Clase n°6

Olfato.

Las células olfativas son neuronas pero con una especialización, que son unas estructuras
que tienen forma de cilio.

Odorante: Es un compuesto químico volátil con que genera una percepción de olor.
Feromona: Pueden ser proteínas o moléculas pequeñas volátiles, que son liberadas por un
individuo y son recibidas por otro de la misma especie. Llevan información que muestra el
sexo, la raza, la especie, etc. Pueden provocar cambios endocrinos y a nivel del
comportamiento del individuo receptor.
Sistema olfatorio.
Si vemos un esquema del sistema olfatorio, nos podemos encontrar con lo siguiente:
Tenemos un organismo o un objeto que produce un odorante o un agente que genera olor.
Por ejemplo las flores, y en la cavidad nasal nos vamos a encontrar con la presencia de
estas células olfatorias.

Si nos centramos en la cavidad nasal vamos a encontrar un epitelio olfatorio que está
representado por 3 tipos de células. Los que van a participar directamente en detectar
olores son las células olfatorias o neuronas olfatorias. Los penachos o cilios que poseen es
donde se reciben los odorantes. Si nosotros amplificamos estas terminales de estos sitios
encontramos con que en esta estructura, al igual como ocurrió en los fotorreceptores, al
igual como ocurrió en los cilios de las células ciliadas, están los canales que permite la
traducción del odorante. Estas neuronas se van a proyectar desde el epitelio olfatorio hacia
el bulbo olfatorio.

En el bulbo olfatorio la acción de las neuronas olfatorias, es hacer sinapsis a nivel de una
estructura llamada glomérulo que está dentro del bulbo olfatorio. Que van a realizar sinapsis
con otro tipo de células que se van a dirigir hacia el cerebro, específicamente hacia regiones
que están relacionadas con la corteza de Olfatorio.
Linda Pak y Richard Axel, son famosos, porque develaron como ocurre la transducción en el
sistema olfatorio.
Estamos situados a nivel del bulbo olfatorio, y en este vienen neuronas olfatorias de la
cavidad nasal y hacen sinapsis con otras. Hay dos tipos, pero las principales son las Células
mitrales y están para dirigir sus acciones hacia los centros superiores.
Siempre que veamos un esquema, vamos a ver que las neuronas están con colores
distintos. Porque cada neurona olfatoria va a expresar el mismo tipo de receptor. Por eso es
que se muestra, por ejemplo. Rojas, significa que presente el mismo tipo de receptor de
odorantes, las púrpura, el mismo tipo, las Verdes, mismo tipo, etc. Cuando llegan al bulbo
olfatorio y se juntan en el glomérulo con las otras células, como por ejemplo las células
mitrales. En los glomérulos solamente van llegar a axones de neuronas olfatorias que
tengan el mismo tipo de receptor de odorante, por eso es que también se mantiene el color.
La relación que existe es de aproximadamente 1000 axones de neuronas olfatorias hacen
sinapsis con una neurona mitral.
Otro dato importante que se tiene que considerar es que en el caso de la especie humana,
nosotros tenemos en torno a 350 tipos de odorantes. En el caso de ratones, por ejemplo,
tienen alrededor de 1000 tipos de receptores de odorantes

distintos. Entonces los ratones poseen más versatilidad al momento de reconocer

odorantes.
Interneuronas del bulbo olfatorio.
Identidad sensorial de los OSN.
Un tipo de receptor de odorante de neurona olfatoria que tiene este tipo de odorante (OR
A), no es que tenga un solo canal, sino que tiene muchos canales pero del mismo tipo.
Interesantemente los axones viajan hacia al bulbo olfatorio y todos los que expresan el
mismo tipo de receptor llegan al mismo punto que se llama glomérulo y es aquí, donde se
hace sinapsis con las células, mitrales, las cuales van a llevar la información hacia los
centros superiores de la corteza.

Estructura química de algunos odorantes.

La estructura química de un odorante, nos da sus características, es decir, que poseen un
olor específico que se puede detectar, algunos más que otros, ya que existen personas que
son especialmente sensibles a algunos olores. Por ejemplo:

Molécula Olor Concentra ción de activación Imagen

Etanol Olor típico del alcohol. 2 mM
Acetato de etilo Olor del éter. 0.06 mM.
Benzaldehíd o Olor típico de las almendras. 0.3 μM
Ácido hidroxioicol actona Olor característico del coco. 0.05 μM
Pentadecalo lactona Olor tipo del almizcle. 7 nM
Dimetilsulfur o Olor típico de las cosas en descomposición
o putrefacción. 5 nM
Sxr-Androst- 16-en-3-one Olor de la orina. 0.6 nM
2,3,6-
tricloroaniso l Olor de los mohos. 0.1 nM
Geosmina Olor a tierra. 0.1 nM
2-trans-6- cis- nonadienal Olor del pepino (fruta). 0.07 nM
Β-Ionona Olor de las violetas. 0.03 nM
2-Isobutil-3- metoxipiran sina Olor del pimiento. 0.01 nM
El receptor de la neurona olfatoria va a ser específico o relativamente específico para cada
una de las moléculas en la tabla, más bien, va a responder a la estructura que presentan
estas moléculas.

Estructura del epitelio olfatorio.

Hay 3 tipos de células que confirman el epitelio olfatorio en la cavidad nasal y estas son:
Célula olfatoria: Con sus cilios y por debajo de los cilios hay una mucosa que corresponde
al moco que recubre la cavidad nasal.
Células soportes: Están entre medio de las neuronas y poseen un rol semejante a la glía, en
cuanto a participar en la fisiología de las neuronas olfatorias.
Células basales: Son muy importantes porque son las que están secretando la mucosa, el
moco.
Células madres: Originan nuevas células olfatorias. En promedio están entre un ciclo de 4 a
8 semanas, en que las neuronas nacen, se regeneran y crecen.
El moco posee una función súper importante en la cavidad nasal, ya que permite adherir los
odorantes a él para que sean fijados por las células y también anticuerpos, o sea, posee un
rol defensivo del tejido ante la acción de ciertos patógenos.

Se realiza un experimento por patch-clamp, donde una primera pipeta libera los odorantes
en los cilios de la célula y otra los libera en el soma celular. ¿Qué pasa con la generación de
las corrientes en ambos casos? ¿Por qué?
Cuando se liberan los odorantes en el cilio, la corriente que se genera es muy grande pero
cuando se aplica lejos de los cilios, se forma una corriente muy débil. Esto es debido a que
los receptores se encuentran en la zona de los cilios y no del soma.

Receptores de odorantes.
Si nosotros amplificamos los canales, nos vamos a encontrar con que hay un receptor de
odorantes con 7 dominios transmembrana, o sea, que está acoplado a una proteína G,
posee aminoácidos que van a ir variando porque tenemos diferentes tipos de odorantes.
La maquinaria de transducción incluye una adenilato ciclasa (AC) e incluye un canal de
iones, que es regulado por nucleótidos cíclicos (cAMP).
Entonces los odorantes se unen al receptor activando la proteína G, la proteína activa la AC
y esta forma cAMP y este nucleótido cíclico abre el canal de iones. Estos canales iónicos se
denominan canales CNG. Es un mecanismo mucho más parecido al de la visión, en vez de
la audición.

Transducción olfatoria.
Visto en más detalles esta transducción se ve de una forma mucho más compleja, pues
tenemos el receptor acoplado a la proteína G, después vemos la AC y por último el CNG.
Hay más canales, por ejemplo, los de cloruro que es tremendamente importante.

Entonces llega la molécula odorante (estímulo) y se une al receptor, al realizar esto se

activa la proteína G y esta molécula activa la AC (adenilato ciclasa), esta toma ATP y lo
transforma en cAMP este nucleótido cíclico se une al canal CNG abriendo el canal. Una vez
abierto entra Ca2+ y Na+, por lo que ocurre una despolarización en la neurona olfatoria
pero, además, ese Ca que entra tendrá 2 efectos, tendrá un feed back (-) sobre el mismo
canal CNG, vale decir que va a promover que se cierre mientras aumenta el Ca intracelular
pero también ese ion Ca va abrir el canal cloruro (Cl-), por cuanto este es un canal de Cl-
regulado por Ca2+.
Lo que pasa en particular en las células olfatorias, es que el cloruro es más adentro que
afuera. Entonces si se abre el canal cloruro, los iones cloro tienden a salir según su
gradiente electroquímico. Por ende, se va a despolarizar esta membrana porque entra Ca y
Na, y a su vez sale Cl.
Cuando hay exceso de Ca, funciona la bomba de Na/Ca que su función es remover el Ca
intracelular.

Es importante tener en cuenta que el Ca no puede estar libre en el citosol de la célula, por lo
que hay 2 opciones. Una de ellas es que se guarde en el retículo, y la segunda es que lo
expulsa por este canal de Na/Ca. Esto porque el Ca al ser segundo mensajero activa
montones de cascadas de transducción dentro de una célula.
Si nosotros amplificamos un cilio de la célula olfatoria podremos ver que en la membrana
del cilio está la proteína G y a su lado la AC que forma cAMP, donde esta misma molécula
se une a los canales CNG abriéndolos y permitiendo la entada de Na y Ca. Mientras que el
Ca aumenta dentro de la célula comienza a cerrar su propio canal pero a su vez estará
abriendo el canal de Cl y esto tendrá como efecto neto, la despolarización.
Si nosotros medimos el voltaje en el cilio, el soma y en el axón, tendremos el siguiente
patrón: El cilio posee un potencial de acción diferente a los ya vistos (imagen), en cambio en
el soma vamos a tener el potencial de receptor que es el que viene migrando desde el cilio,
montado sobre potenciales de acción que son más canónicos y al llegar al axón solo
veremos potencial de acción, sin potencial de receptor porque este ya se diluyó debido a la
lejanía de donde se originó.
Algo en particular es que los canales de Cl- reciben el nombre de ANO2.

Esta transducción es de tipo metabotrópica porque el receptor está unido a una proteína G y
es esta quién comienza con la cascada de transducción.
El ionotrópico corresponde cuando el estímulo, en este caso el odorante se hubiese unido
directamente al canal y lo abre es ionotrópico. En este caso el estímulo se une a un receptor
y ese receptor echa a andar una maquinaria, incluida una proteína G, esta definición
corresponde a los metabotrópicos, sirviéndonos para diferenciar cual es cual.

Componentes de la corriente en OSN.

En la corriente olfatoria podemos reconocer la corriente de CNG y la otra es la corriente del
canal ANO2, es decir, son 2 corrientes.
Si observamos el gráfico, podemos ver que la parte en negro corresponde a la corriente
neta, en púrpura a CNG y en verde a ANO2 (movimiento de cloruro).
Entonces, es el canal ANO2 el que contribuye más a la corriente que se forma en la célula.

Respuesta a odorantes seleccionados.

El primer odorante en aplicar es el cineole, que corresponde a un odorante característico del
eucalipto, luego tenemos el acetato isoamilo que es el olor característico de la banana o
platano, y por último el acetofenon.
Se realiza el experimento en 3 neuronas con estos 3 odorantes y se busca corriente
(respuesta) a los diferentes odorantes. Dando los siguientes resultados.

Odorante/neurona Cineole Acetato de isoamilo Acetanon

Neurona 1
Neurona 2
Neurona 3
Los receptores de odorantes son receptores específicos, ya que si vemos en la neurona n°1
posee un solo tipo de receptor a odorantes, el cual puede responder a 3 tipos de odorantes
diferentes. Entonces podemos decir que este receptor de la neurona es promiscuo, ya que
sirve para codificar para varios estímulos diferentes.

Receptores olfatorios.
Dentro de un esquema general, podemos ver un receptor para odorantes, una proteína G,
AC, el cAMP, CNG, ANO2 y el efecto neto es la despolarización.
Ahora ¿De qué manera explicamos que una neurona olfatoria tenga un único tipo de
receptores olfatorios? Esto no está muy claro pero lo que se cree que el mismo cAMP activa
una proteína kinasa, la cual se transloca al núcleo y en el núcleo estaría modulando la
actividad de la expresión génica, y de alguna manera esta misma cascada sería
responsable de en el genoma de esta célula solo se exprese los genes que codifican al
odorante. Por ejemplo, el receptor que codifica al odorante tipo A y no al tipo B y/o C.
Porque en el genoma de esta célula está la información para expresar otros tipos de
odorantes pero solo se expresa 1. Esto ocurre porque se cree que esta misma cascada
estaría activando

señales que inhiben la expresión de los otros tipos de receptores para asegurarse que solo
exprese un tipo de receptor de odorante.

Código combinatorio de información olfatoria.

Órgano vomeronasal.
Por lo general los roedores, son un modelo ampliamente usados en ciencias,
particularmente en biología, puesto que existen muchas similitudes fisiológicas debido a que
lo que pasa en ratones pasa de igual forma en los humanos.
Entonces desde el epitelio olfatorio salen los axones que van a entregar la información al
bulbo olfatorio y cada uno de los puntos de colores que se observan en la imagen
corresponden al biodema.
Existen odorantes y también feromonas. En el caso de las feromonas, en mamíferos no
primates existe una estructura que es el órgano vomeronasal, el cual está conectado a otra
estructura nerviosa que corresponde al bulbo olfatorio accesorio y es en este sector el lugar
donde se han descrito neuronas para la

detección de estas feromonas. No obstante, hace unos años atrás se logró describir que en
el epitelio olfatorio principal hay neuronas que participan en la detección de feromonas en
roedores.
Dentro del epitelio olfatorio se describió una población de neuronas que usan un canal de
iones bastante particular que corresponde al canal de iones TRPM5.

Paper
El canal TRPM5 está acoplado a una proteína fluorescente de color verde o GFP, esta
proteína es importante porque permite identificar bajo un microscopio de fluorescencia, si es
que la célula expresa o no el canal TRPM5. Entonces todas las neuronas que florezcan
verdes significa que expresan GFP pero además expresan el TRPM5 y las que no
fluorecen, no expresan el canal TRPM5. Las características que tiene es que es un canal
que permea Ca.
Respecto al paper, en la letra A hay 5 neuronas del sistema olfatorio que fueron digregadas,
de esas 5, se les aplicó un filtro para estimular la proteína fluorescente verde, de las 5 solo
1 fluoresce. Entonces la célula que se pigmentó corresponde a una célula TRPM5 GFP+, o
sea, expresa el TRPM5.
Por otro lado en la imagen B solo hay una neurona y al aplicar el filtro se evidencia que
pertenece a células TRPM5 GFP-, básicamente no expresa la TRPM5 y la GFP.
Se trabajó con ratonas y se les aplico diferentes estímulos que corresponden a diferentes
odorantes, que son un mix de odorantes y de feromonas.
Mediante una técnica que se denomina lux-clamp, a diferencia del patch-clamp no se rompe
una porción de la membrana para quedar anclado de forma eléctrica, aquí tocamos con la
pipeta y quedamos sellados con la membrana.
Se utilizaron feromonas de machos y un mix de odorantes. Inicialmente se aplicaron bajas
concentraciones de feromonas (total de 3). De las 3 feromonas

que se utilizaron solo hubo respuesta a 2 feromonas pero las neuronas que expresaron
TRPM5 no respondieron a odorantes. Ahora estas mismas neuronas se le aplican las
mismas feromonas pero a una concentración mayor, igual que antes solo 2 respondieron
pero una más que otra y en el mismo caso anterior, no hubo respuestas a odorantes.

En el caso el control (no expresan TRPM5) y se llevan la misma concentración del primer
intento de las TRPM5+. En este caso no hubo respuestas ni a odorantes ni a feromonas. Se
aumenta la concentración de las feromonas y hubo respuestas a las 3 feromonas y en el
caso de los odorantes también hubo respuesta.
Entonces lo que tenemos son 2 subpoblaciones de neuronas, que corresponden a las que
expresan TRPM5 y no responde a odorantes pero si responden a feromonas, y las que no
responden a odorantes y feromonas pero al aumentar la concentración hay respuestas para
ambas variables (feromonas y odorantes).
Siempre que se trabaja con neuronas es de suma importancia tener la presencia de un
agonista, es decir, que las primeras concentraciones no sean muy grandes, esto porque las
respuestas de las neuronas son muy variables respecto al medio. Porque si hay mucha
concentración puede que el efecto que observemos en las neuronas sea de más que nada
a una respuesta inespecífica que una respuesta específica.
Luego se fueron disectando las neuronas para conocer los componentes moleculares que
poseen las TRPM5+. Para ello, se utiliza la técnica del inmuno cito química.
Tenemos una neurona TRPM5 GFP-, por lo que se utiliza un anticuerpo para que reconozca
a CNG que estaba acoplado a un fluoróforo de color rojo, por lo que la célula brilla de un
color rojo, demostrando que el anticuerpo primario reconoció la CNG y por consecuencia el
Ac secundario reconoció al Ac primario uniéndose a él.
Tenemos el otro caso de una neurona que expresa TRPM5, por lo que se ve de un color
verde y se aplican Acs para que reconozcan CNG, revelando que la neurona no solo
expresa TRPM5, sino que también CNG.
Se tomaron otras neuronas, que al igual que los primeros sujetos del experimento anterior,
no expresan TRPM5, pero a diferencia del caso anterior, acá se utiliza una anticuerpo que
reconoce al canal ANO2 que es un canal activado por Ca y el Ac fue capaz de reconocer los
canales de ANO2. Entonces tenemos que las neuronas que no expresan TRPM5, expresan
CNG y ANO2.
En cambio estas células que presentan TRMP5 no presentan canales de ANO2, ya que
nunca se expresó el color que refleja la inmunocito flurorescencia (color púrpura). Entonces
que las neuronas que expresan TRPM5, expresan CNG pero no expresan ANO2.
Luego se llevó a la farmacología, siendo el grupo control las neuronas TRPM5+, es decir,
que son GFP+. Se aplica feromonas a la muestra control y respondió a ellas. Después se
les aplicó una droga que se llama TPPO que corresponde a un bloqueador de TRPM5 y
como consecuencia la respuesta ante una feromona fue mucho más débil que la anterior.
Luego se le quitó esta droga a la neurona y la respuesta volvió a aumentar. Por lo tanto, es
una reacción reversible.

La respuesta de los controles a feromonas fue muy alta, en comparación a las que poseían
TPPO, que fue muy baja. Se les aplica un test estadístico y aparece un * dando a entender
que existe una diferencia significativa. Esto significa que la respuesta con TPPO se redujo
debido a que se estaba inhibiendo la TRPM5.
En una segunda muestra se les aplica odorantes a un grupo control y obtenemos una
respuesta, lo mismo con neuronas en un medio con odorantes y la presencia de TPPO y la
respuesta de estas neuronas fue igual o semejante que las células control, esto porque el
efecto de la TPPO solo afecta a TRPM5.
También se les aplicó altas concentraciones de las feromonas y las respuestas del TPPO se
mantuvieron igual. Esto ocurrió porque estas neuronas no expresan el TRPM5, por lo que
aplicar un inhibidor a ese canal es como tratar de inhibir a la nada.

Ahora se utiliza el ácido miflumico, porque se quiere saber qué es lo que pasa con ANO2. El
ácido miflúmico es un inhibidor de los canales ANO2.
Entonces tenemos una neurona que expresa GFP y por obviedad expresa TRPM5, se les
aplica odorantes a ambas muestras y no hubo respuestas de parte de ninguna de las 2
neuronas, Como resultado se esperaba que la TRMP5+ no diera respuestas con odorantes,
por lo que se toma un grupo control.

En otro experimento se les aplica feromonas y hay respuestas a las feromonas de parte de
ambas muestras, los controles presentan corrientes y auqellas que poseen ácido miflumico
presentan de igual forma una respuesta ante el medio.
Al comparar ambas respuestas, observamos que las respuestas no son muy diferentes.
Como conclusión de este experimento se esperaban las respuestas que se obtuvieron
porque no existía un blanco para el inhibidor.
Un cuarto experimento es realizado pero, ahora, nuestro grupo control son TRPM5-, solo
responden a feromonas y odorantes a altas concentraciones. Entonces se aplican los
odorantes en altas concentraciones y hay respuestas, en el caso de la muestra con ácido
miflumico la respuesta es menor.
Las otras neuronas que no expresan GFP a altas concentraciones de feromonas y vemos
que responden a las feromonas y con ácido miflumico la respuesta es muy diminuta. Al
cuantificar podremos ver que la respuesta a odorantes es sumamente diferente, puesto que
en el control fue alta, pero en presencia del ácido miflumico no fue muy alta, lo mismo para
las respuestas a feromonas, siendo en el control respuestas bastantes altas, pero en las
muestras con ácidos miflumicos la respuesta es baja. Por lo tanto, hay diferencias
significativas.
A modo de resumen, las neuronas olfatorias que expresan TRPM5 responden a feromonas
y no responde a odorantes, además presentan el canal CNG pero no presentan ANO2. Por
otro lado, las neuronas TRPM5-, es decir, son GFP-. No responde a bajas concentraciones
de feromonas pero si a altas concentraciones de odorantes, expresan CNG y ANO2. Esto
se visualiza con inmuno

fluorescencia y se puede reafirmar al utilizar bloqueadores contra TRPM5 (TPPO) y

bloqueadores contra ANO2 (ácido miflurico).
Entonces a las neuronas TRPM5+ si se les aplica feromonas, tendremos una respuesta
(corriente), se le aplica LCD que sire como bloqueador para el canal de CNG. Por lo tanto,
se inhibe la respuesta, por lo que se cuantifica como una respuesta mínima y al extraer el
LCD del medio la respuesta vuelve a la normalidad, por lo que se le considera como una
reacción reversible. Existen diferencias significativas.
Se utiliza una nueva forma de muestreo a las muestras denominada imagen de calcio, que
mide la cantidad de calcio en los cilios. Entonces para medirlo es necesario saber que
dentro de un gráfico del espectro fotométrico, mientras más cercano al rojo hay una mayor
concentración de Ca y mientras más cercano al azul menor concentración de Ca.

El Ca varía dentro de los cilios celulares, porque lo que nosotros sabemos es que el Ca
entra por un canal (CNG) y dentro de la célula está concentrado pero con el tiempo tiende a
fluir, entonces al aumentar el Ca se propaga la despolarización.
En un nuevo muestreo por imagen de Ca, se aplican feromonas y encontramos una “marea”
de Ca. Después se aplica el LCD que bloquea el canal CNG, por ende, no se encuentra
presencia de Ca, y una vez se extrae el LCD el Ca vuelve aparecer en la imagen de Ca.
Si se bloquea un canal un algún inhibidor y se le agrega un estímulo apenas uno saque el
bloqueador, es altamente probable que no se tenga respuesta. Porque aún pueden haber
moléculas que aún sigan unidas al canal. Por lo tanto, uno tiene que lavar el cultivo.
Ahora se vuelve a experimentar con las neuronas aplicándoles feromonas pero en un medio
que contenga 0 Ca. Entonces al momento de aplicar la imagen de Ca no hay respuesta al
Ca, debido a que no hay Ca en la concentración.
Ahora se vuelve a aplicar Ca pero en vez de feromonas, se utilizan odorantes. Por lo que la
respuesta es nula ya que se están trabajando con neuronas TRPM5+ y estas no responden
a odorantes.

Medio 1:
Se vuelve a experimentar pero con condiciones diferentes con neuronas TRPM5+, donde
en un medio tendremos Ca y luego se aplica TPPO y en el otro medio no hay presencia de
Ca y con el tiempo se le aplica TPPO y LCD.
Entonces se aplica feromonas y la muestra control tiene respuesta y al aplicar el TPPO la
respuesta es más baja
Medio 2:
En el segundo medio donde la concentración de Ca es nula, la neurona control, responde a
Ca y al aplicar TPPO también responde a feromonas, pero al aplicar LCD la respuesta es
débil.
Entonces nos damos cuenta que en el medio 2 la respuesta ante feromonas es de mayor
envergadura que el control del medio 1 y cuando se aplica el TPPO la respuesta sigue
siendo fuerte e incluso mayor que en el control del medio 1, pero al aplicar el LCD la
respuesta decae, siendo muy menor en comparación al control del medio 1.
Por lo tanto, salta una duda y es ¿Cómo se explica que en un medio donde hay
concentración de Ca las respuestas sean menores que en el medio donde la concentración
de Ca es nula?
Esto ocurre debido a que el Ca es más negativo y al ser así a medida que aumenta la
concentración del ion dentro de la célula el canal de Na/Ca se irá cerrando, como forma de
regulación. Por lo tanto, al no existir el Ca en el medio extracelular el canal nunca se ve
afectado por el Ca, es decir, no se cierra ya que el único ingreso es del Na, permitiendo que
las feromonas puedan entrar de forma libre.
Se sabe que al trabajar con la farmacología siempre existe el riesgo de que un inhibidor a
ciertas concentraciones pueda inhibir más de un canal o activar otro mientras inhibe uno.
Por lo que se decide trabajar con ratones K.O al TRPM5, cuando hablamos de
K.O nos referimos a que no expresa cierta proteína, o sea, que está modificado
genéticamente para que no exprese el TRPM5.

Tenemos la comparación del wild type con el K.O. cuando hablamos de wild type nos
referimos al ratón común y corriente, es decir que no se encuentra modificado
genéticamente.
En el caso de los ratones wild type, no expresan el TRPM5 pero sí el CNG y el ANO2. En
cambio, los ratones K.O expresan el CNG pero no expresan el ANO2.
Este experimento se realizó para confirmar los resultados anteriores.
Entonces a los ratones GFP- se les aplica odorantes y feromonas y responden a ambos. A
continuación a los ratones GFP+ (K.O) y no responde a odorantes, lo cual era esperable,
pero tampoco responde a feromonas ya que no expresa el TRPM5.
Se extrae un trozo de membrana de un cilio de la neurona. Entonces se mide la respuesta
eléctrica fisiológica de los canales presentes en el trozo de membrana, y se observa que a
mayor concentración de Ca menor es la respuesta y nos damos cuenta que esta inhibición
es de tipo reversible.
Cuando se aplica el TPPO, se observa que antes de la aplicación del inhibidor hay corriente
y al aplicarlo la respuesta es prácticamente 0 y al sacar el TPPO, reaparece la respuesta.
Entonces se aplica cAMP y aparece respuesta ya que abre el CNG (canal de Na/Ca) y al
aplicar el cAMP + el TPPO la respuesta disminuye una pequeña porción de la vez pasada.
Esto permite demostrar que había una diferencia entre neuronas. Se compara las neuronas
tradicionales que son las que expresan ANO2, entonces se une el odorante al receptor y la
proteína g activa una AC (adenilato ciclasa) y el ATP pasa a cAMP y esta molécula abre el
canal CNG donde entra Ca y este ion abre ANO2 y sale Cl- permitiendo que se produzca la
corriente. Sabemos que el Ca tiene un efecto de feed back- sobre el CNG.

La diferencia recae en las neuronas que no expresan el ANO2 pero expresan el TRPM5.
Entonces se une la feromona y se activa la proteína G, activando a su
vez una AC que da origen al cAMP y abre a CNG entrando Ca dentro de la célula, pero
ahora el Ca va abrir el TRMP5 permitiendo el transporte de Na (entra) y K (sale). Entonces
no hay corriente de cloruro porque no hay ANO2, sino que hay una corriente adicional de
Na que es mediada por TRMP5.