluripotentes
de mamíferos. Celda 168, 473–486 (2017).
86. Yamanaka, S. et al. Generación de nefronas quiméricas limitadas entre
especies utilizando un sistema de reemplazo de células
progenitoras de nefrona condicional. Nat. Comunitario. 8, 1719
(2017).
87. Howden, SE, Vanslambrouck, JM, Wilson, SB,
Tan, KS y Little, MH El mapeo del destino basado en Reporter en
organoides de riñón humano confirma las relaciones de linaje de
nefronas y revela la formación sincrónica de nefronas.
Representante EMBO 20, e47483 (2019).
Agradecimientos
Agradezco a A. Taguchi, S. Tanigawa y a todos los demás miembros del
laboratorio Nishinakamura por sus contribuciones al establecimiento de
protocolos de organoides renales y por sus útiles debates.
Conflicto de intereses
El autor no declara intereses en competencia.
Información de revisión por pares
Nature Reviews Nephrology agradece a M. Little, R. Morizane y los demás
revisores anónimos por su contribución a la revisión por pares de este trabajo.
nota del editor
Springer Nature se mantiene neutral con respecto a reclamos jurisdiccionales
en mapas publicados y afiliaciones institucionales.
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