MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

MEDIOS DE CULTIVO LÍQUIDO

Caldo con carne picada

Este medio se emplea para enriquecer y conservar el desarrollo de bacterias anaerobias. Los trozos de carne proporcionan
un sustrato proteico para las enzimas proteolíticas, que actúan como sustancias reductoras manteniendo un potencial de
óxido-reducción bajo y de algún modo evitan que las bacterias de crecimiento rápido sobrepasen a las formas más lentas.
Si se coloca una capa de vaselina líquida sobre un caldo con carne picada en el que se ha cultivado una bacteria anaerobia,
muchos microorganismos permanecerán viables, a temperatura ambiente, durante varios meses. El medio con carne picada
no necesita ser incubado en anaerobiosis para permitir el crecimiento de los anaerobios.

Caldo nutritivo
Contiene extracto de carne y cloruro sódico. Puede complementarse con peptonas, extracto de levadura y/o glucosa.
Asimismo, puede incorporar un tampón. Este tipo de medio se encuentra comercializado bajo diferentes denominaciones,
según su formulación más o menos rica: caldo de infusión de cerebro y corazón (BHI), caldo
triptona de soja (TSB), caldo brucela, caldo Columbia, etc.

Caldo para Gram negativos

Se emplea como caldo selectivo para el cultivo de Salmonella y Shigella a partir de muestras de heces e hisopos rectales.
Contiene citrato de sodio y desoxicolato sódico (una sal biliar) que destruyen los microorganismos Gram positivos e inhiben
la multiplicación temprana de los coliformes. La adición de mayor cantidad de manitol que de glucosa estimula el
crecimiento de los patógenos fermentadores de manitol y no es favorable para Proteus. El medio se tampona para mantener
el pH neutro aún después de la producción de metabolitos bacterianos ácidos.
Para obtener el máximo beneficio de sus propiedades selectivas, el caldo GN debe ser subcultivado después de 6-8 horas
tras la inoculación e incubación iniciales, ya que después de este período los coliformes sobrepasan a los patógenos.

Caldo selenito F
Caldo con selenito sódico que en ocasiones se suplementa con cisteína, diseñado para el enriquecimiento de salmonelas. El
selenito inhibe el crecimiento de coliformes y enterococos en las primeras 12 horas de incubación mientras que Proteus y
Salmonella no son inhibidos.

Caldo tetrationato
Es selectivo para especies de Salmonella y Shigella. Caldo base de peptona que incluye iodo, ioduro potásico, sales biliares,
tiosulfato de sodio y tetrationato (generado en el medio por el agregado de la solución iodo-iodurada) que permiten el
desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato reductasa, como Salmonella, pero inhiben el desarrollo de
microbiota acompañante como bacterias Gram positivas y resto de enterobacterias.

Caldo tioglicolato
Es el caldo más comunmente usado en microbiología clínica. Favorece el crecimiento de anaerobios, aerobios,
microaerófilos y microorganismos exigentes. Contiene 0,075% de agar para evitar que las corrientes de convección
transporten el oxígeno atmosférico a toda la masa del caldo. El ácido tioglicólico también actúa como agente reductor,
disminuyendo aún más el potencial de óxido-reducción del medio.
Con el agregado de muchos nutrientes como caseína, extractos de levadura y de carne, vitaminas y otros, el medio permite
el crecimiento de la mayoría de las bacterias patógenas.
Se puede distinguir la diferencia entre el desarrollo difuso de los bacilos facultativos Gram negativos y el crecimiento
globuloso de los cocos Gram positivos. Los aerobios estrictos tienden a crecer formando una película delgada sobre la
superficie del caldo. Para el cultivo de los anaerobios es mejor suplementar el caldo tioglicolato con hemina, vitamina K y
bicarbonato sódico.

Caldo tioglicolato Campy

Medio de apoyo selectivo para la recuperación de especies de Campylobacter. Se trata de un caldo tioglicolato
suplementado con una concentración aumentada de agar y antibióticos.

Caldo Todd-Hewitt con sangre y antibióticos

Se utiliza para la selección y enriquecimiento de Streptococcus agalactiae en muestras de tracto genital femenino. El caldo
Todd-Hewitt, que se emplea para el enriquecimiento de estreptococos, se suplementa con ácido nalidíxico y gentamicina o
colistina para una mayor selectividad.

Medio de Diamond
Medio de cultivo empleado que favorece considerablemente el crecimiento y la multiplicación de Trichomonas vaginalis.
El medio de Diamond contiene tripticasa de peptona, extracto de levadura, maltosa, L-cisteína, ácido L-ascórbico, suero
bovino, penicilina G y estreptomicina. La incorporación de agar en el medio limita a los microorganismos contaminantes
en su mayoría a la porción superior del tubo del ensayo, mientras que ayuda a mantener las condiciones microaerófilas en
el fondo del tubo, donde Trichomonas se encuentra en grandes cantidades.

Medio de Kligler
La prueba de Kligler es una prueba múltiple que permite conocer si una determinada bacteria (inicialmente se diseñó para
la identificación de enterobacterias) produce ácidos y gases a partir de la glucosa, de la lactosa o de ambos a la vez. También
sirve para investigar si es capaz de producir sulfhídrico. El medio incorpora glucosa y
lactosa en proporción 1:10, respectivamente. Lleva, además, una fuente de azufre (tiosulfato sódico) y una fuente de hierro
(sulfato ferroso). Como indicador ácido-base se añade rojo fenol (pH neutro: color rojo; pH ácido: color amarillo). La parte
de arriba del medio se denomina pico de flauta y la de abajo, fondo. Ambas deben tener la misma altura, aproximadamente
3 cm. La siembra se puede realizar con asa o con hilo (fondo en picadura y pico de flauta por estrías) y la incubación es de
24 a 48 horas a 37ºC.
Interpretación de los resultados:
1. Fondo y pico de flauta amarillos (ácido)
La bacteria fermenta la glucosa y la lactosa (si el medio aparece roto, significará que se han producido gases).
2. Fondo negro y pico de flauta amarillo (ácido)
La bacteria fermenta la glucosa y la lactosa y produce sulfhídrico (aunque no se vea el color amarillo en la zona que cubre
el precipitado negro, debe suponerse que está amarillo porque es necesario un pH ácido para que se forme el precipitado).
El sulfhídrico es incoloro, pero cuando en el medio hay una fuente de hierro se forma sulfuro de hierro que precipita en un
entorno ácido con un color negro característico.
3. Fondo amarillo (ácido) y pico de flauta rojo (alcalino)
La bacteria fermenta sólo la glucosa. A las pocas horas de incubación tanto el fondo como el pico de flauta estarán amarillos
debido a la utilización de la glucosa y al descenso del pH por la producción de ácidos. A medida que transcurre el tiempo,
la formación de aminas en la parte que está en contacto con el aire, debido a reacciones de descarboxilación oxidativa de
los aminoácidos, provoca la alcalinización del medio, lo que hace virar el indicador a color rojo. En profundidad, donde no
hay oxígeno, se mantiene el color amarillo.
4. Fondo negro y pico de flauta rojo (alcalino)
La bacteria fermenta sólo la glucosa y produce sulfhídrico.
5. Fondo y pico de flauta rojos (alcalino)
La bacteria no fermenta la glucosa ni la lactosa.